專利名稱：偏諾皂苷在增強造血功能藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化合物偏諾皂苷在制藥領(lǐng)域中的新用途。
背景技術(shù)：
偏諾皂苷(pennogenin)化合物，結(jié)構(gòu)通式為 通式中R2＝H，CH3，CH2OH，＝CH2X＝O，N，SC17-OH為R-構(gòu)型或S-構(gòu)型R1＝由單糖、雙糖、三糖、四糖、五糖、六糖、七糖所組成的各種型式的直鏈糖鏈或支鏈糖鏈，其糖鏈組成糖的類型包括β-D-葡萄糖(β-D-glucose)、α-D-葡萄糖(α-D-glucose)、α-L-鼠李糖(α-L-rhamnose)、β-D-半乳糖(β-D-galactose)、α-D-半乳糖(α-D-galactose)、β-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-甘露糖(β-D-mannose)、α-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、β-D-阿拉伯糖(α-D-aradinose)、α-D-木糖(α-D-xylose)、β-D-木糖(α-D-xylose)、α-D-核糖(α-D-ribose)、β-D-核糖(β-D-ribose)、α-D-來蘇糖(α-D-lyxose)、β-D-來蘇糖(β-D-lyxose)、α-L-夫糖(α-L-fucose)。
偏諾皂苷在植物界中分布并不十分廣泛，含量較低。中國專利申請?zhí)?2150907.7公開了一種“17-羥基C#-[27]甾體化合物、合成方法及其用途”，能用于天然產(chǎn)物偏諾皂甙元的合成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供偏諾皂苷化合物在制藥中的新的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備增強造血功能的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備治療貧血的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備升高血小板的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備升高白細胞的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備升高紅細胞的藥物中的應(yīng)用。
為了更好地理解本發(fā)明的實質(zhì)，下面將用偏諾皂苷的藥理試驗及結(jié)果來說明其在制藥領(lǐng)域中的新用途。
用基因芯片篩選功能基因改變并用常規(guī)實驗驗證活性，我們發(fā)現(xiàn)4個活性較強的偏諾皂苷化合物如下X＝O，R2＝H，[I]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→4)-α-L-rha·py(1→4)-[α-L-rha-py(1→2)]-β-D-glc·py[II]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-[α-L-rha·py(1→4)]-β-D-glc·py[III]R1＝-3-O-α-L-ara·fura-(1→4)-[α-L-rha py(1→2)]-β-D-glc·py[IV]R1＝-3-O-α-L-rha·py(1→2)-β-D-glc·py我們發(fā)現(xiàn)和驗證了其增強造血作用與基因IL-11、G-CSF、IL-3Rα、IL-5上調(diào)表達有關(guān)。上調(diào)IL-11、G-CSF、IL-3Rα、IL-5的基因表達，不但可以激活三系成熟造血細胞，增強其功能，而且還可以促進三系造血祖細胞向成熟細胞轉(zhuǎn)化，具有明確的增強造血作用。
Balb-c純系小鼠給予含偏諾皂苷的藥物，一定天數(shù)后從小鼠骨髓中提取總RNA，分離mRNA，逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，給藥組著Cy-3熒光(黃色)，生理鹽水組著Cy-5熒光(紅色)，混勻后，點于基因芯片上，玻片密封，80℃變性，42℃恒溫雜交三小時，洗滌，晾干后，芯片掃描儀掃描，軟件分析Cy-3和Cy-5兩種熒光信號強度和比值，根據(jù)參照基因調(diào)整原始信號。熒光比值在1.8以上提示有很強的生物活性。
結(jié)果見表1、表2、表3、圖1、圖2表1偏諾皂苷對四種造血因子的影響

由于細胞因子的多能性，因此我們根據(jù)因子的主要作用分類敘述，以助于理解。
造血因子(1)IL-11(6.59)作用于骨髓巨核系造血細胞，促進血小板生成。IL-11臨床用于升高放、化療所致血小板降低。
(2)G-CSF(2.53，Granule Clone Stimulate Factor)作用于骨髓粒系及粒單系造血祖細胞，增加外周血粒細胞數(shù)量。G-CSF臨床用于升高化、放療引起的白細胞降低。
(3)IL-3Rα(3.12)為IL-3受體，IL-3作用于骨髓造血干細胞或多能造血祖細胞，促進三系造血細胞功能恢復(fù)。
(4)IL-5(2.26)作用于外周血嗜酸性粒細胞，調(diào)節(jié)嗜酸性粒細胞顆粒分泌。
因此，偏諾皂苷可以刺激骨髓巨核系、骨髓粒系及粒單系造血祖細胞向成熟血細胞分化，具有全面的增強造血功能。
基因芯片表達的改變又進一步從整體動物實驗得到驗證。
偏諾皂苷的造血作用一、偏諾皂苷口服給藥對小鼠外周血PLT數(shù)量的影響方法Balb/c小鼠40只，18-22g雌性。按體重分成四組，分別為正常對照、偏諾皂苷10mg/kg、偏諾皂苷20mg/kg、偏諾皂苷40mg/kg，一日分為兩次口服給藥，共9次四天半。于給藥前、給藥后1天、3天、5天、7天、10天、14天割尾取血20ul，F(xiàn)-820血細胞計數(shù)儀檢測血象。
表2偏諾皂苷口服給藥對小鼠外周血血小板數(shù)量的影響(n＝10)

與生理鹽水組比較*P＜0.5 **P＜0.01 ***P＜0.001結(jié)果血小板的主要功能為參與止血過程。血小板數(shù)量和功能障礙可導(dǎo)致出血傾向。表2示偏諾皂苷口服給藥對大鼠外周血血小板數(shù)量的影響?？梢钥闯觯睇}水組血小板數(shù)相比，給藥組血小板數(shù)量在給藥后3-7天即有升高，10-15天有一更加明顯的升高過程。這些結(jié)果表明，一定劑量的偏諾皂苷口服給藥可增加大鼠外周血血小板數(shù)量，這是偏諾皂苷發(fā)揮其造血作用的療效之一。
二.小鼠外周血白細胞數(shù)量的影響方法Balb/c小鼠40只，18-22g雌性。按體重分成四組，分別為正常對照、偏諾皂苷10mg/kg、偏諾皂苷20mg/kg、偏諾皂苷40mg/kg，一日分為兩次口服給藥，共9次四天半。于給藥前、給藥后1天、3天、5天、7天、10天、14天割尾取血20ul，F(xiàn)-820血細胞計數(shù)儀檢測血象。
表3宮血寧口服給藥對小鼠外周血白細胞數(shù)量的影響(n＝11)

與生理鹽水組比較*P＜0.5 **P＜0.01 ***P＜0.001結(jié)果與生理鹽水組比較，三個劑量組均于給藥后立即顯現(xiàn)升白效果，14至17天顯著升高白細胞數(shù)，其效果比頭五天的還要好。
三、苷對失血型血虛小鼠的治療作用對失血型血虛小鼠的影響ICR小鼠40只，♀♂各半，均分成4組(n＝10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從眼眶靜脈叢放血0.5ml，24h后再取血測全部各組指標(biāo)，然后連續(xù)灌胃給藥1周，末次給藥1h后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血細胞分析儀測上述指標(biāo)，結(jié)果見表4-表6。
表4偏諾皂苷對因失血所致白細胞減少的治療作用

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表5偏諾皂苷對因失血所致血小板減少的治療作用

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表6偏諾皂苷對因失血所致紅細胞的影響

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用偏諾皂苷治療7天后，2個給藥組分別與模型組比較，其PLT值顯著高于模型組，且已超過正常生理鹽水組小鼠的水平，WBC和RBC顯著高于模型組，接近生理鹽水組，提示本品具有明顯的造血作用。
四、偏諾皂苷對環(huán)磷酰胺致血細胞減少的治療作用對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠40只，♀♂兼用，均分成4組(n＝10)，即生理鹽水組、造模組、12mg/Kg組和6mg/Kg組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酰胺80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后1h，從眼眶靜脈叢取血，測WBC、RBC、PLT，取股骨骨髓計數(shù)有核細胞數(shù)，結(jié)果見表7-表10。
表7偏諾皂苷對環(huán)磷酰胺致白細胞減少的治療作用

與生理鹽水組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表8偏諾皂苷對環(huán)磷酰胺致血小板減少的治療作用

與生理鹽水組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表9偏諾皂苷對環(huán)磷酰胺致紅細胞的影響

與生理鹽水組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表10偏諾皂苷對環(huán)磷酰胺致骨髓有核細胞的影響

與生理鹽水組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酰胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細胞下降，偏諾皂苷組與模型組比較，均可明顯對抗環(huán)磷酰胺所致小鼠WBC、PLT、和骨髓有核細胞下降，提示本品具有改善造血功能的作用。
五、諾皂苷對苯所致白細胞減少的治療作用對再生障礙性貧血小鼠的影響昆明種小鼠48只，♀♂兼用，均分成4組(n＝12)，除生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當(dāng)日，同時口服給藥，每天1次，共18天，末次給藥后1h，眼眶靜脈叢取血，測WBC、RBC、PLT，并取股骨骨髓計數(shù)有核細胞數(shù)。
表11偏諾皂苷對苯所致血細胞減少的治療作用

與模型組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001結(jié)果表明，2個給藥組分別與模型組比較，均可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠WBC、RBC、PLT和骨髓有核細胞的下降，對于血小板和白細胞的作用更明顯。
六、偏諾皂苷對幅射所致白細胞減少和凝血功能降低的治療作用為研究對急性放射病的治療作用，觀察了不同劑量的偏諾皂苷對6.SGy照射小鼠造血恢復(fù)的影響。結(jié)果表明，予受照小鼠每日偏諾皂苷1.、5及20mg/Kg治療后，外周血白細胞、紅細胞及血小板的恢復(fù)明顯加快，以20mg劑量組效果為最佳；照射后10d骨髓及脾臟CFU-GM、暴增型紅系祖細胞集落(BFU-E)及混合型祖細胞集落(CFU-Mix)含量及生成率均明顯高于生理鹽水組，并具有劑量相關(guān)性；內(nèi)源性脾結(jié)節(jié)數(shù)隨給藥劑量的加大而增加。表明偏諾皂苷不僅能加速粒系造血恢復(fù)，而且對紅系及巨核系造血恢復(fù)也有明顯的促進作用，因而有希望成為放射病治療藥物之一。
表12偏諾皂苷對輻射所致血細胞減少的治療作用(第10天)

與造模組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001表13偏諾皂苷對輻射損傷造血祖細胞功能的恢復(fù)作用(第10天)


與造模組比較*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001本發(fā)明的優(yōu)點在于1、本發(fā)明對已知化合物偏諾皂苷發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。
2、本發(fā)明的偏諾皂苷安全無毒，藥理作用強，預(yù)示著很好的藥用前景。
3、本發(fā)明的偏諾皂苷可從多種渠道獲得，可從植物中提取，也可用合成、半合成的方法獲得?？捎脝误w或混合物，可以是鹽或與其它分子的復(fù)合物。
4、本發(fā)明的偏諾皂苷配制成的藥物主要為口服劑型，即可單獨作為藥用有效成分，也可與其它無排斥作用的組分配伍。


圖1是偏諾皂苷口服給藥對小鼠外周血血小板數(shù)量的影響圖。
圖2是宮血寧口服給藥對小鼠外周血白細胞數(shù)量的影響圖。
具體實施例方式
實施例1由已知方法提取、制備偏諾皂苷。在中國專利85108520，03135590.0，02133381.5中分別介紹了醇法、水法、水-醇法三種提取和制備方法。將偏諾皂苷加入淀粉及相應(yīng)的輔料，混勻后制粒，壓制成片劑。
實施例2參考中國專利02150907.7的合成方法，由薯蕷皂苷合成母核pennogenin或由劍麻皂苷元合成dihydropennogenin，再在3位接上恰當(dāng)?shù)奶擎?。將偏諾皂苷加入淀粉及相應(yīng)的輔料，混勻后裝入膠囊中制成膠囊劑。
權(quán)利要求
1.偏諾皂苷在制備增強造血功能的藥物中的應(yīng)用。
2.偏諾皂苷在制備治療貧血的藥物中的應(yīng)用。
3.偏諾皂苷在制備升高血小板的藥物中的應(yīng)用。
4.偏諾皂苷在制備升高白細胞的藥物中的應(yīng)用。
5.偏諾皂苷在制備升高紅細胞的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種化合物偏諾皂苷在制藥領(lǐng)域中的新用途。本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備增強造血功能的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明涉及偏諾皂苷作為制備治療貧血、制備升高血小板、白細胞、紅細胞的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明對已知化合物偏諾皂苷發(fā)掘了新的醫(yī)療用途，開拓了一個新的應(yīng)用領(lǐng)域。本發(fā)明的偏諾皂苷配制成的藥物主要為口服劑型，即可單獨作為藥用有效成分，也可與其它無排斥作用的組分配伍。
文檔編號A61P7/06GK1778306SQ20041007956
公開日2006年5月31日 申請日期2004年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月17日
發(fā)明者馮有, 唐書明, 趙振虎 申請人:云南白藥集團股份有限公司