一種α-淀粉酶AmyASS及其在生淀粉降解中的應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種α-淀粉酶，該酶的基因序列如SEQ?ID?NO:2所示；該基因序列編碼的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；該基因序列SEQ?ID?NO:2能夠在大腸桿菌中成功的表達出包涵體形式的α-淀粉酶。通過本發(fā)明包涵體復性方法獲得的α-淀粉酶，蛋白純度達到85%以上，復性率達到50%以上；本發(fā)明α-淀粉酶可用于快速降解生淀粉，尤其適用于降解大米生淀粉。
【專利說明】—種Ct -淀粉酶AmyASS及其在生淀粉降解中的應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地說是一種海洋細菌來源的α -淀粉酶AmyASS的包涵體形式的重組表達、包涵體復性獲取具有催化活性的α -淀粉酶及其在大米生淀粉降解中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002]α-淀粉酶是一種在α-1,4糖苷鍵上切斷糖鏈，降解淀粉的酶。α -淀粉酶在各個工業(yè)領(lǐng)域如釀造、纖維、制藥、洗滌劑和食品工業(yè)有著廣泛的應用。天然的生淀粉顆粒具有復雜致密的結(jié)構(gòu)。葡萄糖分子通過糖苷鍵形成長鏈，長鏈折疊成結(jié)晶和無定型兩種結(jié)構(gòu)，然后這兩種結(jié)構(gòu)交織形成天然的生淀粉顆粒。因此，天然的生淀粉顆粒不能被普通的淀粉降解酶直接降解。傳統(tǒng)的淀粉降解都需要包括淀粉糊化和淀粉酶解兩步。只有先利用高溫糊化破壞生淀粉顆粒的結(jié)構(gòu)，促使生淀粉的結(jié)晶結(jié)構(gòu)打開，也就是生淀粉變?yōu)槭斓矸?，淀粉長鏈才能被淀粉降解酶有效切斷。淀粉糊化是一個非常耗能的過程，因此，如果采用一種特殊的能直接降解生淀粉的淀粉酶對淀粉進行降解，省去淀粉糊化環(huán)節(jié)，可以極大的節(jié)約能耗，降低生產(chǎn)成本，還能將傳統(tǒng)工藝合二為一，縮短處理時間。約10%的α-淀粉酶具有這種獨特的生淀粉降解活性，它們絕大多數(shù)來自陸地生物。這些目前為止只有三個來自海洋細菌的α -淀粉酶被報道具有生淀粉降解活性，分別為來自Bacillus sp.ALSHL3和B.aquimaris MKSC6.2以及來自海洋宏基因組文庫的屬于最新建立的糖苷水解酶亞家族GHl3 — 37 的 α -淀粉酶(AmyP)。
[0003]盡管已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了不少具有生淀粉降解能力的α-淀粉酶，但是這些α-淀粉酶都主要是對生小麥淀粉和生玉米淀粉具有良好的降解能力。大米是我們東南亞國家的主要糧食作物，大米淀粉在食品、化工和醫(yī)藥等行業(yè)具有廣泛的應用價值。但是大米淀粉的降解研究和實際應用遠沒有小麥淀粉和玉米淀粉深入。一個重要的原因是具有生大米淀粉降解能力的α-淀粉酶比較少見。目前文獻報道中，一共僅有10個α-淀粉酶能夠直接降解天然的大米生淀粉。但是這些酶的降解效率低，而且需要24小時以上的長時間反應。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種能夠優(yōu)勢降解大米生淀粉的α -淀粉酶，以彌補現(xiàn)有技術(shù)存在的不足之處。
[0005]本發(fā)明提供了編碼所述α -淀粉酶的基因序列，序列為SEQ ID NO: 2 ;該基因序列編碼的氨基酸序列為SEQ ID NO:1。該氨基酸序列僅比NCBI中序列號ΥΡ_001143410的氨基酸序列少了 N端26個氨基酸，相似性為98.8% ;但是基因序列SEQ ID NO:2與NCBI中序列號ΥΡ_001143410的氨基酸序列對應的基因序列相似性僅為64.5%。該基因序列SEQ IDNO:2能夠在大腸桿菌中成功的表達出包涵體形式的α -淀粉酶。
[0006]本發(fā)明提供了表達上述α-淀粉酶包涵體的重組質(zhì)粒，是將基因序列為SEQ IDNO: 2的核苷酸片段插入到表達載體pColdIII中。[0007]本發(fā)明提供了攜帶表達上述α -淀粉酶包涵體的重組菌。
[0008]本發(fā)明提供了上述重組菌表達出α-淀粉酶包涵體的誘導表達條件。
[0009]本發(fā)明提供了上述α -淀粉酶包涵體復性方法。使無生物活性的α -淀粉酶包涵體轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂写呋钚缘摩?淀粉酶，即以可溶性淀粉為底物時能檢測到酶活。包括包涵體的洗滌液，溶解液和透析液的組成，以及整個復性過程中的溫度和復性前α -淀粉酶的濃度。
[0010]復性方法:
[0011]I)將α-淀粉酶包涵體用洗滌液洗滌1-2次，去離子水洗滌I次，所述洗滌液組成為 ρΗ8.0 的終濃度 50mM Tris-HCl buffer、終濃度 5mM EDTA，和終濃度 1% (v/v)TritonX-100 ；
[0012]2)將經(jīng)步驟I)洗漆后的α -淀粉酶包涵體用溶解液溶解,使包涵體溶解后的蛋白濃度為280-320 μ g/ml，所述溶解液的組成為終濃度6M GdmCl, pH6.0的終濃度IOOmMTris-HCl buffer,終濃度 IOOmM NaCl,終濃度 IOOmM dithiothreitol 和終濃度 ImM EDTA ；然后在4°C條件下放置24小時，其間每隔3小時震蕩一次，以促進包涵體的溶解；溶解后，12000r/min離心20分鐘，去除少量依舊無法溶解的包涵體沉淀，取上清液；
[0013]3) 將步驟2)所獲得的上清液裝入透析袋，進行透析復性；透析采用4種不同的透析液，每隔12小時更換一種透析液，整個透析過程在4°C進行；第一次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer，終濃度10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mM EDTA和終濃度4M GdmCl ;第二次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer、終濃度 10%(v/v)甘油、終濃度 50mM NaCl、終濃度 0.5mM EDTA 和終濃度2M GdmCl ;第三次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer、終濃度10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mM EDTA、終濃度IM GdmCl、終濃度2%L-arginine、終濃度ImM GSSG和終濃度5mM GSH ;第四次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer、終濃度 10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mM EDTA、終濃度2%L-arginine、終濃度ImM GSSG和終濃度5mM GSH ;透析結(jié)束后，將透析袋中的蛋白液體取出，12000r/min、4°C離心20分鐘,去除少量依舊無法復性的包涵體沉淀,取上清即為恢復了催化活性的α-淀粉酶。
[0014]本發(fā)明上述α -淀粉酶可用于降解各種生淀粉，如生大米淀粉、生小麥淀粉、生玉米淀粉、生土豆淀粉、生豌豆淀粉和生綠豆淀粉，在降解生大米淀粉時，其活性高于其他種類生淀粉活性的一倍以上。
[0015]本發(fā)明α-淀粉酶降解生淀粉時:降解生淀粉反應體系的pH值為4.5-9.5，最適pH為6.0 ;生淀粉的濃度為12-25%，最適濃度為12% ;反應溫度為10_70°C，最適溫度為40°C;反應時間為6小時。當反應體系中含有終濃度5mM的CaCl2時，底物為大米生淀粉時，其酶活顯著提高為230%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0016]圖1表示了本發(fā)明的α -淀粉酶的pColdll1-AmyASS質(zhì)粒圖譜
[0017]圖2表示了本發(fā)明的α-淀粉酶的反應pH曲線
[0018]圖3表示了本發(fā)明的α-淀粉酶的反應溫度曲線[0019]圖4表示了本發(fā)明的α -淀粉酶的40°C時的溫度穩(wěn)定性曲線
[0020]圖5表示了本發(fā)明的α -淀粉酶對各種生淀粉的降解活性比較圖
[0021]圖6表示了本發(fā)明的α -淀粉酶對不同濃度的生大米淀粉的降解活性比較圖
[0022]圖7表示了本發(fā)明的α-淀粉酶降解12%生大米淀粉的時間曲線
[0023]圖8表示了本發(fā)明的α -淀粉酶在不同濃度的CaCl2時降解12%生大米淀粉的活性比較圖
【具體實施方式】
[0024]以下實施例中所使用的化學試劑均為現(xiàn)有公知試劑，化學試劑縮寫表如下:EDTA(乙二胺四乙酸二鈉鹽)；Triton X-100 (聚乙二醇辛基苯基醚)GdmCl (鹽酸胍)；NaCl (氯化鈉)；dithiothreitol (DTT, 二硫蘇糖醇)L - arginine (L-精氨酸)；GSSG (氧化型谷胱甘肽)；GSH (還原型谷胱甘肽)。
[0025]實施例1
[0026]α -淀粉酶AmyASS的基因合成
[0027]根據(jù)NCBI中公布的海洋魚類的病原菌殺鮭氣單胞菌殺鮭亞種(Aeromonassalmonicida ssp.salmonicida)的全基因組信息，找到一個“假定糖苷水解酶家族蛋白”(氨基酸序列號YP_001143410)。該AmyASS蛋白的氨基酸與已經(jīng)實驗鑒定的α -淀粉酶AmyP(Liu et al.2012)相似性為50%，被推測為一個α -淀粉酶。將AmyASS蛋白N端的預測為信號肽的26個氨基酸去除，并根據(jù)大腸桿菌的`密碼子偏好性重新設計了基因序列。該基因序列與“假定糖苷水解酶家族蛋白”在NCBI中公布的基因序列(基因序列號NC_009348.1)相似性僅為64.5%。在該基因兩端加NdeI和XhoI限制酶切位點。將該基因的文本序列送至生物公司(上海生工生物科技有限公司)合成。合成的AmyASS基因序列克隆在載體pUC57上，插入位點為T-A克隆，受體菌為大腸桿菌DH5a菌株。其中本發(fā)明的α-淀粉酶AmyASS的核苷酸序列為SEQ ID NO:2，氨基酸序列為SEQ ID N0:1。
[0028]實施例2
[0029]a -淀粉酶AmyASS包涵體的重組表達
[0030]將包含a -淀粉酶AmyASS基因的pUC57載體和冷激休克表達載體pCold III分別進行了 NdeI和XhoI位點的雙酶切后，將AmyASS基因連接到pCold親體上，獲得重組表達質(zhì)粒pColdll1-AmyASS,如圖1所示。將質(zhì)粒pColdlll-AmyASS轉(zhuǎn)入大腸桿菌BL21細胞,在含有50ug/ml氨芐青霉素的LB液體培養(yǎng)基中，200r/min，37°C培養(yǎng)。當大腸桿菌培養(yǎng)液的0D600達到0.5左右時，將培養(yǎng)液急驟降溫至16°C，并加入ImM IPTG，然后在16°C、120rpm過夜培養(yǎng)。在該培養(yǎng)過程中將產(chǎn)生包涵體形式的α-淀粉酶AmyASS。8000r/min離心5分鐘收集16°C過夜培養(yǎng)的大腸桿菌細胞，將大腸桿菌重懸于50mM Tris-HCl buffer(pH8.0),超聲破碎，直至渾濁的大腸桿菌細胞懸液變?yōu)榍辶恋囊后w。3000r/min離心5分鐘，取上清棄沉淀。上清液體在12000r/min離心20分鐘，獲得的沉淀即為a -淀粉酶AmyASS包涵體。
[0031]嘗試過各種優(yōu)化重組表達的方法，均無法實現(xiàn)該a -淀粉酶AmyASS的基因序列在大腸桿菌中表達為具有催化活性的可溶性蛋白。該基因序列只能表達為無催化活性的包涵體。另外，“假定糖苷水解酶家族蛋白”在NCBI中公布的基因序列(基因序列號NC_009348.1)克隆到表達載體pET20b和pColdIII中，均無法在大腸桿菌中表達出任何蛋白。
[0032]實施例3
[0033]α -淀粉酶AmyASS包涵體的復性
[0034]包涵體復性是指在將無生物活性的包涵體形式的蛋白轉(zhuǎn)化成有生物活性的蛋白。將 α -淀粉酶AmyASS包涵體用洗滌液(50mM Tris-HCl buffer,pH8.0,5mM EDTA, l%TritonX-100)洗滌2次,去離子水洗滌I次,用溶解液溶解包涵體,要求包涵體溶解后的蛋白濃度約為300 μ g/ml，根據(jù)此蛋白濃度要求，加入一定量的溶解液。溶解液的成分為6M GdmCl,IOOmM Tris-HCl buffer, pH6.0, pH6.0,IOOmM NaCl,IOOmM dithiothreitol,ImM EDTA。然后在4°C條件下放置24小時，其間每隔3小時震蕩一次，以促進包涵體的溶解。溶解后，12000r/min離心20分鐘，去除少量依舊無法溶解的包涵體沉淀，取上清，裝入透析袋，進行透析復性。一共采用了 4種不同的透析液，每隔12小時更換一種透析液，整個透析過程在4°C進行。第一次使用的透析液成分為50mM Tris-HCl buffer (pH8.0)、10%(v/v)甘油、50mM NaCl、0.5mM EDTA 和 4M GdmCl ;第二次使用的透析液成分為 50mM Tris-HCl buffer(pH8.0),10%(v/v)甘油、50mM NaCl、0.5mM EDTA 和 2M GdmCl ;第三次使用的透析液成分為 50mM Tris-HCl buffer (pH8.0),10%(v/v)甘油、50mM NaCl、0.5mM EDTAUM GdmCl、2%L-arginine、lmM GSSG 和 5mM GSH ;第四次使用的透析液成分為 50mM Tris-HCl buffer(pH8.0),10%(v/v)甘油、50mM NaCl、0.5mM EDTA、2%L_arginine、ImM GSSG 和 5mM GSH。透析結(jié)束后，將透析袋中的蛋白液體取出，12000r/min、4°C離心20分鐘，去除少量依舊無法復性的包涵體沉淀，取上清即為恢復了催化活性的α -淀粉酶AmyASS。
[0035] 采用上述方法獲得的α -淀粉酶AmyASS，蛋白純度達到至少85%以上，復性率達到至少50%以上。
[0036]實施例4
[0037]α -淀粉酶的活性測定
[0038]α-淀粉酶的活性采用3，5_ 二硝基水楊酸(DNS)法測定。該方法是檢測淀粉水解后釋放出的還原糖量，標準曲線以還原糖葡萄糖為標準測定。一個標準反應體系包括40 μ I酶液和560 μ I的1%可溶性淀粉或生淀粉(生淀粉濃度依據(jù)不同情況設置)。淀粉均配置在IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ρΗ6.0)中。酶與淀粉在40°C反應10分鐘，立即加入300 μ IDNS溶液，置于預冷的0.3Μ Na2CO3溶液中5分鐘。當?shù)孜餅榭扇苄缘矸蹠r，直接在沸水中煮15分鐘，然后在A540nm測定吸光值。當?shù)孜餅樯矸蹠r，需要先4°C 12000r/min離心5分鐘，取上清在沸水中煮15分鐘，然后在A540nm測定吸光值。一個標準酶活單位(U)定義為每分鐘釋放出I μ mol還原糖所需的酶量。以1%可溶性淀粉為底物時，酶的比活為45U/mg ;以12%生大米淀粉為底物時，酶的比活為30U/mg。
[0039]實施例5
[0040]α -淀粉酶AmyASS對各種生淀粉的降解活性比較
[0041]將生大米淀粉、生小麥淀粉、生玉米淀粉、生土豆淀粉、生豌豆淀粉和生綠豆淀粉配置在IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ρΗ6.0)中，濃度為4%。根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖6所示。α -淀粉酶AmyASS可以降解生大米淀粉、生小麥淀粉和生綠豆淀粉，不能降解生玉米淀粉、生土豆淀粉和生豌豆淀粉。α -淀粉酶AmyASS對生大米淀粉的活性最高，至少是生小麥淀粉的5倍和生綠豆淀粉的2.5倍。[0042]實施例6
[0043]α -淀粉酶AmyASS對生大米淀粉的降解
[0044](I)作用pH范圍和最適作用pH
[0045]將可溶性淀粉分別用不同pH的緩沖液配置，濃度為PkpM.0-6.0采用的是IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液；pH7.0-8.0采用的是IOOmM磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液；pH9.0-10.0采用的是IOOmM甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液。在40°C根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖2所示。α -淀粉酶AmyASS在ρΗ4.5-9.5起作用，最適作用pH為6.0。
[0046](2)作用溫度范圍和最佳作用溫度
[0047]根據(jù)實施例4描述的方法，在10_70°C分別測定α -淀粉酶AmyASS的活性，結(jié)果如圖3所示。α-淀粉酶AmyASS在10-70°C范圍內(nèi)均起作用，最適作用溫度為40°C。
[0048](3)溫度穩(wěn)定性
[0049]將α -淀粉酶AmyASS加入IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ρΗ6.0)中，在40°C孵育24小時，在此期間，每隔一定時間取出40 μ I酶液，根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖4所示。α -淀粉酶AmyASS在40°C非常穩(wěn)定，24小時孵育后它表現(xiàn)出不低于70%的剩余酶活。
[0050](4)大米生淀粉的濃度
[0051]將大米生淀粉配置在IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH6.0)中，濃度分別為4、
8、12、16和20%，根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖6所示。在較低的大米生淀粉濃度時，α -淀粉酶AmyASS的活性`隨著大米生淀粉濃度的增加而增加，最佳降解濃度為12%。大米生淀粉濃度超過12%后，α-淀粉酶AmyASS的活性出現(xiàn)下降，表現(xiàn)出高底物濃度的抑制效應。α -淀粉酶AmyASS能降解的最高大米生淀粉濃度為25%。
[0052](5)反應時間
[0053]將大米生淀粉配置在8ml IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(pH6.0)中，濃度為12%，加入0.2%甲苯防止微生物污染，加入600 μ I酶液，在40°C反應8小時，在此期間，每隔一定時間取出600 μ I反應液，立即加入300 μ I DNS溶液，根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖7所示。在反應的初始階段，降解大米生淀粉產(chǎn)生的還原糖量隨著時間急劇增加；30分鐘后，還原糖量的增加速度明顯減緩；6小時后，還原糖量維持不變。這表明，α-淀粉酶AmyASS在6小時內(nèi)完成對生大米淀粉的水解。
[0054](6)添加 CaCl2
[0055]將大米生淀粉配置在IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ρΗ6.0)中，濃度為12%，在反應體系中分別添加0、3、5、8、10mM CaCl2，根據(jù)實施例4描述的方法測定酶活，結(jié)果如圖8所示。CaCl2的存在可以顯著提高α-淀粉酶AmyASS降解大米生淀粉的活性，CaCl2的最佳添加濃度為5mM，α -淀粉酶AmyASS的活性至少提高為無添加時的2.3倍。
[0056](7)作用
[0057]用IOOmM檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ρΗ6.0)配置12%的大米生淀粉溶液，加入0.2%甲苯防止微生物污染，加入酶液，在40°C反應6小時。8000r/min離心5分鐘，取上清即為大米生淀粉的水解產(chǎn)物。水解產(chǎn)物的分析采用薄層層析法進行。展層體系為體積比3:1:1的異丙醇:乙酸乙酯:H20。層析結(jié)束后，均勻噴上苯胺-二苯胺磷酸，在85°C烤板10分鐘。結(jié)果表明α -淀粉酶AmyASS水解大米生淀粉的產(chǎn)物為葡萄糖、麥芽糖和麥芽三糖。
【權(quán)利要求】
1.一種α-淀粉酶，其特征在于，所述淀粉酶的基因序列如SEQ ID Ν0:2所示。
2.編碼權(quán)利要求1所述α-淀粉酶基因序列的氨基酸，其特征在于，所述氨基酸序列如SEQ ID NO:1 所示。
3.一種用于表達α-淀粉酶的重組表達質(zhì)粒，該質(zhì)粒至少包括權(quán)利要求1所述的基因。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述重組質(zhì)粒，其特征是該重組質(zhì)粒的載體為pColdIII。
5.一種產(chǎn)生α-淀粉酶包涵體的重組菌，該重組菌內(nèi)導入了權(quán)利要求2所述的基因。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述重組菌，其特征是該重組菌為大腸桿菌BL21菌株。
7.一種α-淀粉酶包涵體的復性方法，其特征是將權(quán)利要求5中獲得的α-淀粉酶包涵體按如下步驟進行: 1)將α-淀粉酶包涵體用洗滌液洗滌1-2次，去離子水洗滌I次，所述洗滌液組成為 ρΗ8.0 的終濃度 50mM Tris-HCl buffer、終濃度 5mM EDTA，和終濃度 1% (v/v) TritonX-1OO ； 2)將經(jīng)步驟I)洗滌后的α-淀粉酶包涵體用溶解液溶解，使包涵體溶解后的蛋白濃度為280-320 μ g/ml，所述溶解液的組成為終濃度6M GdmCl，pH6.0的終濃度IOOmM Tris-HClbuffer,終濃度 IOOmM NaCl,終濃度 IOOmM dithiothreitol 和終濃度 ImM EDTA ;然后在4°C條件下放置24小時，其間每隔3小時震蕩一次，以促進包涵體的溶解；溶解后，12000r/min離心20分鐘，去除少量依舊無法溶解的包涵體沉淀，取上清液； 3)將步驟2)所獲得的上清液裝入透析袋，進行透析復性；透析采用4種不同的透析液，每隔12小時更換一種透析液，整個透析過程在4°C進行；第一次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer，終濃度10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mMEDTA和終濃度4M GdmCl ;第二次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mM Tris-HClbuffer、終濃度10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mM EDTA和終濃度2M GdmCl ；第三次使用的透析液組成為PH8.0的終濃度50mM Tris-HCl buffer、終濃度10%(v/v)甘油、終濃度50mM NaCl、終濃度0.5mM EDTA、終濃度IM GdmCl、終濃度2%L_arginine、終濃度ImM GSSG和終濃度5mM GSH ;第四次使用的透析液組成為pH8.0的終濃度50mMTris-HCl buffer、終濃度 10%(v/v)甘油、終濃度 50mM NaCl、終濃度 0.5mM EDTA、終濃度2%L-arginine、終濃度ImM GSSG和終濃度5mM GSH ;透析結(jié)束后，將透析袋中的蛋白液體取出，12000r/min、4°C離心20分鐘，去除少量依舊無法復性的包涵體沉淀，取上清即為恢復了催化活性的α-淀粉酶。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的α-淀粉酶或根據(jù)權(quán)利要求7所述的具有催化活性的α-淀粉酶在生淀粉降解中的應用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所獲得的具有催化活性的α-淀粉酶在生淀粉降解中的應用，其特征是，所述生淀粉包括生大米淀粉、生小麥淀粉和生綠豆淀粉。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所獲得的具有催化活性的α-淀粉酶降解生淀粉的方法，其特征是:降解生淀粉反應體系的pH值為4.5-9.5 ;生淀粉的濃度為12-25% ;反應溫度為10-700C ;反應時間不超過6小時；反應體系中含有終濃度5mM的CaCl2。
【文檔編號】C12N9/28GK103710325SQ201410005765
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月6日
【發(fā)明者】彭惠, 王敏, 陳茂嬌, 鄭昀昀, 高毅 申請人:安徽大學