專利名稱：緩釋組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生理活性物質(zhì)的緩釋制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
JP-A60-100516公開(kāi)了一種水溶性藥物的緩釋微囊(microcapsule)，其包括平均直徑為2～200μm的顆粒，該顆粒包含分散在基質(zhì)中的水溶性藥物，該基質(zhì)包含重均分子量約5000～200000的乳酸-甘醇酸共聚物，以及包含重量百分比約為100～50％的乳酸及重量百分比約為0～50％的甘醇酸(glycolicacid)，及其帶水干燥(drying in water)的制備方法。
JP-A62-201816公開(kāi)了一種緩釋微囊，其特征在于制備W/O/W型乳劑時(shí)將W/O型乳劑的粘度調(diào)至約150～10000cp，以及其制備方法。
JP-A62-54760公開(kāi)了一種生物可降解的聚氧羧酸酯，其為一種共聚物或聚合物，該聚物或聚合物，從一元酸(monobasic acid)的角度講具有水溶性氧羧酸含量不超過(guò)0.01摩爾/100g，且重均分子量約2000～50000，以及包含該聚合物的注射緩釋微囊。
JP-A61-2852公開(kāi)了重均分子量約5000～30000乳酸-甘醇酸共聚物，其不含催化劑，具有約1.5～2的可分散性(以明膠滲透色譜方法測(cè)定)，并包括重量百分比為約50～95％的乳酸及重量百分比為50～5％的甘醇酸，及包含以聚合物為基質(zhì)的藥物。
JP-A6-192068公開(kāi)了一種緩釋微囊的制備方法，包括將微囊在高于聚合物的玻璃轉(zhuǎn)換溫度下加熱，在該溫度下，膠囊的各部分顆粒彼此不相粘附。
JP-A4-218528公開(kāi)了一種純化生物可降解的脂肪族聚酯的方法，所述方法包括將生物可降解的脂肪族聚酯溶解于有機(jī)溶劑中，該聚酯包含分子量為1000或更低的低分子量聚合物，向其中加入水以沉淀聚合物，并去除分子量為1,000的低分子量聚合物，同時(shí)描述了加入水的比例，以有機(jī)溶劑為100，水為50～150(體積比)。
發(fā)明目的本發(fā)明提供了一種緩釋制劑，其不含明膠，且包含大量生理活性物質(zhì)，通過(guò)抑制生理活性物質(zhì)的任何初始過(guò)度釋放，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)達(dá)約一個(gè)月的穩(wěn)定釋放速率。
發(fā)明概述為解決上述難題，本發(fā)明的發(fā)明人通過(guò)深入研究，最終發(fā)現(xiàn)一種緩釋制劑，其包含大量生理活性物質(zhì)，不含明膠，通過(guò)抑制生理活性物質(zhì)的任何初始過(guò)度釋放，實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)達(dá)約一個(gè)月的穩(wěn)定釋放速率，通過(guò)制備一種聚合物，該聚合物重均分子量與以PLGA為基礎(chǔ)的數(shù)均分子量比值約1.90或更低，或通過(guò)使用重均分子量約11,600～約140,000的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，最終圓滿完成本發(fā)明。
即，本發(fā)明提供了(1)一種緩釋組合物，包含重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，及生理活性物質(zhì)，(2)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)為一種生理活性的肽，(3)根據(jù)(2)中所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)為L(zhǎng)H-RH衍生物，(4)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量為約3,000～約100,000，(5)根據(jù)(4)中所述的緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量為約8,000～約15,000，(6)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中，分子量約3,000或更小的乳酸-甘醇酸聚合物中的低分子量部分的比例為約9％或更低，(7)根據(jù)(6)中所述的緩釋組合物，其中，分子量約3,000或更小的乳酸-甘醇酸聚合物中的低分子量部分的比例為約3％～約9％，(8)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中，所述聚合物中的乳酸與甘醇酸的摩爾比為100∶0～40∶60，(9)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中，所述聚合物中的乳酸與甘醇酸的摩爾比為70∶30～80∶20，(10)根據(jù)(3)中所述的緩釋組合物，其中，LH-RH衍生物為下式所示的肽
5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中，Y指DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，及Z指HN-C2H5或Gly-NH2，或其鹽，(11)根據(jù)(3)中所述的緩釋組合物，其中，LH-RH衍生物為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5，或其乙酸鹽，(12)根據(jù)(3)中所述的緩釋組合物，其中組合物中包含約5％(w/w)～約24％(w/w)的LH-RH衍生物或其鹽，(13)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)或其鹽微溶于水或溶于水，(14)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物用作注射劑，(15)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其可在超過(guò)至少兩周時(shí)間內(nèi)釋放生理活性物質(zhì)或其鹽，(16)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其不含藥物保留(retaining)物質(zhì)，(17)根據(jù)(1)中所述的緩釋組合物，其不含明膠，(18)一種制備(1)中所述的緩釋組合物的方法，包括自混合溶液中除去溶劑，該溶液包括生理活性物質(zhì)或其鹽及含有重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，(19)根據(jù)(18)中所述的方法，包括將生理活性物質(zhì)或其鹽混合、分散于溶液中，有機(jī)溶劑中，該溶液包含一種重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，及除去有機(jī)溶劑，(20)根據(jù)(19)中所述的方法，其中生理活性物質(zhì)或其鹽以包含生理活性物質(zhì)或其鹽的水溶液形式使用，(21)一種包括(1)中所述的緩釋組合物的藥物，(22)一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)或乳腺癌的藥物或避孕藥物，其包括(3)中所述的緩釋組合物，(23)一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的藥物，包括(3)中所述的緩釋組合物，(24)一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的方法，或避孕措施，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的(3)中所述的緩釋組合物，(25)一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的(3)中所述的緩釋組合物，(26)一種制備乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的方法，該聚合物的重均分子量為約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低，該方法包括向包含重均分子量為約5,000～約15,000的乳酸-甘醇酸聚合物的有機(jī)溶劑中加入水，加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為50～150(體積比)，(27)制備(26)中所述的聚合物的方法，其中有機(jī)溶劑為親水溶劑，(28)制備(27)中所述的聚合物的方法，其中有機(jī)溶劑為丙酮，(29)制備(26)中所述的聚合物的方法，其中加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為約10～約45(體積比)，(30)制備(26)中所述的聚合物的方法，其中加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為約40(體積比)，(31)一種乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，該聚合物的重均分子量為約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低，(32)根據(jù)(31)中所述的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽在用于制備不包括明膠的緩釋組合物中的應(yīng)用，(33)一種微球，包含乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，該聚合物的重均分子量約11,600～約14,000，及LH-RH衍生物或其鹽，但不包括明膠，(34)根據(jù)(33)中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中Y指DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，及Z指HH、C2H5或Gly-NH2，或其鹽，(35)根據(jù)(33)中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5，或其乙酸鹽，(36)根據(jù)(33)中所述的微球，其中，包含約5％(w/w)～約24％(w/w)的LH-RH衍生物或其鹽，
(37)根據(jù)(33)中所述的微球，其為微囊，(38)根據(jù)(33)中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽可在多于2周期間內(nèi)釋放，(39)一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的藥物，或避孕藥物，其包括(33)中所述的微球，(40)一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的藥物，其包括(33)中所述的微球，(41)一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的方法，或避孕的方法，所述方法包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的(33)中所述的微球，(42)一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的(33)中所述的微球。
發(fā)明詳述本發(fā)明使用的生理活性物質(zhì)并不受具體局限，只要其可藥用，可為非肽化合物或肽化合物。合適的非肽化合物實(shí)例包括激動(dòng)劑、拮抗劑及具有酶抑制活性的化合物。另外，肽化合物例如，優(yōu)選生理活性肽。合適的生理活性肽具有約3000～約40,000，優(yōu)選約4000～約30,000，更優(yōu)選約5000～約200,000的分子量。
具有生理活性的肽的實(shí)例包括促黃體素釋放激素(LH-RH)、胰島素、抑生長(zhǎng)激素、生長(zhǎng)激素、促生長(zhǎng)激素釋放激素(GH-RH)、催乳素、促紅細(xì)胞生成素、腎上腺皮質(zhì)激素、促黑素細(xì)胞激素、促甲狀腺激素釋放激素、促甲狀腺激素、促黃體素、促卵泡激素、加壓素、催產(chǎn)素、降鈣素、胃泌素、腸泌素、促胰酶素、縮膽囊肽、血管緊張素、人胎盤催乳素、人絨毛膜促性腺素、腦啡肽、內(nèi)啡肽、京都啡肽(kyotrophin)、促吞噬肽、胸腺生成素、胸腺素、thymotimurin、胸腺體液因子、血液胸腺因子、腫瘤壞死因子、集落誘導(dǎo)因子、促胃動(dòng)素、強(qiáng)啡肽、鈴蟾肽、神經(jīng)降壓肽、蛙皮素(cerulein)、緩激肽，心鈉素、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、細(xì)胞生長(zhǎng)因子、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、具有拮抗內(nèi)皮素活性的肽及其衍生物，及其片段及片段衍生物等。
本發(fā)明使用的生理活性物質(zhì)可為其自身或其可藥用鹽。
當(dāng)生理活性物質(zhì)含有堿性基團(tuán)，如氨基，該類鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)酸(也即游離的無(wú)機(jī)酸)(例如，碳酸、碳酸氫鹽、鹽酸、硫酸、硝酸、硼酸等)及有機(jī)酸(也即游離的有機(jī)酸)(例如，琥珀酸、乙酸、丙酸、三氟乙酸等)形成的鹽，當(dāng)生理活性物質(zhì)含有酸性基團(tuán)，如羧基等，該類鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)堿(也即游離的無(wú)機(jī)堿)(例如，堿金屬如鈉、鉀等，堿土金屬如鈣、鎂等)及有機(jī)堿(也即游離的有機(jī)堿)(例如，有機(jī)胺如三乙胺等，堿性氨基酸如精氨酸等)形成的鹽。此外，生理活性的肽可形成金屬絡(luò)合物(例如，銅絡(luò)合物、鋅絡(luò)合物等)。
生理活性的肽的優(yōu)選實(shí)例包括LH-RH衍生物或其鹽，其可有效治療激素依賴性疾病，特別是，性激素依賴性癌癥(例如，前列腺癌、子宮癌、乳腺癌、垂體腺瘤等)，性激素依賴性疾病，如前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、性早熟、痛經(jīng)、無(wú)月經(jīng)、經(jīng)前綜合征、多室卵巢綜合征等，避孕(或者，應(yīng)用藥物停用后的反彈活性，不孕)，預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)。進(jìn)一步的實(shí)例包括可有效治療良性或惡性腫瘤的LH-RH衍生物或其鹽，這些腫瘤不依賴于性激素，但對(duì)LH-RH敏感。
LH-RH衍生物或其鹽的具體實(shí)例包括肽，其如1996出版的Treatmentwith GnRH analogsControversies and perspectives(the parnon PublishingGroup Ltd.)及專利JP-A3-503165、JP-A3-101695、JP-A7-97334及JP-A8-259460所述的肽。
LH-RH衍生物的實(shí)例包括LH-RH激動(dòng)劑及LH-RH拮抗劑。LH-RH拮抗劑的實(shí)例如下式[I]所示的生理活性的肽X-D2Nal-D4ClPhe-D3Pal-Ser-A-B-Leu-C-Pro-DAlaNH2[其中X指N(4H2-furoyl)Gly或NAc，A指選自NheTyr、Tyr、Aph(Atz)及NMeAph(Atz)的殘基，B指選自DLys(Nic)、Dcit、DLis(azaglyNic)、DLis(azaglyFur)DhArg(Et2)、DAph(Atz)及DhCi的殘基，及C指Lys(Nisp)、Arg或hArg(Et2)]，及其鹽。
LH-RH激動(dòng)劑的實(shí)例，如下式[II]所示的生理活性的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z[其中Y指選自Dleu、Dala、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal及DHis(ImBzl)的殘基，及Z指NH-C2H5或Gly-NH2]或其鹽。特別是，合適的肽為其中Y指DLeu及Z指NH-C2H5(即，5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-PrNH-C2H5表示的肽A；Leuprorelin)的肽或其鹽(例如，乙酸鹽)。
這些肽可以上述文獻(xiàn)或?qū)＠_(kāi)或類似方法制備。
本說(shuō)明書(shū)使用的簡(jiǎn)稱的意義如下

關(guān)于其它酸的簡(jiǎn)稱，基于IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員會(huì)的規(guī)定(European JournaL Biochemistry，Vol.138，pp9-37(1984))或本領(lǐng)域常規(guī)的簡(jiǎn)稱。此外，當(dāng)氨基酸具有光學(xué)異構(gòu)體時(shí)，除非另外說(shuō)明，其指L-氨基酸。
至于本發(fā)明使用的乳酸-甘醇酸聚合物，優(yōu)選重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物。
乳酸-甘醇酸共聚物可以是鹽。鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)堿(例如堿金屬，如鈉、鉀等，堿土金屬如鈣、鎂等)及有機(jī)堿(例如，有機(jī)胺如三乙胺等，堿性氨基酸如精氨酸等)形成的鹽，過(guò)渡金屬形成的鹽(例如，鋅、鐵、銅等)及配鹽。
乳酸-甘醇酸聚合物的組成摩爾比例優(yōu)選約100/0～約40/60，更優(yōu)選約70/30～約80/20。
為“乳酸-甘醇酸聚合物”最小重復(fù)單元之一的乳酸，光學(xué)異構(gòu)體，優(yōu)選的D-異構(gòu)體/L-異構(gòu)體(摩爾/摩爾％)的比例范圍約75/25～約25/75。特別是，常用D-異構(gòu)體/L-異構(gòu)體(摩爾/摩爾％)的比例范圍為60/40～約30/70。
乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量通常為約3,000～約100,000優(yōu)選為約3,000～約50,000，特別優(yōu)選約8,000～約15,000。
乳酸-甘醇酸聚合物中，分子量約3,000或更小的的低分子量部分的比例優(yōu)選為約9％或更低，更優(yōu)選約3％～約9％或更低。
此外，本發(fā)明的乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低，優(yōu)選約1.40～約1.90，更優(yōu)選約1.45～約1.80。
進(jìn)一步的優(yōu)選實(shí)例包括(1)重均分子量約3,000～約100,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物，(2)重均分子量約3,000～約50,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物，(3)重均分子量約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物，(4)根據(jù)(1)～(3)所述的一種緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物中分子量約3,000或更小的低分子量部分的比例優(yōu)選約9％或更低，及(5)根據(jù)(1)～(3)所述的一種緩釋組合物，其中分子量約3,000或更小的低分子量部分，在乳酸-甘醇酸聚合物的比例優(yōu)選為約3％～約9％。
更優(yōu)選的實(shí)例包括(6)重均分子量約3,000～約100,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.4～1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物，(7)重均分子量約3,000～約50,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.4～1.90的乳酸-甘醇酸聚合物，(8)重均分子量約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.4～1.90的乳酸-甘醇酸聚合物，(9)根據(jù)(6)～(8)所述的緩釋組合物，其中分子量約3,000或更小的低分子量部分，在乳酸-甘醇酸聚合物中的比例優(yōu)選為約9％或更低，及(10)根據(jù)(6)～(8)所述的一種緩釋組合物，其中分子量約3,000或更小低的分子量部分，在乳酸-甘醇酸聚合物中的比例優(yōu)選為約3％～約9％。
最優(yōu)選的實(shí)例包括(11)重均分子量約3,000～約100,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.45～約1.80的乳酸-甘醇酸聚合物，(12)重均分子量約3,000～約50,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.45～約1.80的乳酸-甘醇酸聚合物，(13)重均分子量約3,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.45～約1.80的乳酸-甘醇酸聚合物，(14)根據(jù)(11)～(13)所述的一種緩釋組合物，其中分子量約3,000或更小的分子量部分，在乳酸-甘醇酸聚合物中的比例優(yōu)選為約9％或更低，及(15)根據(jù)(11)～(13)所述的一種緩釋組合物，其中分子量約3,000或更小的分子量部分，在乳酸-甘醇酸聚合物中的比例優(yōu)選為約3％～約9％。
此外，還可使用重均分子量為約11,600～約14,000的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽。
本說(shuō)明書(shū)中的重均分子量及數(shù)均分子量指以凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定的分子量，在使用聚苯乙烯的情況下，以重均分子量(GPC1)為397000、189000、98900、37200、17100、9490、5870、2500、1050及495的10種單分散聚苯乙烯作為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
此外，分子量約3,000或更小的低分子量聚合物級(jí)分的數(shù)量指在以上述GPC測(cè)定得到的重均分子量分布中分子量為約3,000或更小部分的數(shù)量。更具體而言，對(duì)應(yīng)于分子量約3,000或更小部分的曲線下面積與重均分子量分布類型曲線下面積相比的數(shù)量。使用一系列高速GPC儀器(Toso公司制造，HLC-8120GPC，一種根據(jù)示差折射率進(jìn)行測(cè)定的方法)進(jìn)行測(cè)定，包括TSKguardcolum Super H-L(4.6mmi.d.×35mm)，TSKgel SuperH4000(6mmi.d.×150mm)×2，以及TSKgel SuperH2000(6mmi，d，×150mm)(所有的色譜柱皆為Toso公司制造)，THF為流動(dòng)相，流速為0.6ml/分鐘。
當(dāng)乳酸-甘醇酸聚合物與生理活性物質(zhì)之間的作用為離子相互作用時(shí)，主要的相互作用發(fā)生在生理活性物質(zhì)與乳酸-甘醇酸聚合物的末端羧基之間。當(dāng)包含大量的低分子量級(jí)分時(shí)，生理活性物質(zhì)易與具有高反應(yīng)活性的低分子量的乳酸-甘醇酸聚合物相互作用。在緩釋注射劑中，在制劑中的泄漏及初始釋放的生理活性物質(zhì)主要為與低分子量級(jí)分乳酸-甘醇酸聚合物反應(yīng)的生理活性物質(zhì)。為增加生理活性物質(zhì)的含量及抑制其初始釋放，必須將低分子量部分的乳酸-甘醇酸聚合物的比例及重均分子量與數(shù)均分子量的比例降低至低于一定水平。因此，例如，為得到用于在一個(gè)月內(nèi)可緩釋制劑的乳酸-甘醇酸聚合物，優(yōu)選乳酸-甘醇酸聚合物，優(yōu)選的乳酸-甘醇酸為上述的重均分子量約8,000～約15,000，重均分子量與數(shù)均分子量的比例約1.90或更低，優(yōu)選約1.40～約1.90，更優(yōu)選約1.45～約1.80，及重均分子量為約3,000或更小的低分子量級(jí)分的比例為約9％或更低，優(yōu)選約3％～約9％。
″乳酸-甘醇酸聚合物″可在無(wú)需催化劑的條件下，從乳酸及甘醇酸脫水縮聚制備而成(JP-A61-28521)，或自丙交酯及環(huán)狀二酯化合物如乙交酯等開(kāi)環(huán)聚合而成(Encyclopedic Handbook of Biomaterials and Bioengineering Part AMaterials，volume 2，MarcelDekker，Inc，1995)。
在無(wú)需催化劑的條件下，自乳酸及甘醇酸脫水縮聚制備而成的乳酸-甘醇酸聚合物通常包含大量小分子量部分及含有重均分子量與數(shù)均分子量比例為約2或更高。本發(fā)明使用的乳酸-甘醇酸共聚物重均分子量為約5,000～約15,000。重均分子量為約3,000或更小的低分子量級(jí)分的比例視重均分子量而定，當(dāng)重均分子量為約10,000，重均分子量為約3,000或更小的低分子量級(jí)分的比例為約10％或更高。
所得乳酸-甘醇酸聚合物可經(jīng)有機(jī)溶劑純化得到最終聚合物。
本發(fā)明使用的有機(jī)溶劑的實(shí)例優(yōu)選包括親水或水溶性有機(jī)溶劑，例如，丙酮、四氫呋喃、二氧六環(huán)、二甲基甲酰胺及二甲基亞砜等，尤其優(yōu)選使用丙酮。
本發(fā)明水及有機(jī)溶劑使用量無(wú)特別的限制。然而，當(dāng)水量太大時(shí)，低分子量部分的減少不充分，因而很難得到所需的最終聚合物。另一方面，當(dāng)水量太小時(shí)，聚合物將很難沉淀，收集困難，僅當(dāng)聚合物具有較預(yù)期更高的分子量時(shí)方可收集。通常，加入的水量，以有機(jī)溶劑為100，水為約5～50，優(yōu)選約10～約45，更優(yōu)選約24～約40，特別優(yōu)選約40。例如，將10g乳酸-甘醇酸聚合物溶于100mL有機(jī)溶劑丙酮中，在適當(dāng)?shù)臄嚢柘?，逐漸加入40mL純凈水沉淀最終聚合物，該聚合物可經(jīng)合適的方法干燥。當(dāng)最終聚合物不能自單一的溶解沉淀步驟得到時(shí)，可重復(fù)該步驟。
在制備本發(fā)明緩釋制劑中，基質(zhì)優(yōu)選為重均分子量與數(shù)均分子量的比例約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，或重均分子量為約11,600～約14,000的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽。乳酸與甘醇酸的組成摩爾比優(yōu)選100/0～40/60。生理活性物質(zhì)優(yōu)選LH-RH衍生物，特別優(yōu)選的LH-RH衍生物為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5或其乙酸鹽。其中LH-RH衍生物或其鹽的含量?jī)?yōu)選為約5％(w/w)～約24％(w/w)。此外，優(yōu)選的緩釋制劑不含明膠，其可在至少兩周內(nèi)釋放生理活性物質(zhì)或其鹽。
制備微囊的方法經(jīng)此得到的乳酸-甘醇酸聚合物可用作制備緩釋制劑的基質(zhì)。舉例闡釋了制備諸如微囊的緩釋組合物的方法，該微囊包含生理活性物質(zhì)或其鹽，及本發(fā)明中的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽。
(I)帶水干燥方法(i)O/W方法在本方法中，首先制備乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的有機(jī)溶劑的溶液。用于制備本發(fā)明緩釋制劑的有機(jī)溶劑的沸點(diǎn)優(yōu)選為120℃或更低。
有機(jī)溶劑的實(shí)例，如鹵代烴(例如，二氯甲烷、氯仿、二氯乙烷、三氯乙烷、四氯化碳等)，醚(例如，乙醚、異丙醚等)，脂肪酸酯(例如，乙酸乙酯、乙酸丁酯等)，芳香烴(例如，苯、甲苯、二甲苯等)，醇(例如，乙醇、甲醇等)，乙氰及其混合溶劑。用于乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽等的有機(jī)溶劑優(yōu)選二氯甲烷。
乳酸-甘醇酸聚合物在有機(jī)溶劑中的濃度視乳酸-甘醇酸聚合物分子量及有機(jī)溶劑而定。例如，當(dāng)以二氯甲烷作為有機(jī)溶劑時(shí)，其濃度通常選自約0.5～約70％重量，更優(yōu)選約1～約60％重量，特別優(yōu)選約2～約50％重量。
將生理活性物質(zhì)或其鹽加入并溶解于或分散于如上得到的乳酸-甘醇酸聚合物在有機(jī)溶劑中形成的溶液中。然后，將形成的有機(jī)溶劑溶液加入水相中，生成O(油相)/W(水相)乳劑，油相溶劑經(jīng)揮發(fā)或分散于水相中制得微囊，該有機(jī)溶液包含生理活性物質(zhì)或其鹽及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的組合物。制備時(shí)，水相體積通常為油相體積的約1～約10,000倍，更優(yōu)選約5～50,000倍，特別優(yōu)選約10～2,000倍。
除上述成份外，可向水相加入乳化劑，只要其可形成穩(wěn)定O/W乳劑的乳化劑，皆可使用。具體而言，例如，使用陰離子表面活性劑(油酸鈉、硬脂酸鈉、月桂硫酸鈉等)，非離子表面活性劑(聚乙烯山梨醇脂肪酸酯(吐溫80、吐溫60，Atlas Powder制備)，聚氧乙烯蓖麻油衍生物(HCO-60、HCO-50，Nikko Chemical制備)，聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、卵磷脂、明膠及透明質(zhì)酸。其可單用或聯(lián)用。其使用的濃度優(yōu)選約0.0001～10％重量，更優(yōu)選約0.001～5％重量。
除上述組分，可向水相加入滲透壓調(diào)節(jié)劑。任何可使用只要其制備成水溶液后可產(chǎn)生滲透壓的滲透壓調(diào)節(jié)劑。
滲透壓調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括多羥基醇、單羥基醇、單糖、二糖、寡糖及氨基酸或其衍生物。
多羥基醇的實(shí)例，如優(yōu)選使用三羥基醇如甘油等，五羥基醇如阿糖醇、木糖醇、核糖醇等，及六羥基醇如甘露醇、山梨醇、己六醇等。優(yōu)選六羥基醇，特別合適的為甘露醇。
單羥基醇實(shí)例包括甲醇、乙醇及異丙醇等，優(yōu)選乙醇。
單糖的實(shí)例，如戊糖，例如阿拉伯糖、木糖、核糖、2-脫氧核糖等，及己糖，如葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、鼠李糖、海藻糖等，其中，優(yōu)選己糖。
寡糖的實(shí)例，如三糖，例如麥芽三糖、棉子糖等，及四糖如水蘇糖等，其中，優(yōu)選三糖。
單糖、二糖及寡糖衍生物的實(shí)例，如葡糖胺、半乳糖胺、葡萄糖醛酸及半乳糖醛酸。
氨基酸的實(shí)例，可使用任何L-氨基酸，其實(shí)例包括甘氨酸、亮氨酸及精氨酸。其中，優(yōu)選L-精氨酸。
這些滲透壓調(diào)節(jié)劑可單用或聯(lián)用。
這些滲透壓調(diào)節(jié)劑的使用濃度，為使其在外部水相產(chǎn)生的滲透壓為生理鹽水的滲透壓約1/50～約5倍，優(yōu)選約1/25～約3倍。當(dāng)甘露醇用作滲透壓調(diào)節(jié)劑，其濃度優(yōu)選為0.5％～1.5％。
除去有機(jī)溶劑可采用已知的方法或類似方法。這些方法的實(shí)例包括，在保持螺旋狀攪拌器，磁力攪拌器或超聲發(fā)生裝置攪拌下，在常壓或逐漸減壓蒸發(fā)有機(jī)溶劑的方法，保持一定的真空度情況下以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸發(fā)有機(jī)溶劑的方法，以及使用滲析膜逐漸除去有機(jī)溶劑的方法。
離心或過(guò)濾如上得到的微囊，收集游離的生理活性物質(zhì)或其鹽，藥物保留物質(zhì)(retaining substance)或吸附在微囊表面的乳化劑可用蒸餾水洗滌幾次，然后再分散于蒸餾水中，凍干。
由于本發(fā)明微囊使用的基質(zhì)為重均分子量與數(shù)均分子量比例為1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，或重均分子量約11,600～約14,000的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，因而，微囊可以高含量包含藥物，沒(méi)有必要包含藥物保留吸收的物質(zhì)，如明膠及增稠劑。
這些聚合物可優(yōu)選用于制備緩釋組合物，其可在至少兩周內(nèi)釋放藥物。
在制劑過(guò)程中，為防止顆粒凝聚，可加入阻止聚集的物質(zhì)。阻止聚集的物質(zhì)的實(shí)例，如水溶性多糖，如甘露醇、乳糖、葡萄糖及淀粉(例如，玉米淀粉等)，氨基酸如甘氨酸，及蛋白質(zhì)如血纖蛋白及膠原質(zhì)。其中，優(yōu)選甘露醇。
凍干后，必要時(shí)可在膠囊不融溶的條件下加熱除去膠囊中的水及有機(jī)溶劑。優(yōu)選的加熱溫度為或略高于微囊的中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度，其可通過(guò)示差掃描熱量計(jì)實(shí)現(xiàn)，溫度升高的速度為每分鐘10～20℃。更優(yōu)選地，在微囊的中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度附近或在中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度到中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度高30℃的范圍加熱。優(yōu)選地，在中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度到中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度高10℃的范圍之間的溫度加熱。更優(yōu)選地，在中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度到中點(diǎn)玻璃轉(zhuǎn)換溫度高5℃的范圍之間的溫度加熱。
加熱時(shí)間可視膠囊的量而定，膠囊自身達(dá)到規(guī)定溫度之后通常約12小時(shí)～168小時(shí)，優(yōu)選約24小時(shí)～120小時(shí)，特別優(yōu)選約48小時(shí)～96小時(shí)。
只要聚集的微囊是均一地加熱的，加熱方法無(wú)特別限制。
加熱及干燥的實(shí)例如，在恒溫室，流化室，移動(dòng)槽或爐中加熱及干燥的方法，以及微波加熱的方法。其中，優(yōu)選恒溫室加熱干燥的方法。
(ii)W/O/W方法首先，制備乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽在有機(jī)溶劑中的溶液，所得的溶液指定為油相。制劑方法與上述的部分(I)(i)相同。乳酸-甘醇酸聚合物在有機(jī)溶劑的濃度視乳酸-甘醇酸聚合物的分子量及有機(jī)溶劑類型而定，例如，當(dāng)使用二氯甲烷為有機(jī)溶劑時(shí)，濃度通常為約0.5～約70％重量，更優(yōu)選濃度約1～約60％重量，特別優(yōu)選濃度約2～約50％重量。
其次，制備生理活性物質(zhì)或其鹽的溶液或分散液[溶劑為水或水及醇的混合溶液(例如，甲醇、乙醇等)]。
加入的生理活性物質(zhì)或其鹽的濃度通常為0.001mg/ml～10g/ml，更優(yōu)選0.1mg/ml～5g/ml，更優(yōu)選10mg/ml～3g/ml。
當(dāng)生理活性物質(zhì)含有堿性基團(tuán)，如氨基，鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)酸(也即游離的無(wú)機(jī)酸)(例如，碳酸、碳酸氫鹽、鹽酸、硫酸、硝酸、硼酸等)及有機(jī)酸(也即游離的有機(jī)酸)(例如，琥珀酸\乙酸\丙酸\三氟乙酸等)形成的鹽。
當(dāng)生理活性物質(zhì)含有酸性基團(tuán)，如羧基等，鹽的實(shí)例包括與無(wú)機(jī)堿(也即游離的無(wú)機(jī)堿)(例如，堿金屬如鈉、鉀等，堿土金屬如鈣、鎂等)及有機(jī)堿(也即游離的有機(jī)堿)(例如，有機(jī)胺如三乙胺等，堿性氨基酸如精氨酸等)形成的鹽。此外，生理活性的肽可形成金屬絡(luò)合物(例如，銅絡(luò)合物、鋅絡(luò)合物等)，當(dāng)生理活性物質(zhì)為L(zhǎng)HRH衍生物時(shí)，特別優(yōu)選加入乙酸。
可使用已知的增溶劑及穩(wěn)定劑。為溶解或分散生理活性物質(zhì)或添加劑，可在不影響活性的情況下加熱、振搖及攪拌以得到指定為內(nèi)層水相的水溶液。
如此得到的內(nèi)層水相及油相可通過(guò)已知方法，如勻漿及超聲的方法生成W/O乳劑。
將要混合的油相體積為約1～約1000倍，優(yōu)選2～100倍，更優(yōu)選約3～10倍水相的體積。
在12～25℃，所得W/O乳劑的粘度一般為約10～10,000cp，優(yōu)選約100～5,000cp，特別優(yōu)選約500～2,000cp。
然后，將包括生理活性物質(zhì)或其鹽及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的W/O乳劑加入水相以生成一種W(內(nèi)層水相)/O(油相)/W(外層水相)，油相溶劑經(jīng)揮發(fā)或擴(kuò)散到外層水相制得微囊。制備時(shí)，外層水相的體積一般為油相體積的約1倍～約10,000倍，更優(yōu)選約5倍～約50,000倍，特別優(yōu)選約10倍～約2,000倍。
除上述提及的組分，還可加入乳化劑及滲透壓調(diào)節(jié)劑，此后的制備方法同部分(I)(i)所述。
(II)相分離方法當(dāng)以本方法制備微囊時(shí)，攪拌的同時(shí)將凝聚劑(coacervating agent)逐漸加入到有機(jī)溶劑溶液中，以使沉淀并固化膠囊，所述的有機(jī)溶劑溶液包含生理活性物質(zhì)或其鹽及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，如以上述(I)所述的帶水干燥的方法中所述。凝聚劑的體積為約0.01～1,000倍，優(yōu)選約0.05～500倍，特別優(yōu)選約0.1～200倍油相體積。
凝聚劑的選擇無(wú)特別限制，只要其為聚合物系列、礦物油系列或植物油系列化合物，這些化合物可與有機(jī)溶劑相容，但不溶解生理活性物質(zhì)或其鹽絡(luò)合物及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽。具體的實(shí)例如，硅油、芝麻油、豆油、玉米油、棉籽油、椰子油、亞麻籽油，礦物油、正己烷或正庚烷?；蚱渲?種或多種的混合物。
收集所得膠囊，以正庚烷等反復(fù)洗滌以除去組合物中的凝聚劑，該組合物包括生理活性物質(zhì)或其鹽及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，然后經(jīng)減壓干燥?；蛘?，以上述(I)(i)所述的帶水干燥的方法洗滌，其凍干后再進(jìn)一步加熱干燥。
(III)噴霧干燥方法當(dāng)以本方法制備微囊時(shí)，以噴霧干燥器(機(jī))的噴嘴將有機(jī)溶液噴入干燥室中，在極短時(shí)間內(nèi)揮發(fā)精細(xì)分散的有機(jī)液滴中的溶劑制得微囊，所述有機(jī)溶液包含生理活性物質(zhì)或其鹽以及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，如上述部分(I)中帶水干燥方法所述。噴嘴的實(shí)例如流體噴嘴型、壓力噴嘴型、轉(zhuǎn)盤型。此后，必要時(shí)，可以上述部分(I)帶水干燥方法中同樣的方式洗滌微囊，然后，凍干及進(jìn)一步加熱干燥。
至于除上述的微囊以外其它的劑型，將有機(jī)溶劑溶液蒸發(fā)有機(jī)溶劑或水干燥進(jìn)行干燥，同時(shí)應(yīng)用通旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀控制真空度然后，再以噴氣磨等碾碎得精細(xì)粉末(微粒)，該有機(jī)溶液含微囊制備方法(I)帶水干燥方法中所述的生理活性物質(zhì)或其鹽以及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽。
此外，將碾碎的精細(xì)粉末可以微囊制備方法(I)所述的帶水干燥方法洗滌，凍干及進(jìn)一步加熱干燥。
如此制備的微囊或精細(xì)粉末可實(shí)現(xiàn)與使用的乳酸-甘醇酸聚合物的降低速率一致的藥物釋放。
本發(fā)明緩釋組合物可為任何形式，如微球，微囊或精細(xì)粉末(微粒)，優(yōu)選微囊。
本發(fā)明緩釋組合物可原樣使用，或以其作為原料制成各種劑型使用，并且可制成用作注射劑或可置入靜脈內(nèi)、皮下及器官內(nèi)給藥，以及經(jīng)粘膜吸收藥物、口服制劑(例如，膠囊(例如，硬膠囊、軟膠囊等))，固體制劑如顆粒、粉末等，或液體制劑如糖漿、乳劑，及用于鼻腔、直腸或子宮給藥的混懸劑。
例如，將本發(fā)明緩釋組合物制成注射劑時(shí)，其可制成水懸液，可一起加入的有分散劑(例如，表面活性劑如吐溫80、HCO-60等，及多糖如透明質(zhì)酸鈉、羧甲基纖維素、精氨酸鈉等)，防腐劑(例如，羥苯甲酸甲酯及羥苯甲酸丙酯)，等張調(diào)節(jié)劑(氯化鈉、甘露醇、山梨醇、葡萄糖及哺氨酸)，或?qū)⑵渑c植物油，如麻油或玉米油分散于油懸液中得到可實(shí)際使用的緩釋注射劑。
當(dāng)本發(fā)明緩釋組合物用作注射混懸劑時(shí)，其顆粒直徑應(yīng)滿足一定的分散度及具有較好的穿透性質(zhì)。例如，平均顆粒直徑約0.1～300μm，優(yōu)選約0.5～150μm，更優(yōu)選約1～100μm。
為將本發(fā)明緩釋組合物制成無(wú)菌制劑，方法包括但不限于在制劑中保持各步無(wú)菌操作的方法，以γ射線消毒的方法及添加防腐劑的方法等。
由于本發(fā)明緩釋組合物毒性低，其可安全用于哺乳動(dòng)物(例如，人、牛、豬、狗、貓、小鼠、大鼠、兔等)，本發(fā)明緩釋組合物的劑量視生理活性物質(zhì)的類型及含量、劑型、藥物釋放時(shí)間、疾病類型及研究的動(dòng)物及其有效劑量而定。生理活性物質(zhì)的單位劑量?jī)?yōu)選約0.01mg～10mg/kg體重，更優(yōu)選約0.05mg～5mg/kg成人體重，例如，當(dāng)使用緩釋期為六個(gè)月的制劑。
緩釋組合物單位劑量?jī)?yōu)選約為0.05mg～50mg/kg體重，更優(yōu)選約0.1mg～30mg/kg成人體重。
合適的用藥時(shí)間視生理活性物質(zhì)的類型及含量、劑型、藥物釋放時(shí)間、疾病類型及研究的動(dòng)物而定，如數(shù)周一次、每月一次、數(shù)月(例如，3月、4月、6月)一次等。
本發(fā)明緩釋組合物視其包含的生理活性物質(zhì)的類型可用于預(yù)防或治療多種疾病，例如，當(dāng)生理活性物質(zhì)為L(zhǎng)H-RH衍生物時(shí)，其可用于預(yù)防或治療激素依賴性疾病，特別是，性激素依賴性癌癥(例如，前列腺癌、子宮癌、乳腺癌、垂體腺瘤等)，性激素依賴性疾病如前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、性早熟、痛經(jīng)、無(wú)月經(jīng)、經(jīng)前綜合征、多室卵巢綜合征等，作為預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的藥物，預(yù)防或治療阿爾茨海默病或自身免疫疾病，避孕(或者，預(yù)防或治療不孕的藥物，應(yīng)用藥物停用后的反彈活性)。其進(jìn)一步還可用于預(yù)防或治療治療良性或惡性腫瘤，這些腫瘤不依賴于性激素，但對(duì)LH-RH敏感。
因而，根據(jù)本發(fā)明，可以預(yù)防或治療激素依賴性疾病，特別是，性激素依賴性癌癥(例如，前列腺癌、子宮癌、乳腺癌、垂體腺瘤等)，性激素依賴性疾病如前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、性早熟、痛經(jīng)、無(wú)月經(jīng)、經(jīng)前綜合征、多室卵巢綜合征等；通過(guò)對(duì)哺乳動(dòng)物使用有效劑量的預(yù)防或治療藥物預(yù)防懷孕，并且，還可用來(lái)預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)。
本發(fā)明以實(shí)施例、比較實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)實(shí)施例的方式作具體闡釋，但本發(fā)明不為其所限。
實(shí)施例A110g乳酸-甘醇酸共聚物，其重均分子量為9700及數(shù)均分子量為5030，以乳酸及甘醇酸脫水縮合合成后，將其溶于100mL丙酮中，然后攪拌下滴加入40mL純凈水以沉淀聚合物。傾析除去非粘性淀粉糖漿樣的聚合物沉淀的溶液，真空干燥所得的聚合物。干燥后得到8.37g聚合物，其重均分子量為10500，及數(shù)均分子量為6700。
實(shí)施例A2將4.87g實(shí)施例A得到的聚合物溶于8.03g二氯甲烷中制得油相。將油相混入水相，該水相為0.597g肽A的乙酸鹽溶于0.6mL純凈水中所得，然后以Polytron于25000rpm轉(zhuǎn)速下將混合液初步乳化得到W/O乳劑。在15℃下，將該W/O乳劑加入到1000mL的0.1％聚乙烯醇水溶液中，以高速攪拌器(homomixer)于7000rpm將其轉(zhuǎn)變?yōu)閃/O/W乳劑。以螺旋攪拌器攪拌3小時(shí)脫溶劑使微囊固化，收集過(guò)200目篩的微囊，加入0.48g甘露醇后凍干。凍干后，得到3.92g微囊，肽A的含量為10.18％。
比較實(shí)施例A1使用實(shí)施例A1得到的乳酸-甘醇酸共聚物，根據(jù)與實(shí)施例A2相同的方式得到3.97g微囊，及肽A含量9.50％。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例A1將實(shí)施例A2及比較實(shí)施例A1得到的微囊分散于0.3ml分散介質(zhì)(蒸餾水中含有0.25mg羧甲基纖維素、0.5mg聚山梨醇酯80及25mg甘露醇)，若使用肽A時(shí)，用量為2.25mg，分別以22G注射針頭注射入將其通過(guò)背部皮下施用于7周齡的雄性SD大鼠。施用后的既定時(shí)間，將大鼠處死，清除殘留在施用部位的微囊，并將其中的肽A計(jì)量，其除以起始含量，得表1所示的殘留率。此外，實(shí)施例A2及比較實(shí)施例A1使用的聚合物Mw/Mn也顯示在表中。


從表1中可明顯看出，實(shí)施例A2使用的聚合物的Mw/Mn為1.90或更低，其以丙酮處理后制得微囊，肽A自微囊的初始釋放量被抑制，保證了在4周長(zhǎng)的時(shí)期內(nèi)的緩釋。
實(shí)施例A3將185.7g乳酸-甘醇酸共聚物，其重均分子量為10600及數(shù)均分子量為6600，溶于300.1g二氯甲烷并將溫度調(diào)至29.5℃。稱取330.2g該有機(jī)溶劑溶液，然后與15.62g肽A乙酸鹽溶于15.31g蒸餾水的溶液相混合，該蒸餾水已加熱至54.3℃，攪拌1分鐘后得到粗乳劑，然后以勻漿機(jī)在10,000rpm攪拌2分鐘得W/O乳劑。然后，將該W/O乳劑冷至17.8℃，傾入預(yù)先在17.9℃保持1分鐘16秒的25L的0.1％(w/w)聚乙烯醇(EG-40，Nihongoseikagaku制造)水溶液中，以HOMOMIC LINE FLOW(Tokushukika制造)以7,005rpm轉(zhuǎn)速攪拌得W/O/W乳劑。將該W/O/W乳劑攪拌3小時(shí)后揮發(fā)二氯甲烷或?qū)⒍燃淄榉稚⒌酵鈱铀嘀校拖喙袒?，過(guò)75μm篩，使用離心機(jī)(H-600S，Kokusanenshinki制造)于2,000rmp持續(xù)離心沉淀微囊并收集。將收集的微囊再分散于少量蒸餾水中，過(guò)90μm篩，加入17.2g甘露醇使溶解并凍干得粉末。微囊回收率為76.4％，肽A在微囊中的含量為8.79％。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例A2將實(shí)施例A3所述的約26mg微囊溶于0.3ml分散介質(zhì)(蒸餾水中含有0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80及15mg甘露醇)中，分別用22G注射針頭經(jīng)背部皮下將其施用于7周齡的雄性SD大鼠。施用后的既定時(shí)間，將大鼠處死，清除殘留在施用部位的微囊，并將其中的肽A計(jì)量，其除以起始含量得表2所示的殘留率。


從表2中可明顯看出，甚至當(dāng)制劑放大后，盡管實(shí)施例A3所述的微囊包含大量的生理活性物質(zhì)，在施用1天后的生理活性物質(zhì)殘留率高達(dá)90％。當(dāng)聚合物Mw/Mn比值低至1.6，就發(fā)揮出顯著的抑制生理活性物質(zhì)的初始過(guò)度釋放的作用。此外，微囊內(nèi)生理活性物質(zhì)在較長(zhǎng)期內(nèi)實(shí)現(xiàn)了恒速釋放。
實(shí)施例B1將197.7g重均分子量為12600及數(shù)均分子量為6400的乳酸-甘醇酸共聚物溶于320.1g二氯甲烷中，以0.2μm濾器(EMFFLOW，DFA4201FRP)緊壓過(guò)濾后，將溫度調(diào)至30.0℃。稱取330.1g該有機(jī)溶劑溶液然后與水溶液相混合，所述的水溶液為15.68g肽A乙酸鹽在15.31g蒸餾的水中形成的溶液并且已經(jīng)加熱至56.0℃，攪拌1分鐘后得到粗乳劑，然后于10,000rpm下攪拌2分鐘得W/O乳劑。將該W/O乳劑冷至18.2℃，傾入預(yù)先在18.4℃保持1分鐘16秒的25L的0.1％的(w/w)聚乙烯醇(EG-40，Nihongoseikagaku制造)水溶液中，以HOMOMIC LINE FLOW(Tokushukika制造)在7,007rpm攪拌得W/O/W乳劑。攪拌該W/O/W乳劑3小時(shí)后，揮發(fā)二氯甲烷或?qū)⒍燃淄榉稚⒌酵鈱铀嘀?，將油相固化，過(guò)75μm篩，于2,000rmp離心機(jī)持續(xù)離心(H-600S，Kokusanenshinki制造)沉淀微囊并收集。將收集的微囊再分散于少量蒸餾水中，過(guò)90μm篩，加入17.2g甘露醇使溶解并凍干得粉末。微囊回收率為73.47％，肽A含量為8.43％實(shí)驗(yàn)實(shí)施例B1將實(shí)施例B1所述的約26.7mg微囊溶于0.3mg分散介質(zhì)(蒸餾水中含有0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80及15mg甘露醇)中，以22G注射針頭經(jīng)背部皮下施用于7周齡的雄性SD大鼠。在施用后的既定時(shí)間，將大鼠處死，清除留在施用部位的微囊，并將其中的肽A計(jì)量，其除以起始含量得表3所示的殘留率。


從表3中可明顯看出，甚至在不含明膠的情況下，實(shí)施例B1所述的微囊包含大量的生理活性物質(zhì)，其可顯著抑制生理活性物質(zhì)的初始過(guò)度釋放，并且微囊可長(zhǎng)期釋放生理活性物質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例B2將實(shí)施例B1所述的約44.6mg微囊溶于1.0ml分散介質(zhì)(蒸餾水中含有0.15mg羧甲基纖維素、0.3mg聚山梨醇酯80及15mg甘露醇)中，以23G注射針頭經(jīng)背部皮下施用于體重為7～12kg的比格犬(beagle)。在施用后的既定時(shí)間，自前足靜脈采血，計(jì)量肽A及睪酮濃度，得到表4所示的結(jié)果。


從表4中可以很明顯地看出，實(shí)施例B1所述的微囊長(zhǎng)期釋放生理活性物質(zhì)，并保持生理活性物質(zhì)的血藥濃度。此外，釋放入血的生理活性物質(zhì)的活性并沒(méi)喪失，其效力得到保持。
工業(yè)適用性本發(fā)明緩釋制劑包含一種聚合物，具有重均分子量與以地?cái)?shù)均分子量比值約1.90或更低地PLGA作為基質(zhì)，或使用重均分子量約11,600～約140,000的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽作為基質(zhì)，其甚至在不含明膠的情況下包含大量生理活性物質(zhì)，并且抑制生理活性物質(zhì)的初始過(guò)度釋放并且，因此，可實(shí)現(xiàn)在約一個(gè)月內(nèi)地穩(wěn)定釋放速率。
即，本制劑的優(yōu)點(diǎn)在于具有簡(jiǎn)便的制備方法及較低的生產(chǎn)成本，其由于無(wú)需使用藥物保留物質(zhì)，如明膠及增稠劑，并最終減少了添加劑的用量，該制劑無(wú)需使用保持藥物緩釋的物質(zhì)及增稠劑可包含大量藥物；可以制備可在至少兩周內(nèi)釋放藥物的緩釋組合物；并且由于增加了制劑的玻璃轉(zhuǎn)換溫度，可以制備具有更高穩(wěn)定性地制劑。
權(quán)利要求
1.一種緩釋組合物，其包含重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，及生理活性物質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)為一種生理活性的肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)為L(zhǎng)H-RH衍生物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中該乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量為約3,000～約100,000。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量為約8,000～約15,000。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物分子量為3,000或更小的低分子量部分的比例約為9％或更低。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的緩釋組合物，其中乳酸-甘醇酸聚合物分子量為3,000或更小的低分子量部分的比例約為3％～約9％。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中聚合物含有的乳酸與甘醇酸的摩爾比為100∶0～40∶60。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中聚合物含有的乳酸與甘醇酸的摩爾比為70∶30～80∶20。
10.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋組合物，其中LH-RH衍生物為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中Y指DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，及Z指HH、C2H5或Gly-NH2，或其鹽。
11.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋組合物，其中LH-RH衍生物為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5或其乙酸鹽。
12.根據(jù)權(quán)利要求3所述的緩釋組合物，其中組合物中包含約5％(w/w)～約24％(w/w)的LH-RH衍生物或其鹽。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其中生理活性物質(zhì)或其鹽微溶于水或溶于水。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其用于注射。
15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其用至少兩周內(nèi)釋放生理活性物質(zhì)或其鹽。
16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其不含藥物保留物質(zhì)。
17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物，其不含明膠。
18.一種制備根據(jù)權(quán)利要求1所述的緩釋組合物的方法，其包括自生理活性物質(zhì)或其鹽及乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的混合溶液中除去溶劑，乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的方法，包括混合及分散生理活性物質(zhì)或其鹽于有機(jī)溶劑中并除去有機(jī)溶劑，所述有機(jī)溶劑含乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，該乳酸-甘醇酸聚合物的重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的方法，其中生理活性物質(zhì)或其鹽以包含生理活性物質(zhì)或其鹽的水溶液使用。
21.一種包括權(quán)利要求1中所述的緩釋組合物的藥物。
22.一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的藥物，或避孕藥物，其包括權(quán)利要求3中所述的緩釋組合物。
23.一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的藥物，包括權(quán)利要求3中所述的緩釋組合物。
24.一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)、乳腺癌的方法，或避孕措施，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的權(quán)利要求3中所述的緩釋組合物。
25.一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的權(quán)利要求3中所述的緩釋組合物。
26.一種制備乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽的方法，該聚合物的重均分子量為約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低，該方法包括向包含重均分子量為約5,000～約15,000的乳酸-甘醇酸聚合物的有機(jī)溶劑中加入水，加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為50～150(體積比)。
27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的制備聚合物的方法，其中有機(jī)溶劑為親水性溶劑。
28.根據(jù)權(quán)利要求27所述的制備聚合物的方法，其中有機(jī)溶劑為為丙酮。
29.根據(jù)權(quán)利要求26所述的制備聚合物的方法，其中加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為約10～約45(體積比)。
30.根據(jù)權(quán)利要求26所述的制備聚合物的方法，其中加入的水的比例為以有機(jī)溶劑為100，水為約40(體積比)。
31.一種乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽，其重均分子量為約8,000～約15,000及重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低。
32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的一種乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽在用于制備不包括明膠的緩釋組合物中的用途。
33.一種微球，包含乳酸-甘醇酸聚合物或其鹽以及LH-RH衍生物或其鹽，但不包括明膠，該聚合物的重均分子量約11,600～約14,000。
34.權(quán)利要求33中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-Y-Leu-Arg-Pro-Z，其中Y指DLeu、DAla、DTrp、DSer(tBu)、D2Nal或DHis(ImBzl)，且Z指HH、C2H5或Gly-NH2，或其鹽，
35.權(quán)利要求33中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽為下式所示的肽5-oxo-Pro-His-Trp-Ser-Tyr-DLeu-Leu-Arg-Pro-NH-C2H5，或其乙酸鹽。
36.權(quán)利要求33中所述的微球，其中，包含約5％(w/w)～約24％(w/w)的LH-RH衍生物或其鹽。
37.權(quán)利要求33中所述的微球，其為微囊。
38.權(quán)利要求33中所述的微球，其中，LH-RH衍生物或其鹽可在至少超過(guò)2周期間緩釋。
39.一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的藥物，或避孕的藥物，包括權(quán)利要求33中所述的微球。
40.一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的藥物，包括權(quán)利要求33中所述的微球。
41.一種預(yù)防或治療前列腺癌、前列腺肥大、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、子宮纖維瘤、性早熟、痛經(jīng)的方法，或避孕的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的(33)中所述的微球。
42.一種預(yù)防絕經(jīng)前乳腺癌術(shù)后乳腺癌復(fù)發(fā)的方法，包括對(duì)哺乳動(dòng)物施用有效劑量的權(quán)利要求33中所述的微球。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種緩釋組合物，其甚至在不含明膠的情況下包含大量生理活性物質(zhì)，該組合物由于抑制生理活性物質(zhì)的初始過(guò)度釋放，可在超過(guò)約一個(gè)月的時(shí)間內(nèi)以恒定速率釋放。該緩釋組合物包含重均分子量與數(shù)均分子量比值約1.90或更低的乳酸－甘醇酸聚合物或其鹽，及生理活性物質(zhì)。
文檔編號(hào)A61K9/00GK1535141SQ0281304
公開(kāi)日2004年10月6日 申請(qǐng)日期2002年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2001年6月29日
發(fā)明者山本一路, 子, 山田明子, 畑善夫 申請(qǐng)人:武田藥品工業(yè)株式會(huì)社