專利名稱：類固醇硫酸酯酶抑制劑的雌激素衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種化合物。
特別是，本發(fā)明涉及一種化合物并涉及一種包含該化合物的藥用組合物。本發(fā)明也涉及該化合物或組合物(composition)應用于治療的用途。
背景技術：
有證據表明雌激素是涉及促進內分泌-依賴性組織(例如乳腺和子宮內膜)中腫瘤生長的主要促分裂原。雖然患有乳腺癌或未患有乳腺癌的婦女血漿雌激素濃度是類似的，但是乳腺腫瘤中的雌酮和雌二醇水平明顯高于正常乳腺組織或血液中的水平。雌激素原位合成被認為是腫瘤中高水平的雌激素的重要因素，因此，雌激素生物合成抑制劑，特別是特異性抑制劑對治療內分泌-依賴性腫瘤具有潛在的價值。
在過去的二十年中，關注相當多地是在開發(fā)芳化酶路徑抑制劑上，該路徑將雄激素前體雄甾烯二酮轉化成雌酮。然而，目前有證據表明雌酮硫酸酯酶(E1-STS)路徑，即將雌酮硫酸酯水解成雌酮(E1S至E1)，及芳化酶(即雄甾烯二酮轉化成雌酮)可解釋乳腺腫瘤中雌激素的產生。


圖1和2為顯示涉及由雌酮硫酸酯、雌二醇及雄甾烯二酮原位合成雌酮的某些酶的簡圖。
在圖2中，該圖示意性地顯示了絕經后婦女的雌激素類固醇的來源，″ER″表示雌激素受體，″DHA-S″表示脫氫表雄甾酮-硫酸酯，″Adiol″表示雄甾烯二醇，″E1-STS″表示雌酮硫酸酯酶，″DHA-STS″表示DHA-硫酸酯酶，″Adiol-STS″表示雄甾烯二醇硫酸酯酶，及″17B-HSD″表示雌二醇17B-羥基類固醇脫氫酶。
可以看出，涉及雌激素外圍合成的兩種主要的酶為芳化酶和雌酮硫酸酯酶。
簡而言之，芳化酶將腎上腺皮質大量分泌的雄甾烯二酮轉化為雌酮。最近的報導表明某些黃酮能抑制芳化酶的活性。
然而，大量如此形成的雌酮轉化成了雌酮硫酸酯(E1S)，并且目前相當數(shù)量的證據表明血漿和組織中的E1S作為通過雌酮硫酸酯酶的作用而形成雌酮的儲庫而起作用。
在這方面，現(xiàn)在相信雌酮硫酸酯酶(E1-STS)路徑-即雌酮硫酸酯水解成雌酮(E1S至E1)是乳腺腫瘤中雌激素的主要來源。這一理論得到患有乳腺癌并接受芳化酶抑制劑(例如氨魯米特和4-羥雄甾烯二酮)治療的絕經后婦女的血漿雌激素濃度適度降低的支持，并且也得到這些接受芳化酶抑制劑治療患者的血漿E1S濃度保持相對高這一事實的支持。與未軛合的雌激素(20分鐘)相比，血液中E1S的長半衰期(10-12小時)及肝臟、正常及惡性乳腺組織中高水平的類固醇硫酸酯酶活性也傾向于支持這一理論。
因此，通過硫酸酯酶路徑在惡性乳腺和子宮內膜組織中形成的雌激素對這些腫瘤中存在的高雌激素濃度起主要作用。
PCT/GB92/01587描述了新類固醇硫酸酯酶抑制劑及含有它們的藥用組合物用于治療雌酮依賴性腫瘤尤其是乳腺癌。這些類固醇硫酸酯酶抑制劑為氨基磺酸酯，例如N，N-二甲基雌酮-3-氨基磺酸酯，優(yōu)選雌酮-3-氨基磺酸酯(另外也稱為″EMATE″)。EMATE具有以下結構 已知EMATE是有效的E1-STS抑制劑，它在完整的MCF-7細胞中、以0.1nM濃度顯示大于99％的抑制E1-STS活性。EMATE也以時間和濃度依賴性方式抑制E1-STS酶，這表明其作為活性位點導向的滅活劑而起作用。雖然EMATE最初設計為E1-STS抑制，但它也抑制脫氫表雄甾酮硫酸酯酶(DHA-STS)，該酶被認為在調節(jié)雌激素甾族化合物雄甾烯二醇的生物合成中起關鍵作用。目前也有證據表明雄甾烯二醇可能作為乳腺腫瘤生長促進劑起甚至更重要的作用。EMATE在體內也有活性，當經口或皮下給藥時，幾乎完全抑制大鼠肝臟E1-STS(99％)及DHA-STS(99％)活性。另外，EMATE在大鼠中顯示出具有記憶提高作用。對小鼠的研究顯示了DHA-STS活性與調節(jié)部分免疫反應之間的聯(lián)系?？烧J為這也可能在人類中發(fā)生。EMATE中的氨基磺酸酯部分的橋接O-原子對抑制活性是重要的。因此，當3-O-原子被其他雜原子替換時，如雌酮-3-N-氨基磺酸酯及雌酮-3-S-氨基磺酸酯，這些類似物為較弱的非時間依賴性滅活劑。
除雌酮外，其他具有雌激素特性的、由絕經后婦女產生的大多數(shù)甾族化合物為雄甾烯二醇(見圖2)。
盡管是雄激素，雄甾烯二醇可結合至雌激素受體(ER)并可刺激ER陽性乳腺癌細胞的生長及致癌物質誘發(fā)的大鼠乳腺腫瘤的生長。重要的是，90％絕經后婦女所產生的雄甾烯二醇來源于由腎上腺皮質大量分泌的雄激素脫氫表雄甾酮硫酸酯(DHA-S)。DHA-S由DHA硫酸酯酶轉化為DHA，該硫酸酯酶可與負責水解E1S的雌酮硫酸酯酶相同或不同。
在過去的10-15年中，已經進行了相當多的研究以開發(fā)有效的芳化酶抑制劑，其中的一些現(xiàn)在已上市。然而，在患乳腺癌并接受芳化酶抑制劑治療的絕經后婦女的最近三個報告中，血漿E1S濃度保持在400-1000pg/ml之間。
因此雌激素原位合成被認為對腫瘤中高水平的雌激素起重要作用，因此特異性雌激素生物合成抑制劑對治療內分泌-依賴性腫瘤具有潛在的價值。
此外，即使通過硫酸酯酶路徑在惡性乳腺和子宮內膜組織中形成的雌激素對高雌激素濃度起主要作用，仍有其他對雌激素體內合成起作用的酶促路徑。
發(fā)明概述方面本發(fā)明基于以下的意外發(fā)現(xiàn)D環(huán)具有選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一基團的甾族化合物可用作有效的類固醇硫酸酯酶(STS)抑制劑；細胞周期調節(jié)劑；細胞凋亡調節(jié)劑；細胞生長調節(jié)劑；葡萄糖攝取預防和/或抑制劑；腫瘤血管生成預防劑或抑制劑；微管破壞劑；和/或細胞凋亡誘導劑。
本發(fā)明化合物可包含其他取代基。這些其他取代基例如可進一步增強本發(fā)明化合物的活性和/或增加穩(wěn)定性(在體外和/或在體內)。
發(fā)明詳述方面根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種包含甾族環(huán)系統(tǒng)及任選基團R1的化合物，任選基團R1選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；其中甾族環(huán)系統(tǒng)A環(huán)在2或4位被基團R4取代，其中R4為烴基(hydrocarbyl)。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種包含i)如本文所定義的化合物；及ii)生物反應調節(jié)劑的組合物。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種藥用組合物，該組合物包含(a)(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，及(b)藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了用于藥物的(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備預防和/或抑制腫瘤生長的藥物中的用途。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備用于治療病癥或疾病的藥物中的用途，所述病癥或疾病與類固醇硫酸酯酶(STS)活性；細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝取；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡中一種或多種相關。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備用于治療病癥或疾病的藥物中的用途，所述病癥或疾病與反向的(adverse)類固醇硫酸酯酶(STS)活性；細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡中一種或多種相關。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備用于以下一種或多種情況的藥物中的用途抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝取；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；及誘導細胞凋亡。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性藥物中的用途。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，在制備調節(jié)細胞生長藥物中的用途。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種治療方法，該方法包括給予有治療需要的患者(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種治療方法用于抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和/或誘導細胞凋亡，該方法包括給予有治療需要的患者(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種方法，該方法包括(a)用一種或多種本文所定義的侯選化合物進行測試以下情況中的一種或多種類固醇硫酸酯酶(STS)抑制；細胞周期調節(jié)；細胞凋亡調節(jié)；細胞生長調節(jié)；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成預防和/或抑制；微管破壞；及細胞凋亡誘導；(b)確定是否所述侯選化合物中一種或多種能實現(xiàn)以下情況中的一種或多種類固醇硫酸酯酶(STS)抑制；細胞周期調節(jié)；細胞凋亡調節(jié)；細胞生長調節(jié)；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝?。荒[瘤血管生成預防和/或抑制；微管破壞；及細胞凋亡誘導；及(c)選擇一種或多種能實現(xiàn)以下情況中一種或多種的所述侯選化合物類固醇硫酸酯酶(STS)抑制；細胞周期調節(jié)；細胞凋亡調節(jié)；細胞生長調節(jié)；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝?。荒[瘤血管生成預防和/或抑制；微管破壞；及細胞凋亡誘導。
在任一種本發(fā)明方法中，可存在一個或多個另外步驟。例如，方法也可包括修飾所確定的侯選化合物的步驟(例如通過化學和/或酶技術)及測試該修飾化合物的以下情況中一種或多種的任選另外步驟類固醇硫酸酯酶(STS)抑制；細胞周期調節(jié)；細胞凋亡調節(jié)；細胞生長調節(jié)；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成預防和/或抑制；微管破壞；及細胞凋亡誘導。通過進一步的實例，該方法也可包括確定所鑒定侯選化合物結構的步驟(例如通過使用結晶技術)及然后進行計算機模擬研究-例如為進一步增加其活性。因此，本發(fā)明也包括對所述鑒定侯選化合物具有資料組的計算機(例如結晶學調節(jié))。本發(fā)明也包括提供用于計算機篩選分析-例如酶和/或蛋白質結合研究所鑒定侯選化合物。
根據本發(fā)明的一個方面，提供了由本發(fā)明方法鑒定的化合物。
本發(fā)明也包括本發(fā)明的新化合物(例如本文中所提出的那些)，以及其制備方法(例如本文中所提出的方法)及用于那些方法中的新中間體(例如本文中所提出的那些)。
廣義的方面根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了化合物在制備用于治療與以下情況中一種或多種相關的病癥或疾病的藥物中的用途細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝取；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了組合物在制備用于治療與以下情況中一種或多種相關的病癥或疾病的藥物中的用途細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明另一個廣義方面，提供了化合物在制備用于治療病癥或疾病的藥物中的用途，所述病癥或疾病與反向的以下情況中一種或多種相關細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明另一個廣義方面，提供了組合物在制備用于治療病癥或疾病的藥物中的用途，所述病癥或疾病與反向的以下情況中一種或多種相關細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成；微管形成；及細胞凋亡；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明再一個廣義方面，提供了化合物在制備用于以下情況中一種或多種的藥物中的用途調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和誘導細胞凋亡；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明再一個廣義方面，提供了組合物在制備用于以下情況中一種或多種的藥物中的用途調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和誘導細胞凋亡；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了化合物在制備用于調節(jié)細胞生長藥物中的用途；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了組合物在制備用于調節(jié)細胞生長藥物中的用途；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了一種治療方法用于調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和/或誘導細胞凋亡；該方法包括給予有治療需要的患者化合物，該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了一種治療方法用于調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝??；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和/或誘導細胞凋亡；該方法包括給予有治療需要的患者組合物，該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了化合物在制備用于治療與碳酸酐酶相關的病癥或疾病的藥物中的用途；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了組合物在制備用于治療與碳酸酐酶相關的病癥或疾病的藥物中的用途；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明另一個廣義方面，提供了化合物在制備用于治療與反向的碳酸酐酶活性相關的病癥或疾病的藥物中的用途；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明另一個廣義方面，提供了組合物在制備用于治療與反向的碳酸酐酶活性相關的病癥或疾病的藥物中的用途；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明再一個廣義方面，提供了化合物在制備用于調節(jié)碳酸酐酶活性藥物中的用途；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明再一個廣義方面，提供了組合物在制備用于調節(jié)碳酸酐酶活性藥物中的用途；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了一種用于調節(jié)碳酸酐酶活性的治療方法，該方法包括給予有治療需要的患者化合物；其中該化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在。
根據本發(fā)明一個廣義方面，提供了一種用于調節(jié)碳酸酐酶活性的治療方法，該方法包括給予有治療需要的患者組合物；其中該組合物包含i)包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；及ii)生物反應調節(jié)劑。
在這些廣義方面中，優(yōu)選R1、R2、R3及L如本文所定義。
為了便于參考，現(xiàn)在將本發(fā)明的這些及更多方面按合適的小節(jié)標題討論。然而，各小節(jié)中的內容不必限定于各特定的小節(jié)。
一些優(yōu)勢本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以調節(jié)細胞周期。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以調節(jié)細胞凋亡。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以調節(jié)細胞生長。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝取。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以預防和/或抑制腫瘤血管生成。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可以破壞微管。
在這方面，微管與微絲一起及中間絲體形成細胞的細胞骨架系統(tǒng)的一部分。微管負責細胞的許多運動-實例，包括纖毛及鞭毛的搏動和在細胞質中運輸膜囊。所有這些運動由微管的聚合及解聚或微管動力蛋白動素和驅動蛋白的作用產生。一些其他細胞運動，例如在減數(shù)分裂和有絲分裂期間染色體的排列和分離，由兩種機制產生。微管也指引細胞運動，但在一些情況下，微管純粹具有結構功能。
微管由α-微管蛋白和β-微管蛋白單體的異源二聚體亞單位組成。有兩種微管群體穩(wěn)定、壽命長的微管和動態(tài)、壽命短的微管。當微管結構需要迅速裝配和拆卸時發(fā)現(xiàn)動態(tài)微管。例如，在有絲分裂期間，界面細胞的胞質微管網絡特征消失而其中的微管蛋白往往形成相等地將染色體分配給子細胞的梭形裝置。當有絲分裂完成，該梭狀物分解并且重新形成界面微管網絡。
抑制有絲分裂的藥物提供在細胞中操縱微管的有用手段。三種藥物秋水仙堿、長春堿和泰素-均由植物純化而來-已證實為微管功能的有力探針，部分因為它們僅結合于微管蛋白或微管而不結合于其他蛋白，且也因為可以容易地控制它們在細胞中的濃度。
由于它們對有絲分裂的作用，微管抑制劑已廣泛地用于治療疾病且最近用作抗癌藥物，因為阻斷梭狀物的形成將優(yōu)先抑制如癌細胞的迅速分裂的細胞。極有效的抗卵巢癌藥物為泰素。在卵巢癌細胞中，進行迅速的細胞分裂，有絲分裂被泰素治療阻斷而由完整微管執(zhí)行的其他功能不受影響。微管的全面綜述可見″Molecular Cell Biology″(EdLodish等1995 WH Freeman and Co.New York pp 1051-1122)。
本發(fā)明的一個關鍵優(yōu)勢為本發(fā)明化合物可誘導細胞凋亡。
細胞凋亡由MT-靶向藥物誘導，該過程可涉及細胞凋亡調節(jié)劑bcl-2蛋白的磷酸化(及失活)(Halder，Cancer Res.57229，1997)。
本發(fā)明基于化合物提供癌癥的有效治療這一意外的發(fā)現(xiàn)。
本發(fā)明化合物的另一個優(yōu)勢為它們在體內可能有效。
一些本發(fā)明化合物可為非雌激素化合物。此處，術語“非雌激素”指未顯示或基本未顯示雌激素活性。此處，術語“非雌激素”指未顯示或基本未顯示全身性雌激素活性，例如由方案4所確定的活性。
對一些應用來說，這類化合物具有雌激素作用。
另一個優(yōu)勢為一些化合物可能不能被代謝成顯示或誘導激素活性的化合物。
對一些應用來說，優(yōu)選這類化合物具有可逆作用。
對一些應用來說，優(yōu)選這類化合物具有不可逆作用。
一些本發(fā)明化合物的優(yōu)勢也在于它們可能口服有效。
一些本發(fā)明化合物可用于預防和/或治療癌癥例如乳腺癌以及(或者)非惡性病癥，例如預防和/或治療炎性病癥-例如與以下病癥中任何一種或多種相關的病癥自身免疫性疾病，包括例如類風濕性關節(jié)炎、I型和II型糖尿病、全身性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、甲狀腺炎、脈管炎、潰瘍性結腸炎及節(jié)段性回腸炎、皮膚病例如痤瘡、銀屑病及接觸性皮炎；移植物抗宿主??；濕疹；哮喘及移植后器官排斥。當藥物可能需要從較小年齡開始服用時本發(fā)明化合物特別有用。
在一個實施方案中，本發(fā)明化合物用于乳腺癌的治療。
因此，除了治療內分泌依賴性癌癥外，例如治療自身免疫性疾病，一些本發(fā)明化合物也認為具有治療用途。
為了便于參考，現(xiàn)將本發(fā)明的這些及更多方面按合適的小節(jié)標題討論。然而，各小節(jié)下的內容不必限于各特定的小節(jié)。
優(yōu)選的方面化合物如上所述，本發(fā)明提供一種包含甾族環(huán)系統(tǒng)及選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R1的化合物；其中甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；其中甾族環(huán)系統(tǒng)A環(huán)在2或4位被基團R4取代，其中R4為烴基。
在一個優(yōu)選的方面中，化合物能實現(xiàn)以下情況中一種或多種抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝取；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和誘導細胞凋亡。
甾族環(huán)系統(tǒng)本發(fā)明化合物具有甾環(huán)組成部分-也就是說具有環(huán)戊二烯并(cyclopentano)菲骨架或其生物電子等排體。
正如在本領域眾所周知的那樣，典型的甾族環(huán)結構具有以下通式
在上述結構式中，以常規(guī)方式將環(huán)標記并編號。
一方面，該甾族環(huán)結構可含有任何一個或多個C、H、O、N、P、鹵素(包括Cl、Br及I)、S和P。
該甾族環(huán)結構中至少一種環(huán)狀基團可為雜環(huán)基團(雜環(huán))或非雜環(huán)基團。
該甾族環(huán)結構中至少一種環(huán)狀基團可為飽和環(huán)結構或不飽和環(huán)結構(例如芳基)。
優(yōu)選該甾族環(huán)結構中至少一種環(huán)狀基團為芳環(huán)。
生物電子等排體的實例為當環(huán)A、B、C及D中任何一個或多個為雜環(huán)環(huán)和/或當環(huán)A、B、C及D中任何一個或多個被取代和/或當環(huán)A、B、C及D中任何一個或多個被修飾時；但其中生物電子等排體具有甾族化合物特性。
在這方面，優(yōu)選的甾族環(huán)結構的結構可表示為 其中環(huán)A′、B′、C′及D′各自獨立代表雜環(huán)環(huán)或非雜環(huán)環(huán)，這類環(huán)可獨立為取代或未取代的飽和或不飽和的。
作為實例，環(huán)A’、B’、C’及D’中任何一個或多個可獨立被合適的基團取代，合適的基團有例如烷基、烯丙基、羥基、鹵基、烴基、氧基烴基等。
本文中所使用的術語“烴基”指至少包含C和H的基團并且可任選包含一個或多個其他合適的取代基。這類取代基的實例可包括鹵基-、烷氧基-、硝基-、碳氫化合物(hydrocarbon)基團、N-酰基、環(huán)狀基團等。除取代基可能為環(huán)狀基團外，取代基的組合可形成環(huán)狀基團。如果烴基包含多于一個C，則那些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可通過合適的元素或基團連接。因此，烴基可含有雜原子。合適的雜原子對本領域技術人員來講是顯而易見的，且包括例如硫、氮和氧。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，烴基為碳氫化合物基團。
此處術語“碳氫化合物”指任何一種烷基、烯基、炔基、?；?，這類基團可為直鏈、支鏈或環(huán)狀，或指芳基。術語碳氫化合物也包括其中它們任選被取代的那些基團。如果碳氫化合物為其中具有取代基的支鏈結構，則該取代基可在碳氫化合物主鏈上或在支鏈上；或者這些取代基可在碳氫化合物的主鏈上及在支鏈上。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，烴基為氧基烴基。
本文中所使用的術語“氧基烴基”指至少包含C、H及O的基團并且可任選包含一個或多個其他合適的取代基。這類取代基的實例可包括鹵基-、烷氧基-、硝基-、烷基、環(huán)狀基團等。除取代基可能為環(huán)狀基團外，取代基的組合可形成環(huán)狀基團。如果氧基烴基包含多于一個C，則那些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可通過合適的元素或基團連接。因此，氧基烴基可含有雜原子。合適的雜原子對本領域技術人員來講是顯而易見的，且包括例如硫和氮。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，氧基烴基為氧基碳氫化合物基團。
此處術語“氧基碳氫化合物”指任何一種烷氧基、氧基烯基、氧基炔基，這類基團可為直鏈、支鏈或環(huán)狀，或指氧基芳基。術語氧基碳氫化合物也包括其中它們任選被取代的那些基團。如果氧基碳氫化合物為其中具有取代基的支鏈結構，則該取代基可在碳氫化合物主鏈上或在支鏈上；或者這些取代基可在碳氫化合物的主鏈上及在支鏈上。
優(yōu)選的氧基烴基為烷氧基。優(yōu)選氧基烴基具有式C1-6O(例如C1-3O)。
D′的實例為具有至少一個取代基的五元或六元非雜環(huán)環(huán)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，環(huán)D′被乙炔基取代。
如果環(huán)A′、B′、C′及D′中任何一個為雜環(huán)環(huán)，則優(yōu)選該雜環(huán)環(huán)包含C原子與至少一個N原子和/或至少一個O原子的組合。其他雜環(huán)原子可在環(huán)中存在。
本發(fā)明化合物合適的、優(yōu)選的甾體核環(huán)A′-D′的實例包括雌酮及脫氫表雄甾酮的環(huán)A-D。
本發(fā)明化合物優(yōu)選的甾體核環(huán)A′-D′包括下列化合物的環(huán)A-D雌酮及取代雌酮，即雌酮2-OH-雌酮2-烷氧基-雌酮(例如C1-6烷氧基-雌酮，例如2-甲氧基-雌酮)4-OH-雌酮6α-OH-雌酮7α-OH-雌酮16α-OH-雌酮16β-OH-雌酮雌二醇及取代雌二醇，即2-OH-17β-雌二醇2-烷氧基-17β-雌二醇(例如C1-6烷氧基-17β-雌二醇，例如2-甲氧基-17β-雌二醇)4-OH-17β-雌二醇6α-OH-17β-雌二醇7α-OH-17β-雌二醇2-OH-17α-雌二醇
2-烷氧基-17α-雌二醇(例如C1-6烷氧基-17α-雌二醇，例如2-甲氧基-17α-雌二醇)4-OH-17α-雌二醇6α-OH-17α-雌二醇7α-OH-17α-雌二醇16α-OH-17α-雌二醇16α-OH-17β-雌二醇16β-OH-17α-雌二醇16β-OH-17β-雌二醇17α-雌二醇17β-雌二醇17α-乙炔基-17β-雌二醇17β-乙炔基-17α-雌二醇雌三醇及取代雌三醇，即雌三醇2-OH-雌三醇2-烷氧基-雌三醇(例如C1-6烷氧基-雌三醇，例如2-甲氧基-雌三醇)4-OH-雌三醇6α-OH-雌三醇7α-OH-雌三醇脫氫表雄甾酮及取代脫氫表雄甾酮，即脫氫表雄甾酮6α-OH-脫氫表雄甾酮7α-OH-脫氫表雄甾酮16α-OH-脫氫表雄甾酮16β-OH-脫氫表雄甾酮在通用術語中環(huán)系統(tǒng)A′B′C′D′可含有各種無干擾取代基。特別是，環(huán)系統(tǒng)A′B′C′D′可含有一個或多個羥基、烷基尤其是低級(C1-C6)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基及其他戊基異構體、及正己基和其他己基異構體，烷氧基尤其是低級(C1-C6)烷氧基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基等，炔基例如乙炔基，或鹵素例如氟取代基。
在一個替代用實施方案中，多環(huán)化合物可不含或基于甾體核。在這方面，多環(huán)化合物可含或基于非甾族環(huán)系統(tǒng)-例如二乙基己烯雌酚、己烯雌酚、香豆素及其他環(huán)系統(tǒng)。其他合適的用于或用作本發(fā)明組合物的非甾族化合物可見于US-A-5567831。
R1和R2在一個優(yōu)選的方面中，化合物為式I化合物 式I其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
在一個優(yōu)選的方面中，化合物為式II化合物 式II其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
在一個優(yōu)選的方面中，化合物為式III化合物
式III其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
在一個優(yōu)選的方面中，化合物為式IV化合物 式IV其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
將容易地理解式I-IV中甾族環(huán)系統(tǒng)的A環(huán)另外被基團R4在2或4位取代。
R1本領域技術人員將認識到R1為可存在或可不存在的任選基團。在一個優(yōu)選的方面中，R1存在。在該方面中，R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的基團。
氨基磺酸酯基一方面，R1為任選的氨基磺酸酯基。
術語“氨基磺酸酯”包括氨基磺酸的酯、或氨基磺酸N-取代衍生物的酯或它們的鹽。
一方面，R1為氨基磺酸酯基。在這方面，本發(fā)明化合物可稱為氨基磺酸酯化合物。
優(yōu)選R1的氨基磺酸酯基為下式的氨基磺酸酯基 其中R5和R6獨立選自H或烴基。
優(yōu)選R5和R6獨立選自H、烷基、環(huán)烷基、烯基、酰基和芳基，或其組合，或一起代表亞烷基，其中該或各烷基、環(huán)烷基、烯基或芳基任選含一個或多個雜原子或基團。
當被取代時，本發(fā)明的N-取代化合物可含一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環(huán)烷基、N-?；騈-芳基取代基，優(yōu)選含或各自含最多10個碳原子。當R5和/或R6為烷基時，優(yōu)選的值為其中R5和R6各自獨立選自含有1-5個碳原子的低級烷基的那些值，即甲基、乙基、丙基等。優(yōu)選R5和R6均為甲基。當R5和/或R6為芳基時，典型值為苯基和甲苯基(-PhCH3；鄰-、間-或對-)。當R5和R6代表環(huán)烷基時，典型值為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。當結合在一起時R5和R6典型地代表提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，任選插入一個或多個雜原子或基團例如-O-或-NH-以提供5-、6-或7-元雜環(huán)，例如嗎啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。
在烷基、環(huán)烷基、烯基、?；头蓟抵?，我們包括取代的基團，這類取代的基團含有如本文中不干擾被討論化合物硫酸酯酶抑制活性的一個或多個基團的取代基。示例性的無干擾取代基包括羥基、氨基、鹵基、烷氧基、烷基和芳基。烴基的非限定性實例為酰基。
在一些實施方案中，氨基磺酸酯基可通過與甾族環(huán)系統(tǒng)中或甾族環(huán)系統(tǒng)上的一個或多個原子稠合(或連接)而形成環(huán)結構。
在一些實施方案中，可有多于一個氨基磺酸酯基。作為實例，可有兩個氨基磺酸酯基(即雙-氨基磺酸酯化合物)。
在一些優(yōu)選的實施方案中，R5和R6中至少一個為H。
在一些優(yōu)選的實施方案中，R5和R6各自為H。
在一些優(yōu)選的實施方案中，R1為氨基磺酸酯基且該化合物適合用作雌酮硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)抑制劑。
在一些優(yōu)選的實施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，則該硫酸酯化合物將被類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)水解。
在一些優(yōu)選的實施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，并且與類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起于pH7.4及37℃溫育，將提供小于50mM的Km值。
在一些優(yōu)選的實施方案中，如果氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基替代形成硫酸酯化合物，并且與類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起于pH7.4及37℃溫育，將提供小于50μM的Km值。
膦酸酯基如果本發(fā)明化合物包含膦酸酯基，則該本發(fā)明化合物稱為膦酸酯化合物。
代表性地，膦酸酯基具有式(R18)-P(O)(OH)-O-其中優(yōu)選R18為H、烷基、環(huán)烷基、烯基、?；蚍蓟蚱浣M合，其中該或各烷基、環(huán)烷基、烯基或芳基任選含一個或多個雜原子或基團。
當R18為烷基時，R18可為含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。作為實例，R18可為甲基。當R18為芳基時，典型值為苯基和甲苯基(PhCH3；鄰-、間-、對-)。當R18代表環(huán)烷基時，典型值為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R18甚至可包含提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，任選插入一個或多個雜原子或基團，例如以提供5元雜環(huán)，例如嗎啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。
在烷基、環(huán)烷基、烯基、?；头蓟抵邪ㄈ〈幕鶊F，這類取代的基團含有如本文中不干擾被討論化合物硫酸酯酶抑制活性的一個或多個基團的取代基。示例性的無干擾取代基包括羥基、氨基、鹵基、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，膦酸酯基可與甾族環(huán)系統(tǒng)中或甾族環(huán)系統(tǒng)上的一個或多個原子稠合(或連接)而形成環(huán)結構。
在一些實施方案中，可有多于一個膦酸酯基。作為實例，可有兩個膦酸酯基(即雙-膦酸酯化合物)。如果這些化合物基于甾體核，優(yōu)選第二個(或另外的至少一個)膦酸酯基位于甾體核的17位。這些基團不必相同。
硫代膦酸酯基如果本發(fā)明化合物包含硫代膦酸酯基，則該本發(fā)明化合物稱為硫代膦酸酯化合物。
典型地，硫代膦酸酯基具有式(R19)-P(S)(OH)-O-其中優(yōu)選R19為H、烷基、環(huán)烷基、烯基、?；蚍蓟蚱浣M合，其中該或各烷基、環(huán)烷基、烯基或芳基任選含一個或多個雜原子或基團。
當R19為烷基時，R19可為含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。作為實例，R19可為甲基。當R19為芳基時，典型值為苯基和甲苯基(PhCH3；鄰-、間-、對-)。當R19代表環(huán)烷基時，典型值為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R19甚至可包含提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，任選插入一個或多個雜原子或基團，例如以提供5元雜環(huán)，例如嗎啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。
在烷基、環(huán)烷基、烯基、?；头蓟抵邪ㄈ〈幕鶊F，這類取代的基團含有如本文中不干擾被討論化合物硫酸酯酶抑制活性的一個或多個基團的取代基。示例性的無干擾取代基包括羥基、氨基、鹵基、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，硫代膦酸酯基可與甾族環(huán)系統(tǒng)中或甾族環(huán)系統(tǒng)上的一個或多個原子稠合(或連接)而形成環(huán)結構。
在一些實施方案中，可有多于一個硫代膦酸酯基。作為實例，可有兩個硫代膦酸酯基(即雙-硫代膦酸酯化合物)。如果這些化合物基于甾體核，優(yōu)選第二個(或另外的至少一種)硫代膦酸酯基位于甾體核的17位。這些基團不必相同。
磺酸酯基如果本發(fā)明化合物包含磺酸酯基，則該本發(fā)明化合物稱為磺酸酯化合物。
典型地，磺酸酯基具有式(R20)-S(O)(O)-O-其中優(yōu)選R20為H、烷基、環(huán)烷基、烯基、酰基或芳基或其組合，其中該或各烷基、環(huán)烷基、烯基或芳基任選含一個或多個雜原子或基團。
當R20為烷基時，R20可為含有1-6個碳原子的低級烷基，即甲基、乙基、丙基等。作為實例，R20可為甲基。當R20為芳基時，典型值為苯基和甲苯基(PhCH3；鄰-、間-、對-)。當R20代表環(huán)烷基時，典型值為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。R20甚至可包含提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，任選插入一個或多個雜原子或基團，例如以提供5元雜環(huán)，例如嗎啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。
在烷基、環(huán)烷基、烯基、?；头蓟抵邪ㄈ〈幕鶊F，這類取代的基團含有如本文中不干擾被討論化合物硫酸酯酶抑制活性的一個或多個基團的取代基。示例性的無干擾取代基包括羥基、氨基、鹵基、烷氧基、烷基和芳基。
在一些實施方案中，磺酸酯基可與甾族環(huán)系統(tǒng)中或甾族環(huán)系統(tǒng)上的一個或多個原子稠合(或連接)而形成環(huán)結構。
在一些實施方案中，可有多于一個磺酸酯基。作為實例，可有兩個磺酸酯基(即雙-磺酸酯化合物)。如果這些化合物基于甾體核，優(yōu)選第二個(或另外的至少一個)磺酸酯基位于甾體核的17位。這些基團不必相同。
其他取代基本發(fā)明化合物可含有除了式I的那些取代基之外的取代基。作為實例，這些其他取代基可為一種或多種以下取代基一個或多個氨基磺酸酯基、一個或多個膦酸酯基、一個或多個硫代膦酸酯基、一個或多個磺酸酯基、一個或多個磺酰胺基、一個或多個鹵基、一個或多個O基團、一個或多個羥基、一個或多個氨基、一個或多個含硫基團、一個或多個烴基-例如氧基烴基。
R2本發(fā)明化合物甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團。
在一些優(yōu)選的實施方案中，R2為式-R3，換句話說，無基團L存在。
在一些優(yōu)選的方面中，基團R2為α構象(conformation)。優(yōu)選基團R2在D環(huán)的17位上為α構象。
在一些實施方案中L為烴基。在一些實施方案中L為碳氫化合物基團，例如亞烷基。
L可典型地為C1-10亞烷基、C1-5亞烷基、C1或C2亞烷基。
R3如上所討論，R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺及烯之一的基團。在一些優(yōu)選的方面中，R3選自腈、醇、酯、醚、胺及烯基。優(yōu)選R3為或包含腈基。更優(yōu)選R3為腈基。
R3可為環(huán)狀基團或非環(huán)狀基團。
當R3為環(huán)狀基團時，可形成與甾族化合物D環(huán)稠合或不與甾族化合物D環(huán)稠合的環(huán)。當R3形成與甾族化合物的D環(huán)稠合的環(huán)狀基團時，優(yōu)選R3形成連接D環(huán)鄰近部分的環(huán)，更優(yōu)選R3形成連接D環(huán)16和17位的環(huán)。
在一些優(yōu)選的方面中，R3選自式＝CH2、＝CH-CH3、＝C(CN)2、＝C(CH3)(CN)及-(R7)n(CR14R15)pR8，其中n為0或1，p為整數(shù)，R7選自＝CH-、-O-及NR13；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2；R9選自H及烴基，R10選自H及烴基；R11及R12各自獨立選自H及烴基；R13選自H及烴基，R14及R15各自獨立選自H及烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H及烴基，R17選自H及烴基。
在一些優(yōu)選的方面中，R3為式-(R7)n(CR14R15)pR8基團，其中n為0或1，p為整數(shù)，R7選自＝CH-、-O-及NR13；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2；R9選自H及烴基，R10選自H及烴基；R11及R12各自獨立選自H及烴基；R13選自H及烴基，R14及R15各自獨立選自H及烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H及烴基，R17選自H及烴基。
在一些優(yōu)選的方面中，R3為式-(CR14R15)pR8的基團，p為整數(shù)，R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2；R9選自H及烴基，R10選自H及烴基；R11及R12各自獨立選自H及烴基；R14及R15各自獨立選自H及烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H及烴基，R17選自H及烴基。
在一些優(yōu)選的方面中，R3為式-(CH2)pR8的基團，p為整數(shù)；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2；R9選自H及烴基，R10選自H及烴基；R11及R12各自獨立選自H及烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H及烴基，R17選自H及烴基。
在一些優(yōu)選的方面中，R3為式-(R7)nR8的基團，其中n為0或1，R7選自＝CH-、-O-及NR13；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2；R9選自H及烴基，R10選自H及烴基；R11及R12各自獨立選自H及烴基；R13選自H及烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H及烴基，R17選自H及烴基。
P可為任何整數(shù)。P可為0-20。P可為0-10。典型地p為0-5。一方面p為0、1或2。
q可為任何整數(shù)。q可為0-20。q可為0-10。典型地q為0-5。一方面q為0、1或2。
R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH及-CH＝CH2。在一個優(yōu)選的方面中，R8為-SO2-R9。在一個優(yōu)選的方面中，R8為-SO2-R9，其中R9為烴基。優(yōu)選在該方面中，R7為-O-，n為1，p為0，以使R3為-O-SO2R9。
R9選自H及烴基。一方面R9為烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R9選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
一方面R9選自H及C1-10烷基。一方面R9為C1-10烷基。一方面R9選自H及C1-5烷基。一方面R9為C1-5烷基。一方面R9選自H及C1-3烷基。一方面R9為C1-3烷基。優(yōu)選R9為-CH2CH3。
一方面R9為取代或未取代的胺。當被取代時，本發(fā)明N-取代化合物可含一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環(huán)烷基、N-?；騈-芳基取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。在一個優(yōu)選的方面中，R9為未取代的胺，即R9為NH2。
R10選自H及烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R10選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
一方面R10選自H及C1-10烷基。一方面R10選自H及C1-5烷基。一方面R10選自H及C1-3烷基。一方面R10為C1-3烷基。優(yōu)選R10為-H或-CH3。
如前所提及，NR11R12的R11和R12各自獨立選自H及烴基。當被取代時，本發(fā)明N-取代化合物可含一個或兩個N-烷基、N-烯基、N-環(huán)烷基、N-酰基或N-芳基取代基，優(yōu)選含有或各自含有最多10個碳原子。當R11和/或R12為烷基時，優(yōu)選的值為其中R11和R12各自獨立選自含有1-5個碳原子的低級烷基的那些值，即甲基、乙基、丙基等。優(yōu)選R11和R12兩者為甲基。當R11和/或R12為芳基時，典型值為苯基和甲苯基(-PhCH3；鄰-、間-或對-)。當R11和R12代表環(huán)烷基時，典型值為環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。當結合在一起時R11和R12典型地代表提供4-6個碳原子鏈的亞烷基，任選插入一個或多個雜原子或基團，例如-O-或-NH-，以提供5-、6-或7-元雜環(huán)，例如嗎啉代、吡咯烷-1-基或哌啶-1-基。
一方面R11和R12各自獨立為烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R11和R12各自獨立選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
一方面R11和R12各自獨立選自H及C1-10烷基。一方面R11和R12各自獨立為C1-10烷基。一方面R11和R12各自獨立選自H及C1-5烷基。一方面R11和R12各自獨立為C1-5烷基。一方面R11和R12各自獨立選自H及C1-3烷基。一方面R11和R12各自獨立為C1-3烷基。優(yōu)選R11和R12獨立選自-H或-CH3。
R13選自H及烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R13選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一方面R13選自H及C1-10烷基。一方面R13選自H及C1-5烷基。一方面R13選自H及C1-3烷基。一方面R13為C1-3烷基。優(yōu)選R13為-H。
R14和R15各自獨立選自H及烴基。一方面R14和R15各自獨立為烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R14和R15各自獨立選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
一方面R14和R15各自獨立選自H及C1-10烷基。一方面R14和R15各自獨立為C1-10烷基。一方面R14和R15各自獨立選自H及C1-5烷基。一方面R14和R15各自獨立為C1-5烷基。一方面R14和R15各自獨立選自H及C1-3烷基。一方面R14和R15各自獨立為C1-3烷基。優(yōu)選R14和R15獨立選自-H和-CH3。
X選自O或S。一方面X為S。一方面X為O。
R16選自H及烴基。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R16選自H、C1-C20烴基、C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C20碳氫化合物、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C20烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
一方面R16選自H及C1-10烷基。一方面R16選自H及C1-5烷基。一方面R16選自H及C1-3烷基。一方面R16為C1-3烷基。優(yōu)選R16為-H。
在一個非常優(yōu)選的方面中，R3為選自＝CHC(O)OEt、-CH2C(O)OEt、＝CHCH2OH、-CH2CH2OH、-CH2C≡N、＝CHC≡N、-NHCH2CH2N(Me)2、-OCH2CH2-OMe的基團。
特別優(yōu)選的R3基團選自下面所給出的D環(huán)取代
一方面R3可選自下面所示的D取代，其中各Q獨立選自O、S、NH及CH2，并且y為3-8的整數(shù)，優(yōu)選為5、6、7或8。
R4如前所提及，甾族環(huán)系統(tǒng)的A環(huán)由R4基團取代，其中R4為烴基。
在一個優(yōu)選的方面中，R4為氧基烴基。
如上所討論，本文中所使用的、關于R4的術語“氧基烴基”指至少包含C、H及O的基團，并且可任選包含一個或多個其他合適的取代基。這類取代基的實例可包括鹵基-、烷氧基-、硝基-、烷基、環(huán)狀基團等。除取代基可能為環(huán)狀基團外，取代基的組合可形成環(huán)狀基團。如果氧基烴基包含多于一個C，則那些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可通過合適的元素或基團連接。因此，氧基烴基可含有雜原子。合適的雜原子對本領域技術人員來講是顯而易見的，且包括例如硫和氮。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R4為氧基碳氫化合物基團。
此處術語“氧基碳氫化合物”指或R4為烷氧基、氧基烯基、氧基炔基中任何一種，這些基團可為直鏈、支鏈或環(huán)狀，或為氧基芳基。術語氧基碳氫化合物也包括其中它們任選被取代的那些基團。如果氧基碳氫化合物為其中具有取代基的支鏈結構，則該取代基可在碳氫化合物主鏈上或在支鏈上；或者這些取代基可在碳氫化合物的主鏈上及在支鏈上。
優(yōu)選氧基烴基R4為烷氧基。優(yōu)選氧基烴基R4為式C1-6O(例如C1-3O)基團。優(yōu)選氧基烴基R4為式-O(CH2)1-10CH3、-O(CH2)1-5CH3、-O(CH2)1-2CH3基團。在一個非常優(yōu)選的方面中，R4為甲氧基。
優(yōu)選氧基烴基R4為醚基。優(yōu)選氧基烴基R4為式C1-6OC1-6(例如C1-3OC1-3)基團。優(yōu)選氧基烴基R4為式-(CH2)1-10O(CH2)1-10CH3、-(CH2)1-5O(CH2)1-5CH3、-(CH2)1-2O(CH2)1-2CH3基團。在非常優(yōu)選的方面中，R4為-CH2OCH3。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R4為碳氫化合物基團。優(yōu)選R4為烷基。優(yōu)選該烷基為C1-6烷基(例如C1-3烷基)。優(yōu)選烴基R4為式-(CH2)1-10CH3、-(CH2)1-5CH3、-(CH2)1-2CH3基團。在非常優(yōu)選的方面中，R4為乙基。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R4選自C1-C10烴基、C1-C5烴基、C1-C3烴基、碳氫化合物基團、C1-C10碳氫化合物、C1-C5碳氫化合物、C1-C3碳氫化合物、烷基、C1-C10烷基、C1-C5烷基及C1-C3烷基之一。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R4為烴基硫基。
術語“烴基硫基”指至少包含烴基(如本文中所定義)及硫的基團。該硫基可任選被氧化。優(yōu)選烴基硫基為式-S-烴基，其中烴基如本文所描述。
本文中所使用的、關于R4的術語“烴基硫基”指至少包含C、H及S的基團，并且可任選包含一個或多個其他合適的取代基。這類取代基的實例可包括鹵基-、烷氧基-、硝基-、烷基、環(huán)狀基團等。除取代基可能為環(huán)狀基團外，取代基的組合可形成環(huán)狀基團。如果烴基硫基包含多于一個C，則那些碳不必相互連接。例如，至少兩個碳可通過合適的元素或基團連接。因此，烴基硫基還可含有雜原子。合適的雜原子對本領域技術人員來講是顯而易見的，且包括例如氮。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案中，R4為碳氫化合物硫基。本文中所使用的、關于R4的術語“碳氫化合物硫基”指由C、H及S組成的基團。優(yōu)選碳氫化合物硫基為式-S-碳氫化合物，其中碳氫化合物如本文所描述。
優(yōu)選碳氫化合物硫基R4為式C1-6S(例如C1-3S)。優(yōu)選氧基烴基R4為式-S(CH2)1-10CH3、-S(CH2)1-5CH3、-S(CH2)1-2CH3。在一個非常優(yōu)選的方面中R4為-S-Me。
如前所提及，R4位于A環(huán)的2或4位。因此化合物可具有式 或 優(yōu)選R4位于A環(huán)的2位。
在一個進一步優(yōu)選的方面中，當A環(huán)被R1和R4取代時，R4相對于R1為鄰位。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式 其中R4為烴基，R14和R15各自獨立選自H和烴基，且p為整數(shù)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式
其中R4為氧基碳氫化合物基團或碳氫化合物基團，R14和R15各自獨立選自H和C1-10烷基，且p為0-5的整數(shù)。
在這方面，優(yōu)選R4為烷氧基例如C1-6O基團，或烷基例如C1-6烷基。優(yōu)選R4為甲氧基或乙基。
在這方面，優(yōu)選R14和R15各自獨立選自H和CH3，更優(yōu)選R14和R15均為H。
在這方面，優(yōu)選p為0、1或2。更優(yōu)選p為1。
在一個非常優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式 在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式 其中R4為烴基，R14和R15各自獨立選自H和烴基，且p為整數(shù)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式 其中R4為氧基碳氫化合物基因或碳氫化合物基團，R14和R15各自獨立選自H和C1-10烷基，且p為0-5的整數(shù)。
在這方面，優(yōu)選R4為烷氧基例如C1-6O基團，或烷基例如C1-6烷基。優(yōu)選R4為甲氧基或乙基。
在這方面，優(yōu)選R14和R15各自獨立選自H和CH3，更優(yōu)選R14和R15均為H。
在這方面，優(yōu)選p為0、1或2。更優(yōu)選p為1。
在一個非常優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物具有下式 本發(fā)明非常優(yōu)選的化合物顯示如下并可選自

組合物如上所述，根據本發(fā)明的一個方面，提供了一種藥用組合物，該組合物包含(a)(i)如本文所定義的化合物，或(ii)如本文所定義的組合物，及(b)藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑。
根據本發(fā)明，本發(fā)明組合物可包含多于一種生物反應調節(jié)劑。
術語生物反應調節(jié)劑(″BRM″)包括細胞因子，免疫調節(jié)劑，生長因子，血細胞生成調節(jié)因子，集落刺激因子，趨化性、溶血及溶栓因子，細胞表面受體、配體，白細胞粘附分子，單克隆抗體，預防性及治療性疫苗，激素，細胞外基質成分，纖連蛋白等。
BRMs在調節(jié)疾病中免疫和炎癥反應中起作用。BRMs的實例包括腫瘤壞死因子(TNF)、粒細胞集落刺激因子、促紅細胞生成素、胰島素樣生長因子(IGF)、表皮生長因子(EGF)、轉化生長因子(TGF)、血小板衍生的生長因子(PDGF)、干擾素(IFNs)、白介素、組織纖溶酶原激活劑、P-、E-或L-選擇蛋白、ICAM-1、VCAM、選擇蛋白、地址素等。
優(yōu)選生物反應調節(jié)劑為細胞因子。
細胞因子(經常是可溶性蛋白質)是使免疫細胞相互間溝通的分子。這些分子通過在靶細胞表面表達的特定受體發(fā)揮其生物學功能。受體的結合引發(fā)生物化學信號級聯(lián)釋放，進而深深地影響著帶有受體的細胞的行為(Poole，S 1995 TibTech 1381-82)。已在分子水平鑒定了許多細胞因子及其受體(Paul和Sedar 1994，Cell 76241-251)，并且憑其本身制備了合適的治療價值分子以及治療靶。
細胞因子更詳細的資料可在Molecular Biology andBiotechnology(Pub.VCH，Ed.Meyers，1995，第202、203、394、390、475、790頁)中找到。
細胞因子的實例包括白介素(IL)-例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19；腫瘤壞死因子(TNF)-例如TNF-α；干擾素α、β及γ；TGF-β。
對本發(fā)明而言，優(yōu)選細胞因子為腫瘤壞死因子(TNF)。
更優(yōu)選細胞因子為TNF-α。
TNF是由介導炎癥和免疫病理學反應的巨噬細胞和淋巴細胞產生的細胞因子。TNF涉及到疾病的發(fā)展，這些疾病包括但不限于免疫調節(jié)失調、感染、細胞增殖、血管發(fā)生(新血管形成)、腫瘤轉移、細胞凋亡、膿毒癥及內毒素血癥。
體內TNF的壞死作用主要涉及毛細血管損傷。TNF不僅在腫瘤組織中而且在肉芽組織中引起壞死。它在培養(yǎng)的血管內皮細胞生長抑制方面引起形態(tài)學的變化和細胞毒性(Haranka等1987 Ciba Found Symp131140-153)。
對本發(fā)明優(yōu)選的方面而言，TNF可為任何類型的TNF-例如TNF-α、TNF-β，包括其衍生物或混合物。
TNF方面的內容可在技術-例如WO-A-98/08870及WO-A-98/13348中找到。
TNF可用化學方法制備或可從源中提取。優(yōu)選TNF通過使用重組DNA技術制備。
就本發(fā)明的這一方面而言，本發(fā)明組合物在體內比單獨的化合物或單獨的TNF更有效。而且，在一些方面，化合物和TNF的組合比預期的單獨化合物的效能更強，即它們之間是協(xié)同關系。
此外，本發(fā)明預期本發(fā)明組合物還包含生物反應調節(jié)劑的誘導劑-例如生物反應調節(jié)劑的體內誘導劑。
根據本發(fā)明，組合物的成分可同時或順序加入混合物。此外，根據本發(fā)明，可通過誘導或增加成分之一的表達原位形成至少部分組合物(例如在體內)。例如，可誘導或增加生物反應調節(jié)劑例如TNF的表達。作為實例，可通過加入細菌脂多糖(LPS)和胞壁酰二肽(MDP)誘導或增加TNF的表達。在這方面，細菌LPS和MDP組合可在體外刺激鼠科動物脾細胞TNF的產生并在體內刺激腫瘤縮小(Fuks等Biull EkspBiol Med 1987 104497-499)。
在治療方法中，患者優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選人類。對一些應用而言，優(yōu)選人類為婦女。
本發(fā)明也包含用于制備本發(fā)明化合物的新中間體。例如，本發(fā)明包含化合物的新醇前體。作為進一步的實例，本發(fā)明包含化合物雙保護的前體。本文中提供了這些前體中每一個的實例。本發(fā)明也包括一種包含合成本發(fā)明化合物的這些前體的每一種或兩者的方法。
類固醇硫酸酯酶類固醇硫酸酯酶-有時稱為類固醇硫酸酯酶或steryl硫酸酯酶或簡稱“STS”-水解幾種硫酸酯化類固醇，例如雌酮硫酸酯、脫氫表雄甾酮硫酸酯及膽固醇硫酸酯。STS的酶編號為EC 3.1.6.2。
STS已被克隆和表達。例如可參見Stein等(J.Biol.Chem.26413865-13872(1989))和Yen等(Cell 49443-454(1987))。
STS是涉及到許多疾病狀況的酶。
作為實例，研究人員發(fā)現(xiàn)完全缺乏STS可產生魚鱗癬。根據一些研究人員，STS不足在日本相當普遍。同樣的研究人員(Sakura等，JInherit Metab Dis 1997Nov；20(6)807-10)也報道了變應性疾病-例如支氣管哮喘、過敏性鼻炎或特應性皮炎-可能與類固醇硫酸酯酶缺乏有關。
除了STS活性完全缺乏引起疾病外，STS活性增強水平也可能導致疾病狀況。作為實例，并如上所指，有很強的證據支持STS在乳腺癌生長和轉移中的作用。
STS也涉及到其他疾病狀況。作為實例，Le Roy等(Behav Genet1999年3月；29(2)131-6)確定了在類固醇硫酸酯酶濃度和小鼠攻擊行為的引發(fā)之間可能存在遺傳相關性。該作者得出結論甾族化合物的硫酸酯化可能為復雜網絡的主要原動力，包括顯示涉及到通過突變引起攻擊的基因。
STS抑制認為與STS活性相關的一些疾病狀況是由于無活性的硫酸酯化雌酮轉化成有活性的非硫酸酯化的雌酮。在與STS活性相關的疾病狀況中，理想地是抑制STS活性。
此處，術語“抑制”包括減少和/或消除和/或掩蓋和/或預防STS的有害作用。
STS抑制劑根據本發(fā)明，本發(fā)明化合物能作為STS抑制劑起作用。
此處，本文中所使用的、關于本發(fā)明化合物的術語“抑制劑”指可以抑制STS活性-例如減少和/或消除和/或掩蓋和/或預防STS的有害作用的化合物。STS抑制劑可作為拮抗劑起作用。
化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力可用完整的JEG3絨膜癌細胞或胎盤微粒體評價。另外，可使用動物模型。在下列小節(jié)提供了合適測試方案的細節(jié)。應注意其他實驗也可用以確定STS活性及STS抑制。例如，也可參考WO-A-99/50453的內容。
一方面，對一些應用而言，化合物特征還在于特征即如果氨基磺酸酯基被硫酸酯基取代形成硫酸酯衍生物，則該硫酸酯衍生物可通過具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解-即當與類固醇硫酸酯酶EC 3.1.6.2于pH7.4及37℃溫育時。
在一個優(yōu)選的實施方案中，如果化合物的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替形成硫酸酯化合物，則當與類固醇硫酸酯酶EC 3.1.6.2于pH7.4及37℃溫育時，該硫酸酯化合物可被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解并可產生小于200毫摩爾的Km值，優(yōu)選小于150毫摩爾，優(yōu)選小于100毫摩爾，優(yōu)選小于75毫摩爾，優(yōu)選小于50毫摩爾。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明化合物不被具有類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)活性的酶水解。
對一些應用而言，優(yōu)選本發(fā)明化合物對目標靶(例如STS和/或芳化酶)具有至少約100倍的選擇性，優(yōu)選對目標靶具有至少約150倍的選擇性，優(yōu)選對目標靶具有至少約200倍的選擇性，優(yōu)選對目標靶具有至少約250倍的選擇性，優(yōu)選對目標靶具有至少約300倍的選擇性，優(yōu)選對目標靶具有至少約350倍的選擇性。
應注意本發(fā)明化合物除了具有抑制STS和/或芳化酶活性的能力外，可能還具有其他有益的特性，或者具備兩者之一。
用癌細胞確定STS活性的試驗(方案1)JEG3細胞中硫酸酯酶活性的抑制用完整的JEG3絨毛膜癌細胞體外測定類固醇硫酸酯酶活性。該細胞系可用于研究人類乳腺癌細胞生長的控制。它具有顯著的類固醇硫酸酯酶活性(Boivin等，J.Med.Chem.，2000，434465-4478)并且由American Type Culture Collection(ATCC)出售。
細胞保存在基本培養(yǎng)基(Minimal Essential Medium)(MEM)(FlowLaboratories，Irvine，Scotland)中，該培養(yǎng)基含20mM HEPES、5％胎牛血清、2mM谷氨酰胺、非必須氨基酸及0.075％碳酸氫鈉。用上述培養(yǎng)基，以大約1×105細胞/燒瓶接種最多可達30個平行測定的25cm2組織培養(yǎng)燒瓶。使細胞生長到80％融合度(confluency)并且每隔兩天更換培養(yǎng)基。
用Earle氏平衡鹽溶液(EBSS，來自ICN Flow，High Wycombe，U.K.)洗滌在一式三份的25cm2組織培養(yǎng)燒瓶中的完整的單層JEG3細胞，并于37℃、與在無血清MEM(2.5ml)中的5pmol(7×105dpm)[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，來自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)及雌酮-3-氨基磺酸酯(5個濃度1nM、10nM、100nM、1000nM和10μM)一起溫育3-4小時。溫育后，冷卻各燒瓶并將培養(yǎng)基(1ml)用吸管分別移入含[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，來自Amersham International Radiochemical Centre，Amersham，U.K.)的試管中。該混合物與甲苯(5ml)一起充分振搖30秒。試驗顯示經過該處理，＞90％[14C]雌酮及＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相除去。分離部分(2ml)有機相，蒸發(fā)并用閃爍分光法測定殘留物中的3H和14C含量。水解的雌酮-3-硫酸酯質量根據所得的3H計數(shù)(校正所用的培養(yǎng)基和有機相體積，并校正所加入[14C]雌酮的回收率)及底物的比活性計算。每批試驗包括從硫酸酯酶陽性人胎盤(陽性對照)制備的微粒體及無細胞燒瓶(以評價明顯的底物非酶促水解)的溫育。用Zaponin處理細胞單層后，用Coulter計數(shù)器確定每燒瓶中的細胞核數(shù)量。每批用一個燒瓶來評價細胞膜狀況并用錐蟲藍排除法評價生存力(Phillips，H.J.(1973)InTissue culture and applications，[edsKruse，D.F.& Patterson，M.K.]；406-408頁；Academic出版社，New York)。
類固醇硫酸酯酶活性結果以在溫育期間(3-4小時)形成的總產物(雌酮+雌二醇)的平均值±1S.D.表示，以106個細胞計算，相對于不含雌酮-3-氨基磺酸酯的溫育其減少(抑制)百分比顯示統(tǒng)計學意義。用未配對Student t-檢驗測試結果的統(tǒng)計學意義。
用胎盤微粒體測定STS活性的試驗(方案2)胎盤微粒體中類固醇硫酸酯酶活性的抑制用剪刀將正常時期懷孕的硫酸酯酶陽性人胎盤徹底剪碎并用冷的磷酸鹽緩沖液(pH7.4，50mM)洗滌一次，然后再懸浮于冷的磷酸鹽緩沖液(5ml/g組織)中。用Ultra-Turrax勻漿器完成勻化，每三次10秒的脈沖攪拌后在冰中冷卻2分鐘。以2000g將核及細胞碎片離心(4℃)30分鐘除去，并將部分(2ml)上清液于20℃儲存。用Bradford法測定上清液中的蛋白質濃度(Anal.Biochem.，72，248-254(1976))。
用蛋白質濃度為100mg/ml、底物濃度為20mM的[6，7-3H]雌酮-3-硫酸酯(比活性60Ci/mmol，來自New England Nuclear，Boston，Mass.，U.S.A.)進行溫育(1ml)并于37℃溫育20分鐘。如果必要，采用化合物的六種濃度0.1nM、1.0nM、10nM、100nM、1000nM及10μM。溫育后，將各樣品冷卻并將培養(yǎng)基(1ml)用吸管分別移入含[14C]雌酮(7×103dpm)(比活性97Ci/mmol，來自Amersham InternationalRadiochemical Centre，Amersham，U.K)的試管中。該混合物與甲苯(5ml)一起徹底振搖30秒。試驗顯示經過該處理，＞90％[14C]雌酮及＜0.1％[3H]雌酮-3-硫酸酯從水相除去。分離部分(2ml)有機相，蒸發(fā)并用閃爍分光法測定殘留物中的3H和14C含量。水解的雌酮-3-硫酸酯質量根據所得的3H計數(shù)(校正所用的培養(yǎng)基和有機相體積，并校正所加入的[14C]雌酮回收率)及該底物的比活性計算。
確定STS活性的動物試驗模型(方案3)體內雌酮硫酸酯酶活性的抑制可用動物模型研究本發(fā)明化合物，特別是用切除卵巢的大鼠。在該模型中，雌激素化合物刺激子宮生長。
經口給予大鼠化合物(0.1mg/Kg/天，共5天)，另一組動物僅接受溶媒(丙二醇)。研究結束時，獲取肝組織樣品并用3H雌酮硫酸酯作為底物測定雌酮硫酸酯酶活性，如前所述(見PCT/GB95/02638)。
確定雌激素活性的動物試驗模型(方案4)可用動物模型研究本發(fā)明化合物，特別是用切除卵巢的大鼠。在該模型中，雌激素化合物刺激子宮生長。
經口給予大鼠化合物(0.1mg/Kg/天，共5天)，另一組動物僅接受溶媒(丙二醇)。研究結束時，獲取子宮并稱重，以子宮重量/全身重量×100表示結果。
對子宮生長不具有顯著作用的化合物不是雌激素化合物。
確定STS活性的生物技術試驗(方案5)化合物抑制雌酮硫酸酯酶活性的能力也可用氨基酸序列或編碼STS的核苷酸序列、或其活性片段、衍生物、同系物或變體進行例如高通量篩選評價。
可使用任何一種或多種合適的靶-例如氨基酸序列和/或核苷酸序列、以任何藥物篩選技術確定藥物是否可以調節(jié)STS。在此類試驗中采用的靶可游離在溶液中、固定于固體載體、連接于細胞表面或位于細胞內。可測定靶活性的去除或靶與受試藥物之間結合復合物的形成。
本發(fā)明的試驗可為測試許多藥物的篩選方法。一方面，本發(fā)明的試驗方法為高通量篩選方法。
藥物篩選技術可基于Geysen于1984年9月13日公布的歐洲專利申請84/03564中描述的方法?？傊?，在固體底物例如塑料針或一些其他表面上合成了大量不同的小肽受試化合物。將肽受試化合物與合適的靶或其碎片反應并洗滌。然后例如通過本領域眾所周知的合適方法檢測結合的實體。也可直接將純化過的靶涂于板上，該板用于藥物篩選技術?；蛘?，可用未中和抗體捕獲該肽并將其固定在固體載體上。
本發(fā)明也預期使用競爭性藥物篩選試驗，其中能特異性結合靶的中和抗體與受試化合物競爭與靶結合。
另一篩選技術提供給對物質具有合適結合親和力的藥物高通量篩選(HTS)，且基于WO 84/03564中詳細描述的方法。
預期本發(fā)明的試驗方法將既適合于小規(guī)模又適合于大規(guī)模的受試化合物篩選，并適合于定量測試。
在一個優(yōu)選方面中，本發(fā)明涉及一種鑒定選擇性調節(jié)STS的藥物的方法，這類化合物具有式(I)。
報道基因大量的報道基因可用于本發(fā)明的試驗方法(以及篩選)，優(yōu)選的報道基因提供常規(guī)可檢測的信號(例如通過光譜法)。作為實例，報道基因可將催化改變光吸收特性的反應的酶編碼。
其他方案包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)、放射性免疫測定(RIA)及熒光活化細胞分類(FACS)。甚至可使用兩點、基于單克隆的免疫測定，利用對兩種無干擾抗原決定基有反應的單克隆抗體。其它位置中，在Hampton R等(1990，Serological Methods，A Laboratory Manual，APS出版社，St Paul MN)及Maddox DE等(1983，J Exp Med 1581211)中描述了這些及其他測試。
報道分子的實例包括但不限于(β-半乳糖苷酶、轉化酶、綠熒光蛋白質、熒光素酶、氯霉素、乙酰轉移酶、(-葡糖醛酸酶、外-葡聚糖酶及葡糖淀粉酶。或者，可將放射標記或熒光標記物標記的核苷酸結合到初期轉錄中，隨后當結合于低聚核苷酸探針時將其鑒定。
作為進一步的實例，許多公司例如Pharmacia Biotech(Piscataway，NJ)、Promega(Madison，WI)及US Biochemical Corp(Cleveland，OH)提供商品試劑盒及測定程序方案。合適的報道分子或標記包括那些放射性核素、酶、熒光、化學發(fā)光或顯色劑以及底物、輔因子、抑制劑、磁粒子等。教導使用此類標記的專利包括US-A-3817837、US-A-3850752、US-A-3939350、US-A-3996345、US-A-4277437、US-A-4275149及US-A-4366241。
宿主細胞本發(fā)明涉及的術語“宿主細胞”包括任何包含本發(fā)明藥物的靶的細胞。
因此，本發(fā)明再一個實施方案提供由本發(fā)明靶或表達本發(fā)明靶的聚核苷酸轉化或轉染的宿主細胞。優(yōu)選將所述聚核苷酸裝載到將要成為靶或將要表達靶的聚核苷酸的復制和表達的載體中。細胞將選擇與所述載體相容的細胞，并且例如可為原核(如細菌)、真菌、酵母或植物細胞。
革蘭氏陰性細菌大腸桿菌(E.coli)被廣泛用作異種基因表達的宿主。然而，大量的異種蛋白質趨于在細胞內積聚。隨后從大量大腸桿菌(E.coli)細胞內蛋白質中純化所需蛋白質有時可能是困難的。
與大腸桿菌(E.coli)相比，因為它們將蛋白質分泌進培養(yǎng)基的能力，芽胞桿菌屬(Bacillus)細菌很適合作為異種宿主。其他適合作為宿主的細菌為來自鏈霉菌屬(Streptomyces)和假單胞菌屬(Pseudomonas)的那些細菌。
依據編碼本發(fā)明多肽的聚核苷酸的性質和/或對所要表達的蛋白質的進一步處理的需要，真核生物宿主例如酵母或其他真菌可為優(yōu)選。一般而言，酵母細胞比真菌細胞更好，因為它們易于操作。然而，一些蛋白質既很少從酵母細胞中分泌，在一些情況下又不能被適當?shù)靥幚?例如在酵母中高度糖基化)。在這些情況下，應選擇不同的真菌宿主生物體。
在本發(fā)明范圍內的合適的表達宿主的實例有真菌例如曲霉屬(Aspergillus)(例如在EP-A-0184438和EP-A-0284603中描述的那些)及木霉屬(Trichoderma)；細菌例如芽胞桿菌屬(Bacillus)(例如EP-A-0134048和EP-A-0253455中描述的那些)、鏈霉菌屬(Streptomyces)和假單胞菌屬(Pseudomonas)；及酵母例如克魯維酵母屬(Kluyveromyces)(例如EP-A-0096430和EP-A-0301670中描述的那些)和酵母屬(Saccharomyces)。作為實例，典型的表達宿主可選自黑曲霉(Aspergillusniger)、Aspergillus niger var.tubigenis、Aspergillus niger var.awamori、Aspergillus aculeatis、構巢曲霉(Aspergillus nidulans)、Aspergillusorvzae、Trichoderma reesei、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、乳酸克魯維酵母(Kluyveromyces lactis)和釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。
使用合適的宿主細胞-例如酵母、真菌和植物宿主細胞-可提供翻譯后修飾(例如肉豆蔻酰基化、糖基化、切斷、投石(lapidation)和酪氨酸、絲氨酸或蘇氨酸磷酸化)，而這可能是將最佳的生物活性賦予本發(fā)明重組表達產物所需的。
生物體本發(fā)明涉及的術語“生物體”包括任何可能包含本發(fā)明靶和/或從中獲得的產物的生物體。生物體的實例可包括真菌、酵母或植物。
本發(fā)明涉及的術語“轉基因生物體”包括任何包含本發(fā)明靶和/或所得產物的生物體。
宿主細胞/宿主生物體的轉化正如較早指出的那樣，宿主生物體可為原核生物體或真核生物體。合適的原核宿主實例包括大腸桿菌(E.coli)和枯草桿菌(Bacillussubtilis)。原核宿主轉化的資料在本領域是很多的，例如可參見Sambrook等(Molecular CloningA Laboratory Manual，第二版，1989，Cold Spring Harbor Laboratory出版社)和Ausubel等，Current Protocols inMolecular Biology(1995)，John Wiley & Sons，Inc。
如果使用原核宿主，則核苷酸序列在轉化之前可能需要適當?shù)匦揎?例如除去內含子。
在另一個實施方案中轉基因生物體可為酵母在這方面，酵母也被廣泛地用作異種基因表達的媒介物。釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)具有工業(yè)上使用的長久歷史，包括其用于異種基因表達。Goodey等(1987，Yeast Biotechnology，D R Berry等編輯，pp 401-429，Allen和Unwin，London)及King等(1989，Molecular和Cell Biology ofYeasts，E F Walton和G T Yarronton編輯，pp 107-133，Blackie，Glasgow)對異種基因在釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)中的表達進行了綜述。
由于一些原因，釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)對異種基因表達很適合。首先，它對人類是非致病的且它不能產生某些內毒素。其次，在長達幾個世紀的各種目的商業(yè)開發(fā)之后，它具有長期安全使用的歷史。這已導致廣泛的公眾接受度。第三，對該生物體廣泛的商業(yè)使用和研究，導致產生很多有關釀酒酵母(saccharomyces cerevisiae)遺傳學和生理學以及大規(guī)模發(fā)酵特性方面的知識。
E Hinchcliffe E Kenny對異種基因在釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)中的表達及基因產物的分泌原理進行了綜述(1993，″Yeast asa vehicle for the expression of heterologous genes(酵母作為媒介物用于異種基因的表達)″，Yeasts，Vol 5，Anthony H Rose和J Stuart Harrison編輯，第二版，Academic Press Ltd.)。
可得到幾種類型的酵母載體，包括需要重組宿主基因組以維持的整合載體，及自主復制質粒載體。
為了制備轉基因酵母，通過將核苷酸序列插入到為在酵母中表達所設計的結構中以制備表達構建物。已開發(fā)了幾種用于異種表達的構建物。這些構建物在融合核苷酸序列的酵母中含有啟動子活性，通常為酵母來源的啟動子，例如使用GALl啟動子。通常使用酵母來源的信號序列，例如編碼SUC2信號肽的序列。酵母的終止子活性終止該表達系統(tǒng)。
對酵母轉化而言，已開發(fā)了幾種轉化方案。例如，本發(fā)明的轉基因酵母可通過Hinnen等(1978，Proceedings of the National Academy ofSciences of the USA 75，1929)；Beggs，J D(1978，Nature，London，275，104)及Ito，H等(1983，J Bacteriology 153，163-168)所描述的方法制備。
轉化的酵母細胞用各種選擇性標記來選擇。在用于轉化的標記中有許多營養(yǎng)缺陷型標記例如LEU2、HIS4及TRP1和顯性耐抗生素標記例如氨基苷類抗生素標記如G418。
另一種宿主生物體為植物。構建遺傳修飾植物的基本原理是將遺傳信息插入到植物基因組中，以得到所插入遺傳物質的穩(wěn)定維持。存在幾種插入遺傳信息的技術，兩種主要原理為直接導入遺傳信息和通過使用載體系統(tǒng)導入遺傳信息。可在Potrykus(Annu Rev Plant PhysiolPlant Mol Biol42205-225)和Christou(Agro-Food-Industry Hi-Tech，1994年3月/4月17-27)等的文章中找到通用技術的綜述。植物轉化的內容還可在EP-A-0449375中找到。
因此，本發(fā)明也提供一種用核苷酸序列轉化宿主細胞的方法，該核苷酸序列為靶或表達靶。由核苷酸序列轉化的宿主細胞可在適合于編碼蛋白表達的條件下培養(yǎng)。重組細胞產生的蛋白質可顯示在該細胞表面上。如果需要且被本領域技術人員所理解，含編碼序列的表達載體可用信號序列設計，該信號序列通過特定的原核細胞膜或真核細胞膜直接分泌編碼序列。其他重組構建物可將該編碼序列結合到編碼多肽域的核苷酸序列中，其將有利于可溶性蛋白質的純化(Kroll DJ等(1993)DNA Cell Biol 12441-53)。
變體/同系物/衍生物除本文所述的具體氨基酸序列和核苷酸序列，本發(fā)明還包含它們的變體、同系物和衍生物的用途。此處，術語“同源性”可等同于“一致性”。
在本文中，同源序列包括至少75％、85％或90％一致的氨基酸序列，優(yōu)選至少95％或98％一致。盡管同源性也可理解為相似性(即具有類似化學特性/功能的氨基酸殘基)，但在本發(fā)明的上下文中優(yōu)選用序列一致來表達同源性。
同源性比較可通過眼睛進行，或更常見借助于容易獲得的序列比較程序進行。這些市售計算機程序可計算兩個或多個序列之間的同源性百分數(shù)。
同源性百分數(shù)可在連續(xù)序列上計算，即一個序列與另一個序列比對，將一個序列中的每個氨基酸直接與另一個序列中的相應氨基酸進行比較，一次一個殘基。這稱作“無空位”比對。通常，這類無空位比對只在相對少的殘基數(shù)目上進行。
盡管這是非常簡單和一貫的方法，但它未考慮到例如在其它方式一致的序列對中插入或刪除一個殘基將導致后面的氨基酸殘基偏離比對，因此在進行總體比對時可能導致同源性百分數(shù)大幅度降低。所以，絕大多數(shù)序列比較方法設計為生成最佳比對，該比對考慮到可能的插入和刪除而未過度降低總同源性記分。這通過在序列比對中插入“空位”以最大化局部同源性而實現(xiàn)。
然而，這些更為復雜的方法將“空位罰分”賦予發(fā)生在比對中的每個空位，從而對相同數(shù)目的一致氨基酸，具有盡可能少空位的序列比對(反映兩個進行比較的序列之間具有更高的相關性)將比具有許多空位的序列比對獲得更高的記分?！坝H合空位成本”通常用于對空位的存在要求相對高的成本并對空位中的每個后續(xù)殘基施加較小的罰分。這是最常用的空位評分系統(tǒng)。高空位罰分將理所當然地生成具有較少空位的最佳比對。絕大多數(shù)比對程序允許修改空位罰分。然而，優(yōu)選在使用這類軟件進行序列比較時采用默認值。例如當使用GCGWisconsin Bestfit包(參見以下)時，氨基酸序列的默認空位罰分為空位為-12，每個延長為-4。
因此最大同源性百分數(shù)的計算首先要求生成考慮到空位罰分的最佳比對。進行這類比對的合適計算機程序為GCG Wisconsin Bestfit包(University of Wisconsin，U.S.A.；Devereux等，1984，Nucleic AcidsResearch 12387)。其他可進行序列比較的軟件實例包括但不限于BLAST包(參見Ausubel等，1999 ibid-18章)、FASTA(Atschul等，1990，J.Mol.Biol.，403-410)和GENEWORKS比較工具組。BLAST和FASTA都可進行脫機和在線查詢(參見Ausubel等，1999 ibid，7-58至7-60頁)。然而優(yōu)選使用GCG Bestfit程序。
其它有用的參考發(fā)現(xiàn)于FEMS Microbiol Lett 1999年5月15日；174(2)247-50(出版的勘誤表見FEMS Microbiol Lett 1999年8月1日；177(1)187-8)。
盡管最終同源性百分數(shù)可用一致性進行測定，比對方法本身通常不基于全或無配對比較。相反通常使用分級相似性記分矩陣，基于化學相似性或進化距離而將記分賦予每個成對比較。通常使用的這類矩陣實例為BLOSUM62矩陣，即BLAST程序組的默認矩陣。GCGWisconsin程序通常使用公共默認值或自定義符號比較表(如果提供，有關進一步的詳情參見用戶手冊)。GCG包優(yōu)選使用公共默認值，或在其他軟件情況中使用默認矩陣(例如BLOSUM62)。
一旦軟件生成最佳比對，就有可能計算同源性百分數(shù)，優(yōu)選序列一致性百分數(shù)。軟件通常將此作為序列比較的一部分而執(zhí)行，并生成數(shù)字結果。
序列還可具有氨基酸殘基的缺失、插入或置換，這產生沉默突變并產生功能等效物?？苫跇O性、電荷、溶解度、疏水性、親水性和/或殘基兩性的相似性而進行有意的氨基酸置換，只要保留物質的二級結合活性。例如帶負電荷的氨基酸包括天冬氨酸和谷氨酸；帶正電荷氨基酸包括賴氨酸和精氨酸；不帶電荷極性頭基團、具有類似親水性值的氨基酸包括亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、苯基丙氨酸和酪氨酸。
例如可根據下表進行保守置換。第二欄相同區(qū)段內的氨基酸、優(yōu)選第三欄相同行內的氨基酸可互相置換
表達載體用作靶或用于表達靶的核苷酸序列可整合入重組可復制載體中。載體可用于在和/或從相容宿主細胞復制和表達核苷酸序列。表達可通過使用調控序列進行控制，所述調控序列包含啟動子/增強子和其他表達調節(jié)信號。可以使用原核啟動子和在真核細胞中有功能的啟動子?？梢允褂媒M織特異性或刺激特異性啟動子。還可使用包含得自兩種或更多種上述不同啟動子的序列元件的嵌合啟動子。
由宿主重組細胞通過表達核苷酸序列而生成的蛋白質可被分泌或包含在細胞內，這取決于所使用的序列和/或載體。編碼序列可設計帶有信號序列，該信號序列指導物質編碼序列分泌通過具體的原核或真核細胞膜。
融合蛋白質靶氨基酸序列可作為融合蛋白質而生成，例如幫助提取和純化。融合蛋白質附加物的實例包括谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)、6xHis、GAL4(DNA結合和/或轉錄活化域)和□-半乳糖苷酶。還可方便地在融合蛋白質附加物和目標蛋白質序列之間包括蛋白水解部位以除去融合蛋白質序列。優(yōu)選融合蛋白質不妨礙靶的活性。
融合蛋白質可包含融合到本發(fā)明物質的抗原或抗原決定簇。在該實施方案中，融合蛋白質可為非天然存在的融合蛋白質，該蛋白質包含可用作佐劑的物質以提供免疫系統(tǒng)普遍刺激。抗原或抗原決定簇可附著于物質的氨基或羧基端。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，氨基酸序列可連接到異源序列來編碼融合蛋白質。例如為從肽庫篩選能夠影響物質活性的藥物，編碼表達異源表位的嵌合物質是有用的，該表位由市售抗體識別。
治療本發(fā)明的化合物可用作治療藥物，即用于治療應用中。
術語“治療”包含治愈效果、改善效果和預防效果。
治療可用于人或動物，優(yōu)選雌性動物。
藥用組合物在一個方面中，本發(fā)明提供了一種藥用組合物，該藥用組合物包含本發(fā)明的化合物和任選的藥學上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑(包括它們的組合)。
藥用組合物可在人和獸醫(yī)學中用于人或動物用途，并通常包含任何一種或多種藥學上可接受的稀釋劑、載體或賦形劑。用于治療用途的可接受的載體或稀釋劑為藥學領域所熟知，并見述于例如Remington′s Pharmaceutical Sciences(雷明頓制藥科學)，Mack PublishingCo.(A.R.Gennaro edit.1985)?？筛鶕A定的給藥途徑和標準制藥實踐而選擇藥用載體、賦形劑或稀釋劑。藥用組合物可包含如(或除載體、賦形劑或稀釋劑之外的)任何合適的粘合劑、潤滑劑、懸浮劑、包衣劑、增溶劑。
藥用組合物中可提供有防腐劑、穩(wěn)定劑、染料和甚至調味劑。防腐劑的實例包括苯甲酸鈉、山梨酸和對羥基苯甲酸酯。還可以使用抗氧化劑和懸浮劑。
根據不同的傳遞系統(tǒng)而具有不同的組合物/制劑要求。作為實例，本發(fā)明的藥用組合物可配制為使用小型泵傳遞或通過粘膜途徑傳遞(例如配制為鼻噴霧劑或吸入氣霧劑或可服用溶液)或腸胃外傳遞(其中組合物配制為可注射形式，通過例如靜脈內、肌內或皮下途徑傳遞)?；蛘撸苿┛稍O計為通過兩種途徑傳遞。
當藥物要通過胃腸粘膜進行粘膜傳遞時，它應能夠在通過胃腸道時保持穩(wěn)定；例如它應耐受蛋白水解降解，在酸性pH下穩(wěn)定并耐受膽汁的去污作用。
如果合適，藥用組合物可通過吸入給藥，以栓劑或陰道栓的形式給藥，以洗劑、溶液劑、乳膏劑、軟膏劑或撒布粉的形式局部給藥，通過使用皮膚貼劑給藥，以包含賦形劑(例如淀粉或乳糖)的片劑形式或以膠囊劑或丸劑(單獨或與賦形劑混合)形式或以包含調味劑或著色劑的酏劑、溶液劑或懸浮劑的形式口服給藥，或它們可進行腸胃外注射，例如靜脈內、肌內或皮下注射。對腸胃外給藥，組合物可最好以無菌水溶液形式使用，該水溶液可包含其他物質，例如足夠的鹽或單糖以使溶液與血液等滲。對經頰或舌下給藥，組合物可以用常規(guī)方法配制的片劑或錠劑的形式給藥。
聯(lián)合藥物本發(fā)明的化合物可與一種或多種其他活性藥物(例如一種或多種其他藥用活性藥物)聯(lián)合使用。
作為實例，本發(fā)明的化合物可與其他STS抑制劑和/或其他抑制劑例如芳化酶抑制劑(例如4-羥基雄甾烯二酮(4-OHA))和/或類固醇(例如天然存在的神經類固醇脫氫表雄甾酮硫酸酯(DHEAS)和孕烯醇酮硫酸酯(PS)和/或其他結構相似的有機化合物)聯(lián)合使用。其他STS抑制劑的實例可發(fā)現(xiàn)于上述參考文獻中。作為實例，本發(fā)明所使用的STS抑制劑包括與本文所提供化合物5類似的2-乙基和2-甲氧基17-脫氧化合物之一或兩者。
此外或者，本發(fā)明的化合物可與生物應答調節(jié)劑聯(lián)合使用。
術語生物應答調節(jié)劑(″BRM″)包括細胞因子、免疫調節(jié)劑、生長因子、造血調節(jié)因子、集落刺激因子、趨化因子、溶血因子和血栓溶解因子、細胞表面受體、配體、白細胞粘合分子、單克隆抗體、預防性和治療性疫苗、激素、細胞外基質成分、粘連蛋白等。對某些應用，優(yōu)選生物應答調節(jié)劑為細胞因子。細胞因子的實例包括白介素(IL)(例如IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-19)；腫瘤壞死因子(TNF)(例如TNF-α)；干擾素α、β和γ；TGF-β。對某些應用，優(yōu)選細胞因子為腫瘤壞死因子(TNF)。對某些應用，TNF可為任何類型的TNF(例如TNF-α、TNF-β，包括它們的衍生物或混合物)。更優(yōu)選細胞因子為TNF-α。有關TNF的教導可發(fā)現(xiàn)于技術，例如WO-A-98/08870和WO-A-98/13348中。
給藥一般來說，主治醫(yī)師決定對個體患者最合適的實際劑量，且此劑量根據年齡、體重和具體患者的反應而不同。以下劑量為平均情形的示例。采用更高或更低的劑量范圍當然是個別情況。
本發(fā)明的組合物可通過直接注射給藥。組合物可配制為腸胃外、粘膜、肌內、靜脈內、皮下、眼內或透皮給藥。根據需要，藥物可按0.01-30毫克/千克體重的劑量給藥，例如0.1-10毫克/千克體重，更優(yōu)選0.1-1毫克/千克體重。
作為進一步的實例，本發(fā)明的藥物可根據每天1-4次的方案給藥，優(yōu)選每天1次或2次。具體的劑量水平和劑量頻率對任何具體的患者可以不同，且取決于各種因素，包括所采用的具體化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和作用時間長度、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥方式和時間、排泄率、藥物聯(lián)合、具體病癥的嚴重程度和經受治療的主體。
除上述的典型傳遞方式之外，術語“給藥”還包括通過例如脂質介導轉染、脂質體、免疫脂質體、脂質轉染(lipofectin)、陽離子表面兩親物(CFA)和它們的組合等技術給藥。這類傳遞機理的途徑包括但不限于粘膜、鼻、口、腸胃外、胃腸、局部或舌下途徑。
術語“給藥”包括但不限于通過粘膜途徑傳遞(例如作為鼻噴霧劑或吸入氣霧劑或作為可服用溶液)；通過腸胃外途徑傳遞(通過可注射形式傳遞，例如靜脈內、肌內或皮下途徑)。
因此對藥物給藥，本發(fā)明的STS抑制劑可以任何合適的方式、采用常規(guī)藥物配制技術和藥用載體、助劑、賦形劑、稀釋劑等進行配制，且通常用于腸胃外給藥。近似有效劑量率可為1-1000毫克/天，例如10-900毫克/天或甚至100-800毫克/天，取決于所討論化合物的單獨活性和患者的平均體重(70千克)。優(yōu)選和更有效的化合物的更常用劑量率為200-800毫克/天，更優(yōu)選200-500毫克/天，最優(yōu)選200-250毫克/天。它們可按單劑量方案、分劑量方案和/或多劑量方案持續(xù)給藥數(shù)天。對口服給藥，它們可配制為每單位劑量包含100-500毫克化合物的片劑、膠囊劑、溶液劑或懸浮劑?；蛘邇?yōu)選化合物配制在合適的腸胃外給藥載體中經腸胃外給藥，并提供200-800毫克的單日劑量率，優(yōu)選200-500毫克，更優(yōu)選200-250毫克。然而這類有效日劑量根據有效成分的固有活性和患者體重而變化，這類變化屬于主治醫(yī)師的技術和判斷范疇內。
細胞周期本發(fā)明的化合物可用于細胞周期疾病的治療方法中。
如″Molecular Cell Biology(分子細胞生物學)″第3版，Lodish等，177-181頁所述，不同的真核細胞可以相當不同的速率生長和分裂。例如酵母細胞可每120分鐘分裂一次，海膽和昆蟲的胚胎細胞中受精卵的首次分裂僅需1530分鐘，因為一個大的預先存在的細胞發(fā)生再分裂。然而，絕大多數(shù)生長中的植物和動物細胞需要10-20小時使數(shù)量增倍，有些以更慢的速率復制。成人的許多細胞(例如神經細胞和紋狀肌肉細胞)根本不發(fā)生分裂；其他如幫助愈合傷口的成纖維細胞按需要生長，但在其他情況下為靜息。
然而，每個分裂的真核細胞必須將相同的遺傳物質賦予兩個子細胞。真核細胞中的DNA合成不在細胞分裂周期中發(fā)生，而是限制于細胞分裂前的一部分。
真核DNA合成和細胞分裂的關系已經在能夠生長和分裂的哺乳動物細胞的培養(yǎng)物中得到深入分析。與細菌相比，發(fā)現(xiàn)真核細胞僅花費一部分時間用于DNA合成，且在細胞分裂(有絲分裂)前數(shù)小時就已完成。因此在DNA合成之后和細胞分裂之前出現(xiàn)時間間隙；在分裂之后和下一輪DNA合成之前出現(xiàn)另一個時間間隙。這個分析得出結論為，真核細胞周期由M(有絲分裂)相、G1相(第一個間隙)、S(DNA合成)相、G2相(第二個間隙)組成，并返回M。有絲分裂之間的各相(G1、S和G2)共同稱作分裂間期。
組織中的許多非分裂細胞(例如所有的靜息成纖維細胞)將周期中止于有絲分裂之后和DNA合成之前；這類“休眠”細胞被認為脫離細胞周期并處于G0態(tài)。
當細胞處于細胞周期的三個分裂間期階段之一時，可以通過用熒光激活細胞分選器(FACS)測量它們的相對DNA含量來識別細胞處于G1(DNA合成以前)的細胞具有確定數(shù)量為x的DNA；S相期間(DNA復制)為x至2x；當處于G2(或M)時，它具有2x的DNA。
動物細胞中的有絲分裂和胞質分裂的階段如下(a)分裂間期。分裂間期的G2階段先于有絲分裂開始。在S相期間染色體DNA已經復制并結合到蛋白質上，但是染色體仍未被看作明顯結構。細胞核是在光學顯微鏡下可見的唯一核結構。在DNA復制前的二倍體細胞中具有每種類型的兩種形態(tài)染色體，細胞被稱為2n。在G2中DNA復制后，細胞為4n。每個染色體DNA具有4個拷貝。因為姐妹染色體還未彼此分離，它們被稱為姐妹染色單體。
(b)早前期。每個中心粒與新形成的子中心粒一起開始向細胞的相反極移動；染色體可見為長線。核膜開始解聚為小囊。
(c)中和晚前期。染色體縮聚已完成；每個可見的染色體結構由兩個染色單體在它們的著絲點相結合而組成。每個染色單體包含兩個新復制的子DNA分子之一。微管紡錘體開始從鄰近中心粒的區(qū)域進行輻射，中心粒移動靠近它們的極。某些紡錘體纖維從一個極達到另一個極；絕大多數(shù)達到染色單體并附著于著絲點上。
(d)中期。染色體向細胞的赤道移動，在本文它們在赤道平面內排列成線。姐妹染色單體還未分離。
(e)后期。兩個姐妹染色單體分離為獨立的染色體。每個包含通過紡錘體纖維連接到一個極的著絲點，染色體向極移動。因此每個染色體的一個拷貝被賦予每個子細胞。同時細胞伸延，如極對極紡錘體所做。在分裂溝開始形成時開始胞質分裂。
(f)末期。在子核周圍形成新的膜；染色體展開并變得不太明顯，細胞核重新變?yōu)榭梢?，在每個子核周圍形成核膜。胞質分裂幾乎完成，紡錘體隨微管和其他纖維的解聚而消失。在有絲分裂整個過程中，每個極的“子”中心粒生長至達到全長。在末期，每個原始中心粒的復制已經完成，新的子中心粒在下一個分裂間期期間生成。
(g)分裂間期。胞質分裂一經完成，細胞進入細胞周期的G1相并沿周期重新進行。
可以理解的是細胞周期是極為重要的細胞過程。偏離正常細胞周期可導致許多醫(yī)學疾病。增強和/或無限制的細胞周期可導致癌癥。減少的細胞周期可導致變性病癥。使用本發(fā)明的化合物可提供治療這類疾病和病癥的方法。
因此，本發(fā)明的化合物可適用于治療細胞周期疾病(例如癌癥，包括激素依賴性和激素非依賴性癌癥)。
此外，本發(fā)明的化合物可適用于治療癌癥，例如乳腺癌、卵巢癌、子宮內膜癌、肉瘤、黑色素瘤、前列腺癌、胰腺癌等和其他實體瘤。
對某些應用，細胞周期被抑制和/或預防和/或停滯，優(yōu)選其中細胞周期被預防和/或停滯。在一個方面中，細胞周期可被抑制和/或預防和/或停滯于G2/M相。在一個方面中，細胞周期可被不可逆轉地預防和/或抑制和/或停滯，優(yōu)選其中細胞周期被不可逆轉地預防和/或停滯。
術語“不可逆轉地預防和/或抑制和/或停滯”是指在應用本發(fā)明的化合物后，除去化合物仍可觀察到化合物的效果，即預防和/或抑制和/或停滯細胞周期。更具體地講，術語“不可逆轉地預防和/或抑制和/或停滯”是指當根據本文所提供的細胞周期測定方案測定時，用目標化合物處理的細胞相對對照細胞顯示出在方案I階段2后更弱的生長。這個方案的細節(jié)如下所示。
因此，本發(fā)明提供了這樣的化合物通過預防和/或抑制和/或停滯細胞周期而對雌激素受體陽性(ER+)和ER陰性(ER-)乳腺癌細胞的體外生長產生抑制；和/或導致完整動物(即未切除卵巢)中亞硝基-甲基脲(NMU)誘導的乳房腫瘤縮小，和/或預防和/或抑制和/或停滯癌細胞的細胞周期；和/或通過預防和/或抑制和/或停滯細胞周期而體內作用和/或用作細胞周期激動劑。
細胞周期測定(方案7)方法階段1將MCF-7乳腺癌細胞以105細胞/孔的密度接種于多孔培養(yǎng)板中。允許細胞粘連和生長直至約30％融合，此時對它們作如下處理對照組-無任何處理目標化合物(COI)20μM細胞在包含COI的生長培養(yǎng)基中生長6天，每3天更換培養(yǎng)基/COI。在這個時期結束時，使用Coulter細胞計數(shù)器計數(shù)細胞數(shù)量。
階段2在用COI處理細胞6天后，將細胞以104細胞/孔的密度再次接種。不加入任何進一步的處理。允許細胞在生長培養(yǎng)基的存在下再繼續(xù)生長6天。在這個時期結束時，再次計數(shù)細胞數(shù)量。
癌癥如所述，本發(fā)明的化合物可用于治療細胞周期疾病。具體的細胞周期疾病為癌癥。
癌癥仍然是大多數(shù)西方國家中死亡率的主要原因。迄今為止癌癥治療的發(fā)展已經包括阻斷激素的作用或合成來抑制激素依賴性腫瘤的生長。然而，目前應用更具有攻擊性的化學治療來治療激素非依賴性腫瘤。
因此，激素依賴性和/或激素非依賴性腫瘤的抗癌治療藥物的發(fā)展，并缺乏某些或全部化學治療相關性副作用，將代表主要的治療進步。
已經知道雌激素在其合成后經歷許多羥基化和綴合反應。直至最近人們認為這類反應是代謝過程的一部分而最終賦予雌激素以水溶性并促進它們從身體中消除。現(xiàn)在已經證明某些羥基代謝物(例如2-羥基和16α-羥基)和綴合物(例如雌酮硫酸酯，E1S)對確定雌激素在體內的某些復雜反應具有重要意義。
研究人員們已經研究了2-和16-羥基化雌激素的形成與改變乳腺癌風險的關系?，F(xiàn)在已經證明提高2-羥基化酶活性的因素涉及降低的癌癥風險，而提高16α-羥基化的因素可增加乳腺癌的風險。對雌激素代謝物生物學作用的進一步興趣已經被不斷增加的證據所激發(fā)，即2-甲氧基雌二醇為具有抗有絲分裂性質的內源性代謝物。2-MeOE2是由2-羥基雌二醇(2-OHE2)通過兒茶酚雌激素甲基轉移酶(一種在體內廣泛分布的酶)而形成。
研究人員們已經顯示在體內2-MeOE2抑制腫瘤的生長，所述腫瘤通過皮下注射Meth A肉瘤、B16黑色素瘤或MDA-MB-435雌激素受體陰性(ER-)乳腺癌細胞而生成。它還抑制內皮細胞增殖和遷移以及體外血管生成。人們提出2-MeOE2抑制體內腫瘤生長的能力可能歸因于它抑制腫瘤誘導血管生成的能力，而不是直接抑制腫瘤細胞的增殖。
2-MeOE2發(fā)揮其有效的抗有絲分裂和抗血管生成效果的機理還有待闡明。有證據表明在高濃度時，它可抑制微管聚合并用作秋水仙堿結合到微管蛋白的弱抑制劑。然而最近在阻斷有絲分裂的濃度下，細胞內的微管蛋白絲未發(fā)現(xiàn)解聚而是具有與經泰素處理后所見相同形態(tài)。因此，有可能如同泰素(用于治療乳腺和卵巢乳腺癌的藥物)一樣，2-MeOE2通過穩(wěn)定微管動力學而起作用。
雖然確認2-MeOE2為新的癌癥治療藥代表重要的進步，經口給藥的雌激素的生物利用度很差。此外，它們在首次通過肝臟期間經歷廣泛的代謝。作為治療乳腺癌的類固醇硫酸酯酶抑制劑的開發(fā)研究計劃的一部分，雌酮-3-O-氨基磺酸酯(EMATE)被確認為有效的活性定點抑制劑。出乎意料的是，EMATE證明具有有效的雌激素特性，它在大鼠中的口服子宮營養(yǎng)活性比雌二醇的高100倍。其提高的雌激素性被認為來源于它被紅細胞(rbcs)吸收，這保護它在通過肝臟時免于失活并用作存儲器，用于它在長時間周期內緩慢釋放。已合成和試驗了許多A環(huán)修飾類似物，包括2-甲氧基雌酮-3-O-氨基磺酸酯。雖然此化合物用作類固醇硫酸酯酶抑制劑時與EMATE等效，但它沒有雌激素性。
我們相信本發(fā)明的化合物提供了癌癥特別是乳腺癌的治療方法。
此外或或者，本發(fā)明的化合物可用于阻斷癌癥的生長，所述癌癥包括白血病和實體瘤，例如乳腺、子宮內膜、前列腺、卵巢和胰腺腫瘤。
關于雌激素的治療我們相信某些本發(fā)明的化合物可用于控制體內、特別是女性體內的雌激素水平。因此，某些化合物可用于提供控制生育的方法，例如口服避孕片劑、丸劑、溶液或錠劑?；蛘弑景l(fā)明化合物可以為植入物或貼劑的形式。
因此，本發(fā)明的化合物可用于治療雌激素相關性激素病癥。
此外或或者，本發(fā)明的化合物可用于治療除那些雌激素相關性病癥之外的激素病癥。因此，本發(fā)明的化合物還能夠影響激素活性并且還能夠影響免疫應答。
神經變性疾病我們相信一些本發(fā)明化合物可用于治療神經變性疾病及類似病癥。
作為實例，認為STS抑制劑可用于提高患者或者尋求記憶力提高的個體的記憶功能，所述患者患有疾病例如健忘癥、頭部損傷、阿爾茨海默病、癲癇性癡呆、早老性癡呆、創(chuàng)傷后癡呆、老年性癡呆、血管性癡呆及中風后癡呆等。
TH1我們相信一些本發(fā)明化合物可用于TH1用途。
作為實例，認為在巨噬細胞或其他提供抗原的細胞中STS抑制劑的存在可導致降低敏感T細胞提高TH1(高IL-2、IFNγ低IL-4)反應的能力。因此其他甾族化合物例如糖皮質激素的正常調節(jié)影響將占優(yōu)勢。
炎性病癥我們相信一些本發(fā)明化合物可用于治療炎性病癥-例如與以下任何一種或多種疾病相關的病癥自身免疫性疾病包括例如類風濕性關節(jié)炎、I型和II型糖尿病、全身性紅斑狼瘡、多發(fā)性硬化、重癥肌無力、甲狀腺炎、血管炎、潰瘍性結腸炎及節(jié)段性回腸炎、皮膚病例如銀屑病和接觸性皮炎；移植物抗宿主??；濕疹；哮喘和移植后的器官排斥反應。
作為實例，認為STS抑制劑可預防DHEA或相關甾族化合物對免疫和/或炎癥反應的正常生理效應。
本發(fā)明化合物可用于制備顯示內源性糖皮質激素樣作用的藥物。
其他治療也可理解本發(fā)明化合物/組合物可具有其他重要的醫(yī)學用途。
例如，本發(fā)明化合物或組合物可用于治療WO-A-99/52890中所列疾病，即另外，或者本發(fā)明化合物或組合物可用于治療WO-A-98/05635中所列疾病。為了便于參考，現(xiàn)提供所列疾病的一部分癌癥、炎癥或炎性疾病、皮膚病、發(fā)熱、心血管作用、出血、凝結及急性相反應、惡病質、厭食癥、急性感染、HIV感染、休克狀態(tài)、移植物抗宿主反應、自身免疫性疾病、再灌注損傷、腦膜炎、偏頭痛及阿司匹林依賴性抗血栓癥；腫瘤生長、侵襲和擴散、血管生成、轉移、惡性腫瘤、腹水及惡性胸膜腔積液；腦缺血、缺血性心臟病、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎、骨質疏松癥、哮喘、多發(fā)性硬化、神經變性、阿爾茨海默病、動脈硬化癥、休克、血管炎、節(jié)段性回腸炎及潰瘍性結腸炎；牙周炎、齒齦炎；銀屑病、特應性皮炎、慢性潰瘍、大皰性表皮松解；角膜潰瘍、視網膜病及手術傷口愈合；鼻炎、過敏性結膜炎、濕疹、過敏反應；再狹窄、充血性心力衰竭、子宮內膜異位、動脈硬化癥或內因硬化癥(endosclerosis)。
另外，或者本發(fā)明化合物或組合物可用于治療WO-A-98/07859中所列疾病。為了便于參考，現(xiàn)提供所列疾病的一部分細胞因子及細胞增殖/分化活性；免疫抑制劑或免疫刺激劑活性(例如用于治療免疫缺陷，包括感染人免疫缺陷病毒；調節(jié)淋巴細胞生長；治療癌癥和許多自身免疫性疾病，及預防移植排斥或誘導腫瘤免疫性)；調節(jié)造血作用，例如治療骨髓性或淋巴性疾??；促進骨、軟骨、腱、韌帶及神經組織的生長，例如愈合傷口、灼傷、潰瘍及牙周疾病和神經變性的治療；促卵泡成熟激素(調節(jié)生育力)的抑制或活化；趨化性/化學動力學活性(例如動員特殊細胞類型到損傷或感染部位)；止血和溶解血栓活性(例如治療血友病及中風)；抗炎活性(用于治療例如膿毒性休克或節(jié)段性回腸炎)；作為抗微生物劑；例如代謝或行為調節(jié)劑；作為止痛劑；治療具體缺陷性疾??；用人用或獸用藥物治療例如銀屑病。
另外，或者本發(fā)明組合物可用于治療WO-A-98/09985中所列疾病。為了便于參考，現(xiàn)提供所列疾病的一部分巨噬細胞抑制和/或T細胞抑制活性及抗炎活性；抗免疫活性，即對細胞和/或體液免疫反應的抑制作用，包括不與炎癥相關的反應；抑制巨噬細胞和T細胞附著于細胞外基質成分和纖連蛋白的能力，以及上調的fas受體在T細胞中的表達；抑制不必要的免疫反應及包括關節(jié)炎在內的炎癥，包括類風濕性關節(jié)炎、與過敏相關的炎癥、變應性反應、哮喘、全身性紅斑狼瘡、膠原病及其他自身免疫性疾病、與動脈粥樣硬化癥相關的炎癥、動脈硬化、動脈粥樣硬化性心臟病、再灌注損傷、心搏停止、心肌梗塞、血管炎性疾病、呼吸窘迫綜合征或其他心肺疾病、與消化性潰瘍相關的炎癥、潰瘍性結腸炎及其他胃腸道疾病、肝纖維化、肝硬化或其他肝病、甲狀腺炎或其他腺性疾病、腎小球性腎炎或其他腎臟和泌尿道疾病、耳炎或其他耳鼻喉科疾病、皮炎或其他皮膚病、牙周疾病或其他牙齒疾病、睪丸炎或附睪炎、不育癥、睪丸創(chuàng)傷或其他免疫相關性睪丸疾病、胎盤機能障礙、胎盤機能不全、習慣性流產、驚厥、子癇前期及其他免疫和/或炎癥相關性婦科疾病、后眼色素層炎、中眼色素層炎、前眼色素層炎、結膜炎、脈絡膜視網膜炎、眼色素層視網膜炎(uveoretinitis)、視神經炎、眼內炎癥例如視網膜炎或囊樣黃斑水腫、交感神經眼炎、鞏膜炎、色素性視網膜炎、變性溶化(fondus)疾病的免疫及炎性成分、眼創(chuàng)傷的炎性成分、感染引起的眼部炎癥、增殖性玻璃體視網膜病、急性缺血性眼神經病、過度瘢痕形成例如在青光眼濾過手術之后形成瘢痕、眼植入物免疫和/或炎癥反應及其他免疫和炎癥相關性眼科疾病、與自身免疫性疾病或炎癥或障礙相關的炎癥，其中在中樞神經系統(tǒng)(CNS)或在任何其他器官中，免疫和/或炎癥抑制將是有益的，帕金森病、帕金森病治療引發(fā)的并發(fā)癥和/或副作用、AIDS相關的癡呆合并HIV相關的腦病、Devic氏病、Sydenham舞蹈病、阿爾茨海默病及其他變性疾病、CNS病癥或障礙、stokes炎性成分、脊髓灰質炎后綜合征、精神病障礙的免疫和炎性成分、脊髓炎、腦炎、亞急性硬化性全腦炎、腦脊髓炎、急性神經病、亞急性神經病、慢性神經病、Guillaim-Barre綜合征、Sydenham chora、重癥肌無力、假腦瘤、Down氏綜合征、亨廷頓舞蹈病、肌萎縮性側索硬化癥、CNS壓迫或CNS創(chuàng)傷或CNS感染的炎性成分、肌肉萎縮和營養(yǎng)不良的炎性成分以及免疫和炎癥相關性疾病、中樞及外周神經系統(tǒng)病癥或障礙、創(chuàng)傷后炎癥、膿毒性休克、傳染病、手術引發(fā)的炎性并發(fā)癥或副作用、骨髓移植或其他移植并發(fā)癥和/或副作用、基因療法引發(fā)的炎性和/或免疫并發(fā)癥和副作用，例如由病毒攜帶者引起的感染，或與AIDS相關的炎癥、抑制體液和/或細胞免疫反應、通過減少單核細胞或淋巴細胞的量來治療或改善單核細胞或白細胞增殖性疾病例如白血病，在移植天然或人造細胞、組織和器官例如角膜、骨髓、器官、晶狀體、起搏器、天然或人造皮膚組織的情況下預防和/或治療移植排斥。
化合物制備本發(fā)明化合物可通過將合適的醇與合適的氯化物反應制備。作為實例，本發(fā)明氨基磺酸酯化合物可通過將合適的醇與合適的式R5R6NSO2Cl的氨磺酰氯反應制備。
進行該反應的典型條件如下。
于0℃將氫化鈉和氨磺酰氯加入到攪拌的醇的無水二甲基甲酰胺溶液中。隨后，使該反應升溫至室溫，并且再繼續(xù)攪拌24小時。將該反應混合物傾入到冷的飽和碳酸氫鈉溶液中，并用二氯甲烷萃取所得水相。將合并的有機萃取物用無水MgSO4干燥。過濾，然后真空蒸發(fā)溶劑，并用甲苯共蒸發(fā)，得到粗殘留物，其進一步通過快速層析純化。
優(yōu)選在反應之前用氨磺酰氯適當?shù)貙⒋佳苌?。必要時，醇的官能團可用已知方法保護并在反應結束時除去該保護基團或那些保護基團。
優(yōu)選按照Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)的方法制備氨基磺酸酯化合物。
可適當?shù)亟Y合Page等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB92/01586的方法制備膦酸酯化合物。
可適當?shù)夭捎肞age等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB92/01586的方法制備磺酸酯化合物。
可適當?shù)夭捎肞age等(1990 Tetrahedron 46；2059-2068)及PCT/GB91/00270的方法制備硫代膦酸酯化合物。
優(yōu)選的制備方法也在下文中提供。
實施例本發(fā)明現(xiàn)在將通過實施例并參照附圖進一步詳細地描述，其中圖1顯示簡要流程；圖2顯示簡要流程；圖3顯示圖；和圖4顯示圖；圖5顯示板；
圖6顯示板；圖7顯示圖；圖8顯示圖；圖9顯示圖；圖10顯示板；圖11顯示圖；圖12顯示圖；圖13顯示圖；圖14顯示熒光照片；圖15顯示圖；圖16顯示圖；圖17顯示圖；本發(fā)明現(xiàn)在將僅通過實施例描述。然而，應理解這些實施例也代表本發(fā)明優(yōu)選的化合物，以及制備這些化合物的優(yōu)選路線及用于制備這些化合物的有用中間體。
合成按照下列流程合成2-取代的17-烯基氨基磺酸酯
17-烯基酯官能的轉化
腈官能化的EMATES的合成
17-烷基-EMATEs
17-氨基雌激素 其中P為保護基團。
方法A將氨磺酰氯(680μl，0.507mmol)的0.745M甲苯溶液真空濃縮(水浴溫度在30℃以下)，并在加入DMA(1.5ml)之前于冰浴中冷卻。然后加入合適的苯酚(0.253mmol)并使該反應達到室溫過夜。加入水并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取該混合物。合并有機組分，用水(5×10ml)及鹽水(10ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。
雌酮3-O-叔丁基二甲基甲硅烷基醚1 方法B將雌酮(10g，37mmol)、咪唑(6.4g，94mmol)及叔丁基二甲基氯化硅(6.7g，44.4mmol)溶于二甲基甲酰胺(130ml)中，并在氮氣下室溫攪拌過夜。加入水并用二氯甲烷(3×100ml)萃取混合物。合并的有機組分用水(2×100ml)及鹽水(10ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。
乙醇重結晶，得到保護的雌酮白色針狀結晶(11.34g，29.6mmol，80％)。m.p.172-173℃(文獻值m.p.170-172℃).
δH(CDCl3)0.19[6H，s，Si(CH3)2)]，0.91(3H，s CH3)，0.98[9H，s，C(CH3)3]，1.36-1.68(5H，m，烷基H)，1.90-2.55(7H，m，烷基H)，2.82-2.88(2H，m，烷基H)，6.57(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.62(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.12(1H，d，J＝8.6，ArH-1).
m.p.Fevig等J.Org.Chem.521987，247-251。菲-17-亞基]-乙酸乙酯2 方法C于室溫、氮氣下，無水THF(15ml)中攪拌氫化鈉(520mg，17.4mmol)直到所有固體溶解。加入膦酸乙酸三乙酯(3.20g，2.84ml，7.14mmol)并在加入TBS雌酮1(2g，5.2mmol)之前攪拌10分鐘。將所得混合物回流加熱過夜。加入水并用乙酸乙酯(3×50ml)萃取混合物。合并的有機組分用水(2×50ml)及鹽水(10ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。
快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到兩種異構體的混合物，為白色結晶固體(1.73g，3.77mmol，73％)。由NMR確定異構體的比率為5∶1。m/z(EI+)454(M+，50％)，397(90％)，82.9(100％)。HRMS(FAB+)計算值C28H42O3Si 454.2903，實測值454.2910。
方法Ewers等Tetrahedron，541998，4277-4282。
(3-羥基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙酸乙酯3 方法D于室溫、氮氣下，攪拌TBS醚2(100mg，0.220mmol)、1M叔丁基氟化銨的THF溶液(300μl，0.300mmol)及THF(5ml)2小時。加入水并用乙酸乙酯(3×5ml)萃取混合物。合并有機組分，用水(2×5ml)及鹽水(5ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。
快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到兩種異構體的混合物，為白色結晶固體(74mg，0.218mmol，99％)。m.p.118-120℃。由NMR確定異構體的比率為5∶1。
δH(CDCl3)0.86(3H，s，CH3)，1.30(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.41-2.91(15H，m，烷基H)，4.17(2H，q，J＝7.0)，5.20(1H，s，OH)，5.59(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.58(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.64(1H，dd，J＝8.2，2.7，ArH-2)，7.15(1H，d，J＝8.2，ArH-1)；m/z(FAB+)341.1[(MH)+，100％]；HRMS(FAB+)計算值C22H28O3+H341.2116，實測值341.2111。
2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基]-乙醇4
方法E于-78℃、氮氣下，向TBS醚2(300mg，0.66mmol)的THF(5ml)溶液中加入1.5M二異丁基氫化銨的甲苯溶液(1ml，1.5mmol)。將該溶液升溫至0℃并攪拌1.5小時。于0℃加入甲醇和水并使該溶液升溫至室溫，攪拌30分鐘。用乙酸乙酯(3×10ml)萃取該渾濁溶液，并用水(2×10ml)及鹽水(10ml)洗滌合并的有機組分，干燥(Na2SO4)并真空濃縮。
所得白色固體(179mg，0.434mmol，66％)無需進一步純化即可使用。m.p.128-130℃(文獻值m.p.128-130℃).δH(CDCl3)0.18[6H，s，Si(CH3)2)]，0.81(3H，s CH3)，0.98[9H，s，C(CH3)3]，1.03-1.61(7H，m，烷基H)，1.74-1.97(3H，m，烷基H)，2.16-2.42(3H，m，烷基H)，2.75-2.86(2H，m，烷基H)，4.07-4.23(2H，m，CH2OH)，5.26-5.31(1H，m，烯H)，6.55(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.61(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.13(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。由NMR確定異構體的比率為8∶1。
m/z(FAB+)412.1(M+，7％)，73.0(100％)，147(35％)；HRMS(FAB+)計算值C26H40O2Si 412.2798，實測值412.2778。
方法Tanabe等專利號US 6,281,205 B1.2001?？勾萍に冂摅w化合物及相關藥用組合物及使用方法。
m.p.Ewers等Tetrahedron，541998，4277-4282。
17-(2-羥基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇，5 用烯丙基醇4(179mg，434mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到兩種異構體的混合物，為白色粉末(74mg，0.218mmol，99％)。m.p.200-202℃。δH(CDCl3)0.81(3H，s，CH3)，1.13-1.56(7H，m，烷基H)，1.82-1.98(3H，m，烷基H)，2.16-2.43(3H，m，烷基H)，2.82-2.87(2H，m，烷基H)，5.27-5.32(2H，m，CH2OH)，4.53(1H，s，OH)，5.27-5.32(1H，m，烯H)，6.56(1H，d，J＝2.3，ArH-4)，6.63(1H，dd，J＝8.6，2.3，ArH-2)，7.17(1H，d，J＝8.6，ArH-1)；m/z(FAB+)298.1(M+，75％)，281.1(100％)；HRMS(FAB+)計算值C20H26O2298.1933，實測值298.1935。菲-17-基]-乙酸乙酯6 方法F在氫氣氣氛下，攪拌酯2(300mg，0.66mmol)和5％鈀/碳酸鈣(17mg)的乙醇(5ml)溶液過夜。將該反應混合物通過硅藻土(Celite)床過濾并用乙醇洗滌。濾液真空濃縮。
快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到還原產物6的白色結晶固體(233mg，0.51mmol，77％)。m.p.64-66℃.
δH(CDCl3)0.18[6H，s，Si(CH3)2)]，0.64(3H，s CH3)，0.97[9H，s，C(CH3)3]，1.27(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.30-1.56(5H，m，烷基H)，1.73-2.42(9H，m，烷基H)，2.79-2.82(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.4，CH2)，6.54(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.60(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.11(1H，d，J＝8.6，ArH-1)；m/z(FAB+)456.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C28H44O3Si456.3060，實測值456.3041。
方法Tanabe等專利號US 6,281,205 B1.2001。抗雌激素甾體化合物及相關藥用組合物及使用方法。
(3-羥基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯7 用酯6(100mg，0.211mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到苯酚7的灰色針狀物(56mg，0.164mmol，78％)。m.p.126-128℃。
δH(CDCl3)0.63(3H，s CH3)，1.27(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.30-2.43(14H，m，烷基H)，2.78-2.84(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.0，CH2)，4.60(1H，s，OH)，6.56(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.62(1H，dd，J＝8.2，2.7，ArH-2)，7.14(1H，d，J＝8.2，ArH-1).
m/z(FAB+)342.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H30O3342.2195，實測值342.2201。
2-(3-羥基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-丙酸乙酯8 用TBS雌酮1(1g，2.6mmol)及2-膦?；崛一?1.7g，1.53ml，7.14mmol)按方法C的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到去保護產物8的單一異構體，為白色粉末(170mg，0.48mmol，18％)。m.p.113-115℃。δH(CDCl3)0.91(3H，s CH3)，1.40(3H，t，J＝6.6，CH3)，1.43-1.68(7H，m，烷基H)，1.91-2.28(6H，m，烷基H)，2.37-2.42(2H，m，烷基H)，2.87-2.91(2H，m，CH2)，4.00(2H，q，J＝7.0，CH2)，6.64(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.71(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.19(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。菲-17-亞基]-乙腈9 用TBS雌酮1(5g，13.0mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(4.02g，4.4ml，22.7mmol)按方法C的描述進行該反應。隨后后處理粗反應混合物，其TLC及1H NMR表明起始原料不再存在，且該產物為比率為6∶1的兩種異構體9的混合物。該混合物無需進一步純化即可使用。
(3-羥基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙腈10 用甲硅烷基醚9(100g，0.246mmol)按方法D的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到苯酚10單一異構體的白色粉末(53mg，0.18mmol，73％)。m.p.264-266℃。δH(DMSO)0.84(3H，s CH3)，1.24-1.50(8H，m，烷基H)，1.82-1.87(2H，m，烷基H)，1.93-1.97(1H，m，烷基H)，2.09-2.16(1H，m，烷基H)，2.18-2.34(1H，m，烷基H)，2.66-2.77(2H，m，烷基H)，5.37(1H，m，烯H)，6.44(1H，d，J＝2.64，ArH-4)，6.51(1H，dd，J＝8.2，2.6，ArH-2)，7.06(1H，d，J＝8.2，ArH-1)，9.02(1H，s，OH)；m/z(FAB+)293.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C20H23ON 293.1780，實測值293.1783。
13-甲基-17-亞甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇11 將叔丁醇鉀(220mg，1.96mmol)加入到無水THF(5ml)中并攪拌10分鐘，使該鹽完全溶解。將甲基三苯基溴化鏻(700mg，1.96mmol)分次加入到該鹽溶液中。將雌酮(500mg，1.85mmol)溶于THF(5ml)并用注射器滴加到該淺黃色溶液中。室溫攪拌2小時后，將該反應回流加熱過夜。將該反應冷卻，加入水(10ml)并用乙酸乙酯(3×10ml)萃取該混合物。合并有機組分，用水(2×10ml)和鹽水(10ml)洗滌，干燥(Na2SO4)并真空濃縮?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)并用甲苯/己烷重結晶，得到烯11的白色結晶固體(53mg，0.198mmol，11％)。m.p.130-132℃(文獻值m.p.134-137℃)。δH(CDCl3)0.82(3H，s CH3)，1.20-1.62(6H，m，烷基H)，1.78-1.85(1H，m，烷基H)，1.90-1.99(2H，m，烷基H)，2.16-2.38(3H，m，烷基H)，2.50-2.59(1H，m，烷基H)，2.78-2.92(2H，m，烷基H)，4.50(1H，s，OH)，4.67(2H，t，J＝2.0，烯H)，6.57(1H，d，J＝2.7，ArH-4)，6.63(1H，dd，J＝8.6，2.7，ArH-2)，7.17(1H，d，J＝8.6，ArH-1)。
方法Williams，Preparation of Alkenes(烯的制備)，OxfordUniversity出版社，1996，32頁。
m.p.Forcellese等J.Org.Chem.461981，3326-3328。
3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-酮12
用2-乙基雌酮(4g，13.4mmol)按方法B的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到甲硅烷基醚12的白色結晶固體(5.02g，12.2mmol，91％)。δH(CDCl3)0.24[6H，s，Si(CH3)2)]，0.98(3H，s，CH3)，1.01[9H，s，C(CH3)3]，1.17(3H，t，J＝7.8，CH3)，1.40-1.66(6H，m，烷基H)，1.94-2.52(7H，m，烷基H)，2.57(2H，q，J＝7.8，CH2)，2.82-2.86(2H，m，烷基H)，6.50(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)。菲-17-亞基]-乙酸乙酯13 用甲硅烷基醚12(412mg，1mmol)及膦酸乙酸三乙酯(271mg，240μl，1.2mmol)按方法C的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到兩種異構體13的無色油狀物(290mg，0.602mmol，60％)。由1H NMR確定異構體的比率為6∶1。δH(CDCl3)0.22[6H，s，Si(CH3)2)]，0.97(3H，s CH3)，1.00[9H，s，C(CH3)3]，1.17(3H，t，J＝7.8，CH3)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.59-2.44(11H，m，烷基H)，2.56(2H，q，J＝7.8，CH2)，2.76-2.92(4H，m，烷基H)，4.15(2H，q，J＝7.0，CH2)，5.62(1H，t，J＝2.0，烯H)，6.48(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)482.1(M+，90％)，73.0(100％)；HRMS(FAB+)計算值C30H46O3Si482.3216，實測值？？。
Z-和E-(2-乙基-3-羥基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙酸乙酯14a和14b 用酯13(290mg，0.639mmol)按方法D的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到Z-異構體14a的白色粉末(28mg，0.0757mmol，12％).m.p.157-159℃。δH(CDCl3)1.04(3H，s CH3)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.35-2.48(13H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.78-2.84(2H，m，烷基H)，4.09-4.12(2H，m，CH2)，4.46(1H，s，OH)，5.68(1H，t，J＝2.0，烯H)，6.50(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)368.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C24H32O3368.2351，實測值368.2364。
進一步洗脫得到E異構體14b的淺黃色油狀物(184mg，0.497mmol，78％)。δH(CDCl3)0.86(3H，s CH3)，1.23(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.29(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.33-2.45(11H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.74-2.91(4H，m，烷基H)，4.15(2H，q，J＝7.0，CH2)，4.52(1H，s，OH)，5.59(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.51(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)。
(2-乙基-13-甲基-3-氨磺酰氧基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙酸乙酯15
用酯14b(132mg，0.357mmol)按方法A的描述進行該反應。使用制備HPLC純化氨基磺酸酯15，得到白色固體(28mg，0.0757mmol，21％)。σH(d6-丙酮)0.91(3H，s CH3)，1.18(3H，t，J＝7.7，CH3)，1.23(3H，t，J＝7.2，CH3)，1.28-1.65(6H，m，烷基H)，1.86-2.08(5H，m，烷基H)，2.24-2.34(1H，m，烷基H)，2.47-2.54(1H，m，烷基H)，(2H，q，J＝7.7，CH2)，2.81-2.89(2H，m，烷基H)，4.10(2H，q，J＝7.2，CH2)，5.56(1H，t，J＝2.5，烯H)，7.09(1H，s，ArH)，7.26(1H，s，ArH)。
2-[3-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基]-乙醇16 用酯14b(412mg，1mmol)按方法E的描述進行該反應。TLC及1HNMR均表明起始原料不再存在，且產物乙烯醇16無需進一步純化即可使用。
Z-和E-2-乙基-17-(2-羥基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇17a和17b 用乙烯醇16(520mg，1.18mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到Z-苯酚17a的白色粉末(27mg，0.0831mmol，7％)。m.p.205-207℃。δH(CDCl3)0.93(3H，s CH3)，1.23(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.26-1.61(5H，m，烷基H)，1.72-1.79(2H，m，烷基H)，1.89-1.92(1H，m，烷基H)，2.18-2.39(4H，m，烷基H)，2.47-2.53(1H，m，烷基H)，2.60(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.74-2.87(2H，m，烷基H)，4.21(1H，dd，J＝7.0，12.1，CHOH)，4.35(1H，dd，J＝12.1，7.0，CHOH)，4.62(1H，s，OH)，5.33-5.37(1H，m，烯H)，6.50(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)326.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H30O2326.2246，實測值326.2259。
進一步洗脫得到E-苯酚17b的白色粉末(245mg，0.754mmol，64％)。m.p.169-171℃。δH(CDCl3)0.79(3H，s CH3)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.27-1.61(5H，m，烷基H)，1.74-1.97(3H，m，烷基H)，2.20-2.48(5H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.77-2.83(2H，m，烷基H)，4.11-4.60(2H，m，CH2OH)，4.50(1H，s，OH)，5.26-5.37(1H，m，烯H)，6.48(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)326.1(M+，50％)，73.0(100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H30O2326.2246，實測值326.2256。
氨基磺酸2-乙基-13-甲基-17-乙烯基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯18 用17b(65mg，0.200mmol)按方法A的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2CHCl3)得到氨基磺酸酯18的無色油狀物(36mg，0.093mmol，47％)。δH(CDCl3)0.91(3H，s CH3)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.27-1.55(2H，m，烷基H)，1.61-1.73(4H，m，烷基H)，1.85-2.07(2H，m，烷基H)，2.18-2.39(4H，m，烷基H)，2.69(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.83-2.92(2H，m，烷基H)，4.88-4.97(1H，m，烯H-16)，4.99(2H，s NH2)，5.35(1H，d，J＝18.0，烯H-22)，5.73(1H，br s，烯H-22)，6.32(1H，dd，J＝18.0，11.4，烯H-21)，7.10(1H，s，ArH)，7.18(1H，s，ArH)。
2-乙基-17-(2-羥基-乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇19 用乙烯醇16(76mg，0.233mmol)按方法F的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯5∶1)得到白色粉末二醇19(51mg，0.155mmol，67％)。m.p.162-164℃。δH(CDCl3)0.63(3H，s CH3)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.24-1.50(10H，m，烷基H)，1.72-1.88(4H，m，烷基H)，2.15-2.32(2H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.76-2.81(2H，m，烷基H)，3.61-3.75(2H，m，CH2OH)，5.0(1H，s，OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.05(1H，s，ArH)；δC(CDCl3)12.6(CH3)，14.4(CH3)，23.0(CH2)，24.4(CH2)，26.5(CH2)，27.9(CH2)，28.4(CH2)，29.3(CH2)，33.7(CH2)，37.8(CH2)，38.9(CH)，42.5(C)，44.2(CH)，47.2(CH)，54.7(CH)，62.7(CH2)，115.2(CH)，126.3(CH)，127.1(C)，132.8(C)，135.5(C)，151.1(C).m/z(FAB+)328.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H32O2328.2402，實測值328.2407。
氨基磺酸2-乙基-13-甲基-17-(2-氨磺酰氧基-乙基)-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯20 用二醇19(35mg，0.107mmol)按方法A的描述進行該反應。用制備HPLC純化氨基磺酸酯20，得到白色固體(28mg，0.0576mmol，54％)。δH(d6-丙酮)0.69(3H，s CH3)，1.18(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.29-1.62(10H，m，烷基H)，1.76-1.42(6H，m，烷基H)，1.70(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.80-2.84(2H，m，烷基H)，4.16-4.18(2H，m，CH2)，6.63(2H，s，NH2)，7.09(1H，s，ArH)，7.13(2H，s，NH2)，7.24(1H，s，ArH)；m/z(FAB-)485.1[(M-H)+，100％]；HRMS(FAB+)計算值C22H34O6N2S2486.1858，實測值486.1854。菲-17-基]-乙酸乙酯21 用酯13(100mg，0.220mmol)按方法F的描述進行該反應。1H NMR表明起始原料不再存在，且產物酯21無需進一步純化即可使用。
(2-乙基-3-羥基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯22 用酯21(66mg，0.145mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到無色油狀飽和酯22(38mg，0.103mmol，71％)。δH(CDCl3)0.63(3H，s CH3)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.27(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.24-2.00(11H，m，烷基H)，2.12-2.22(3H，m，烷基H)，2.27-2.33(1H，m，烷基H)，2.41(1H，dd，J＝14.5，5.1，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.73-2.81(2H，m，烷基H)，4.13(2H，q，J＝7.4，CH2)，4.62(1H，s，OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)；m/z(FAB)370.2(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C24H34O3370.2508，實測值370.2537。
(2-乙基-13-甲基-3-氨磺酰氧基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯23 用酯22(100mg，0.270mmol)按方法A的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到白色粉末氨基磺酸酯23(83mg，0.185mmol，68％)。m.p.120-122℃。δH(CDCl3)0.63(3H，s CH3)，1.21(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.27(3H，t，J＝7.0，CH3)，1.24-1.50(7H，m，烷基H)，1.74-1.98(5H，m，烷基H)，2.11-2.42(4H，m，烷基H)，2.68(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.82-2.84(2H，m，烷基H)，4.12(2H，q，J＝7.0，CH2)，5.08(2H，s，NH2)，7.05(1H，s，ArH)，7.16(1H，s，ArH)。δC(CDCl3)12.5，14.2，14.6，23.0，24.2，26.2，27.5，28.2，29.2，35.4，37.3，38.4，42.3，44.2，46.9，54.3，60.2，121.4，126.9，133.6，136.0，139.6，146.1，174.0；m/z(FAB)449.1(M+，10％)，135.0(100％)；HRMS(FAB+)計算值C24H35O5NS 449.2236，實測值449.2237。菲-17-亞基]-乙腈24 用甲硅烷基醚12(1g，2.6mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(691mg，631μl，3.9mmol)按方法C的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯20∶1)得到無色油狀兩種異構體24(641mg，1.47mmol，57％)。m/z(FAB)435.3(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C28H41ONSi435.2957，實測值435.2961。
(2-乙基-3-羥基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙腈25 用甲硅烷基醚24(540mg，1.24mmol)按方法D的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到淺黃色油狀苯酚25(284mg，0.88mmol，71％)。δH(CDCl3)0.88(3H，s CH3)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.25-1.62(6H，m，烷基H)，1.90-1.97(3H，m，烷基H)，2.18-2.24(1H，m，烷基H)，2.40-2.45(1H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.63-2.84(4H，m，烷基H)，4.53(1H，s，OH)，5.04(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.49(1H，s，ArH)，7.02(1H，s，ArH)；δH(CDCl3)14.4(CH3)，18.0(CH3)，23.0(CH3)，23.5(CH2)，26.3(CH2)，27.4(CH2)，29.1(CH2)，30.3(CH2)，34.7(CH2)，38.5(CH)，43.7(CH)，46.4(C)，52.8(CH)，87.7(CH)，115.2(CH)，117.5(C)，126.2(CH)，127.4(C)，131.7(C)，135.2(C)，151.4(C)，181.1(C)；m/z(FAB)321.3(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H27ON 321.2093，實測值321.2088。菲-17-基]-乙腈26 用甲硅烷基醚24(100mg，0.230mmol)按方法F的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到無色油狀飽和腈26(81mg，0.185mmol，81％)。δH(CDCl3)0.22[6H，s，Si(CH3)2)]，0.67(3H，sCH3)，1.00[9H，s，C(CH3)3]，1.16(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.26-1.53(7H，m，烷基H)，1.78-2.17(5H，m，烷基H)，2.20-2.29(2H，m，烷基H)，2.31-2.40(2H，m，CH2CN)，2.56(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.74-2.81(2H，m，烷基H)，6.47(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB)437.4(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C28H43OSiN 437.3114，實測值437.3121。
(2-乙基-3-羥基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙腈27 用腈26(73mg，0.167mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到白色固體苯酚27(38mg，0.118mmol，70％).m.p.195-197℃。δH(CDCl3)0.67(3H，s CH3)，1.22(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.27-1.53(7H，m，烷基H)，1.74-1.89(3H，m，烷基H)，1.99(1H，dt，J＝12.1，3.1，烷基H)，2.03-2.12(1H，m，烷基H)，2.14-2.42(4H，m，烷基H)，2.59(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.75-2.86(2H，m，烷基H)，4.67(1H，s OH)，6.49(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB)323.2(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H29ON 323.2249，實測值323.2252。
氨基磺酸17-氰基甲基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯28(STX 564) 用苯酚27(182mg，0.591mmol)按方法A的描述進行該反應。快速柱層析(CHCl3)得到白色針狀氨基磺酸酯28(120mg，0.299mmol，51％)。m.p.175-177℃。δH(d6-丙酮)0.73(3H，s CH3)，1.17(3H，t，J＝7.4，CH3)，1.26-1.56(7H，m，烷基H)，1.77-2.13(5H，m，烷基H)，2.26-2.58(3H，m，烷基H)，2.69(2H，q，J＝7.4，CH2)，2.80-2.83(2H，m，烷基H)，7.08(1H，s，ArH)，7.12(2H，s，NH2)，7.23(1H，s，ArH)；m/z(FAB)402.0(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C22H30O3N2S 402.1977，實測值402.1975。菲-17-亞基甲基]-亞甲基-胺29 用2-甲氧基-3-叔丁基二甲硅烷基氧基雌酮(1g，2.42mmol)及二乙基(氰基甲基)膦酸酯(712g，650μl，4.02mmol)按方法C的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯19∶1)得到無色油狀烯29的兩種異構體(481mg，1.14mmol，27％)。由NMR確定兩種異構體的比率為1∶1。m/z(FAB+)438.1[(MH)+，50％]，380.1(100％)，73.0(80％)；HRMS(FAB+)計算值C27H39O2NSi 437.2750，實測值437.2731。
Z-和E-(3-羥基-2-甲氧基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙腈30 用甲硅烷基醚29(400mg，0.95mmol)按方法D的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯9∶1)得到兩種異構體的混合物，為白色粉末(91mg，0.281mmol，30％)。
進一步洗脫得到白色固體E異構體30(115mg，0.356mmol，37％)。δH(CDCl3)0.89(3H，s CH3)，1.25-1.64(6H，m，烷基H)，1.90-1.99(3H，m，烷基H)，2.22-2.27(1H，m，烷基H)，2.35-2.40(1H，m，烷基H)，2.60-2.69(1H，m，烷基H)，2.74-2.82(3H，m烷基H)，3.86(3H，sOCH3)，5.05(1H，t，J＝2.7，烯H)，5.43(1H，s，OH)，6.65(1H，s，ArH)，6.77(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)323.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C21H25O2N 323.1885，實測值323.1885。
氨基磺酸2-甲氧基-13-甲基-17-亞甲基氨基亞甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯31(STX639) 用苯酚30(40mg，0.124mmol)按方法A的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到白色針狀氨基磺酸酯31(36mg，0.0896mmol，72％)。m.p.202-204℃。δH(d6-丙酮)0.95(3H，s CH3)，1.25-1.65(7H，m，烷基H)，1.94-2.08(2H，m，烷基H)，2.26-2.35(1H，m，烷基H)，2.46-2.66(2H，m，烷基H)，2.74-2.84(3H，m，烷基H)，3.84(3H，s OCH3)，5.27(1H，t，J＝2.3，烯H)，6.90(2H，s，NH2)，7.02(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；m/z(FAB+)402.0(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C21H26O4N2S 402.1613，實測值402.1611。
(3-羥基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙腈32
用烯30(100mg，0.310mmol)按方法F的描述進行該反應?？焖僦鶎游?SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)得到白色固體飽和腈32(81mg，0.249mmol，80％)。m.p.172-174℃。δH(d6-丙酮)0.71(3H，s CH3)，1.22-1.52(7H，m，烷基H)，1.73-1.90(3H，m，烷基H)，1.98-2.08(2H，m，烷基H)，2.14-2.22(1H，m，烷基H)，2.30-2.39(2H，m，烷基H)，2.45-2.54(1H，m，烷基H)，2.65-2.80(2H，m，烷基H)，3.80(3H，s OCH3)，6.52(1H，s，ArH)，6.84(1H，s，ArH)，8.00(1H，s，OH).m/z[FAB+]325(100％，M+)；HRMS[FAB+]實測值325.20418，C21H27NO2理論值325.20418；計算值C，77.5％；H，8.36％；N，4.30％；實測值C，77.2％；H，8.41％；N，4.01％。
氨基磺酸17-氰基甲基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯33(STX641) 用腈32(60mg，0.185mmol)按方法A的描述進行該反應。快速柱層析(SiO2己烷∶乙酸乙酯4∶1)并用丙酮/己烷重結晶，得到白色結晶固體氨基磺酸酯33(20.3mg，0.0547mmol，30％)。m.p.183-185℃。
δH(CDCl3)0.69(3H，s CH3)，1.20-1.55(7H，m，烷基H)，1.70-1.94(3H，m，烷基H)，1.98-2.50(6H，m，烷基H)，2.74-2.84(2H，m，烷基H)，3.87(3H，s OCH3)，5.06(2H，s，NH2)，6.92(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)；δc(CDCl3)12.2(CH3)，17.6(CH2)，23.9(CH2)，26.3(CH2)，27.4(CH2)，28.3(CH2)，28.6(CH2)，37.3(CH2)，38.3(CH)，42.5(C)，44.3(CH)，46.7(CH)，54.4(CH)，56.4(CH3)，110.4(CH)，119.5(C)，124.2(CH)，130.2(C)，138.2(C)，140.4(C)，149.0(C)；m/z(FAB+).404.1(M+，100％)；HRMS(FAB+)計算值C21H28O4N2S 404.1770，實測值404.1767；C21H28O4N2S理論值C，62.35％；H，6.98％；N，6.93％，實測值C，62.50％；H，6.96％；N，6.85％。
3-O-(叔丁基-二甲基-甲硅烷基)-17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-雌酮34 向3-OTBS雌酮(200mg，0.52mmol)的THF(20mL)溶液中加入2-甲氧基乙胺(226μL，4eq)，然后，10分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(449mg，4.5eq)及乙酸(150μL)。于室溫攪拌4天后用氫氧化鈉(4mL，1M水溶液)猝滅該反應，并用乙酸乙酯(50mL)稀釋。標準水后處理得到所需胺34，為白色固體，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.09(1H，d，J 8.4，ArH)，6.58(1H，dd，J 8.4和2.5，ArH)，6.52(1H，d，J 2.5，ArH)，3.34-3.51(2H，m，OCH2)，3.34(3H，s，OMe)，2.57-2.92(5H，m，6-CH2，CH2N和CHN)，1.20-2.30(14H，m)，0.96(9H，s，1Bu)，0.74(3H，s，18-CH3)和0.17(6H，s，SiMe2)；δc153.6，137.8，133.2，126.1，119.9，117.1，72.4，69.3，58.7，52.4，48.5，44.0，43.2，38.7，38.3，29.7，29.6，27.5，26.4.25.7.23.5，1801，11.8和-4.4.FAB+444.3.
17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-雌酮35 用TBAF(0.4mL，1M THF溶液)處理TBS保護的雌三烯34(160mg)的THF(10mL)溶液。攪拌過夜后進行標準水后處理，得到所需產物35，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.10(1H，d，J 8.6，ArH)，6.58(1H，dd，J 8.6和2.7，ArH)，6.52(1H，d，J 2.7，ArH)，3.48-3.52(2H，m，OCH2)，3.34(3H，s，OMe)，2.62-2.94(5H，m，6-CH2，CH2N和CHN)，1.24-2.52(15H，m)和0.75(3H，s，18-CH3)
17-(2-二甲基氨基-乙基氨基)-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇36 向2-MeO-3-OTBS雌酮(415mg)的THF(10mL)溶液中加入N，N-二甲基乙二胺(439μL，4mmol)，然后，10分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(954mg，4.5mmol)及乙酸(300μL)。于室溫攪拌3天后用氫氧化鈉(4mL，1M水溶液)猝滅該反應，并用乙酸乙酯(50mL)稀釋。標準水后處理得到淺黃色油狀所需胺，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.76(1H，s，ArH)，6.53(1H，s，ArH)，3.76(3H，s，OMe)，2.65-2.82(4H，m，6-CH2和CH2N)，2.62(1H，dd，J 8.6和8.6，CHN)，2.36-2.48(2H，m，CH2N)，1.20-2.30(20H，m 包括2.23(6H，s，NMe2))，0.99(9H，s，1Bu)，0.76(3H，s，18-CH3)和0.15(6H，s，SiMe2).
然后將TBS保護的氨基甾族化合物溶于THF(20mL)并用TBAF(1.5mL，1M THF溶液)及KF(10mg)處理，然后攪拌8小時。然后加入乙酸乙酯(50mL)，所得溶液用碳酸氫鈉溶液(50mL，飽和)、水(50mL)及鹽水(2×50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。所得淺黃色油狀物用柱層析純化(CHCl3/MeOH 99∶1-1∶1)，得到所需胺36的透明無色油狀物，然后用乙醚/己烷研磨得到白色粉末，m.p.108℃，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.77(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，3.85(3H，s，OMe)，2.68-2.84(4H，m，6-CH2和CH2N)，2.63(1H，dd，J 8.6和8.6，CHN)，2.38-2.46(2H，m，CH2N)，1.20-2.30(21H，m包括2.24(6H，s，NMe2))和0.76(3H，s，18-CH3).δc144.6，143.4，131.5，129.3，114.7，108.1，69.4，59.3，56.0，52.4，46.3，45.5，44.3，43.2，38.8，38.3，29.7，29.1，27.6，26.9，23.5和11.9.
2-甲氧基-17-(2-嗎啉-4-基-乙基氨基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇37 向2-MeO-3-OTBS雌酮(315mg，0.76mmol)的THF(10mL)溶液中加入4-(2-氨基乙基)嗎啉(395mg，4eq)，然后，10分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(723mg，4.5eq)及乙酸(240μL)。于室溫攪拌4天后用氫氧化鈉(4mL，1M水溶液)猝滅該反應，并用乙酸乙酯(50mL)稀釋。標準水后處理得到所需胺，為白色粉末，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.78(1H，s，ArH)，6.54(1H，s，ArH)，3.78(3H，s，OMe)，3.66-3.76(4H，m，2×OCH2)，1.20-2.88(25H，m).0.99(9H，s，1Bu)，0.76(3H，s，18-CH3)和0.16(6H，s，SiMe2).
然后將TBS保護的氨基甾族化合物溶于THF(20mL)，并用TBAF(1.5mL，1M THF溶液)及KF(10mg)處理，然后攪拌8小時。然后加入乙酸乙酯(50mL)，所得溶液用碳酸氫鈉溶液(50mL，飽和)、水(50mL)及鹽水(2×50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)。所得淺黃色油狀物用柱層析純化(CHCl3/MeOH 99∶1-1∶1)，得到所需胺37的透明無色油狀物，然后用乙醚/己烷研磨得到白色粉末，m.p.144-146℃，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.75(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，3.84(3H，s，OMe)，3.67-3.71(4H，m，2×OCH2)2.72-2.86(4H，m，6-CH2和CH2N)，2.65(1H，dd，J 9.0和8.2，CHN)，2.52(2H，dd，J 6.3和6.3，CH2N)2.46-2.50(4H，m，2×CH2N)，1.20-2.26(15H，m)和0.76(3H，s，18-CH3)。δc144.5，143.4，131.3，129.3(所有C)，114.6，108.0(兩個CH)，69.2(CH)，67.0，57.9(兩個CH2)，56.0(CH3)，53.7(CH2)，52.3(CH)，45.0(CH2)，44.3(CH)，43.2(C)，38.8(CH)，38.2，29.4，29.1，27.6，26.9，23.5(所有CH2)及12.0CH3)。
2-乙基-17-[(呋喃-2-基甲基)-氨基]-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇38 向2-Et-3-O-TBS雌酮(414mg，1mmol)的THF(10mL)溶液中加入糠胺(354μL，4mmol)，然后，10分鐘后，加入三乙酰氧基硼氫化鈉(954mg，4.5mmol)及乙酸(300μL)。于室溫攪拌3天后用氫氧化鈉(4mL，1M水溶液)猝滅該反應并用乙酸乙酯(50mL)稀釋。標準水后處理得到所需胺，為淺黃色油狀物。向保護的甾族化合物的THF溶液中加入TBAF(1.5mL)及氟化鉀(10mg)。于室溫攪拌14小時后加入乙醚(50mL)和水(50mL)。然后分離有機層，用碳酸氫鈉溶液(25mL)、水(25mL)及鹽水(25mL)洗滌，然后干燥并蒸發(fā)，得到淺黃色油狀物(270mg)。然后，所需產物38用柱層析分離(0-3％甲醇/氯仿)，得到透明無色油狀物，其顯示δH(CDCl3，TMS＝0)7.37(1H，dd，J 1.8 & 0.8)，7.03(1H，s，ArH)，6.49(1H，s，ArH)，6.32(1H，dd，J 3.2 & 1.8)，6.24(1H，dd，J 3.2 & 0.8)，3.85-3.95(2H，m，CH2N)，2.76-2.84(2H，m，6-CH2)，2.67(1H，dd，8.8 & 8.5，CHN)，2.60(2H，q，J 7.6，CH2Me)，2.27-2.35(1H，m)，2.14-2.22(1H，m)，1.26-2.07(13H，m)，1.23(3H，t，J 7.6，CH2Me)和0.81(3H，s，18-CH3).
(2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-吡啶-2-基甲基-胺二鹽酸鹽39 攪拌2-Et-3-O-MOM雌酮(342mg，1mmol)及2-(氨基甲基)吡啶(515μl，5mmol)的THF(10mL)溶液1小時，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(848mg，4mmol)處理。攪拌3天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。將所得黃色油狀物溶于THF中并用HCl的乙醚溶液(1mL，2M)處理，然后真空除去溶劑，用乙醚研磨所得膠狀物，得到產物39二鹽酸鹽的灰色粉末，其顯示δH(CD3OD，TMS＝0)8.86(1H，app d，J 5.1)，8.38(1H，app t，J 7.8)，8.06(1H，app d，J 7.8)，7.87(1H，dd，J 7.8 &5.1)，7.02(1H，s，ArCH)，6.73(1H，s ArH)，5.14(2H，s，OCH2)，4.59(2H，br，CH2N)，3.43(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH2)，2.59(2H，q，J 7.4，CH2Me)，1.30-2.41(12H，m)，1.17(3H，t，J7.4，CH2Me)和1.01(3H，s，18-CH3).
2-乙基-13-甲基-17-[(吡啶-2-基甲基)-氨基]-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇40 由乙酰氯(957μL)與甲醇(2.5mL)于0℃反應制備HCl甲醇溶液(Methanolic HCl)，然后加入到MOM保護的雌酮MPL03139中，超聲2分鐘后將該反應物蒸發(fā)至干。該HCl鹽自甲醇乙醚中析出但太易吸濕而無法收集，取而代之的是將該化合物溶于乙醇，用NaHCO3(飽和)堿化，然后用乙酸乙酯萃取。有機層用水、然后用鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)，得到無色油狀的產物40，其顯示δH(CDCl3，TMS＝0)8.54-8.57(1H，m)，7.65(1H，ddd，J 7.87.8 & 1.9)，7.39(1H，app d，J 7.8)，7.16(1H，m)，7.03(1H，s，ArH)，6.45(1H，s，ArH)，3.97(2H，s，NCH2)，2.73-2.78(2H，m，6-CH2)，2.67(1H，dd，9.0& 8.6，CHN)，2.60(2H，q，J 7.4 CH2Me)，1.25-2.32(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.77(3H，s，18-CH3).
(3-芐氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-(2-嗎啉-4-基-乙基)-胺41 攪拌2-MeO-3-O-芐基雌酮(390mg，1mmol)及4-(2-乙基氨基)嗎啉(651mg，5mmol)的THF(15mL)溶液1小時，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(954mg，4.5mmol)處理。攪拌5天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。黃色油狀所需產物41顯示δH(CDCl3，TMS＝0)7.25-7.46(5H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH2O)，3.86(3H，s，OMe)，3.68-3.74(4H，m，2×CH2O)，1.20-2.80(25H，m)和0.75(3H，s，18-CH3).
(3-芐氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-吡啶-2-基甲基-胺42 攪拌2-MeO-3-O-芐基雌酮(390mg，1mmol)及2-(氨基甲基)吡啶(515μL，5mmol)的THF(20mL)溶液1小時，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(954mg，4.5mmol)處理。攪拌6天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。黃色所需胺42顯示δH(CDCl3，TMS＝0)8.52(1H，m)，7.62(1H，ddd，J 7.8，7.8 & 1,9)7.24-7.46(7H，m)，7.12-7.17(1H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH2O)，3.96(2H，s，CH2Ar)3.86(3H，s，OMe)，2.63-2.82(3H，m，6-CH2和CHN)1.20-2.32(13H，m)和0.75(3H，s，18-CH3).
(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-(2-甲氧基-乙基)-胺43 攪拌2-Et-3-O-芐基雌酮(220mg，0.57mmol)及2-甲氧基乙胺(197μL，2.26mmol)的THF(10mL)溶液1小時，然后用乙酸(150mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(540mg，2.55mmol)處理。攪拌3天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。黃色所需胺43顯示δH(CDCl3，TMS＝0)7.27-7.44(5H，m)，7.08(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.02(2H，s，PhCH2O)，3.47-3.51(2H，m，OCH2)，2.74-2.92(4H，m，6-CH2& CH2N)，2.58-2.70(3H，m，CHN & ArCH2Me)，1.24-2.34(14H，m)，1.21(3H，t，J 7.6，CH2Me)和0.75(3H，s，18-CH3).
N′-(2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)N，N-二甲基-乙-1，2-二胺44
攪拌2-Et-3-O-MOM雌酮(342mg，1mmol)及N，N-二甲基乙二胺(549μL，5mmol)的THF(10mL)溶液1小時，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(848mg，4mmol)處理。攪拌3天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。所得黃色油狀物用柱層析純化(10％MeOH/CHCl3)得到所需產物44，其顯示δH(CDCl3，TMS＝0)7.08(1H，s，ArCH)，6.78(1H，sArH)，5.17(2H，s，OCH2)，3.48(3H，s，OMe)，2.24-2.86(9H，m，6-CH2，ArCH2和2×NCH2和NCH)，2.23(6H，s，NMe2)，1.20(3H，t，J 7.6，CH2Me)和0.75(3H，s，18-CH3).
N′-(3-芐氧基-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-N，N-二甲基-乙-1，2-二胺45 攪拌2-MeO-3-O-芐基雌酮(390mg，1mmol)及N，N-二甲基乙二胺(439μL，4mmol)的THF(10mL)溶液1小時，然后用乙酸(300mg)及三乙酰氧基硼氫化鈉(954mg，4.5mmol)處理。攪拌3天后加入氫氧化鈉(5mL，2M水溶液)，隨后加入乙酸乙酯(30mL)。然后分離有機層，用水及鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。黃色油狀產物45顯示δH(CDCl3，TMS＝0)7.28-7.46(5H，m)，6.84(1H，s，ArH)，6.61(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，PhCH2O)，3.86(3H，s，OMe)，2.37-2.83(7H，m；6-CH2，2×NCH2和NCH)，2.22(6H，s，NMe2)，1.24-2.14(14H，m)和0.75(3H，s，18-CH3).菲-17-基氧基)-乙氧基]-叔丁基-二甲基-硅烷46 用氫化鈉(2eq.)處理3-O-Bn-2-MeO-雌二醇(340mg，0.86mmol)的甲苯(8mL)溶液，然后在密封管中加熱至130℃保持0.25小時，冷卻至室溫，然后用2-(叔丁基二甲基甲硅烷基氧基)乙基溴(429μL，2mmol)處理，然后于130℃在密封管中加熱16小時。標準水后處理后，粗物質經柱層析純化，得到所需醚46的白色固體(208mg)，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.26-7.46(5H，m，ArH)，6.85(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.11(2H，s，OCH2Ph)，3.87(3H，s，OMe)，3.71-3.77(2H，m，OCH2)，3.39-3.69(3H，m，OCH2and HCO)，2.72-2.82(2H，m，6-CH2)，1.10-2.40(13H，m)，0.91(9H，s，tBu)，0.80(3H，s，18-CH3)和0.10(6H，s，SiMe2).
17-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-乙氧基]-2-甲氧基-13-甲基7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇47 用10％Pd/C(20mg)處理攪拌下的、脫氣的醚46(200mg，0.36mmol)的THF(10mL)溶液并于氫氣氣氛下放置過夜。然后將反應物經硅藻土過濾并蒸發(fā)，得到透明無色油狀所需苯酚47，δH6.80(1H，s，ArH)，6.65(1H，s，ArH)，5.55(1H，s，OH)，3.87(3H，s，OMe)，3.52-3.82(4H，m，2×OCH2)，3.42-3.48(1H，m，17-CH)，2.72-2.84(2H，m，6-CH2)，1.20-2.36(13H，m)，0.94(9H，s，1Bu)，0.89(3H，s，18-Me)和0.12(6H，s，SiMe2).
17-[2-(羥基)-乙氧基]-2-甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇48 用TBAF(250mL，0.25mmol)處理TBS保護的醇47(110mg，0.24mmol)的THF(5mL)溶液。攪拌過夜后用乙酸乙酯(25mL)萃取反應物，有機層用水和鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。所得淺黃色油經柱層析純化(2％甲醇/氯仿)，得到透明無色油狀所需二醇48(65mg)，其顯示δH6.78(1H，s，ArH)，6.64(1H，s，ArH)，5.51(1H，s，OH)，3.86(3H，s，OMe)，3.40-3.68(5H，m，2×OCH2和CHOR)，2.72-2.82(2H，m，6-CH2)，1.20-2.30(14H，m)和0.81(3H，s，18-Me)；δc144.6，143.5，131.7，129.5，114.6，109.1，89.4，70.9，62.1，56.1，50.2，44.2，38.6，38.0，28.9，28.1，27.2，26.6，23.0和11.7.
氨基磺酸2-甲氧基-13-甲基-17-(2-氨磺酰氧基-乙氧基)-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯49 將氨磺酰氯(1ml，0.69mmol)的甲苯溶液蒸發(fā)至干，冷卻至0℃，然后依次用二甲基乙酰胺(1.5mL)和二醇48(45mg)處理。于室溫攪拌3小時后，反應物用乙酸乙酯(20mL)稀釋，然后用水(10ml)處理，分離有機層并用鹽水(5×10mL)萃取，干燥并蒸發(fā)得到黃色油狀物。用柱層析(梯度5-10％甲醇/氯仿)純化所需雙-氨基磺酸酯49，得到透明無色油狀物(21mg)，其顯示
δH(CDCl3，TMS＝0)7.03(1H，s，ArH)，6.90(1H，s，ArH)，5.02(4H，br，2×NH2)，4.37-4.42(2H，m，CH2OS)，3.87(3H，s，OMe)，3.75-3.82(2H，m，OCH2)，3.48(1H，dd，J 8.6 & 7.9，OCH)，2.74-2.85(2H，m，6-CH2)，1.25-2.50(H，m)和0.79(3H，s，18-CH3)；m/z 504.6.
叔丁基-[2-甲氧基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基氧基]-二甲基-硅烷50 用氫化鈉(98mg，2.45mmol)處理2-MeO-3-O-TBS雌二醇(340mg，0.81mmol)的甲苯(20mL)溶液，然后使其回流1小時，然后加入2-(甲氧基)乙基溴(153μL，1.62mmol)。反應回流14小時，然后，再用等分量的氫化鈉(80mg，2mmol)和2-(甲氧基)乙基溴(141μl，1.5mmol)處理，再回流8小時，然后再加入等分量的堿和烷基溴。再回流14小時后，將該反應冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30mL)稀釋，然后用飽和氯化銨(20mL)處理。分離有機層，用水(2×20mL)、鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。然后所需醚50經柱層析分離(洗脫劑己烷/乙酸乙酯11∶1)，得到白色針狀物，mp 98-100℃(276mg，％)，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.76(1H，s，ArH)，6.54(1H，s，Ar，H)，3.77(3H，s，OMe)，3.41-3.73(7H，m)，3.40(3H，s，OMe)，2.68-2.80(2H，m，6-CH2)，1.16-2.27(11H，m)，0.99(9H，s，1Bu)，0.82(3H，s，18-CH3)和0.15(6H，s，SiMe2)δc148.6，142.9，133.2，129.0，121.0，110.0，89.6，72.3，69.5，59.2，50.4，43.4，38.5，38.2，29.7，28.8，28.2，27.4，26.6，25.8，23.0，18.5，11.7和4.6.m/z FAB+473.2.
2-甲氧基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇51 用TBAF(0.5mL，1M THF溶液)處理TBS保護的醚50(232mg)的THF(10mL)溶液。攪拌過夜后進行標準水后處理，所需苯酚51經柱層析(4∶1Hex/EA)純化得到白色固體，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)6.77(1H，s，ArH)，6.63(1H，s，ArH)，5.50(1H，s，OH)，3.85(3H，s，ArOMe)，3.41-3.72(5H，m，2×OCH2和CHOR)，3.40(3H，s，OMe)，2.69-2.83(6-CH2)，1.16-2.26(13H，m)和0.81(3H，s，18-Me)；δc144.5，143.4，131.7，129.5(所有C)，114.6，108.1，89.6(所有CH)，72.3，69.5(兩個CH2)，59.1(CH)，56.0(CH3)，50.3，44.2(兩個CH)，43.3(C)，38.6(CH)，38.1，28.9，28.1，27.2，26.7，23.0(所有CH2)和11.6(CH3)。
2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-酮52 用對甲苯磺酸吡啶鎓(333mg)處理2-Et-3-O-MOM-17-(亞乙基二氧基縮酮)雌酮(15g)的丙酮(200mL)和水(10mL)的溶液，然后使其回流14小時。然后旋轉蒸發(fā)除去溶劑，得到白色固體，該白色固體然后用乙醇水重結晶，得到所需產物52的白色固體(5.6g)，其顯示
δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.09(1H，s，ArH)，6.81(1H，s，ArH)，5.18(2H，s，OCH2)，3.49(3H，s，OMe)，2.84-2.92(2H，m，6-CH2)，2.61(2H，q，J 7.4，CH2Me)，1.38-2.56(13H，m)，1.19(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.91(3H，s，18-CH3)；δC 220.1，152.8，134.8，132.6，130.6，126.2，114.0，94.3，56.0，50.4，48.1，44.1，38.4，36.0，31.7，29.6，26.7，26.0，23.6，21.7，14.9和14.0.
2-乙基-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-醇53 向攪拌、室溫下的2-Et-3-O-MOM雌酮52(743mg，2.18mmol)的THF(10mL)/甲醇(40mL)溶液中加入硼氫化鈉(76mg，2mmol)。一小時后加入氯化銨(2mL飽和溶液)猝滅該反應，用乙酸乙酯(50mL)和水(25mL)稀釋，分離有機層并用水、鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。柱層析(己烷/乙酸乙酯梯度)得到透明無色油狀所需醇53(650mg)，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.09(1H，s，ArH)，6.78(1H，s，ArH)，5.17(2H，s，OCH2)，3.69-3.78(1H，m，CHOH)3.48(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH2)，2.61(2H，q，J 7.4，CH2Me)，1.24-2.38(13H，m)，1.19(3H，t，J7.4，CH2Me)和0.77(3H，s，18-CH3).
2-乙基-17-(2-甲氧基-乙氧基)-3-甲氧基甲氧基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲54 用氫化鈉(80mg，2mmol)處理2-Et-3-O-MOM雌二醇53(170mg，0.5mmol)的甲苯(10mL)溶液，然后使其回流0.5小時，然后加入2-(甲氧基)乙基溴(141μL，1.5mmol)。該反應回流14小時，然后再用等分量的氫化鈉(80mg，2mmol)和2-(甲氧基)乙基溴(141μl，1.5mmol)處理，然后再回流8小時，其后無剩余的起始原料存在。將該反應冷卻至室溫，用乙酸乙酯(30mL)稀釋，然后用飽和氯化銨(20mL)處理。分離有機層，用水(2×20mL)、鹽水洗滌，干燥并蒸發(fā)。所需醚54經柱層析分離(梯度0-20％乙酸乙酯/己烷)，得到透明無色油狀物(128mg，％)，其顯示δH(400MHz，CDCl3，參照TMS＝0)7.08(1H，s，ArH)，6.78(1H，s，Ar，H)，5.17(2H，s，OCH2)，3.67-3.74(1H，m)，3.52-3.56(2H，m)，3.48(3H，s，OMe)，3.43(1H，dd，J 8.6和8.2，CHO)，3.40(3H，s，OMe)，2.78-2.86(2H，m，6-CH2)，2.63(2H，q，J 7.4，CH2Me)，2.37-2.44(1H，m)，2.14-2.22(1H，m)，2.01-2.11(2H，m)，1.83-1.90(1H，m)，1.23-1.72(8H，m)，1.19(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.81(3H，s，18-CH3)δc152.6，135.0，133.2，130.3，126.1，114.0，94.3，89.6，72.3，69.6，59.2，56.0，50.4，44.1，43.5，38.7，38.3，29.7，28.3，27.4，26.6，23.6，23.2，15.0和11.7.
按照以下流程反應。

(E-和Z-)-2-乙基-3-O-叔丁基-二甲基-甲硅烷基-17-甲基硫基亞甲基雌酮A和(E-和Z-)-2-乙基-17-甲基硫基亞甲基雌酮B 用三等份的己烷(各1mL)洗滌氫化鈉(120mg，3mmol)，氮氣下干燥，然后用THF(5mL)處理。然后將二乙基(甲硫基甲基)膦酸酯(526μL，3mmol)引入到懸浮液中，形成澄清無色溶液前劇烈放出氣體。然后用2-Et-3-OTBS雌酮(412mg，1mmol)的THF(5mL)溶液處理該反應混合物，然后回流48小時。用乙酸乙酯(30mL)稀釋冷卻的反應物，傾入水(20mL)中并分離水層。然后有機層用水(3×35mL)、鹽水(50mL)洗滌，然后干燥并蒸發(fā)。所得油經柱層析(5％乙酸乙酯/己烷)純化，第一組分得到所需TBS保護的烯A產物的異構體混合物，為無色油狀物(196mg，43％)，第二組分為無色油狀物，經確證為脫甲硅烷基化的烯B(150mg，44％)。
F1δH(CDCl3)7.05(1H，s，ArH)，6.54，6.47(1H，s，ArH，兩種異構體)，5.48-5.55(1H，m，CHSMe，兩種異構體)，2.75(2H，m，6-CH2)，2.56(2H，q，J 7.4，CH2Me)，2.26，2.21(3H，s，兩種異構體的SMe)，1.19(3H，t，J 7.4，CH2Me)，1.00(9H，s，tBu)，0.92，0.81(3H，s，18-CH3)，及0.21(6H，s，SiMe2)。m/z[FAB+]實測值456.28822，C28H44SOSi理論值456.28821。
F2δH(CDCl3)7.04(1H，s，ArH)，6.48(1H，s，ArH)，5.51(t，1.9，CHSMe)，5.49(t，2.3，CHSMe)，4.43-4.46(1H，m，OH)，2.72-2.88(2H，m，6-CH2)，2.59(2H，q，J 7.4，CH2Me)，2.27及2.22(3H，2×s，兩種異構體的SMe)，1.22(3H，t，J 7.4，CH2Me)，0.93及0.81(3H，s，兩種異構體的18-CH3)；m/z[FAB+]實測值342.20174，C22H30SO理論值342.20173。2-乙基-17-甲基硫基甲基雌酮C 將(E-及Z-)-2-乙基-17-甲基硫基亞甲基雌酮B(150mg)溶于THF(1mL)及乙醇(10mL)中，然后用Pd/C(25mg，5％)處理，脫氣并在氫氣氣氛下攪拌16h。然后反應物通過硅藻土墊過濾并蒸發(fā)。所需還原產物C經柱層析分離得到，為無色油狀物(85mg)，其顯示δH(CDCl3)7.04(1H，s，ArH)，6.48(1H，s，ArH)，4.48(1H，s，OH)，2.74-2.84(2H，m，6-CH2)，2.58(2H，q，J 7.4，CH2Me)；2.11(3H，s，SMe)，1.21(3H，t，J7.4，CH2Me)和0.65(3H，s，18-CH3).
2-乙基-3-O-氨磺?；?17-甲基硫基甲基雌酮E 將氨磺酰氯(1.5mL，0.56M溶液)蒸發(fā)至干，于0℃溶于DMA(1.5mL)，然后加入到2-乙基-13-甲基-17-甲基硫基甲基雌酮C(80mg)中。攪拌下反應在14小時內達到室溫。然后加入乙酸乙酯(10mL)并用水(3×10mL)和鹽水(10mL)洗滌該溶液，干燥(Na2SO4)，然后蒸發(fā)至干。粗產物經柱層析(0-7.5％乙酸乙酯/氯仿)純化，得到白色泡沫狀所需氨基磺酸酯E(65mg)，其顯示δH(CDCl3)7.18(1H，s，ArH)，7.06(1H，s，ArH)，4.90(2H，br，NH2)，2.78-2.88(2H，m，6-CH2)，2.68(2H，q，J 7.4，CH2Me)，2.11(3H，s，SMe)，1.21(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.66(3H，s，18-CH3).
2-羥基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮 用硼氫化鈉(189mg，5mmol)處理2-甲?；?3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮(2.00g，5.18mmol)的THF(10mL)和甲醇(20mL)溶液。10分鐘后無剩余起始原料，加入氯化銨破壞過量的硼氫化物。將反應物萃取至乙酸乙酯(50mL)，用水(2×25mL)、鹽水(25mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)，得到白色泡沫狀2-羥基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮(1.98g)，δH(CDCl3)7.23(1H，s，ArH)，6.82(1H，s，ArH)，5.20(2H，s，OCH2)，4.64-4.70(2H，m，ArCH2O)，3.88-4.00(4H，m，OCH2CH2O)，3.49(3H，s，OCH3)，2.82-2.88(2H，m，6-CH2)，1.30-2.40(14H，m)和0.88(3H，s，18-CH3)；δc152.9，137.7，133.9，127.2，126.2，119.3，114.5，94.6，65.2，64.5，61.9，56.1，49.3，46.1，43.6，38.9，34.2，30.6，29.7，26.9，26.0，22.3和14.3；m/z[ES+]411.2(100％，M++Na).
2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮 向室溫、攪拌下的2-羥基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮(1.98g，5.10mmol)的THF(25mL)溶液中加入氫化鈉(306mg)，0.5小時后加入甲基碘。攪拌反應物過夜，然后進行標準水后處理。層析(己烷/乙酸乙酯)得到無色油狀所需產物(1g)及回收的起始原料(600mg)。產物2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮顯示δH(CDCl3)7.26(1H，s，ArH)，6.80(1H，s，ArH)，5.16(2H，s，OCH2)，4.43-4.50(2H，m，ArCH2O)，3.86-3.98(4H，m，OCH2CH2O)，3.46(3H，s，OCH3)，3.39(3H，s，OMe)，2.80-2.86(2H，m，6-CH2)，1.26-2.40(13H，m)和0.86(3H，s，18-CH3)；δc152.6，137.4，133.6，126.4，124.4，119.3，114.3，94.4，69.5，65.2，64.5，58.1，55.9，49.3，46.1，43.6，38.9，34.2，30.6，29.6，26.9，26.1，22.3和14.3；m/z[ES+]425.3(100％，M++Na).HRMS[FAB+]402.24063.
2-甲氧基甲基3-O-TBS雌酮 用HCl甲醇溶液(10mL，4M)處理2-甲氧基甲基-3-O-甲氧基甲基-17-亞乙基二氧基雌酮(1g)的THF(10mL)溶液0.25小時，標準水后處理后將產物溶于DMF(10mL)，并用咪唑(425mg)和TBSCl(453mg)處理。14小時后將該反應物萃取至乙酸乙酯(25mL)，然后用水(5×20mL)及鹽水(20mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。柱層析(0-15％乙酸乙酯/己烷)得到所需產物的白色固體(360mg)，其顯示δH(CDCl3)7.25(1H，s，ArH)，6.51(1H，s，ArH)，4.43(1H，d，J 11.7，ArCHa)，4.40(1H，d，J 11.7，ArCHb)，3.39(3H，s，OCH3)，2.82-2.88(2H，m，6-CH2)，2.42-2.54(2H，m)，1.92-2.29(5H，m)，1.36-1.68(6H，m)，1.01(9H，s，t-Bu)，0.91(3H，s，18-CH3)和0.22(6H，s，SiMe2)；δc221.1，151.3，136.7，132.3，126.4，126.1，118.6，69.8，58.2，50.4，48.0，44.0，38.3，35.9，31.5，29.4，26.6，25.9，25.7，21.6，18.2，13.8和-4.3.
2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-氰基亞甲基雌酮 用氫化鈉(124mg)處理二乙基(氰基甲基)膦酸酯(506μL，3mmol)的THF(10mL)溶液，氣體放出停止后，用2-甲氧基甲基3-O-TBS雌酮(320mg)的THF(5mL)溶液處理。將反應加熱至70℃保持1.5小時，然后進行后處理。產物經層析純化(7∶1己烷/乙酸乙酯)得到1∶1的異構體混合物(240mg)，該透明無色油狀物顯示δH(CDCl3)7.24 & 7.25(1H，2×s，ArH)，6.51 & 6.50(1H，2×s，ArH)，5.13(dd，J 2.3及2.0CHCN) &5.05(dd，J 2.5及2.3)(1H，2×dd，CHCN兩種異構體)，4.43(1H，d，J12.8，OCHa)，4.40(1H，d，J 12.8，OCHb)，3.39 & 3.39(3H，2×s，OCH3)，0.99及0.88(3H，2×s，18-CH3，兩種異構體)。
2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮 將2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-氰基亞甲基雌酮(220mg)的THF(1mL)及乙醇(5mL)溶液在Pd/C(200mg，5％)的存在下氫化14小時。然后反應物通過硅藻土過濾，蒸發(fā)得到透明無色油狀所需產物2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮(200mg)，其顯示δH(CDCl3)7.23(1H，s，ArH)，6.50(1H，s，ArH)，4.42(1H，d，J 11.8，ArCHa)，4.41(1H，d，J11.8，ArCHb)，3.39(3H，s，OCH3)，2.72-2.86(2H，m，6-CH2)，1.15-2.46(16H，m)，1.01(9H，s，t-Bu)，0.67(3H，s，18-CH3)和0.21(6H，s，SiMe2)；δc151.20，136.9，132.7，126.4，125.9，119.8，118.6，69.8，58.2，54.4，46.8，44.0，42.7，38.8，37.3，28.6，28.4，27.8，26.3，25.7，24.0，18.2，17.6，12.3和-4.1.
2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮 用TBAF(1mL，1M THF溶液)處理2-甲氧基甲基-3-O-TBS-17-β-氰基甲基雌酮(200mg)的THF(5mL)溶液。0.5小時后將反應物后處理。層析(己烷/乙醚)得到所需產物2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮的結晶固體(120mg)，其顯示δH(CDCl3)7.22(1H，s，ArH)，6.91(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，OH)，4.64(1H，d，J 12.5，ArCHa)，4.59(1H，d，J12.5，ArCHb)，3.43(3H，s，OCH3)，2.78-2.86(2H，m，6-CH2)，1.24-2.42(15H，m)和0.67(3H，s，18-CH3)；δc153.8，138.0，131.5，125.0，119.8，119.4，116.3，74.1，58.1，54.3，46.7，43.6，42.5，38.7，37.3，29.3，28.2，27.6，26.2，25.6，23.9，17.6和12.2.m/z[APCI-]338.3(100％，M+-H).
2-甲氧基甲基-3-O-氨磺酰基-17-β-氰基甲基雌酮 將氨磺酰氯(1.7mmol)冷卻至0℃，溶于二甲基乙酰胺(1.5mL)，5分鐘后用2-甲氧基甲基-17-β-氰基甲基雌酮(60mg)處理。15分鐘后移去外部冷卻并使該反應于環(huán)境溫度攪拌3小時。然后將反應物用乙酸乙酯(15mL)稀釋，傾入鹽水(15mL)并分離有機層。有機提取物用水(3×15mL)及鹽水(15mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。層析(0-5％MeOH/DCM)得到無色油狀產物2-甲氧基甲基-3-O-氨磺?；?17-β-氰基甲基雌酮(65mg)。氯仿/己烷結晶得到白色結晶固體，其顯示δH(CDCl3)7.29(1H，s，ArH)，7.17(1H，s，ArH)，5.55(2H，s，NH2)，4.48(2H，s，OCH2)，3.44(3H，s，OCH3)，2.86-2.92(2H，m，6-CH2)，1.26-2.42(15H，m)和0.69(3H，s，18-CH3)；δc147.3，139.4，139.3，128.5，126.8，122.7，119.6，70.6，58.3，54.3，46.6，43.9，42.6，38.2，37.3，29.2，28.2，27.2，26.1，23.9，17.6和12.2.m/z[APCl-]417.3(100％，M+-H).
2-乙基-17-亞甲基雌酮 用氫化鈉(400mg)處理甲基三苯基碘化鏻(10mmol)的DMSO(15mL)溶液。0.5小時后向所得黃色內鎓鹽中加入2-乙基雌酮(600mg)的DMSO(15mL)溶液，使反應在60℃保持16小時。將反應冷卻至室溫，傾入冰水(50mL)，用乙醚(3×50mL)萃取，合并的有機提取物用水(3×50mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。層析(10％乙醚/己烷)得到白色泡沫狀所需產物2-乙基-17-亞甲基雌酮(390mg)，其顯示δH(CDCl3)7.05(1H，s，ArH)，6.47(1H；s，ArH)，4.65-4.68(2H，m，CH2)，4.53(1H，s，OH)，2.72-2.87(2H，m，6-CH2)，2.59(2H，q，J 7.4，CH2Me)，1.25-2.56(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.81(3H，s，18-CH3)；δc161.6，150.9，135.4，132.6，127.0，126.2，115.1，100.7，53.5，44.4，44.1，38.9，35.8，29.5，29.4，27.7，26.8，24.0，23.1，18.7和14.6；HRMS[FAB+]296.21402.
2-乙基-17-亞乙基雌酮 用氫化鈉(400mg)處理乙基三苯基碘化鏻(10mmol)的DMSO(15mL)溶液。0.5小時后向所得黃色內鎓鹽中加入2-乙基雌酮(600mg)的DMSO(15mL)溶液，并使反應于60℃保持16小時。將反應冷卻至室溫，傾入冰水(50mL)，用乙醚(3×50mL)萃取，合并的有機提取物用水(3×50mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。層析(10％乙醚/己烷)得到白色泡沫狀所需產物順-2-乙基-17-亞乙基雌酮(460mg)，其顯示δH(CDCl3)7.03(1H，s，ArH)，6.47(1H，s，ArH)，5.14(1H，qdd，J 7.0，2.0，2.0，CHMe)，4.45(1H，s，OH)，2.72-2.88(2H，m，6-CH2)，2.59(2H，q，J 7.4，CH2Me)，2.14-2.46(5H，m)，1.87-1.95(1H，m)，1.70-1.78(1H，m)，1.69(3H，ddd，J 7.0，2.0，2.0，MeHC)，1.25-1.62(6H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH2Me)和0.91(3H，s，18-CH3)；δc150.8，150.1，135.4，132.7，126.9，126.1，115.1，113.3，55.2，44.6，43.9，38.5，37.3，31.5，29.4，27.7，27.1，24.3，23.1，17.1，14.7和13.3；HRMS[FAB+]310.22967.
2-乙基-3-O-氨磺酰基17-亞甲基雌酮 向2-乙基-17-亞甲基雌酮(231mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(320mg)及氨磺酰氯(1.56mmol)。于室溫攪拌14后將反應物用乙酸乙酯(20mL)稀釋，然后用水(3×20mL)和鹽水(20mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。柱層析得到透明無色油狀所需產物2-乙基-3-O-氨磺?；?7-亞甲基雌酮(200mg)，其放置后固化并顯示δH(CDCl3)7.19(1H，s，ArH)，7.09(1H，s，ArH)，5.06-5.14(2H，br，NH2)，4.56-4.60(2H，m，CH2)，2.82-2.87(2H，m，6-CH2)，2.69(2H，q，J 7.4，CH2Me)，1.32-2.60(13H，m)，1.22(3H，t，J 7.4，CH2Me)及0.82(3H，s，18-CH3)；δC161.3，145.9，139.5，135.8，126.8(所有C)，126.8，121.3(兩個CH)，100.9(CH2)，53.5(CH)，44.3(C)，44.3，38.4(兩個CH)，35.7，29.5，29.3，27.5，26.5，24.0，23.1(所有CH2)，18.6及14.7(兩個CH3)；HRMS[FAB+]375.18681。
2-乙基-3-O-氨磺?；?17-亞乙基雌酮
向2-乙基-17-亞乙基雌酮(329mg)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入2，6-二叔丁基-4-甲基吡啶(435mg)及氨基磺酰氯(2.12mmol)。于室溫攪拌14后將反應物用乙酸乙酯(20mL)稀釋，然后用水(3×20mL)和鹽水(20mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。柱層析得到透明無色油狀所需產物順-2-乙基-3-O-氨磺?；?7-亞乙基雌酮，其放置后固化并顯示δH(CDCl3)7.17(1H，s，ArH)，7.04(1H，s，ArH)，5.15(1H，qdd，J 7.0，2.0，2.0，CHMe)，5.09(2H，s，NH2)，2.80-2.86(2H，m，6-CH2)，2.69(2H，q，J7.4，CH2Me)，2.18-2.46(5H，m)，1.89-1.96(1H，m)，1.70-1.78(1H，m)，1.69(3H，ddd，J 7.0，2.0，2.0，MeHC)，1.23-1.63(6H，m)，1.21(3H，t，J7.4，CH2Me)及0.90(3H，s，18-CH3)；δC149.8，145.9，139.5，135.8，133.4(所有C)，126.8，121.2，113.4，55.4(所有CH)，44.5(C)，44.1，38.0(兩個CH)，37.2，31.5，29.3，27.4，26.9，24.2，23.1(所有CH2)，17.0，14.7及13.3；HRMS[FAB+]389.20246。
2-甲氧基-3-芐氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇 用氫化鈉(120mg)處理2-甲氧基-3-芐氧基雌二醇(800mg)的DMF(10mL)溶液，0.25小時后加入氯甲基甲基醚(266μL)。于室溫攪拌反應14小時，然后進行標準水后處理。層析(6∶1己烷/乙酸乙酯)得到透明無色油狀所需產物(590mg)，其放置后固化，m.p.87-88℃并顯示δH(CDCl3)7.24-7.45(5H，m)，6.85(1H，s，ArH)，6.62(1H，s，ArH)，5.10(2H，s，OCH2)，4.66(2H，s，OCH2)，3.86(3H，s，OMe)，3.62(1H，dd，J 8.4，8.2，17-αH)，3.37(3H，s，OCH3)2.70-2.80(2H，m，6-CH2)，1.20-2.32(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH3).m/z[FAB+]436.1(100％，M++H).HRMS[FAB+]436.26136.
2-甲氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇 將2-甲氧基-3-芐氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇(500mg)的THF(2mL)及乙醇(10mL)溶液在Pd/C(50mg，5％)的存在下氫化(1atm)16小時。將反應物通過硅藻土過濾進行后處理，并蒸發(fā)得到所需產物的白色固體(500mg)。乙醚/己烷重結晶得到白色結晶，δH(CDCl3)6.78(1H，s，ArH)，6.63(1H，s，ArH)，4.65(2H，s，OCH2)，3.86(3H，s，OMe)，3.56-64(1H，m，17-αH)，3.37(3H，s，OCH3)2.72-2.80(2H，m，6-CH2)，1.15-2.30(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH3).
2-甲氧基-3-O-氨磺?；?17-O-甲氧基甲基雌二醇 用2-甲氧基-17-O-甲氧基甲基雌二醇(170mg)處理0℃的氨磺酰氯(1.7mmol)的DMA(2mL)溶液。3小時后將反應物通過用乙酸乙酯(15mL)稀釋進行后處理，然后用水(4×15mL)和鹽水(15mL)洗滌，干燥并蒸發(fā)。層析(丙酮/氯仿梯度)得到所需產物2-甲氧基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲氧基甲基雌二醇的白色固體(160mg)，然后用乙醚/己烷結晶，δH(CDCl3)7.02(1H，s，ArH)，6.91(1H，s，ArH)，4.99(2H，s，NH2)，4.65(1H，d，9.0，CHaHbO)，4.64(1H，d，9.0，CHaHbO)，3.86(3H，s，OMe)，3.60(1H，dd，J 8.6，8.2，17-αH)，3.37(3H，s，OCH3)2.76-2.82(2H，m，6-CH2)，1.15-2.30(13H，m)，和0.82(3H，s，18-CH3)；δc148.7，140.4，136.6，130.1，124.0，110.4，96.0，86.5，56.4，55.2，50.0，44.5，43.0，38.2，37.3，28.7，27.1，26.5，23.2和11.9.
2-乙基-3-芐氧基-17-O-甲磺酰基雌二醇58
向氮氣下攪拌并冷卻至0℃的2-乙基-3-O-芐基雌二醇(1mmol)的5ml無水吡啶溶液中加入甲基磺酰氯(0.09ml，1.2mmol)。于0℃攪拌該溶液2小時，然后加入水(20ml)。有機物用乙酸乙酯(2×60ml)萃取并依次用水和鹽水洗滌有機層，然后用MgSO4干燥。真空除去溶劑及柱層析(己烷/乙酸乙酯5∶1)后得到2-乙基-3-芐氧基-17-O-甲磺?；贫嫉陌咨腆w0.36g(77％)，mp＝133℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.87(s，3H，CH3)，1.22(t，JH-H＝7.4Hz，3H，CH3)，1.25-1.60(m，6H)，1.70-1.95(m，3H)，2.05(m，1H)，2.15-2.45(m，3H)，2.68(q，JH-H＝7.4Hz，2H，CH2)，2.85(m，2H，H6)，3.02(s，3H，CH3SO2)，4.57(m，1H，H17)，5.05(s，2H，CH2Ph)，6.64(s，1H，ArH，7.10(s，1H，ArH)，7.36-7.44(m，5H，Ph).13C NMR(CDCl3)11.7(CH3)，14.6(CH3)，23.0，23.4，26.0，27.1，27.9，29.536.4，38.2，38.6，43.3，43.7，49.0，69.8(CH2Ph)，89.5(C17)，111.8，126.2，127，0，127.6，128.4130.3，131.7，134.7，137.6和154.52-乙基-17-O-甲磺酰基雌二醇59 向2-乙基-3-芐氧基-17-O-甲磺?；贫?0.5mmol)的10ml THF及40ml乙醇溶液中加入30mg 10％Pd/C。于室溫、氫氣下攪拌該混合物14小時。將懸浮液用硅藻土過濾，用THF洗滌并真空濃縮有機層。柱層析后(己烷/乙酸乙酯1∶0-2∶1)，分離得到2-乙基-17-O-甲磺酰基雌二醇的白色固體145mg(77％)，mp＝195℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.86(s，3H，CH3)，1.21(t，JH-H＝7.7Hz，3H，CH3)，1.25-1.60(m，6H)，1.71-1.91(m，3H)，2.03(m，1H)，2.13-2.38(m，3H)，2.58(q，JH-H＝7.7Hz，2H，CH2)，2.79(m，2H，H6)，3.01(s，3H，CH3SO2)，4.53(s，1H，OH)，4.56(dd，1 JH-H＝9.1和7.9Hz，1H，H17)，6.49(s，1H，ArH，7.03(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)11.7(CH3)，14.6(CH3)，23.0，23.4，26.0，27.1，27.9，29.536.4，38.2，38.6，43.3，43.7，49.0，89.5(C17)，115.2，126.3，127.3，132.1，135.2和151.2MS m/z350.16(M+)HPLC100％.
微量分析C66.30(理論值66.63)；H7.80(理論值7.99)
2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-O-甲磺?；贫?0 將1ml 0.559M氨磺酰氯的甲苯溶液真空濃縮并將氨磺酰氯溶于1ml DMA。將該溶液冷卻至0℃，并在氮氣下加到2-乙基-17-O-甲磺?；贫?0.2mmol)中。于室溫攪拌該溶液15小時。加入5ml水后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空濃縮。柱層析后(己烷/乙酸乙酯5∶2)得到白色固體2-乙基-3-O-氨磺?；?17-O-甲磺?；贫?0mg(66％)，mp＝179℃。
1H NMR(CDCl3，270MHz)0.85(s，3H，CH3)，1.20(t，JH-H＝7.4Hz，3H，CH3)，1.30-1.55(m，6H)，1.73-187(m，3H)，2.04(m，1H)，2.16-2.36(m，3H)，2.68(q，JH-H＝7.4Hz，2H，CH2)，2.82(m，2H，H6)，3.01(s，3H，CH3SO2)，4.57(dd，1 JH-H＝8.7和8.1Hz，1H，H17)，5.08(s，2H，NH2)，6.49(s，1H，ArH，7.03(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)14.1(CH3)，17.0(CH3)，25.4，23.4，28.2，29.2，30.3，31.438.6，40.5，40.6，45.6，46.3，51.4，91.5(C17)，123.6，129.2，135.9，137.9，141.1和148.3.LRMSm/z457.32(M+)；HPLC 100％；微量分析C53.40(理論值55.12)；H6.38(理論值6.34)；N3.09(理論值3.06)。
2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亞甲基雌酮 使2-乙基-3-O-TBS雌酮(2mmol)、丙二腈(6mmol)及β-丙氨酸的150ml甲苯和30ml乙酸溶液回流3天。而且，24小時和48小時后加入2mmol等分量的丙二腈。將該溶液冷卻至室溫后，將溶劑蒸發(fā)并將殘留固體與50ml水一起攪拌，用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。有機層用水、鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空除去溶劑。柱層析后得到白色粉末狀2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亞甲基雌酮840mg(91％)，mp＝168℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.21(s，6H，CH3Si).1.00(s，9H，(CH3)3Si)，1.06(s，3H，CH3)，1.15(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.40-1.80(m，6H)，1.85-2.05(m，2H)，2.26(m，1H)，2.45-3.05(m，7H)，6.4(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)-4.2和-4.1(CH3Si)，14.6(CH3)，16.6，18.2，23.2，23.6，25.7((CH3)3CSi)，26.3，27.5，29.1，34.0，34.7，38.3，43.4，49.5，54.2，79.6(C17)，111.1，112.4，118.3，126.1，131.2，132.2，134.3，151.5和196.2.
2-乙基-17-二氰基亞甲基雌酮 將2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亞甲基雌酮(.5mmol)的THF(50ml)溶液冷卻至0℃并滴加入TBAF/THF 1M(0.6mmol，0.6ml)。于0℃攪拌該溶液2小時，然后升溫至室溫。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)純化后得到白色固體2-乙基-17-二氰基亞甲基雌酮。125mg(72％)；mp＝270℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)1.06(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.5Hz，3H，CH3)，1.39-1.79(m，6H)，1.89-2.05(m，2H)，2.25(m，1H)，2.45-2.52(m，1H)，2.61(q，J＝7.5Hz，2H，CH2)，2.63-3.02(m，5H)，4.52(s，1H，OH)，6.50(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH)，13C NMR(CDCl3)14.3，16.6(CH3)，23.0，23.2，26.4，27.4，28.9，33.9，34.7，38.3，43.3，49.4，54.1，79.6(C17)，111.2，112.5，115.2，126.2，127.5，131.3，135.0，151.4和196.1.HPLC100％2-乙基-3-O-氨磺?；?17-二氰基亞甲基雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-二氰基亞甲基雌酮(0.2mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物14小時。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，然后真空除去溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5/1-3/1)純化，得到2-乙基-3-O-氨磺?；?17-二氰基亞甲基雌酮62mg(73％)，mp＝228℃；1HNMR(CDCl3，270MHz)1.06(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.44-1.75(m，6H)，1.92-2.03(m，2H)，2.29(m，1H)，2.44-2.55(m，1H)，2.69(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.75-3.04(m，5H)，5.03(s，2H，NH2)，7.09(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)14.6，16.6(CH3)，23.0，23.2，26.2，27.2，28.9，33.8，34.7，37.8，43.4，49.3，54.1，79.7(C17)，111.0，112.3，121.5，126.9，134.0，135.4，138.0，146.4和195.8.HPLC 100％；微量分析C64.90(理論值64.92)；H6.45(理論值6.40)；N9.68(理論值9.87)。
2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮 將2-乙基-3-O-TBS-17-二氰基亞甲基雌酮(1mmol)的甲醇(50ml)和THF(5ml)溶液冷卻至-10℃，并分次加入NaBH4(76mg，2mmol)。于-10℃攪拌該混合物4小時。加入水(50ml)并用NH4Cl酸化該溶液。有機物用乙酸乙酯(2×60ml)萃取，并依次用水和鹽水洗滌有機層，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。殘留固體經柱層析純化，得到2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮380mg(83％)，mp＝162℃1H NMR(CDCl3，)0.22(s，6H，CH3Si).0.80(s，3H，CH3)，1.00(s，9H，(CH3)3CSl)，1.16(t，J＝7.5Hz，3H，CH3)，1.33-1.66(m，6H)，1.85(m，2H)，2.10-2.40(m，6H)，2.55(q，J＝7.5Hz，2H，CH2)，2.78(m，2H，H6)，3.56(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)2)，6.47(s，1H，ArH)，7.03(s，1H，ArH)，13C NMR(CDCl3)-4.2和-4.1(CH3Si)，12.4(CH3)，14.7，18.2，23.4，25.7((CH3)3CSi)，26.2，27.6，27.7，29.2，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.6，112.7，118.2，128.1，131.9，132.1，134.5，和151.3.
2-乙基-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮
將2-乙基-3-O-TBS-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮(5mmol)的THF(50ml)溶液冷卻至0℃，滴加入TBAF/THF 1M(0.6mmol，0.6ml)。于0℃攪拌該溶液2小時，然后升溫至室溫。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)純化，得到白色固體2-乙基-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮。124mg(71％)mp＝248℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.80(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.30-1.61(m，7H)，1.85(m，2H)，2.10-2.41(m，5H)，2.59(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.81(m，2H，H6)，3.56(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)2)，4.51(br，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.02(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)12.4(CH3)，14.4(CH3)，22.9，23.4，26.3，27.6，27.7，29.0，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.5，112.7，115.2，126.3，127.3，131.9，135.2，和151.3.HPLC100％；微量分析C78.96(理論值79.27)；H8.03(理論值8.10)；N7.79(理論值8.04)。
2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮(0.2mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物14小時。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，然后真空除去溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5/1-3/1)純化，得到2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-二氰基甲基17-脫氧雌酮白色粉末170mg(80％)，mp＝169℃；
1H NMR(CDCl3，270MHz)0.80(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.32-1.55(m，7H)，1.87(m，2H)，2.10-2.38(m，5H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.83(m，2H，H6)，3.57(d，J＝9.9Hz，1H，CH(CN)2)，4.91(br，2H，NH2)，7.08(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3，270MHz)12.4(CH3)，14.4(CH3)，22.9，23.4，26.3，27.6，27.7，29.0，37.5，38.8，43.2，43.6，50.3，54.5，112.7，115.2，126.3，127.3，131.9，135.2，和151.3.HPLC100％；微量分析C64.64(理論值64.61)；H7.80(理論值6.84)；N9.62(理論值9.83)。
2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脫氧雌酮 于-78℃、氮氣下攪拌2-乙基-3-O-TBS-17β-氰基甲基17-脫氧雌酮(0.5mmol)的THF(50ml)溶液，然后以滴加方式、用1M LDA(1.2mmol，1.2ml)處理。30分鐘后加入CH3I(1.5mmol，212mg)，于-78℃攪拌該混合物4小時，然后于室溫攪拌12小時。然后加入乙酸乙酯(100ml)和水(30ml)，有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。所得黃色油狀物經柱層析(己烷/乙酸乙酯20∶1)純化，得到無色油狀2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脫氧雌酮176mg(78％)，為(1∶1)非對映異構體混合物，1H NMR(CDCl3，270MHz)0.23(s，6H，CH3Si)，0.76和0.78(s，3H，CH3)，1.01(s，9H，(CH3)3CSi)，1.17(t，J＝7.4Hz，2H，CH3)，1.25-1.96(m，13H)，2.05-2.50(m，3H)，2.57(q t，J＝7.3Hz，2H，CH2)，2.66-2.88(m，4H，CH2)，6.48和6.50(m，1H，ArH)，7.03-7.06(m，1H，ArH).
2-乙基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮 將2-乙基-3-O-TBS-17β-(1-氰基)乙基17-脫氧雌酮(1mmol)的THF(50ml)溶液冷卻至0℃，并滴加入1M TBAF/THF(1.2mmol，1.2ml)。于0℃攪拌該溶液2小時，然后升溫至室溫。加入水(10ml)和乙酸乙酯(80ml)，有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。殘留黃色固體(400mg)經柱層析(己烷/乙酸乙酯5∶1-2∶1)純化，然后己烷/乙酸乙酯6∶1重結晶，得到220mg(71％)白色粉末狀2-乙基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮。mp226-228℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.75(s，3H，CH3)，1.20-1.65(m，9H)，1.85-1.92(m，5H)，2.10-2.58(m，4H)，2.5(m，2H，H6)，6.55-6.62(m，2H，ArH)，7.07(m，1H，ArH).HPLC100％微量分析C81.60(理論值81.51)；H8.79(理論值8.79)；N4.40(理論值4.53)。
2-乙基-3-O-氨磺?；?17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(0.6mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮(0.2mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物14小時。然后加入10mL水并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，然后真空除去溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5/1-2/1)純化，然后重結晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到42mg(54％)2-乙基-3-O-氨磺?；?17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮，mp157-159℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.79(s，3H，CH3)，1.25-1.64(m，11H)，1.73-1.81(m，1H)，1.85-2.03(m，2H)，2.23-2.37(m，2H)，2.40-2.53(m，2H)，2.89(m，2H，H6)，7.03(d，J＝2.7Hz，1H，ArH)，7.07(dd，J＝9.0和2.7Hz，1H，ArH)，7.31(d，J＝9.0Hz，1H，ArH).HPLC100％微量分析C64.90(理論值64.92)；H7.52(理論值7.26)；N7.23(理論值7.21)。
2-乙基-3-O-芐基-17α-(甲基)氰基甲基雌二醇 于-78℃、氮氣下攪拌丙腈(0.05mol)的無水THF(50ml)溶液，然后以滴加方式、用LDA(0.05mol)處理。攪拌該混合物1小時，然后加入2-乙基-3-O-芐基雌酮(8mmol)的20ml THF溶液(在3小時內滴加)。再攪拌該混合物3小時，然后用NH4Cl水溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經柱層析(己烷/乙酸乙酯10/1-4/1)純化，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-芐基-17α-(甲基)氰基甲基雌二醇2.70g(76％)，mp＝75-77℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.97(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.6Hz，3H，CH3)，1.25-1.90(m，12H)，1.97-2.07(m，2H)2.15-2.23(m，1H)，2.41-2.49(m，1H)，2.66(q，J＝7.6Hz，2H，CH2)，2.77-2.91(m，3H)，5.04(s，2H，CH2Ph)，)，6.62(s，1H，ArH)，7.09(s，1H，ArH)，7.28-7.46(m，5H，Ph).
2-乙基-3-O-芐基17-(1-氰基)亞乙基雌酮 將2-乙基-3-O-芐基雌二醇-17α-丙腈(0.05mol)加入到冷卻至0℃的TEA(2ml)及DCM(25ml)溶液中，并在加入CH3SO2Cl(0.055mol，0.44ml)后，于0℃攪拌該溶液8小時。用水猝滅該溶液并用DCM萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空除去溶劑。粗油狀物經柱層析(己烷/乙酸乙酯10/1)純化，得到2-乙基-3-O-芐基17-氰基亞乙基雌酮。產率85％，mp＝63-64℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.95(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.3Hz，3H，CH3)，1.30-1.71(m，6H)，1.84(s，3H，CH3)，1.85-1.96(m，2H)，2.21-2.51(m，4H)，2.64(q，J＝7.3Hz，2H，CH2)，2.75-2.90(m，3H)，5.04(s，2H，CH2Ph)，6.63(s，1H，ArH)，7.10(s，1H，ArH)，7.28-7.48(m，5H，Ph).
2-乙基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮 向2-乙基-3-O-芐基17-(1-氰基)亞乙基雌酮(1mmol)的5mLTHF/45mL甲醇溶液中加入50mg 5％Pd/C，并在氫氣下攪拌該混合物16小時。將該懸浮液經硅藻土/沙過濾，用THF洗滌并真空濃縮有機層。柱層析(己烷/乙酸乙酯10∶1-1∶1)及重結晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)后，分離得到白色固體2-乙基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮，白色粉末225mg(67％)，mp＝235-236℃；1H NMR.(CDCl3，270MHz)0.76(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.24-1.69(m，13H)，1.71-2.00(m，2H)，2.10-2.48(m，2H)，2.57(q，J＝7.3Hz，2H，CH2)，2.71(m，1H，CH(CH3)CN)，2.78(m，2H，H6)，4.47(br，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.03(s，1H，ArH).
微量分析C81.50(理論值81.85)；H9.18(理論值9.26)；N3.99(理論值4.15)。
2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(1mmol)的DMA(2ml)溶液加入到21a(0.3mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物14小時。然后加入水(10mL)并用乙酸乙酯(2×50ml)萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥，然后真空除去溶劑。殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5/1-2/1)純化，然后重結晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-氨磺酰基-17-脫氧17β-(1-氰基)乙基雌酮86mg(69％)，mp＝171-172℃
1H NMR(CDCl3，270MHz)0.76(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.22-1.64(m，11H)，1.75-2.35(m，6H)，2.66(q，J＝7.3Hz，2H，CH2)，2.68(m，1H，CH(CH3)CN)，2.84(m，2H，H6)，4.92(br，2H，NH2)，7.07(s，1H，ArH)，7.16(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3，270MHz)12.4(CH3)，14.6(CH3)，18.6(CH3)，23.0，23.8，26.2，26.8，27.0，27.4，29.1，38.2，38.6，42.9，44.0，53.3，54.8，121.4，123.0(CN)，126.9，133.6，135.9，139.3，146.2.
微量分析C66.40(理論值66.31)；H7.73(理論值7.74)；N6.52(理論值6.72)。
2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮 氮氣下將(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙酸乙酯(1.84g，4mmol)的30ml無水THF溶液冷卻至0℃，然后分次加入LiAlH4(0.30g，8mmol)。于0℃3小時后，該混合物用NH4Cl水溶液猝滅并用乙酸乙酯萃取有機物。有機層用水、鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯15/1-8∶1)純化，得到1.47g(88％)白色粉末狀2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮，mp＝98-99℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.63(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.22-1.58(m，9H)，1.70-1.92(m，5H)，2.16-2.34(m，2H)，2.66(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.82(m，2H，H6)，3.68(m，2H，CH2OH)，5.03(s，2H，CH2Ph)，6.62(s，1H，ArH)，7.10(s，1H，ArH)，7.28-7.45(m，5H，Ph).
2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮 氮氣下將2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮(1.26g，3mmol)的30ml無水THF溶液冷卻至0℃。分次加入NaH(0.16g，4mmolNaH 60％礦物油的分散液)，攪拌該溶液30分鐘，然后滴加入CH3I(0.37ml，6mmol)。使該溶液升溫至室溫并攪拌18小時。加入水(20ml)后，有機物用乙酸乙酯萃取。有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯20/1)純化，得到1.25g(96％)白色粉末狀2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮，mp＝70-71℃1H NMR(CDCl3，270MHz)0.66(s，3H，CH3)，1.25(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.26-1.60(m，9H)，1.76-1.96(m，5H)，2.20-2.42(m，2H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.86(m，2H，H6)，3.38(s，3H，CH3O)，3.44(m，2H，CH2O)，5.07(s，2H，CH2Ph)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.31-7.50(m，5H，Ph).
2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮 將35的2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮0.87g(2mmol)溶于THF(5mL)及甲醇(50mL)中，加入50mg 5％Pd/C并在氫氣下攪拌該混合物16小時。將該懸浮液經硅藻土/沙過濾，用THF洗滌并真空蒸發(fā)溶劑。稠狀微黃色油經柱層析(己烷/乙酸乙酯15/1-10/1)純化，得到白色粉末狀2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮0.66g(97％)，mp＝58-59℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.62(s，3H，CH3)，1.19-1.56(m，12H)，1.72-1.91(m，5H)，2.13-2.34(m，2H)，2.60(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.77(m，2H，H6)，3.37(s，3H，CH3O)，3.45(m，2H，CH2O)，5.26(s，1H，OH)，6.48(s，1H，ArH)，7.06(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3)12.4(CH3)，12.5(CH3)，23.0，24.4，26.5，27.9，28.3，29.3，30.2，37.7，38.9，42.4，44.2，47.3，54.6，58.4，72.4，115.1，126.2，127.2，132.6，.135.4，和151.3.HPLC100％HRMS(FAB+)實測值342.255493；計算值C23H34O2342.255881
2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(3mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮(342mg，1mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物24小時。加入水(10mL)后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯10/1-4/1)純化，然后重結晶(己烷/乙酸乙酯5∶1)，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-甲氧基乙基)17-脫氧雌酮0.35g(84％)，mp＝168-169℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.61(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.22-1.54(m，9H)，1.70-1.95(m，5H)，2.15.2.33(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.82(m，2H，H6)，3.33(s，3H，CH3O)，3.35(m，2H，CH2O)，4.95(s，2H，NH2)，7.06(s，1H，ArH)，7.18(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3，270MHz)12.4(CH3)，14.6(CH3)，23.0，24.4，26.3，27.7，28.3，29.3，30.4，37.6，38.5，42.4，44.4，47.4，54.9，58.7，72.6，121.4，127.0，133.5，136.1，139.9，和148.1.；HPLC100％；微量分析C65.40(理論值65.52)；H8.29(理論值8.37)；N3.14(理論值3.32)。
2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮 在氮氣、室溫下攪拌2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮(0.419g，1mmol)、咪唑(0.136g，2mmol)及TPDPSCl(1.1mmol)的10ml無水DMF溶液24小時。加入水(10mL)后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留油狀物經柱層析(己烷/乙酸乙酯25/1)純化，得到白色粉末狀[2-(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-基)-乙氧基]-叔丁基-二苯基-硅烷590mg(90％)，mp＝48-50℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.63(s，3H，CH3)，1.12(s，9H，(CH3)3C)1.15-1.60(m，11H)，1.71-2.01(m，5H)2.20-2.44(m，2H)，2.69(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.88(m，2H，H6)，3.65-3.81(m，2H，CH2O)，5.09(s，2H，CH2Ph)，6.68(s，1H，ArH)，7.20(s，1H，ArH)，7.32-7.51(m，11H，Ph)，7.72-7.77(m，4H，Ph).
2-乙基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮 向2-乙基-3-O-芐基-17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮(1mmol)的THF(2mL)及乙醇(20mL)溶液中加入50mg 5％Pd/C，并在氫氣下攪拌該混合物。反應用TLC監(jiān)控。反應完成后，將懸浮液經硅藻土/沙過濾并真空蒸發(fā)溶劑。殘留油狀物經柱層析(己烷/乙酸乙酯20/1至3∶1)純化，得到白色固體17-[2-(叔丁基-二苯基-硅烷氧基)-乙基]-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇，mp＝134-135℃，0.49g(87％)；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.59(s，3H，CH3)，1.08(s，9H，(CH3)3C)，1.18-1.56(m，12H)，1.68-1.89(m，5H)，2.10-2.33(m，2H)，.2.61(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.78(m，2H，H6)，3.61-3.78(m，2H，CH2O)，4.71(s，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH)，7.07(s，1H，ArH)，7.38(m，6H，Ph)，7.70(m，4H，Ph).
2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(3mmol)的DMA(2ml)溶液加入到39c(566mg，1mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物24小時。加入水(10mL)后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯15/1-8/1純化，得到白色固體2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮470mg(72％)，mp＝185-186℃；1HNMR(CDCl3，270MHz)0.57(s，3H，CH3)，1.05(s，9H，(CH3)3C)，1.18-1.55(m，13H)，1.68-1.89(m，4H)，2.15-2.31(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.82(m，2H，H6)，3.57-3.75(m，2H，CH2O)，4.91(br，2H，NH2)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH)，7.34-7.45(m，6H，Ph)，7.67(m，4H，Ph).13C NMR(CDCl3)12.9(CH3)，15.1(CH3)，20.0，23.5，24.9，26.8，27.3，28.1，28.8，29.7，33.9，38.1，38.8，42.7，44.8，47.6，55.0，63.9，121.5，127.2，127.7，129.7，133.7，134.3，135.7，136.3，140.1，和146.2.
HRMS(FAB+)實測值645.326294，計算值C23H34O2645.3308102-乙基-3-O-氨磺酰基-17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮 將2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-(OTBDPS)乙基)17-脫氧雌酮(323mg，0.5mmol)的20ml THF溶液冷卻至0℃，然后滴加入0.6ml 1MTBAF/THF。于0℃攪拌該溶液6小時，然后加入水(10ml)，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯10/1-2/1)純化，然后己烷/乙酸乙酯4∶1重結晶，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-氨磺?；?17β-(2-羥基乙基)17-脫氧雌酮145mg(72％)，mp＝157-158℃；1H NMR((CD3)2CO)0.62(s，3H，CH3)，1.17-1.55(m，12H)，1.70-1.94(m，5H)，2.16-2.33(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.83(m，2H，H6)，3.60-3.76(m，2H，CH2O)，4.87(br，2H，NH2)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH)；13C NMR(CD3COCD3，400MHz)11.8(CH3)，13.9(CH3)，22.3，23.7，25.7，27.1，27.7，28.5，33.0，37.1，38.0，41.7，43.8，46.7，54.1，61.2，121.1，126.0，133.1，134.9，138.4和145.8；微量分析C64.78(理論值64.83)；H8.12(理論值8.16)；N3.41(理論值3.44)。
2-(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙醇 氮氣下將(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙酸乙酯(0.92g，2mmol)的20ml無水THF溶液冷卻至0℃，然后以分次加入方式加入LiAlH4(0.15g，4mmol)。于0℃6小時后，用NH4Cl水溶液猝滅該混合物，有機物用乙酸乙酯萃取。有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯15/1-6∶1)純化，得到2-(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙醇0.75g(89％)，為白色粉末，mp＝61-62℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.84(s，3H，CH3)，1.20-1.66(m，9H)，1.82-2.02(m，3H)，2.21-2.51(m，3H)，2.71(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.87(m，2H，H6)，4.16(m，2H，CH2OH)，5.07(s，2H，CH2Ph)，5.31(m，1H，CHCH2OH)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.30-7.48(m，5H，Ph).
3-芐氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲 氮氣下將2-(3-芐氧基-2-乙基-13-甲基-6，7，8，9，11，12，13，14，15，16-十氫-環(huán)戊二烯并[a]菲-17-亞基)-乙醇(0.62g，1.5mmol)的10ml無水THF溶液冷卻至0℃。分次加入NaH(0.08g，2mmol NaH 60％的礦物油分散液)，攪拌該溶液30分鐘，然后滴加入CH3I(0.19ml，3mmol)。使該溶液升溫至室溫并攪拌18小時。加入水(20ml)后，有機物用乙酸乙酯萃取。有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥并真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯20/1)純化，得到3-芐氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲0.59g(91％)，為無色油狀物；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.84(s，3H，CH3)，1.24(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.26-1.66(m，6H)，1.82-2.02(m，3H)，2.20-2.51(m，3H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.87(m，2H，H6)，3.36(s，3H，CH3O)，3.94(m，2H，CH2OMe)，5.06(s，2H，CH2Ph)，5.27(m，1H，CHCH2OH)，6.66(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH)，7.31-7.48(m，5H，Ph).
2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇 將3-芐氧基-2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲(0.43g，1mmol)的50ml叔丁醇溶液回流，并在6小時內以小份加入Na(0.46g，20mmol)。該混合物回流18小時，冷卻至室溫并加入2-丙醇以破壞過量的鈉。將溶劑蒸發(fā)并將殘留固體傾入水(20ml)中。有機物用乙酸乙酯萃取，有機層用水和鹽水洗滌，用MgSO4干燥。真空蒸發(fā)溶劑。粗油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯15/1-8∶1)純化，得到白色粉末狀2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇，230mg(68％)，mp＝133-134℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.79(s，3H，CH3)，1.22(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.28-1.60(m，6H)，1.75-1.96(m，3H)，2.18(m，1H)，2.39(m，3H)，2.59(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.79(m，2H，H6)，3.35(s，3H，CH3O)，3.94(m，2H，CH2OMe)，5.11(s，1H，OH)，5.24(m，1H，CHCH2OH)，6.48(s，1H，ArH)，7.05(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3，400MHz)14.9(CH3)，19.2，23.5，24.4，26.7，27.1，28.1，29.7，36.4，39.1，44.4，44.8，53.5，58.2，70.2，112.8，115.7，126.4，127.5，132.6，135.5，151.5，和157.1.HPLC98％；HRMS(FAB+)實測值340.24023，計算值C23H32O2340.24023。
2-乙基-3-O-氨磺?；?7-(2-甲氧基-亞乙基)雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(2mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-(2-甲氧基-亞乙基)-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15，16，17-十氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇(170mg，0.5mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物24小時。加入水(10mL)后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯10/1-5/1)純化，得到白色固體2-乙基-3-O-氨磺酰基17-(2-甲氧基-亞乙基)雌酮，142mg(68％)，1H NMR(CDCl3，270MHz)0.79(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.22-1.67(m，6H)，1.78-1.98(m，3H)，2.17-2.47(m，4H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.85(m，2H，H6)，3.32(s，3H，CH3O)，3.90(m，2H，CH2OMe)，5.14(s，2H，NH2)，5.22(m，1H，CHCH2OH)，7.06(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH).13C NMR(CDCl3，400MHz)14.6(CH3)，18.8，23.1，24.0，26.4，26.5，27.4，29.2，35.8，38.2，44.3，44.4，53.2，57.8，69.8，112.9，121.4，127.0，133.7，136.0，139.6，146.2和156.4.HPLC99.7％；HRMS(FAB+)實測值419.21303，計算值C23H33O4NS 419.213032-乙基-3-O-乙?；?17-氰基-17-羥基-雌酮 于室溫攪拌2-乙基雌酮乙酸酯(5mmol)及KCN(3.26g，50mmol)的20ml甲醇及5ml乙酸溶液3-5天。將冰及水加入到該混合物中，將所得固體過濾并用大量水洗滌。將白色固體溶于乙酸乙酯(100ml)中，有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥，真空除去溶劑，得到白色固體2-乙基-3-O-乙?；?17-氰基-17-羥基-雌酮，1.6g(87％)，其顯示1H NMR(CDCl3，270MHz)0.85(s，3H，CH3)，1.16(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.33-1.70(m，6H)，1.80-2.06(m，5H)，2.30(s，3H，CH3CO)，2.25-2.35(m，1H)，2.38-2.58(m，3H)，2.70(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.82(m，2H，H6)，6.71(s，1H，ArH)，7.15(s，1H，ArH).
乙酸17-氰基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯 將2-乙基-3-O-乙?；?17-氰基-17-羥基-雌酮(4mmol)溶于10無水吡啶中，并滴加入SOCl2(1.46，20mmol)。氮氣下該溶液回流1小時，冷卻至0℃并用5M鹽酸水解至pH1。有機物用乙酸乙酯萃取，且有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空蒸發(fā)溶劑，所得黑色油狀物經層析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)純化，得到白色粉末狀乙酸17-氰基-2-乙基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯，0.50g(36％)，mp176-177℃；1HNMR(CDCl3，270MHz)0.94(s，3H，CH3)，1，16(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.36-1.52(m，1H)，1.60-1.73(m，4H)，1.84-1.94(m，1H)，2.05-2.26(m，3H，2.30(s，3H，CH3CO)，2.39-2.52(m，4H)，2.86(m，2H，H6)，6.65(dd，J＝3.5和2.0Hz，1H，H16)，6.72(s，1H，ArH)，7.14(s，1H，ArH).
2-乙基-3-O-乙?；?17-氰基-17-脫氧雌酮 向乙酸17-氰基-13-甲基-7，8，9，11，12，13，14，15-八氫-6H-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯(1mmol)的THF(5mL)及甲醇(30mL)溶液中加入5％Pd/C(30mg)，并于室溫、氫氣下攪拌該懸浮液24小時。將懸浮液經硅藻土/沙過濾并真空蒸發(fā)溶劑。殘留固體經層析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)純化，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-脫氧雌酮，330mg(94％)，mp＝195-196℃；
1H NMR(CDCl3，270MHz)0.99(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.22-1.32(m，1H)，1.37-1.53(m，4H)，1.56-1.67(m，1H)，1.86-1.95(m，2H)，1.99-2.08(m，1H)，2.12-2.17(m，1H)，2.19-2.32(m，2H)，2.35(s，3H，CH3CO)，2.38-2.47(m，2H)，2.53(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.88(m，2H，H6)，6.76(s，1H，ArH)，7.19(s，1H，ArH).
2-乙基-17-氰基-17-脫氧雌酮 將2-乙基-3-O-乙酰基-17-氰基-17-脫氧雌酮(0.8mmol)溶于丙酮(10ml)及甲醇(10ml)中，并向該溶液中加入K2CO3(0.55g，4mmol)。于室溫攪拌該混合物24小時。將鹽濾去并將溶劑蒸發(fā)。所得固體用NH4Cl水溶液處理(至pH1)，并用乙酸乙酯萃取有機物。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空蒸發(fā)溶劑，所得固體經層析(己烷/乙酸乙酯8∶1-6∶1)純化，和己烷/乙酸乙酯(4∶1)重結晶，得到白色粉末狀2-乙基-17-氰基-17-脫氧雌酮，210mg(85％)，mp＝284-285℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.95(s，3H，CH3)，1.21(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.30-1.60(m，6H)，1.79-1.91(m，2H)，1.94-2.07(m，2H)，2.09-2.24(m，2H)，2.33-2.42(m，2H)，2.58(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.78(m，2H，H6)，4.50(s，1H，OH)，6.49(s，1H，ArH).7.03(s，1H，ArH)；13C NMR(CDCl3，400MHz)14.4(CH3)，14.5，23.1，24.3，26.4，26.7，27.8，29.1，37.1，39.2，40.4，43.7，44.7，53.5，115.2，121.3，126.4，127.4，131.9，135.2，和151.3；微量分析C81.15(理論值81.51)；H8.72(理論值8.79)；N4.33(理論值4.53)。
2-乙基-3-O-氨磺?；?17-氰基-17-脫氧雌酮 將冷卻至0℃的NH2SO2Cl(0.8mmol)的DMA(2ml)溶液加入到2-乙基-17-氰基-17-脫氧雌酮(0.3mmol)中，并于室溫、氮氣下攪拌該混合物24小時。加入水(10mL)后，有機物用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。有機層依次用水和鹽水洗滌，并用MgSO4干燥。真空除去溶劑，殘留固體經柱層析(己烷/乙酸乙酯5/1)純化并己烷/乙酸乙酯(5/1)重結晶，得到白色粉末狀2-乙基-3-O-氨磺?；?17-氰基-17-脫氧雌酮，100mg(86％)，mp＝193-194℃；1H NMR(CDCl3，270MHz)0.95(s，3H，CH3)，1.20(t，J＝7.4Hz，3H，CH3)，1.28-1.62(m，6H)，1.86(m，2H)，1.96-2.28(m，4H)，2.37(m，2H)，2.68(q，J＝7.4Hz，2H，CH2)，2.83(m，2H，H6)，4.94(s，2H，NH2)，7.08(s，1H，ArH)，7.18(s，1H，ArH)；13C NMR(CDCl3，400MHz)14.4(CH3)，14.7，23.1，24.3，26.1，26.6，27.5，29.1，37.0，38.8，40.3，43.8，44.6，53.5，121.2，121.5，127.0，133.8，135.7，138.8和146.3.
微量分析C64.95(理論值64.92)；H7.29(理論值7.26)；N7.11(理論值7.21)。
生物學數(shù)據本文中所提及的化合物可由上述合成部分中所使用的化合物編號確定或由STX代號確定?；衔锞幪柵c其相應的STX代號如下所列。
另外，下列化合物指
類固醇硫酸酯酶的抑制
細胞增殖用微量滴定板試驗(Cell Titer 96 proliferation assay，Promega，Hampshire，UK)測定藥物對細胞增殖的作用。
化合物STX 140在下列測試中用作對照。
人臍靜脈細胞；96孔板MTS增殖試驗，平均抑制三個孔+/-Sds
*僅復制閱讀。
人皮膚成纖維細胞；96孔板MTS增殖試驗，平均抑制三個孔+/-Sds
*僅復制閱讀A2780卵巢癌細胞；三天的研究，細胞數(shù)目
STX 641及STX 140表示分別研究了STX 641和STX 140藥物誘導作用的可逆性。對這些研究而言，在第3天移去藥物，用PBS洗滌細胞，然后加入培養(yǎng)基。這些研究表明在大多數(shù)情況下藥物的作用是不可逆的。
這些數(shù)據在圖8中顯示。
PC3前列腺癌細胞；三天的研究，細胞數(shù)目
STX 641及STX 140表示分別研究了STX 641和STX 140藥物誘導作用的可逆性。對這些研究而言，在第3天移去藥物，用PBS洗滌細胞，然后加入培養(yǎng)基。這些研究表明在大多數(shù)情況下藥物的作用是不可逆的。
這些數(shù)據在圖9中顯示。
A2780卵巢癌細胞中的克隆發(fā)生
這些數(shù)據在圖10中顯示。
抑制泰素誘導的微管聚合藥物抑制泰素誘導的微管蛋白聚合的能力通過350nm處濁度測定。最終濃度為1mg/ml的微管蛋白(Cryoskeleton Inc.，Denver，CO)于32℃、在G-PEM緩沖液[80mM哌嗪-N，N′-雙(2-乙磺酸)倍半鈉(sequisodium)鹽，1mM MgCl2，1mM EGTA及1mM GTP(pH6.8)]中，在泰素的存在下、在有或無雌酮衍生物[20μM]的情況下溫育。
圖3顯示STX641及相關化合物對泰素誘導的微管蛋白聚合的抑制。STX641被認為起抗微管藥物作用，即破壞微管功能。為了顯示該作用，微管蛋白在泰素(稱為促進微管蛋白聚合的化合物)的存在下溫育。泰素體外誘導有效的微管裝配，以350nm處測定的濁度增大來反映。除了STX641之外，STX 505、STX564或STX640對微管蛋白及泰素反應混合物可有效地阻斷微管蛋白裝配，且檢測的濁度很少增大。這些結果顯示STX641及相關化合物在體外可抑制微管蛋白聚合且此類化合物可能干擾微管在體內的動力學(并且因此中斷腫瘤生長)。
抑制葡萄糖攝取為了測定對葡萄糖攝入細胞的抑制，將細胞置于12孔多孔板中并生長至融合。將細胞用磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)洗滌并在每孔含1μCi 2-脫氧-D-[1-3H]葡萄糖(NEN-Dupont，UK)的溫育緩沖液中、在潛在的抑制劑(0.1-10μM)缺乏或存在下溫育15分鐘。通過用冷(4℃)PBS洗滌細胞來終止攝取。將細胞溶于在0.01M氫氧化鈉中的Triton-X中并進行液體閃爍計數(shù)(Singh等，Molecular and Cellular Endocrinology，16061-66，2000)。
圖4顯示葡萄糖攝取的抑制。葡萄糖(作為能量來源)攝取的增加是大多數(shù)癌細胞的典型特征。葡萄糖由許多葡萄糖轉運蛋白傳送入細胞并且在惡性乳腺組織中一種該轉運蛋白(GLUT 1)被過度表達。圖4顯示STX641(及相關化合物)抑制MCF-7(雌激素受體陽性，ER+)及MDA-MB-231(ER-)乳腺癌細胞的葡萄糖攝取。體內葡萄糖攝取的抑制應抑制腫瘤生長，且這可為STX641及相關化合物用于抑制患者腫瘤生長的重要機理。
對小管形成的作用用血管生成試劑盒(TCS-Cellworks Ltd(Bucks，UK)評價藥物對小管形成(以其抗血管生成潛力標記測定)的作用。為此，將人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)在人皮膚二倍體成纖維細胞基質中用24孔板培養(yǎng)。在整個試驗過程中，共培養(yǎng)的細胞在37℃、5％CO2濕潤培養(yǎng)箱中溫育。在第1天，移去培養(yǎng)基并用含研究中藥物的培養(yǎng)基代替。在第4、7及9天，用含研究中藥物的新鮮培養(yǎng)基代替培養(yǎng)基。在第11天，細胞用加入到各孔中的PBS及70％乙醇(1ml)洗滌30分鐘以固定細胞。固定后，細胞用阻斷緩沖液(1ml PBS+1％牛血清白蛋白，Sigma，UK)洗滌并用von Willebrand氏因子或CD31染色。小管形成的程度由手工計數(shù)或由計算機分析定量。用Kodak DC120數(shù)碼照相機捕獲圖像。另外，藥物誘導小管形成的改變細節(jié)也通過具有某些Photoshop處理圖像表示掃描的高清晰度板掃描來記錄。
如果生長出血管網絡，大多數(shù)實體瘤的大小僅能增長1-2mm，所以它們能獲得支持其生長的基本營養(yǎng)(稱為血管生成的過程)。阻斷該血管生成過程的藥物因此應能抑制廣泛的實體瘤的生長。
在該試驗中，STX641(及相關化合物)作為血管生成抑制劑作用的能力用HUVECs及皮膚成纖維細胞的共培養(yǎng)檢測。在該系統(tǒng)中，內皮細胞最初在成纖維細胞基質中形成小島。它們隨后增殖并進入遷移階段，在該階段中它們通過基質移動形成線狀小管結構。這些并生形成閉合小管的網絡。圖5和6為顯示STX641對小管形成作用的代表性圖。在圖5中，對未處理的(對照)HUVECs及皮膚成纖維細胞的共培養(yǎng)而言，廣泛的小管網絡的線狀性質是明顯可見的。相反，對用STX641(0.1μM)處理的共培養(yǎng)細胞而言，小管已完全被破壞，表明該藥物具有有效的抗血管生成特性。在圖6中，板通過高清晰度掃描記錄并也處理給出像素化(pixalated)圖像。此外，對未處理(對照)的共培養(yǎng)物而言，線狀小管明顯可見，但0.05μM的STX641(及STX140)完全消除了小管形成。
小管形成的抑制程度可通過計算機分析定量(圖7)。正如所示，0.05μM和0.1μM的STX641、STX564及STX639完全抑制小管形成，確定了這些化合物的抗血管生成潛力。
抑制微血管形成
在各情況中，校準為1.0像素且圖像面積為3211216。VEGF為血管內皮生長因子。
圖11中顯示這些數(shù)據。
細胞周期停滯和細胞凋亡MCF-7乳腺癌細胞對40％MCF-7與500nM化合物融合群體進行流式細胞計量細胞周期分析。
與對照(16％-27％)相比，在8小時STX 140、STX 640及STX 641顯著誘導G2/M停滯。
與對照(28％)、STX 140(28％)及STX 640(18％)相比，暴露于STX64124小時后，68％的細胞被停滯在G2/M。這種G2/M細胞群體的增加伴隨著G1-及S-階段群體的減少(分別為37％-15％，及30％-9％)。在STX 140處理的細胞中，觀察到亞-G1群體的顯著增加，這正常地指示細胞凋亡(36％，與對照細胞中的2％相比)。
48小時后，STX 641-處理的細胞仍被停滯在G2/M，且細胞凋亡的亞-G1群體無顯著增加。用STX 140處理的細胞繼續(xù)顯示亞-G1細胞群體的增加。
A2780卵巢癌細胞圖12顯示濃度為1μM的STX 641對A2780卵巢癌細胞的作用，表明24小時后STX 641誘導G2/M停滯(左手邊圖)。右手邊圖顯示對用膜聯(lián)蛋白V抗體染色細胞的FACs分析結果。對于對照而言，無如在M2區(qū)域缺少峰所指示的細胞表面表達。相反，STX 641處理的細胞顯示該細胞凋亡標記的染色顯著增加，如在M2區(qū)域的增加所示，表明該化合物誘導細胞凋亡。
異種移植裸小鼠模型MCF-7乳腺癌裸小鼠模型給成年雌性ICRF裸(nu/nu)小鼠注射10×106MCF-7細胞/0.1mlMatrigel s.c，并且每周監(jiān)測腫瘤生長。當腫瘤體積達到100-150mm3，將小鼠分成下列組A對照 溶媒0.1ml p.o一周5次，共3周BSTX 14020mg/kg p.o一周5次，共3周CSTX 64120mg/kg p.o一周5次，共3周在處死之前20分鐘，給小鼠靜脈注射0.1ml的25mg/ml FITC-右旋糖酐溶液以便腫瘤血管生成顯形和量化。
該研究的結果在下列圖中顯示。
圖13顯示STX 140和STX 641(20mg/kg p.o)對ICRF裸小鼠中MCF-7乳腺癌細胞瘤生長的作用。
STX 140導致59％腫瘤縮小，而STX 641在3周給藥期間產生25％的腫瘤縮小。
圖14表示熒光照片，顯示STX 140和STX 641(20mg/kg p.o)對腫瘤脈管系統(tǒng)治療的作用。
腫瘤FITC成像顯示控制以具有充分明確結構的脈管系統(tǒng)，但在STX 140和STX 641處理的動物中，腫瘤脈管系統(tǒng)被破壞并幾乎不明確。
圖15顯示STX-140和STX641(20mg/kg)對MCF-7乳腺腫瘤血管生成的作用。
腫瘤血管生成的FITC定量顯示STX 140和STX 641均產生顯著的抑制，對腫瘤血管生成的抑制分別為40％和60％。
圖16顯示STX 140及641(20mg/kg op)對裸小鼠中肝臟及腫瘤硫酸酯酶活性的作用。
肝臟硫酸酯酶活性幾乎完全被STX 140和STX 641抑制。
圖17顯示STX 140及641(20mg/kg op)治療3周對裸小鼠體重的影響。
在給藥期間，在任何一組動物中均未觀察到體重減輕。
碳酸酐酶
CA2和CA9的抑制活性是相關聯(lián)的(Vullo 2003，BioOrg.Med.Chem.)。
上述說明書中提及的所有出版物和專利通過引用結合到本文中。
本發(fā)明的各種修改和變化對本領域技術人員而言將是顯而易見的，并未背離本發(fā)明的宗旨和范圍。雖然本發(fā)明結合具體的優(yōu)選實施方案進行了描述，但應理解要求保護的本發(fā)明不應不適當?shù)叵薅ㄓ谶@些具體的實施方案。甚至，對所描述的實現(xiàn)本發(fā)明方式的各種修改對化學、生物學或相關領域技術人員而言是顯而易見的，并將落入權利要求書的范圍內。
權利要求
1.一種化合物，所述化合物包含甾族環(huán)系統(tǒng)和任選基團R1，R1選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種；其中所述甾族環(huán)系統(tǒng)的D環(huán)被式-L-R3的基團R2取代，其中L為任選連接基團且R3選自為或包含腈基、醇、酯、醚、胺和烯之一的基團，條件是當R3為或包含醇時，L存在；且其中所述甾族環(huán)系統(tǒng)A環(huán)的2或4位被基團R4取代，其中R4為烴基。
2.權利要求1的化合物，其中所述化合物能實現(xiàn)抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝?。活A防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和誘導細胞凋亡中的一種或多種。
3.權利要求1或2的化合物，所述化合物為式I化合物 式I其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
4.權利要求1或2的化合物，所述化合物為式II化合物 式II其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
5.權利要求1或2的化合物，所述化合物為式III化合物 式III其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
6.權利要求1或2的化合物，所述化合物為式IV化合物 式IV其中R1為選自-OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團。
7.前述權利要求中任一項的化合物，其中R4為氧基烴基。
8.權利要求7的化合物，其中R4為烷氧基。
9.權利要求8的化合物，其中R4為甲氧基。
10.權利要求1-6中任一項的化合物，其中R4為碳氫化合物基團。
11.權利要求10的化合物，其中R4為烷基。
12.權利要求11的化合物，其中R4為乙基。
13.前述權利要求中任一項的化合物，其中R4位于A環(huán)的2位。
14.前述權利要求中任一項的化合物，其中當A環(huán)被R1和R4取代時，R4相對于R1為鄰位取代。
15.前述權利要求中任一項的化合物，其中R1存在。
16.前述權利要求中任一項的化合物，其中R1為-OH或氨基磺酸酯基。
17.前述權利要求中任一項的化合物，其中R1為-OH。
18.權利要求1-16中任一項的化合物，其中R1為氨基磺酸酯基。
19.權利要求18的化合物，其中R1為下式氨基磺酸酯基 其中R5和R6獨立選自H、烷基、環(huán)烷基、烯基和芳基或其組合，或一起代表亞烷基，其中該或各烷基、環(huán)烷基、烯基或芳基任選含一個或多個雜原子或基團。
20.權利要求19的化合物，其中R5和R6中至少一個為H。
21.權利要求20的化合物，其中R5和R6中每一個為H。
22.前述權利要求中任一項的化合物，其中R3為或包含腈基。
23.前述權利要求中任一項的化合物，其中R3為式-(R7)n(CR14R15)pR8基團其中n為0或1，p為整數(shù)；R7選自＝CH-、-O-和NR13；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH和-CH＝CH2；R9選自H和烴基，R10選自H和烴基；R11和R12各自獨立選自H和烴基；R13選自H和烴基；R14和R15各自獨立選自H和烴基；q為整數(shù)；X為O或S；R16選自H和烴基；且R17選自H和烴基。
24.前述權利要求中任一項的化合物，其中R3為式-(CR14R15)pR8基團，p為整數(shù)；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH和-CH＝CH2；R9選自H和烴基，R10選自H和烴基；R11和R12各自獨立選自H和烴基；R14和R15各自獨立選自H和烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H和烴基且R17選自H和烴基。
25.前述權利要求中任一項的化合物，其中R3為式-(CH2)pR8基團，p為整數(shù)；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C＝N、-NR11R12-C≡CH和-CH＝CH2；R9選自H和烴基，R10選自H和烴基；R11和R12各自獨立選自H和烴基；q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H和烴基且R17選自H和烴基。
26.權利要求1-23中任一項的化合物，其中R3為式-(R7)nR8基團，其中n為0或1，R7選自＝CH-、-O-和NR13；R8選自-SO2-R9、-C(O)OR17、-OR10、(CH2)q-X-R16、-C≡N、-NR11R12-C≡CH和-CH＝CH2；R9選自H和烴基，R10選自H和烴基；R11和R12各自獨立選自H和烴基；R13選自H和烴基，q為整數(shù)，X為O或S，R16選自H和烴基且R17選自H和烴基。
27.權利要求23-26中任一項的化合物，其中p為0-5。
28.權利要求23-27中任一項的化合物，其中p為0、1或2。
29.權利要求23-28中任一項的化合物，其中R8為-SO2-R9。
30.權利要求23-29中任一項的化合物，其中R8為-SO2-R9，其中R9為烴基。
31.權利要求23-30中任一項的化合物，其中R9選自H和C1-10烷基。
32.權利要求23-31中任一項的化合物，其中R9為-CH2CH3。
33.權利要求23-32中任一項的化合物，其中R10選自H和C1-10烷基。
34.權利要求23-33中任一項的化合物，其中R10為-H或-CH3。
35.權利要求23-34中任一項的化合物，其中R11和R12獨立選自H和C1-10烷基。
36.權利要求23-35中任一項的化合物，其中R11和R12獨立選自-H和-CH3。
37.權利要求23-36中任一項的化合物，其中R13選自H和C1-10烷基。
38.權利要求23-37中任一項的化合物，其中R13為-H。
39.權利要求23-38中任一項的化合物，其中R14和R15各自獨立選自H和烴基。
40.前述權利要求中任一項的化合物，其中R3為選自＝CHC(O)OEt、-CH2C(O)OEt、＝CHCH2OH、-CH2CH2OH、-CH2C≡N、＝CHC≡N、-NHCH2CH2N(Me)2、-OCH2CH2-OMe的基團。
41.前述權利要求中任一項的化合物，其中L為烴基。
42.前述權利要求中任一項的化合物，其中L為碳氫化合物基團。
43.前述權利要求中任一項的化合物，其中L為亞烷基。
44.前述權利要求中任一項的化合物，其中L為C1-10亞烷基，優(yōu)選C1-5亞烷基，優(yōu)選C1或C2亞烷基。
45.權利要求1-40中任一項的化合物，其中R2為式-R3。
46.前述權利要求中任一項的化合物，其中基團R2為α構象。
47.前述權利要求中任一項的化合物，其中在D環(huán)17位上的基團R2為α構象。
48.前述權利要求中任一項的化合物，其中R1為氨基磺酸酯基，且所述化合物適用于作為雌酮硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)抑制劑使用。
49.權利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，則所述硫酸酯化合物可被類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)水解。
50.權利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，并于pH7.4和37℃與類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起溫育，它將提供小于50mM的Km值。
51.權利要求48的化合物，其中如果所述氨基磺酸酯化合物上的氨基磺酸酯基被硫酸酯基代替以形成硫酸酯化合物，并于pH7.4和37℃與類固醇硫酸酯酶(E.C.3.1.6.2)一起溫育，它將提供小于50μM的Km值。
52.一種組合物，所述組合物包含i)前述權利要求中任一項所定義的化合物；和ii)生物反應調節(jié)劑。
53.權利要求52的組合物，其中所述生物反應調節(jié)劑為細胞因子。
54.權利要求53的組合物，其中所述細胞因子為腫瘤壞死因子(TNF)。
55.權利要求54的組合物，其中所述TNF為TNFα。
56.一種藥用組合物，所述組合物包含(a)(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-55中任一項所定義的組合物，和(b)藥學上可接受的載體、稀釋劑、賦形劑或助劑。
57.用于藥物的(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物。
58.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備預防和/或抑制腫瘤生長藥物中的用途。
59.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備用于治療與一種或多種以下情況相關的病癥或疾病的藥物中的用途類固醇硫酸酯酶(STS)活性；細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝??；腫瘤血管生成；微管形成；和細胞凋亡。
60.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備用于治療病癥或疾病的藥物中的用途，所述病癥或疾病與反向的以下情況中一種或多種相關類固醇硫酸酯酶(STS)活性；細胞周期；細胞凋亡；細胞生長；腫瘤對葡萄糖的攝取；腫瘤血管生成；微管形成；和細胞凋亡。
61.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備用于一種或多種以下情況的藥物中的用途抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝取；預防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和誘導細胞凋亡。
62.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備用于抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性的藥物中的用途。
63.(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物在制備用于調節(jié)細胞生長的藥物中的用途。
64.一種治療方法，所述方法包括給予有治療需要的患者(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物。
65.一種治療方法，所述方法包括給予有治療需要的患者(i)權利要求1-51中任一項所定義的化合物，或(ii)權利要求52-56中任一項所定義的組合物，以便抑制類固醇硫酸酯酶(STS)活性；調節(jié)細胞周期；調節(jié)細胞凋亡；調節(jié)細胞生長；預防和/或抑制腫瘤對葡萄糖的攝?。活A防和/或抑制腫瘤血管生成；破壞微管；和/或誘導細胞凋亡。
66.一種化合物，所述化合物如說明書中結合實施例所充分描述。
67.一種組合物，所述組合物如說明書中結合實施例所充分描述。
68.說明書中結合實施例所充分描述的用途。
69.一種方法，所述方法如說明書中結合實施例所充分描述。
全文摘要
本發(fā)明提供一種包含甾族環(huán)系統(tǒng)和選自－OH、氨基磺酸酯基、膦酸酯基、硫代膦酸酯基、磺酸酯基或磺酰胺基中任何一種的任選基團R
文檔編號A61K31/56GK1791610SQ200480013919
公開日2006年6月21日 申請日期2004年2月20日 優(yōu)先權日2003年3月24日
發(fā)明者M·利斯, A·普羅希特, M·J·里德, S·P·紐曼, S·K·錢德, F·茹爾當, B·V·L·波特 申請人:斯特里克斯有限公司