專利名稱：新的作為藥用配制品的血清素激動劑(5ht2)和拮抗劑(5ht6)復(fù)合劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及與5-HT2C和5-HT6受體相關(guān)的疾病的預(yù)防和治療。另外，本發(fā)明提供了一種藥用組合物，含有用于治療用途的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑。
背景技術(shù)：
血清素(5-羥色胺或5-HT)是外周和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(PNS和CNS)的關(guān)鍵神經(jīng)遞質(zhì)，涉及了多種感覺、運(yùn)動和行為官能，諸如調(diào)節(jié)進(jìn)食、睡眠、體溫、血壓、情緒和認(rèn)識。至少14種不同的血清素受體亞型在哺乳動物PNS和CNS中表達(dá)并已經(jīng)被正式分類；參見Glennon等人，Neurosci.Biobehav.Rev.1990，14，35-37；和D.Hoyer等人，Pharmacol.Rev. 1994，46，157-203。已經(jīng)建議將血清素激動劑和拮抗劑用于治療多種疾病，包括焦慮、抑郁、高血壓、偏頭痛、肥胖、藥物濫用和成癮、強(qiáng)迫性病癥、精神分裂癥、孤獨(dú)癥、神經(jīng)變性病癥(例如阿爾茲海默氏癥、帕金森癥和杭廷頓氏舞蹈病)和化療引起的嘔吐。
受體的5-HT2亞科有三種亞型受體組成5-HT2A、5-TH2B和5-HT2C。血清素5-HT2C受體在許多腦區(qū)中表達(dá)，并涉及進(jìn)食調(diào)節(jié)(Dourish，C.T.Obes.Res.1995，3，Suppl.4，449S-462S；Bickerdike，M.J.，等人，Diabetes，Obes.Metab.1999，1，207-214)。已經(jīng)證明非特異5-HT2C受體激動劑m-氯苯基哌嗪(m-CPP)對5-HT2C受體有些偏愛，減少了表達(dá)正常5-HT2C受體的小鼠的進(jìn)食，而其對表達(dá)變態(tài)失活形式5-HT2C受體的小鼠缺乏活性(Tecott.L.H.，等人，Nature 1995，374，542-546)。
另外，已經(jīng)報(bào)道了m-CPP和丫庚因并吲哚U-22394A在分別進(jìn)行2周和9周治療后減輕了人的體重，后者最近被確定為5-HT2C受體的激動劑(未見公開)(Walsh，A.E.S.，Psychopharmacology 1994，116，120-122；Sargent，P.A.，等人Psychopharmacology 1997，133，309-312和Gallant，D.M.，等人，Curr.Ther.Res.1967，9，579-581)。
近來，一系列的吡咯并[3，2，1-ij]喹啉衍生物已經(jīng)被確定為對5-HT2A受體具有選擇性的5-HT2C受體激動劑(Isaac M.，等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，919-921)。據(jù)報(bào)道，這些化合物提供了治療肥胖和癲癇的新嘗試。
還已經(jīng)提出，5-HT2C受體涉及了CNS疾病，諸如抑郁和焦慮(Jenck，F(xiàn).，等人，Expert Opin.Invest.Drugs 1998，7，1587-1599；Leysen，D.C.M.IDrugs 1999，2，109-120)。還提出了5-HT2C受體亞型涉及了泌尿疾病，諸如尿失禁(Leysen，D.C.M.IDrugs 1999，2，109-120)。
還有5-HT6受體(確定于1993年，Monsma等人，Mol.Pharmacol.1993，43，320-327和Ruat，M.等人，Biochem.Biophys.Res.Commun.1993，193，269-276)涉及了進(jìn)食調(diào)節(jié)和CNS疾病。
因此，例如Bentley，J.C.等人，Br.J.Pharmacol.1999，126，66P描述了通過施以5-HT6拮抗劑降低了大鼠的進(jìn)食。還有，一些抗抑郁劑和非典型的抗精神失調(diào)即表現(xiàn)出對5-HT6受體的高親合力，這指出精神分裂癥涉及到了5-HT6受體(Roth等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.1994，268，1403-1410；Sleight等人，Expert Opin.Ther.Patents 1998，8，1217-1224；Bourson等人，Br.J.Pharm.1998，125，1562-1566；Boess等人，Mol.Pharmacol.1988，54，577-583；Sleight等人，Br.J.pharmacol.1998，124，556-562)。另外，5-HT6受體與一般的應(yīng)激反應(yīng)和焦慮狀態(tài)關(guān)聯(lián)(Yoshioka等人，LifeSci.1998，17/18，1473-1477)。
發(fā)明概述根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)已出乎意料地發(fā)現(xiàn)將5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑聯(lián)合給藥減少了進(jìn)食，效果比單獨(dú)使用激動劑或拮抗劑更明顯。與單獨(dú)使用激動劑或拮抗劑相比，這種5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑聯(lián)合給藥可提供了治療學(xué)上的益處。
因此本發(fā)明的一個方面是提供一種藥物組合物，包括有效量的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的結(jié)合，以及任選的藥學(xué)可接受的載體。
本發(fā)明的另一方面是提供一種預(yù)防或治療與5-HT2C受體和5-HT6受體相關(guān)的疾病的方法，特別是肥胖，包括給需要的人或哺乳動物(同時(shí)或連續(xù)地)使用足以提供治療效果量的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑。
本發(fā)明的另一個方面是提供5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑在生產(chǎn)治療涉及5-HT2C受體和5-HT6受體的疾病的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明的另一方面是提供一種制備藥物組合物的方法，其中聯(lián)合治療量的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑與藥學(xué)可接受的載體完全混合。
本發(fā)明的另一方面是提供一種含有5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的產(chǎn)品，其作為聯(lián)合配制品用于同時(shí)、分別或相繼地用于治療與5-HT2C受體和5-HT6受體相關(guān)的疾病，特別是肥胖。


附圖1表示了在ob/ob小鼠用5-HT2C受體激動劑(PNU-183933F；50mg/kg po)和5-HT6受體拮抗劑(PNU-186053A；50mg/kg sc)聯(lián)合給藥后在進(jìn)食方面的效果，以及單獨(dú)使用激動劑和拮抗劑的效果。
附圖2表示了在ob/ob小鼠用5-HT2C受體激動劑(BVT.2938F；5mg/kg sc)和5-HT6受體拮抗劑(BVT.5182C；3mg/kg sc)聯(lián)合給藥后在進(jìn)食方面的效果，以及單獨(dú)使用激動劑和拮抗劑的效果。
發(fā)明詳述如上所述，本發(fā)明基于一個出乎意料的發(fā)現(xiàn)，即，5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的聯(lián)合給藥比單獨(dú)使用激動劑或拮抗劑更能減少進(jìn)食。與單獨(dú)使用激動劑或拮抗劑相比，這種5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的聯(lián)合給藥還可提供數(shù)種好處，例如在肥胖的治療中。
首先，聯(lián)合給藥對于每種化合物需要的劑量更低，卻得到了類似的或比單一治療更好的減少進(jìn)食效果。
其次，聯(lián)合給藥需要的劑量更低可降低不利情況發(fā)生的危險(xiǎn)。
第三，聯(lián)合給藥需要的劑量更低可降低耐受和濫用傾向產(chǎn)生的危險(xiǎn)。
第四，相對于基于一個靶的治療，基于兩個靶的治療可增加個體療效。同時(shí)也降低了無應(yīng)答功效(無響應(yīng)器)的風(fēng)險(xiǎn)。
本發(fā)明聯(lián)合給藥的有益效果是不但可用于調(diào)節(jié)進(jìn)食行為，用于治療體重過重和肥胖，而且可用于治療CNS失調(diào)，諸如抑郁癥、躁狂癥、精神分裂癥樣疾病、焦慮、記憶障礙(諸如阿爾茨海默氏癥)、偏頭痛、藥物成癮、驚厥、人格疾病、外傷后應(yīng)激反應(yīng)綜合征和睡眠障礙，以及用于治療尿失禁(或更一般的活動過度的膀胱)、性機(jī)能不良、腸胃疾病和青光眼。
在此使用的術(shù)語“5-HT2C受體激動劑”是導(dǎo)致血清素5-HT2C受體活化的化合物。5-HT2C受體激動劑優(yōu)選具有小于50nM的親和常數(shù)Ki，優(yōu)選小于20nM，用細(xì)胞內(nèi)Ca2+水平度量的體外固有活性相對于5-HT(1μM)大于20％，優(yōu)選大于50％。
在此使用的術(shù)語“5-HT6受體拮抗劑”是阻斷血清素5-HT6受體調(diào)節(jié)反應(yīng)的化合物。5-HT6受體拮抗劑優(yōu)選具有小于50nM的親和常數(shù)Ki，優(yōu)選小于20nM，用細(xì)胞內(nèi)cAMP水平度量的體外固有活性相對于5-HT(1μM)小于50％，優(yōu)選小于20％。
可用于分別確定5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑親合力和固有活性的體外試驗(yàn)是本領(lǐng)域已知的，在下面的實(shí)驗(yàn)部分也描述了它們，作為確定對5-HT2A和5-HT2B受體的親合力的試驗(yàn)。
通常，5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑應(yīng)具有足夠的選擇性，不會導(dǎo)致任何實(shí)質(zhì)上的不利副反應(yīng)。但是，在上下文中，術(shù)語“選擇性”和“實(shí)質(zhì)上”可廣義地解釋，其含義是本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的。
分別相對于5-HT2A、5-HT2B和5-HT6受體，5-HT2C受體激動劑對5-HT2C受體的選擇性優(yōu)選至少為5，優(yōu)選至少為10，更優(yōu)選至少20(作為5-HT2A/5-HT2C、5-HT2B/5-HT2C和5-HT6/5-HT2C親和比測定)。
分別相對于5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C受體，5-HT6受體拮抗劑對5-HT6受體的選擇性優(yōu)選至少為5，優(yōu)選至少為10，更優(yōu)選至少20(作為5-HT2A/5-HT6、5-HT2B/5-HT6和5-HT2C/5-HT6親和比測定)。
用于確定化合物是選擇性的5-HT2C受體激動劑還是選擇性的5-HT6受體拮抗劑的相關(guān)試驗(yàn)是本領(lǐng)域已知的，如上所述，也在下文的實(shí)驗(yàn)部分大致描述。
已知是5-HT2C受體激動劑的化合物是例如EP-A-0863136中所述類型的氮雜環(huán)丁烷和吡咯烷衍生物；EP-A-0657426中所述類型的三環(huán)吡咯衍生物；EP-A-0655440中所述類型的1-氨基乙基吲哚；EP-A-0572863中所述類型的吡嗪并吲哚；US 4081542中所述類型的哌嗪基吡嗪；WO 00/12475中所述類型的二氫吲哚衍生物；WO 00/12510中所述類型的吡咯并吲哚、吡啶并吲哚和丫庚因并吲哚；WO 00/12482中所述的吲唑衍生物；WO 00/12502中所述類型的吡咯并喹啉；WO00/35922中所述類型的2，3，4，4a-四氫-1H-吡嗪并[1，2-a]喹喔啉-5(6H)酮；WO 00/12481中所述類型的吲唑基丙基胺；WO00/17170中所述類型的吲唑；WO 00/76984和2000年11約20日提交的瑞典專利申請No.0004244-0和0004245-7中所述類型的哌嗪基吡嗪；WO 00/77001、WO 00/77002和WO 00/77010中所述類型的雜環(huán)稠合的γ-carboline；WO 01/09111和WO 01/09123中所述類型的苯并呋喃基哌嗪；WO 01/09122中所述類型的苯并呋喃；WO 01/09126中所述類型的苯并噻吩；EP 370560中所述類型的吡啶基哌嗪；Bioorg.Med.Chem.Lett.2000，10，919-921中所述類型的吡咯并喹啉；WO 98/30548中所述類型的氨基烷基吲唑；WO 01/12602中所述類型的二氫吲哚；WO 01/12603中所述類型的吲哚；WO 00/44753中所述類型的吡嗪并(氮雜)吲哚；WO 98/56768中所述類型的三環(huán)吡咯或吡唑。
目前優(yōu)選的5-HT2C受體激動劑是芳基哌嗪和哌嗪基吡嗪化合物，特別是WO 00/76984和2000年11約20日提交的瑞典專利申請No.0004244-0和0004245-7中所述類型的化合物。
已知是5-HT6受體拮抗劑的化合物是例如WO 99/37623中所述類型的哌嗪基苯磺酰胺；EP-A-0930302中所述類型的磺?；窖苌?；WO 99/02502中所述類型的磺酰胺衍生物；WO 99/42465中所述類型的磺酰胺衍生物；WO 98/27081中所述類型的磺酰胺衍生物；WO98/27058中所述類型的碳酰胺衍生物；EP-A-0815861中所述類型的磺酰胺衍生物；WO 99/47516中所述類型的吡咯烷酮甲基吲哚衍生物；WO 99/65906中所述類型的雙環(huán)哌啶和哌嗪衍生物；EP-A-0941994中所述類型的吡唑并嘧啶和吡唑并三嗪衍生物；WO 01/05793中所述類型的芳基砜取代的六氫丫庚因并吲哚；WO 01/09142中所述類型的噁嗪并咔唑；WO 01/17963中所述類型的氨基烷氧基咔唑；2000年6月20日提交的PCT/US00/30177國際專利申請中所述類型的二苯基亞砜；和2000年10月20日提交的瑞典專利申請No.0003810-9中所述類型的芳基磺?；胚?。
目前優(yōu)選的5-HT6受體拮抗劑是丫庚因并吲哚化合物，諸如WO01/05793中所述類型的芳基砜取代的六氫丫庚因并吲哚。其它優(yōu)選的5-HT6受體拮抗劑包括芳基磺酰基吲哚化合物，諸如瑞典專利申請No.0003810-9中所述的化合物。
5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑可以是化合物本身，或在適當(dāng)時(shí)是其藥學(xué)可接受的鹽(酸或堿加成鹽)或其立體異構(gòu)體形式(包括光學(xué)異構(gòu)體，諸如對映體和外消旋體)。
上述藥學(xué)可接受的加成鹽包括化合物能夠形成的治療活性的非毒性酸和堿加成鹽形式。堿性的化合物通過用適當(dāng)?shù)乃崽幚韷A的形式可轉(zhuǎn)化成它們的藥學(xué)可接受的酸加成鹽。酸的例子包括無機(jī)酸，諸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸；有機(jī)酸，諸如乙酸、丙酸、羥乙酸、乳酸、丙酮酸、乙醇酸、馬來酸、丙二酸、草酸、苯磺酸、甲苯磺酸、甲磺酸、三氟乙酸、富馬酸、琥珀酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、水楊酸、對氨基水楊酸、撲酸、苯甲酸、抗壞血酸等。堿加成鹽形式的例子是鈉、鉀、鈣鹽，以及與藥學(xué)可接受的胺形成的鹽，所述的胺是諸如氨、烷基胺、苯胺和氨基酸，諸如精氨酸和賴氨酸。在此使用的術(shù)語“加成鹽”還包括溶劑化物，化合物以及其鹽可形成諸如水合物、醇合物等。
5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑還可以是前藥或可在體內(nèi)代謝變化后釋放出所述的活性成分的形式。在“Design of Prodrugs”ed.H.Bundgaard，Elsevier，1985中描述了選擇和制備適合的前藥衍生物的常規(guī)方法。
5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑可配制成各種藥劑形式給藥，它們可以在相同的藥物劑量的形式中，諸如同一種片劑，或在獨(dú)立的藥劑形式中。但是，在后者的情況下，有利的是將5-HT2C受體激動劑的單位劑量形式和5-HT6受體拮抗劑的單位劑量形式裝在同一個包裝中，例如包裝在同一個泡膜中。
游離的堿或鹽形式的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑可根據(jù)公知的制藥方法制成適當(dāng)?shù)乃幬飫┬?，諸如用于口服、注射、鼻內(nèi)噴霧給藥等用途的組合物。根據(jù)本發(fā)明的這類藥物組合物包括有效量的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑以及適合的藥學(xué)可接受的本領(lǐng)域公知的載體材料或稀釋劑。載體可以是任何惰性材料，有機(jī)的或無機(jī)的，適用于經(jīng)口、腸、直腸、皮膚、皮下或非腸道給藥，諸如水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、微晶纖維素、淀粉、淀粉羥乙酸鈉、磷酸氫鈣、硬脂酸鎂、滑石、膠態(tài)二氧化硅等。這些組合物還可含有其它藥學(xué)活性劑和常規(guī)添加劑，諸如穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、香味劑、緩沖劑等。
根據(jù)本發(fā)明的組合物可制成用于口服的固體或液體形式，諸如片劑、丸劑、膠囊、粉末、糖漿劑、酏劑、可分散顆粒、扁囊劑、栓劑等，用于非腸道給藥能夠的無菌溶液、懸浮劑或乳劑，噴劑，例如鼻用噴劑，眼用配制品，例如貼片等。
5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的劑量水平和特定結(jié)合的劑量的給藥頻率根據(jù)多種因素改變，包括使用的每種具體化合物的效能、代謝穩(wěn)定性和化合物作用的長度、患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥形式和時(shí)間、排泄速度、藥物組合、要治療癥狀的嚴(yán)重程度。例如，5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的劑量每日劑量分別可以是每千克體重約0.001-150mg，優(yōu)選每千克體重約0.01-100mg，特別是每千克體重約0.1-50mg，它們可以單劑或多劑給藥，例如每劑月0.01mg至約1g。通常，這種合并劑量用于口服，但是也可以選擇例如非腸道或直腸給藥。片劑聯(lián)合配方的例子可以是(A)雙獨(dú)立片的形式，1片含有10mg、20mg或50mg 5-HT2C受體激動劑，1片含有10mg、20mg或50mg 5-HT6受體拮抗劑；或(B)一個復(fù)合片，含有10mg、20mg或50mg 5-HT2C受體激動劑和10mg、20mg或50mg 5-HT6受體拮抗劑。
現(xiàn)通過下述非限制性的實(shí)驗(yàn)部分進(jìn)一步具體說明本發(fā)明。
實(shí)驗(yàn)部分A.試驗(yàn)化合物的制備如WO 00/76984所述制備5-HT2C受體激動劑游離堿(2R)-甲基-1-{3-[2-(3-吡啶基氧基)乙氧基]-2-哌嗪基}哌嗪延胡索酸鹽(“PNU-183933F”)。游離堿轉(zhuǎn)化為其延胡索酸鹽的形式，m.p.126-129℃。MS m/z 315(M)+。Anal.(C16H21N5O2·C4H4O4)C，H，N。
如WO 01/05793所述制備5-HT6受體拮抗劑6-甲基-9-(苯基磺?；?-1，2，3，4，5，6-六氫丫庚因并[4，5-b]吲哚，鹽酸鹽(“PUN-186053A”)。
如WO 00/76984所述制備5-HT2C受體激動劑。(2R)-1-(3-{2-[(2-乙氧基-3-吡啶基)氧基]乙氧基}-2-吡嗪基)2-甲基哌嗪，延胡索酸鹽(“BVT.2938F”)。
如2000年10月20日提交的瑞典專利申請No.0003810-9中所述制備5-HT6受體拮抗劑1-(苯基磺酰基)-4-(1-哌嗪基)-1H-吲哚，鹽酸鹽(“BVT.5182C”)。簡而言之，BVT.5182C根據(jù)下述反應(yīng)式1所示的一般過程制備，從可從市場購買的4-哌嗪基吲哚(化合物1)開始，進(jìn)行步驟(a)至(C)，得到1-(苯基磺酰基)-4-(1-哌嗪基)-1H-吲哚，鹽酸鹽(產(chǎn)率80％)。HPLC純度(P10框1)。
1H NMR(DMSO-d6)δ9.64(br s，2 H)，8.00-7.85(m，3 H)，7.79(d，J＝3.77Hz，1H)，7.70-7.65(m，1H)，7.63-7.60(m，3H)，7.27-7.22(m，1H)，6.95(d，J＝3.76Hz，1H)，6.81-6.77(m，1H)，3.30-3.20(m，4H)；13C NMR(DMSO-d6)δ144.79，137.02，135.22，134.62，129.82，126.85，125.63，125.54，123.49，111.15，107.87，107.76，47.81，42.86；MS(posES-FIA) m/z 342(M+H).
反應(yīng)式1 步驟(a)哌嗪N4氮的BOC保護(hù)4-哌嗪基吲哚(1eq)、DMAP(0.1eq)和Et3N(4eq)溶于DMF。加入(BOC)2O(1.1eq)，反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?12小時(shí))。蒸出DMF，殘留物通過色譜在硅膠上提純，使用氯仿、甲醇和氨的混合物作為洗脫液。HPLC100％純度。MS m/z 302.2(M+H)。
步驟(b)中間體3的制備中間體2(1.0eq)溶于DMF中，加入NaH(1.3eq)，懸浮液在氮?dú)鈿夥障聰嚢?.5小時(shí)。加入苯磺酰氯(1.2eq)，反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^夜。蒸出揮發(fā)性物質(zhì)。殘余物溶于DCM，用飽和NaHCO3溶液洗滌，干燥(MgSO4)，過濾，濃縮，得到油狀殘留物，通過色譜在硅膠上提純，用己烷和乙酸乙酯(7∶3)的混合物作為洗脫液，得到4-[1-(苯磺?；?-1H-吲哚-4-基]-1-哌嗪羧酸丁酯(3)。HPLC 100％。NMR(1H和13C)和MS分析確認(rèn)了所述結(jié)構(gòu)。
步驟(c)除去BOC保護(hù)基中間體3上的BOC基團(tuán)通過將化合物溶于甲醇，然后加入HCl氣體飽和的乙醚。過濾并干燥HCl鹽(4)。
B.藥物組合物的制備片劑成分 mg/片1 5-HT2C受體激動劑 10.02 5-HT6受體拮抗劑10.03 微晶纖維素 57.04 磷酸氫鈣15.05 淀粉羥乙酸鈉5.06 膠態(tài)二氧化硅0.257 硬脂酸鎂0.75活性成分1和2與成分3、4、5和6混合約10分鐘。然后加入硬脂酸鎂(7)，生成的混合物混合約5分鐘，壓制成有或沒有膜包覆的片。
C.受體親和力和效能分析
5-HT2C受體親和力分析5-HT2C受體親和力在競爭試驗(yàn)中測定，其中通過在閃爍計(jì)數(shù)器中測量在玻璃纖維過濾器上過的膜勻化物的活性技術(shù)監(jiān)測系列稀釋度化合物代替結(jié)合在通過穩(wěn)定表達(dá)人5-HT2C受體蛋白的轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞系制備的膜上的3H-標(biāo)記的5-HT的能力。用5μM米安色林確定非特異性結(jié)合。
5-HT2A受體親和力分析5-HT2A受體親和力在競爭試驗(yàn)中測定，其中通過在閃爍計(jì)數(shù)器中測量在玻璃纖維過濾器上過的膜勻化物的活性技術(shù)監(jiān)測系列稀釋度化合物代替結(jié)合在通過穩(wěn)定表達(dá)人5-HT2A受體蛋白的轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞系制備的膜上的3H-標(biāo)記的ketanserin或麥角酸酰二乙胺(LSD)的能力。用5μM米安色林確定非特異性結(jié)合。
5-HT2B受體親和力分析5-HT2B受體親和力在競爭試驗(yàn)中測定，其中用閃爍接近分析(SPA)技術(shù)監(jiān)測系列稀釋度化合物代替結(jié)合在通過穩(wěn)定表達(dá)人5-HT2B受體蛋白的轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞系制備的膜上的3H-標(biāo)記的5-HT的能力。用5μM米安色林確定非特異性結(jié)合。
5-HT2C受體效能分析在5-HT2C受體的激動劑效能通過用鈣螯合熒光染料FLUO-3(Sigma，St.Louis，MO，U.S.A)測定化合物在穩(wěn)定表達(dá)人5-HT2C受體蛋白的轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞中松動細(xì)胞內(nèi)鈣的能力確定。相對于1μM血清素，測定相對效能(％)。
5-HT6受體親和力分析放射性配體結(jié)合分析使用[3H]-1麥角酰二乙胺(LSD)。分析在96-孔樣品板上進(jìn)行，加入11μl適當(dāng)稀釋度的試驗(yàn)化合物(分析使用雙份的11個系列濃度的樣品)，11μl放射性配體，以及178μl洗過的WGA-涂敷的SPA珠，在結(jié)合緩沖劑中的膜用含有克隆人5-HT6受體的HEK293-細(xì)胞制備。將板振動約5分鐘，然后在室溫培養(yǎng)1小時(shí)。然后將板加載到計(jì)數(shù)暗盒中，在閃爍計(jì)數(shù)器中計(jì)數(shù)。得到的特定結(jié)合cpm用GraphPad Prism ver.2.0調(diào)整到一-位點(diǎn)結(jié)合模型。用Cheng Prusoff方程將評價(jià)的IC50值轉(zhuǎn)化為Ki值(親和常數(shù))(Cheng，Y.C.等人，Biochem.Pharmacol.1973，22，3099-3108)。
5-HT6受體效能分析在5-HT6受體的拮抗劑效能用cAMP SPA直接螢光分析系統(tǒng)(RPA559，Amersham Pharmacia Biotech，Uppsala，Sweden)測定化合物在穩(wěn)定表達(dá)人5-HT6受體蛋白的轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞中對由5-HT導(dǎo)致的cAMP增加的拮抗能力確定。
D.進(jìn)食實(shí)驗(yàn)試驗(yàn)化合物5-HT2C受體激動劑(2R)-甲基-1-{3-[2-(3-吡啶基氧基)乙氧基]-2-哌嗪基}哌嗪延胡索酸鹽(“PNU-183933F”)和(2R)-1-(3-{2-[(2-乙氧基-3-吡啶基)氧基]乙氧基}-2-吡嗪基)-2-甲基哌嗪，延胡索酸鹽(“BVT.2938F”)溶于鹽水(0.9％NaCl)，在相同的載體中稀釋至合適的濃度。
5-HT6受體拮抗劑6-甲基-9-(苯基磺酰基)-1，2，3，4，5，6-六氫丫庚因并[4，5-b]吲哚鹽酸鹽(“PNU-186053A”)和1-(苯基磺?；?-4-(1-哌嗪基)-1H-吲哚鹽酸鹽(5-HT6受體拮抗劑(“BVT.5182C”)在25％環(huán)糊精中溶解并稀釋。
在處理的當(dāng)天配制新鮮的溶液。
動物使用8-9周齡平均體重45g的雄性小鼠(C57BL/6JBom-Lepob(ob/ob)，Bomholtsgaard，Denmark)。動物單獨(dú)關(guān)在籠中，溫度23±1℃，濕度40-60％，可自由飲水并食用標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室食物。確立12/12h明/暗循環(huán)，在5p.m.關(guān)燈。在開始研究前，動物至少習(xí)慣1周。在試驗(yàn)期間，動物得到特別的食物(BioServ，F(xiàn)renchtown，NJ，USA無塵精顆粒，每粒重20mg)。
實(shí)驗(yàn)部分在研究的開始，動物轉(zhuǎn)移到特殊的籠“operant試驗(yàn)籠”中(Habitest Modular Animal Behavior Test System；Colbourn Instr，Allentown，PA，USA)。這些籠包括一個喂食槽，其具有用于測量食物攝取的傳感器；一個用于記錄水?dāng)z取量的光學(xué)lickometer；以及一個基于紅外線的監(jiān)測器，用于記錄所有一般的運(yùn)動活動。監(jiān)測器與計(jì)算機(jī)相連，計(jì)算機(jī)連續(xù)地控制并監(jiān)測情況。稱量出用于整個研究所需量的食物顆粒，水瓶注滿新鮮的自來水并稱重。動物在它們的新環(huán)境中適應(yīng)3天以建立基準(zhǔn)值。動物在開始和結(jié)束研究時(shí)在3p.m.稱重。在黑暗開始前，在4.20和5.00p.m.投喂化合物。三組動物分別接受(i)在25％環(huán)糊精中的5-HT6受體拮抗劑；(ii)在鹽水中的5-HT2C受體激動劑；和(iii)聯(lián)合的5-HT2C受體激動劑/5-HT6受體拮抗劑。當(dāng)聯(lián)合使用時(shí)，5-HT6受體拮抗劑或鹽水在5-HT2C受體激動劑或25％環(huán)糊精給藥前30分鐘投喂。第四組以相同的方法分別投喂載體。研究在第5天結(jié)束。用計(jì)算機(jī)輔助Mettler-Toledo PR5002/PR802稱進(jìn)行稱重。
結(jié)果的評價(jià)每個劑量組包括12-16只動物。在22小時(shí)期間基于稱重的泄漏量校正食物泄漏量數(shù)據(jù)，并且假定其是按照基于時(shí)間的比例的。在處理之前和之后計(jì)算數(shù)據(jù)。在處理前和3小時(shí)(5pm-8pm)、6小時(shí)(5pm-11pm)、12小時(shí)(5pm-5am)、21小時(shí)(5pm-2pm)之間食物攝取之間的差以基本攝食量的％數(shù)值(平均值±SEM)表示。
附圖1所示的結(jié)果指出，用5-HT6受體拮抗劑“PNU-186053A”(50mg/kg皮下)和5-HT2C受體激動劑“PNU-183933F”(50mg/kg口服)聯(lián)合處理所降低的食物消耗明顯高于使用單一化合物。相應(yīng)地，附圖2所示的結(jié)果指出，用5-HT2C受體激動劑“BVT.2938F”(5mg/kg皮下)和5-HT6受體拮抗劑“BVT.5182C”(3mg/kg皮下)聯(lián)合處理在給藥后12和21小時(shí)所降低的食物消耗明顯高于使用單一化合物。因此，顯然用5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑聯(lián)合治療對食物攝取量的降低明顯比單獨(dú)使用激動劑或拮抗劑治療更有效。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包括有效量的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑或所述激動劑和/或拮抗劑的鹽、對映體或前藥形式的結(jié)合，以及任選的藥學(xué)可接受的載體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其中分別相對于5-HT2A、5-HT2B和5-HT6受體，5-HT2C受體激動劑對5-HT2C受體的選擇性至少為10，優(yōu)選至少20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的藥物組合物，其中分別相對于5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C受體，5-HT6受體拮抗劑對5-HT6受體的選擇性至少為10，更優(yōu)選至少20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3的藥物組合物，其中5-HT2C受體激動劑是芳基哌嗪化合物，諸如哌嗪基吡嗪化合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的藥物組合物，其中5-HT6受體拮抗劑選自丫庚因并吲哚化合物，諸如芳基砜取代的六氫丫庚因并吲哚和芳基磺酰基吲哚化合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的藥物組合物，其中5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑以治療量結(jié)合，與藥學(xué)可接受的載體均勻混合。
7.一種含有5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑的產(chǎn)品，其作為聯(lián)合制劑在與5-HT2C受體和5-HT6受體相關(guān)的疾病的治療中同時(shí)、分別或相繼使用。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的產(chǎn)品，其中疾病選自飲食失調(diào)、CNS失調(diào)、尿失禁和青光眼。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的產(chǎn)品，其中疾病是體重過重或肥胖。
10.5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑在制備藥物中的用途，所述的藥物用于治療與5-HT2C受體和5-HT6受體相關(guān)的疾病。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的用途，其中疾病選自飲食失調(diào)、CNS失調(diào)、尿失禁和青光眼。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用途，其中疾病是體重過重或肥胖。
13.預(yù)防或治療與5-HT2C受體和5-HT6受體相關(guān)的疾病的方法，包括給需要的人或動物施用足以提供治療效果的5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中疾病選自飲食失調(diào)、CNS失調(diào)、尿失禁和青光眼。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其中疾病是體重過重或肥胖。
16.根據(jù)權(quán)利要求13、14或15的方法，其中5-HT2C受體激動劑和5-HT6受體拮抗劑作為聯(lián)合藥物組合物給藥。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種預(yù)防或治療與5－HT
文檔編號A61P13/02GK1443162SQ0181315
公開日2003年9月17日 申請日期2001年7月19日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月21日
發(fā)明者S·喬森, B·M·尼爾森, K·S·薩克里爾森, J·斯瓦騰格林 申請人:比奧維特羅姆股份公司