專利名稱：應用促性腺激素釋放激素的組合物和方法
背景技術：
促性腺激素釋放激素(GnRH)的激動劑和拮抗劑被用來治療包括月經(jīng)前期綜合征的良性婦科病癥和雄性激素依賴性前列腺癌。GnRH也被稱為促黃體激素釋放激素。GnRH由垂體門脈系統(tǒng)中的下丘腦以脈沖方式分泌。因為激素只有分鐘級的半衰期，因此垂體腺就暴露在脈沖波動的激素之中。這種暴露導致了促性腺激素，也就是促黃體生成素(LH)和促卵泡生成素(FSH)的分泌。在男性體內LH作用于睪丸間質細胞，刺激睪丸酮的分泌。FSH負責精子的產(chǎn)生。睪丸酮似乎對GnRH的分泌具有反饋抑制作用，可降低垂體對激素的敏感性。在女性體內，F(xiàn)SH作用于卵巢，刺激雌激素的分泌。LH在女性體內的主要作用是支持卵泡發(fā)育成熟，在卵泡周期的中期觸發(fā)排卵。和睪丸酮一樣，雌激素似乎能夠反饋抑制GnRH的分泌和作用。
已經(jīng)發(fā)現(xiàn)施用有效的GnRH激動劑會導致初期LH的突然上升和FSH釋放，接下來垂體的GnRH受體全面下調。結果，不再釋放LH和FSH，性激素在女性和男性體內分別降低到卵巢已切除水平和睪丸已切除或已閹割水平。GnRH激動劑的高劑量長效制劑的發(fā)展使得可以持續(xù)性抑制性類固醇激素的產(chǎn)生，方便藥物的使用。
典型地，前列腺癌在最初期是雄性激素依賴性的，而在后期轉變成雄性激素非依賴性的。已經(jīng)以單獨治療或與其他治療模式如手術、外部射線放射治療、近距離放療等一起使用的方式實施了多種消除雄性激素的治療方法?？诜邉┝堪牒铣纱萍に鼗衔锒一合┐品邮亲钤缙谥委熐傲邢侔┑姆鞘中g選擇之一。這種治療在消退前列腺癌方面和睪丸切除術同樣有效。然而不幸的是口服施用的高劑量雌激素化合物會導致包括水腫和深部靜脈血栓形成的心血管并發(fā)癥。當可以利用基本上不具有心血管毒性的GnRH激動劑和拮抗劑時，二乙基己烯雌酚治療就被放棄了。
GnRH激動劑在臨床誘導前列腺癌消退方面和治療的金標準——睪丸切除術同樣有效，但施用它們伴隨有其他重要的毒性，包括有疲勞、體重增加、抑郁、骨丟失、貧血、肌肉萎縮、男子乳腺發(fā)育，熱潮紅，認知功能的喪失和高密度脂蛋白的減少。Hellerstedt和Pienta.CA Cancer J Clin 2002；52154-179。也許影響生存質量最嚴重的并發(fā)癥是骨礦物質密度損耗和熱潮紅。
因為睪丸酮是男性體內循環(huán)的主要性激素，因此在很長時間里一直推測認為導致外科手術閹割男性或GnRH激動劑或拮抗劑治療的前列腺癌病人的骨更新和骨礦物質密度損耗增加是由于這種激素的缺乏引起的。然而最近的觀查研究令人驚訝地表明男性體內骨礦物質密度與雌激素水平的相關性比與雄性激素水平的相關性高。Khosla等.J Clin Endocrinol Metab 2002；871443-1450.一項介入研究表明雌激素補充給藥療法可以防止用GnRH激動劑治療的老年男性體內出現(xiàn)的GnRH誘導的骨形成標記下降和骨吸收標記增加。Khosla等.J ClinEndocrinol Metab 2001；863555-3561。最后，另一項研究表明對芳香酶活性的特異性抑制也會導致骨吸收標記顯著增加和骨形成標記下降。Taxel等.JClin Endocrinol Metab 2002；874907-4913。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及包含有在至少大約一個月，優(yōu)選至少兩個月，更優(yōu)選至少三個月的時間里能夠以足以誘導和維持男性病人化學性閹割的速率釋放GnRH組分的促性腺激素釋放激素(這里簡稱為GnRH)組分的第一緩釋制劑和能夠維持所述期間血清水平，以足以減少通常由應用GnRH組分化學性閹割男性病人所引起的骨礦物質密度損耗增加和熱潮紅的雌激素組分的第二緩釋制劑的組合物。
優(yōu)選地，本發(fā)明組合物的第一緩釋制劑以約10-1,000μg/天的速率釋放GnRH組分。本發(fā)明的第二緩釋制劑以包含至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素。在第一起始階段的過程中，本發(fā)明的第二緩釋制劑表現(xiàn)為起始爆發(fā)釋放減弱。在第二階段的過程中，第二緩釋制劑以10-100μg雌二醇等價物/天的速率，優(yōu)選以不超過大約50μg雌二醇等價物/天的速率釋放雌激素組分。優(yōu)選地，在第一起始階段釋放的雌激素組分不超過上述第二階段中每天釋放的雌激素組分上限的5倍，更優(yōu)選地不超過3倍。
在本發(fā)明的不同實施方案中，組合物不局限于供參考的用于男性病人化學性閹割的組合物。其定義為包含在至少大約一個月的時期內能夠以大約10-1000μg/天的平均速率釋放GnRH組分的GnRH組分的第一緩釋制劑和能夠以包含上述至少第一起始階段和第二階段的曲線下在所述時間內釋放雌激素組分的雌激素組分的第二緩釋制劑。
在本發(fā)明的組合物中，第一緩釋制劑的GnRH組分選自GnRH，GnRH激動劑，GnRH拮抗劑和它們的混合物。優(yōu)選地，GnRH組分是從亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯瑞林，戈那瑞林和它們的鹽，以及它們的混合物中選出的GnRH激動劑。
出現(xiàn)在第二緩釋制劑中的雌激素組分選自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚單芐基醚，去氫馬烯雌酮，去氫馬烯雌酮硫酸鹽，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一鈉，雌酮硫酸鉀，乙炔雌二醇，磷雌酚四鈉，己雌酚，羥雌酮二醋酸鹽，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脫瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它們的混合物。
在優(yōu)選的組合物中，第一緩釋制劑的GnRH組分是曲普瑞林或其鹽，第二緩釋制劑中的雌激素組分是雌二醇。在最優(yōu)選的組合物中，第一緩釋制劑的GnRH組分是以大約100μg/天速率釋放的曲普瑞林或其鹽，第二緩釋制劑中的雌激素組分是在所述第二階段中以大約25-50μg/天速率釋放的雌二醇。
本發(fā)明進一步涉及一種治療前列腺癌的方法，包括向前列腺癌病人施用包含有在至少大約一個月，優(yōu)選至少兩個月，更優(yōu)選至少三個月的時間內能夠以足以誘導和維持病人化學性閹割的速率釋放GnRH組分的GnRH組分的第一緩釋制劑和能夠維持所述期間血清水平足以減少通常由應用GnRH組分化學性閹割男性病人所引起的骨礦物質密度損耗增加和熱潮紅的雌激素組分的第二緩釋制劑的組合物。
給前列腺癌病人施用的組合物中的第一緩釋制劑優(yōu)選地以大約10-1,000μg/天的速率釋放GnRH組分，第二緩釋制劑以大約10-100μg/天的速率釋放雌激素組分。最優(yōu)選地，按照本發(fā)明的方法給前列腺癌病人施用的第二緩釋制劑以包含上述至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素，其中第一起始階段的爆發(fā)釋放減弱。
按照本發(fā)明的方法施用的組合物中第一緩釋制劑的GnRH組分選自GnRH，GnRH激動劑，GnRH拮抗劑和它們的混合物。優(yōu)選地，GnRH組分是從亮丙瑞林、戈舍瑞林、曲普瑞林、布舍瑞林、那法瑞林、地落瑞林、海斯瑞林、戈那瑞林和它們的鹽，以及它們的混合物中選出的GnRH激動劑。
出現(xiàn)在第二緩釋制劑中的雌激素組分選自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚單芐基醚，去氫馬烯雌酮，去氫馬烯雌酮硫酸鹽，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一鈉，雌酮硫酸鉀，乙炔雌二醇，磷雌酚四鈉，己雌酚，羥雌酮二醋酸鹽，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脫瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它們的混合物。
參照本發(fā)明的方法施用的優(yōu)選組合物中，第一緩釋制劑的GnRH組分是曲普瑞林或其鹽，第二緩釋制劑中的雌激素組分是雌二醇。在本發(fā)明方法所施用的最優(yōu)選的組合物中，第一緩釋制劑的GnRH組分是以大約100μg/天速率釋放的曲普瑞林或其鹽，第二緩釋制劑中的雌激素組分是以大約25-50μg/天速率釋放的雌二醇。本發(fā)明的組合物可以采用皮下，肌肉內或經(jīng)皮途徑給藥。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及一種新的組合物和利用這些組合物治療激素反應性前列腺癌的用途，這種治療不誘發(fā)以前文獻中出現(xiàn)的激素消除治療特有的嚴重副作用。本發(fā)明的組合物包含同時給病人施用的兩種緩釋制劑，第一種含有促性腺激素釋放激素(GnRH)組分，第二種含有雌激素組分?？梢栽谑┯脮r或在制備時將兩種制劑結合。典型地，本發(fā)明的緩釋制劑在至少大約一個月的時期內有效。有效時間可長達一年。認為具有更長持續(xù)時間的制劑也在本發(fā)明的范圍內。優(yōu)選設計本發(fā)明組合物的治療時間為一到三個月，一到三個月后再次施用該組合物。
第一緩釋制劑包含一種GnRH組分。已經(jīng)描述過多種抑制促性腺激素分泌，從而抑制男性雄性激素類和女性雌激素類的分泌的化合物。在男性體內雌激素來源于芳香酶反應的睪丸酮。GnRH組分既包含GnRH激動劑和拮抗劑，也包含GnRH本身。本發(fā)明的GnRH組分也可以由后面描述的化合物的混合物組成。GnRH拮抗劑通過與GnRH競爭垂體的GnRH受體而起作用。通常情況下，GnRH以脈沖方式被分泌。因為激素較高的更新變化，GnRH受體就暴露在發(fā)信號而釋放的LH和FSH的波動性GnRH中。當高濃度的GnRH激動劑存在時，出現(xiàn)初期LH突然增高和FSH的釋放后，GnRH受體下調和LH、FSH的釋放降低導致信號通路被關閉。在幾個星期的時間內，LH和FSH的釋放完全被抑制。雌激素和睪丸酮濃度在女性和男性體內分別達到卵巢切除水平和睪丸切除或閹割水平。當雌激素和睪丸酮水平如此最低值時，對GnRH的反饋抑制不再出現(xiàn)。結果GnRH釋放量達到最大。這種釋放模式有助于維持GnRH受體的下調。已知的GnRH激動劑包括亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林和它們的鹽。一種已知的GnRH拮抗劑是阿巴瑞克。
已經(jīng)研究出多種GnRH激動劑的緩釋制劑，通過商業(yè)購買可獲得這些制劑?？缮虡I(yè)購買的GnRH激動劑的緩釋制劑的實例包括Lake Forrest IL的TAP制藥股份有限公司生產(chǎn)的長效黃體酮(Lupron Depot)3.75mg和長效黃體酮(LupronDepot)7.5mg。長效黃體酮(Lupron Depot)3.75mg包含3.75mg醋酸亮丙瑞林，0.65mg明膠，33.1mg DL-乳酸和羥乙酸共聚物，和6.6mgD-甘露醇。附隨的稀釋劑包含7.5mg羥甲基纖維素鈉，75mg甘露醇，1.5mg聚山梨酯80，水，USP，和冰乙酸。緩釋三個月的長效黃體酮Lupron Depot-3月22.5mg是一種給藥間隔為三個月的肌肉注射制劑，含有22.5mg分散在聚丙交酯微球中的醋酸亮丙瑞林。美國專利No.4,728,721；4,849,228；5,330,767；5,476,663；5,480,656；5,575,987；5,631,020；5,643,607；5,716,640；5,814,342；5,823,997；5,980,488；6,036,976。醋酸亮丙瑞林的其他緩釋制劑包括Atrix實驗室研制的可緩釋一個月的制劑Eligard和ALZA公司研制的緩釋十二個月的制劑Viadur。3.6mg和10.8mg的Zoladex分別是可緩釋一個月和三個月的由AstraZeneca銷售的醋酸戈舍瑞林的長效制劑。Zoladex 3.6mg制劑中包含相當于13.3-14.3mg D，L-乳酸和羥乙酸共聚物中3.6mg戈舍瑞林的醋酸戈舍瑞林。Ferring公司和Ipsen-Beaufour分配的達必佳(Decapeptyl)是乙酸曲普瑞林或巴莫酸曲普瑞林的長效制劑。達必佳一月制劑包含3.75mg包裹在聚丙交酯-共-乙交酯微囊中的曲普瑞林。巴莫酸曲普瑞林的類似緩釋制劑最近在德國被衛(wèi)生當局批準，名稱為Pamorelin。Pamorelin以持續(xù)一個月或三個月的緩釋制劑形式存在(Pamorelin Depot 3.75mg，Pamorelin LA 11.25mg)。Pamorelin Depot 3.75mg是無菌凍干的生物降解微粒制劑，以含有巴莫酸曲普瑞林(3.75mg曲普瑞林肽)，170mg聚-d，1-聚丙交酯-共-乙交酯，85mg甘露醇，30mg羧甲基纖維素鈉和2mg聚山梨酯80的單劑量藥瓶形式提供。注射時將制劑混懸在2ml水中，肌肉內注射。Pamorelin LA 11.25mg是含有巴莫酸曲普瑞林(11.25mg曲普瑞林肽)，145mg聚-d，1-聚丙交酯-共-乙交酯，85mg甘露醇，30mg羧甲基纖維素鈉和2mg聚山梨酯80的類似制劑。制劑被混懸在2ml水中，肌肉內注射。美國專利No.5,134,122，5,192,741和5,225,205描述了類似的制劑。這些專利在這里全部引入作為參考。
在本發(fā)明的組合物中也可以使用GnRH，GnRH激動劑，GnRH拮抗劑或它們的混合物的相似的緩釋制劑。這些緩釋制劑以除上述商業(yè)制劑中存在的聚丙交酯-乙交酯共聚物以外的可生物降解的和/或生物相容性聚合物為基礎，這些聚合物包括乙烯醋酸乙烯酯，聚酐類，聚乙醇酸，膠原，聚原酯類和聚乳酸。這些聚合物和其他聚合物，以及用這些聚合物制備合適劑型的方法都是本領域熟練技術人員公知的。
本發(fā)明的第一緩釋制劑優(yōu)選是巴莫酸曲普瑞林的長效制劑，例如Pamorelin制劑，也可以使用GnRH激動劑或GnRH拮抗劑或GnRH本身的其他緩釋制劑。任何以足以引起GnRH受體下調和降低女性體內性激素濃度達到卵巢切除水平和男性體內性激素濃度達到睪丸切除或閹割水平的速率持續(xù)釋放GnRH激動劑或GnRH拮抗劑或GnRH的長效制劑都適于本發(fā)明。但精確的釋放速率隨所使用的GnRH激動劑(包括GnRH)或GnRH拮抗劑的特性，制劑的特性和給藥模式而發(fā)生變化，合適的第一緩釋制劑將以大約10-1,000μg/天的速率釋放GnRH激動劑或拮抗劑。
GnRH激動劑或拮抗劑從第一緩釋制劑中的釋放將產(chǎn)生用GnRH激動劑或拮抗劑治療時出現(xiàn)的公知的副作用。為了對抗這些副作用，特別是在前列腺癌病人中出現(xiàn)的骨礦物質密度損耗和熱潮紅，本發(fā)明的組合物還含有一種釋放雌激素組分的第二緩釋制劑。觀察到的研究表明如果血清可生物利用的雌二醇水平為大約11pg/ml或高于11pg/ml，男性體內的骨礦物質密度損耗就不會發(fā)生。Khosia等.J Clin Endocrinol Metab 2002；871443-1450?？紤]到老年男性體內性激素結合蛋白水平增高，相應地確定最小總血清雌二醇水平為大約30pg/ml。
由第二緩釋制劑遞送的雌激素組分既包含天然化合物，也包含合成化合物。優(yōu)選的雌激素組分是雌二醇(化學名稱β-雌-1，3，5(10)三烯-3，17-二醇；CAS RN50-28-2)?？捎糜诒景l(fā)明的其他雌激素組分的實例包括氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚單芐基醚，去氫馬烯雌酮，去氫馬烯雌酮硫酸鹽，雌四醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一鈉，雌酮硫酸鉀，乙炔雌二醇，磷雌酚四鈉，己雌酚，羥雌酮二醋酸鹽，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺和它們的混合物。由于這些雌激素組分的效能和藥代動力學特性存在很大的不同，這些雌激素組分的用量和要達到的濃度也明顯不同。為了本發(fā)明的目的，用雌激素組分的雌二醇等價量和濃度來定義它們的濃度和量。等價意味著取得的期望生物效應相似，例如使正在進行激素消除治療的前列腺癌病人的骨礦物質密度損耗降低和/或使熱潮紅的頻率和嚴重性下降的效果相似。
附加的雌激素組分包括選擇性雌激素受體調節(jié)劑(SERM)，例如他莫昔芬，托瑞米芬，雷洛昔芬，替勃龍和拉索昔芬。Riggs & Hartman.2003.N Engl JMed 348，618-629.Ke等.2001.J Bone Miner Res 16，765-773.由于這些組分具有選擇性，因此在本發(fā)明的第二緩釋制劑中使用它們只能夠產(chǎn)生應用雌激素時所產(chǎn)生的部分，而不是全部有益效果。例如，可以期望雷洛昔芬，托瑞米芬，他莫昔芬減慢骨吸收，但它們不能減少(有可能增強)熱潮紅發(fā)生的頻率和嚴重性。雌激素組分也包括專利申請PCT/US02/18544中描述的被稱為ANGELS的化合物(非健豪寧(non-genotropic)類雌激素樣信號通路活化劑)。ANGELS化合物是能夠模擬雌激素和雄激素的非健豪寧效應而實質上不產(chǎn)生健豪寧效應的小分子。優(yōu)選的ANGELS化合物是(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇(CAS RN35950-87-9)，在小鼠模型中顯示其可以逆轉骨損耗。Kousteni et al2002.Science 298，843-846.
已經(jīng)公知雌激素會增加心血管事件，特別是水腫和深部靜脈血栓形成發(fā)生的概率。這種認識是口服己烯雌酚(diethylstilbesterone)實施GnRH激動劑治療被放棄的一個主要原因。對絕經(jīng)婦女的雌激素替補療法進行了類似的觀察。盡管把雌激素的給藥途徑從口服改為胃腸外給藥可以使雌激素對前列腺癌病人的毒性減輕到一定程度，仍然存在與高劑量雌激素給藥相關的顯著的剩余風險。
為了有效對抗GnRH給藥的不利副作用而不增加與高水平雌激素相關的風險，第二緩釋制劑以計算后的較低速率釋放雌激素組分，此速率只足以提供相當于約30pg/ml雌二醇的血清雌激素水平。由于個體之間的生物學差異，第二緩釋制劑給藥所達到的實際血清雌二醇或雌二醇等價物水平可以在大約10pg/ml和50pg/ml之間變化。
然而，緩釋制劑的缺點之一是它們幾乎不可避免地表現(xiàn)出以雙峰動力學形式釋放藥物，即藥物釋放包含起始爆發(fā)釋放和緊接著的釋放速率非常低的延長緩釋相。這種釋放曲線足以勸阻大家為了本發(fā)明的目的而考慮使用這種制劑。
令人驚訝地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明組合物中的一些第二緩釋制劑顯示出一種接近單峰的釋放曲線。對于一種給定的雌激素組分，通過在包埋這種組分的生物降解性聚合材料和制備制劑的條件之間選擇合適的折衷方案可以實現(xiàn)這一目的。已經(jīng)證明可以提供合適劑型的聚合材料之一是聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)，優(yōu)選兩種共聚物之間的比例在85∶15和40∶60之間的材料，例如比例為50∶50或65∶35的材料。優(yōu)選的合適劑型是微球形式，制備微球的方法之一是專業(yè)人員熟知的乳化/溶劑提取法。任選地將從不同批次中獲得的至少兩種緩釋制劑混合有助于使釋放曲線變平滑。
因此，由于藥物從第二緩釋制劑中的釋放不存在重要的起始爆發(fā)釋改，雌激素的濃度永遠不會大大超出目標水平。計算出的雌激素組分的理想釋放速率相當于約25μg雌二醇/天(清除率x期望的血清水平或增高的血清水平)。在施用第二緩釋制劑給藥后的前幾天雌激素組分的最大釋放速率相當于75μg雌二醇/天。對第二緩釋制劑釋放特征的嚴格限定使與高水平雌激素相關的風險保持在最低水平。
可以在給藥時或在制備時將本發(fā)明組合物中的兩種緩釋制劑，即含有促性腺激素釋放激素(GnRH)的第一種緩釋制劑和含有雌激素組分的第二種緩釋制劑結合?？梢砸怨腆w形式，例如以冷凍干燥制劑的形式保存分開的或結合的制劑。
本發(fā)明的組合物在已經(jīng)重組成可注射制劑后，單次肌肉內，例如臀部注射給藥。
典型地，本發(fā)明的緩釋制劑在至少大約一個月的時間里，優(yōu)選至少兩個月，更優(yōu)選至少三個月的時間里有效。優(yōu)選設計本發(fā)明組合物的治療時間是一到三個月，一到三個月后該組合物再次給藥。
在下面的實施例和附圖中詳細描述了本發(fā)明的組合物和其特性，其中-

圖1表示從實施例1中獲得的制劑(方塊)和從實施例2中獲得的制劑(圓)的雌二醇動力學曲線；-圖2表示從實施例3中獲得的組合制劑的雌二醇動力學曲線(菱形)和曲普瑞林動力學曲線(方塊)；和-圖3表示作對照的長效曲普瑞林制劑(方塊)和從實施例3獲得的組合制劑的曲普瑞林動力學曲線(菱形)。
實施例1在至少一個月的時間內釋放曲普瑞林和雌二醇的組合物的制備1.曲普瑞林制劑按照美國專利No.5,134,122實施例1描述的方法獲得這種制劑。
2.包埋在PLGA微球中的雌二醇制劑磁性攪拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制備水相(溶液A)。接著在磁性攪拌下將4.9g的50∶50聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.42dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制備有機相(溶液B)。將100mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亞砜)中(溶液C)。
將溶液B和溶液C混合在一起，以5ml/分鐘的速率將獲得的溶液抽吸到勻漿器中。以750ml/分鐘的速率將溶液A并行抽吸到勻漿器中。轉子的轉速是5000rpm，這一過程持續(xù)約10分鐘。
所獲得的混懸液經(jīng)1.2μm過濾，通過過濾，水洗，接著凍干回收顆粒。核芯負載量是1.50％，平均粒徑D(v，0.5)是18.9μm。
實施例4中報道了單次肌肉內注射所獲得的制劑后大鼠內雌二醇血清釋放。
實施例2在至少一個月的時間內釋放曲普瑞林和雌二醇的組合物的制備1.曲普端林制劑按照美國專利No.5,134,122實施例1中描述的方法獲得這種制劑。
2.包埋在PLGA微球中的雌二醇制劑磁性攪拌下于40℃混合80g PVA(聚乙烯醇)和3920g MilliQ水制備水相(溶液A)。接著在磁性攪拌下將4.5g的65∶35聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.62dl/g)溶解在25g醋酸乙酯中制備有機相(溶液B)。將92mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亞砜)中(溶液C)。
將溶液B和溶液C混合在一起，以5ml/分鐘的速率將獲得的溶液抽吸到勻漿器中。以630ml/分鐘的速率將溶液A并行抽吸到入勻漿器中。轉子的轉速是5000rpm，這一過程持續(xù)約6分鐘。
所獲得的混懸液經(jīng)1.2μm過濾，通過過濾，水洗，接著凍干回收顆粒。核芯負載量是1.60％，平均粒徑D(v，0.5)是32.2μm。
實施例4中報道了單次肌肉內注射所獲得的制劑后大鼠內雌二醇血清釋放。
實施例3在至少三個月的時間里釋放曲普瑞林和雌二醇的組合物的制備1.曲普瑞林制劑按照下面的方法制備巴莫酸曲普瑞林微粒制劑。
室溫下將大約12wt％的巴莫酸曲普瑞林與大約88wt％的75∶25的PLGA在球磨機中混合。將獲得的混合物進行適當?shù)木|化處理后在溫度達到大約110℃進行擠壓之前進行逐步壓縮，同時逐步加熱。擠出物被切割成小丸后在大約-100℃的溫度下研磨。180μm以下篩分研磨后所獲得的微粒。
2.雌二醇制劑如下制備雌二醇和特性粘度為0.42dl/g的PLGA 50/50的微球制劑(制劑1)。
磁性攪拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制備水相(溶液A)，接著在磁性攪拌下將4.9g的50∶50聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.42dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制備有機相(溶液B)。將100mg雌二醇溶解在800μl DMSO(二甲亞砜)中(溶液C)。
混合溶液B和溶液C，以5ml/分鐘的速率將該溶液抽吸到勻漿器中。以750ml/分鐘的速率將溶液A并行抽吸到勻漿器中。轉子的轉速是5000rpm，這一過程持續(xù)約10分鐘。
所獲得的混懸液經(jīng)1.2μm過濾，通過過濾，用水洗，接著凍干回收顆粒。核芯負載量是1.50％，平均粒徑D(v，0.5)是18.9μm。
按照下面的方法制備雌二醇和特性粘度為0.6dl/g的PLGA 85/15的微球制劑(制劑2)。
磁性攪拌下于40℃混合160g PVA(聚乙烯醇)和7840g MilliQ水制備水相(溶液A)，接著在磁性攪拌下將4.65g的85∶15聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)聚合物(特性粘度(iv)＝0.6dl/g)溶解在50g醋酸乙酯中制備有機相(溶液B)。將350mg雌二醇溶解在2500μl DMSO(二甲亞砜)中(溶液C)。
混合溶液B和溶液C，以5ml/分鐘的速率將該溶液抽吸到勻漿器中。以750ml/分鐘的速率將溶液A并行抽吸到勻漿器中。轉子的轉速是5500rpm，這一過程持續(xù)約10分鐘。
所獲得的混懸液經(jīng)1.2μm過濾，通過過濾，用水洗，接著凍干回收顆粒。核芯負載量是6.04％，平均粒徑D(v，0.5)是18.4μm。
3.曲普瑞林和雌二醇組合制劑使雌二醇微球制劑1和2的比例分別為75∶25，雌二醇劑量為3mg，曲普瑞林劑量為12mg，在玻璃藥瓶中混合這些制劑。最后凍干這些混合物(在加入包含甘露醇，羧甲基纖維素鈉和Tween 80的凍干介質后)。
實施例4中報道了單一肌肉內注射所獲得的制劑后大鼠內血清雌二醇和曲普瑞林血清釋放。
實施例4藥代動力學研究這個實驗研究的目的是追蹤研究單次肌肉內注射雌二醇/曲普瑞林制劑后大鼠內雌二醇和/或曲普瑞林的血清釋放。
1.動物和制劑的給藥輕度乙醚麻醉睪丸切除雄性Sprague Dawley大白鼠大腿后部肌肉內注射(i.m.)雌二醇和或曲普瑞林制劑。每組研究六只動物。在注射制劑的前一天(第0天)收集參考血樣。每次注射(雌二醇劑量為0.75到2.25mg/kg之間和/或曲普瑞林劑量為9mg/kg)都在第1天的T0時間進行。這被認為是采集血樣的參考時間。
2.采集血樣在第一天收集兩份血樣，注射后1小時(T0+1h00)收集第一份，注射后6小時(T0+6h00)收集第二份。在隨后的時間里，也就是從第2天到第42天的時間里，在同一時間，即所選擇的T0時間收集血樣。收集所有組的血樣直到第42天。對于用三個月制劑治療的動物還應每周另外采集血樣直到第91天。在每一個時間點，用血細胞容量計毛細管從后眶竇(retro-orbital sinus)(右眼或左眼)中收集大約1.5ml血液。
3.檢測分析用放射免疫分析法(RIA)測定處理動物血清中的血清雌二醇和/或曲普瑞林。
4.結果4.1實施例1和實施例2中得到的雌二醇制劑圖1報告了大鼠血清中實施例1的制劑(方塊)和實施例2的制劑(圓)中雌二醇釋放的動力學曲線。
該曲線顯示分別與實施例1和實施例2的制劑相對應的爆發(fā)性釋放水平分別為450pmol/I和470pmol/I，而兩種制劑的坪值都大約為100pmoles/l左右。所獲得的比例為4.5-4.7。在爆發(fā)性釋放后血清雌二醇水平開始下降直到第7天到第32天達到坪值。接著雌二醇的釋放從第32天開始下降。
預計在人的實驗中將獲得類似的動力學曲線。
4.2實施例3中獲得的雌二醇和曲普瑞林的組合制劑圖2報告了在單次肌肉內注射制劑后84天的時間里大鼠血清中實施例3的組合制劑釋放雌二醇的動力學曲線(菱形)和曲普瑞林釋放的動力學曲線(方塊)在注射制劑后立即觀察到血清雌二醇爆發(fā)性釋放達到588pmol/l。接著雌二醇水平迅速下降在第7天到第28天維持坪值(90和130pmo/l之間)。從第35天開始可觀察到雌二醇水平有小幅增長(從190pmol/l增長到第56天的234pmol/l)，接下來第84天雌二醇水平開始下降。在第91天仍可觀察到45pmol/l的水平。這些結果表明該制劑隨著相對起始爆發(fā)性釋放，能夠在血清中誘導雌二醇均勻釋放。
圖3報告了在肌肉內注射對照曲普瑞林制劑(只有曲普瑞林)(方塊)和實施例3的雌二醇和曲普瑞林組合制劑(菱形)后大鼠血清內比較的血清曲普瑞林釋放曲線。
與三個月的曲普瑞林相比，雌二醇和曲普瑞林的組合不會改變血清曲普瑞林的釋放，因為兩者的曲普瑞林血清曲線是相似的。
實施例5臨床試驗因前列腺癌接受GnRH激動劑治療的男人中，通過緩釋曲普瑞林制劑(只有曲普瑞林)和實施例3的雌二醇+曲普瑞林組合制劑給藥，進行分別比較治療對骨礦物質密度、熱潮紅、睪丸酮血清水平和前列腺特異性抗原的作用的研究。
140名患有未發(fā)生骨轉移的晚期前列腺癌的男性被隨機分組，每隔12個星期或者單獨注射11.25mg巴莫酸曲普瑞林緩釋制劑(對照)或者注射11.25mg巴莫酸曲普瑞林和3mg雌二醇的組合制劑(實施例3的組合物)，兩種治療方式都是肌肉內注射緩釋(PLGA)制劑，每組70名病人。隨訪這些病人48周。
為了防止因為鈣或維生素D不足導致骨丟失，所有的病人在藥物治療研究前一個月開始補充鈣和維生素D。
在開始時和48周時測定骨礦物質密度(BMD)。利用病人日志在開始時和每月測定熱潮紅發(fā)生頻率和嚴重性。在開始時和有規(guī)律間隔測定血清睪丸酮和前列腺特異性抗原(PSA)水平。
結果骨礦物質密度在單獨供給曲普瑞林組，48周時腰椎BMD下降2.8％，整個髖部BMD下降3.3％，而接受曲普瑞林+雌二醇治療組在兩個位點BMD都只下降0.5％。
曲普瑞林+雌二醇和只施用曲普瑞林組在48周后骨丟失的平均差在腰椎為2.3％，在整個髖部為2.8％(有顯著統(tǒng)計學意義)，從基線變化的標準偏差為4.4。
熱潮紅兩組接受治療的病人中有75％都經(jīng)歷了熱潮紅。每天熱潮紅發(fā)生的平均次數(shù)在單用曲普瑞林組為7，曲普瑞林+雌二醇組為5。基于視覺模擬評分尺(從1到10)，熱潮紅的平均嚴重性在單用曲普瑞林組為6.5，曲普瑞林+雌二醇組為4.5。
血清睪丸酮水平在第29天達到閹割水平(血清睪丸酮≤1.735nmol/L)的病人平均百分比在單用曲普瑞林組為95.3％，曲普瑞林+雌二醇組為96.1％。在第29天和第336天之間維持閹割水平的病人平均百分比在單用曲普瑞林組為98.2％，曲普瑞林+雌二醇組為98.5％。兩組之間的平均差不具有顯著性意義。
血清PSA水平在單用曲普瑞林組平均PSA濃度從開始的46.8μg/L下降到1.3μg/L，在曲普瑞林+雌二醇組PSA濃度從基線的45.0μg/L下降到1.2μg/L。兩組之間的平均差不具有顯著性意義。
權利要求
1.一種組合物，包括在至少大約一個月的時期內能夠以足以誘導和維持男性病人化學性閹割的速率釋放促性腺激素釋放激素組分的促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑，和能夠維持所述期間血清水平以足以減少通常由應用促性腺激素釋放激素組分化學性閹割男性病人所引起的增加的骨礦物質密度損耗或熱潮紅的雌激素組分的緩釋制劑。
2.按照權利要求1的組合物，其中促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑以大約10-1,000μg/天的速率釋放促性腺激素釋放激素組分。
3.按照權利要求1的組合物，其中緩釋制劑以包含至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素組分，雌激素組分在所述第二階段的過程中以大約10-100μg雌二醇等價物/天的速率釋放，在所述第一起始階段的過程中釋放的雌激素組分不超過所述第二階段期間發(fā)生的每天釋放的雌激素組分的5倍。
4.一種組合物，包括在至少大約一個月的時期內能夠以大約10-1,000μg/天的平均速率釋放促性腺激素釋放激素組分的促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑和能夠以包含至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素組分的雌激素緩釋制劑，雌激素組分在所述第二階段的過程中以大約10-100μg雌二醇等價物/天的速率釋放，在所述第一起始階段釋放的雌激素組分不超過所述第二階段期間發(fā)生的每天釋放的雌激素組分上限的5倍。
5.按照前面任意一項權利要求的組合物，其中促性腺激素釋放激素組分選自促性腺激素釋放激素，促性腺激素釋效激素激動劑，促性腺激素釋放激素拮抗劑和它們的混合物。
6.如權利要求1，2，3或4的組合物，其中促性腺激素釋放激素組分是從亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林，和它們的鹽，以及它們的混合物中選出的促性腺激素釋放激素激動劑。
7.如權利要求1，2，3或4的組合物，其中雌激素組分選自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚單芐基醚，去氫馬烯雌酮，去氫馬烯雌酮硫酸鹽，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一鈉，雌酮硫酸鉀，乙炔雌二醇，磷雌酚四鈉，己雌酚，羥雌酮二醋酸鹽，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脫瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它們的混合物。
8.如權利要求1，2，3或4的組合物，其中促性腺激素釋放激素組分是曲普瑞林或其鹽，且雌激素組分是雌二醇。
9.權利要求8的組合物，其中曲普瑞林或曲普瑞林鹽以大約100μg/天的速率釋放，且雌二醇以大約25-50μg/天的速率釋放。
10.一種治療前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大約一個月的時期內能夠以足以誘導和維持病人化學性閹割的速率釋放促性腺激素釋放激素組分的促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑，和同時給病人施用能夠維持所述期間血清水平以足以減少通常由應用促性腺激素釋放激素組分化學性閹割男性病人所引起的增加的骨礦物質密度損耗和熱潮紅的雌激素組分的緩釋制劑。
11.一種治療前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大約一個月的時期內能夠以大約10-1,000μg/天的平均速率釋放促性腺激素釋放激素組分的促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑，和同時給病人施用能夠以包含至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素組分的雌激素組分緩釋制劑，雌激素組分在所述第二階段過程中以大約10-100μg雌二醇等價物/天的速率釋放，在所述第一起始階段釋放的雌激素組分不超過所述第二階段期間發(fā)生的每天釋放的雌激素組分上限的5倍。
12.一種治療前列腺癌的方法，包括向患有前列腺癌的病人施用在至少大約一個月的時期內能夠以大約10-1,000μg/天的平均速率釋放促性腺激素釋放激素組分的促性腺激素釋放激素組分的緩釋制劑，和同時給病人施用能夠以包含至少第一起始階段和第二階段的曲線釋放雌激素組分的雌激素組分緩釋制劑，雌激素組分在所述第二階段過程中以大約10-100μg雌二醇等價物/天的速率釋放，在所述第一起始階段釋放的雌激素組分不超過所述第二階段期間發(fā)生的每天釋放的雌激素組分上限的5倍。
13.如權利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素釋放激素組分選自促性腺激素釋放激素，促性腺素釋放激素激動劑，促性腺激素釋放激素拮抗劑和它們的混合物。
14.如權利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素釋放激素組分是從亮丙瑞林，戈舍瑞林，曲普瑞林，布舍瑞林，那法瑞林，地落瑞林，海斯特瑞林，戈那瑞林，和它們的鹽，以及它們的混合物中選出的促性腺激素釋放激素激動劑。
15.如權利要求10，11或12的方法，其中雌激素組分選自氯烯雌酚，己二烯雌酚，二乙基己烯雌酚，二丙酸己烯雌酚，二乙基己烯雌酚單芐基醚，去氫馬烯雌酮，去氫馬烯雌酮硫酸鹽，雌四醇，雌二醇，(3α，17β)-雌-4-烯-3，17-二醇，雌三醇，半琥珀酸雌三醇，雌酮，雌酮硫酸一鈉，雌酮硫酸鉀，乙炔雌二醇，磷雌酚四鈉，己雌酚，羥雌酮二醋酸鹽，美雌醇，松焦油，硫酸哌嗪雌酮，丙甲雌三烯，炔雌醚，三苯氧胺，脫瑞米酚，雷洛昔芬，拉索昔芬和它們的混合物。
16.如權利要求10，11或12的方法，其中促性腺激素釋放激素組分是曲普瑞林或其鹽，且雌激素組分是雌二醇。
17.權利要求16的方法，其中曲普瑞林或曲普瑞林鹽以大約100μg/天的速率釋放，且雌二醇以大約25-50μg/天的速率釋放。
18.如權利要求10，11或12的方法，其中該組合物通過皮下、肌肉內或經(jīng)皮途徑給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含兩種緩釋制劑的組合物，第一種能夠釋放促性腺激素釋放激素組分，第二種能夠釋放雌激素組分。本發(fā)明的組合物可以用于前列腺癌的改進性雄性激素消除治療，在治療的過程中通過維持較低的足夠的雌激素水平來最小化骨礦物質密度損耗和熱潮紅發(fā)生的頻率及嚴重性。
文檔編號A61K31/565GK1780634SQ200480011409
公開日2006年5月31日 申請日期2004年4月30日 優(yōu)先權日2003年4月30日
發(fā)明者H·珀切特, F·海姆加特納, C·科迪, B·杜克雷 申請人:德比奧法姆股份有限公司