專利名稱：檢測喹乙醇代謝物的elisa試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及檢測喹乙醇代謝物殘留量的試劑盒，特別是檢測動物組織中喹乙醇代謝物殘留量的酶聯(lián)免疫檢測(ELISA)試劑盒，ELISA (Enzyme Linked ImmunosorbentAssay)是酶聯(lián)免疫吸附劑測定的簡稱，它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種酶免技術(shù)。
技術(shù)背景
喹乙醇(Olaquindox),又名快育靈、倍育諾(Bayonox)、奧拉金、喹酸胺醇、Fedan。分子式C12H13N304。是1965年由德國Bayer公司由2-甲基喹噁啉_1、4_ 二氧化物與乙醇胺縮合而成的淡黃色結(jié)晶性粉末，微溶于水。因其具有良好的廣譜抗菌效果尤其是對大腸桿菌、沙門氏桿菌等革蘭氏陰性致病菌所致的消化道疾病具有良好的治療效果，并且有促進(jìn)畜禽對飼料的消化利用，提高生長速度等作用而被廣泛應(yīng)用于飼料及飼料添加劑中。近年來在水產(chǎn)飼料中，喹乙醇曾一度被稱為“水產(chǎn)瘦肉精”，經(jīng)歷了從被忽略毒副作用到被客觀評價的過程。喹乙醇的毒性隨動物種屬不同存在較大差異，特別對禽和魚類，有中度至明顯蓄積毒性和一定遺傳毒性，對部分魚類有明顯致畸作用。喹乙醇的蓄積毒性不但能使動物發(fā)生中毒或死亡，且其可能殘留在畜產(chǎn)品中，對人體也有較大危害。因此，使用時，必須嚴(yán)格按其使用范圍、劑量濃度實(shí)行休藥期。鑒于喹乙醇的毒性和存在的潛在危害，因而人們重新對喹乙醇的安全性進(jìn)行評價，對喹乙醇的使用也做出了新的規(guī)定。美國沒有批準(zhǔn)使用；歐盟也從1999年開起始全面禁止使用喹乙醇；我國對喹乙醇使用的限制也更加嚴(yán)格。我國農(nóng)業(yè)部頒布的《動物性食品獸藥最高殘留限量》中也列入了喹乙醇。國家進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫局制定了肉中喹乙醇?xì)埩袅康臋z驗(yàn)方法《中華人民共和國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)出口肉中喹乙醇代謝物殘留量檢驗(yàn)方法SN 0197-93》也把雞飼料、飲水及魚飼料中的喹乙醇作為違禁藥物進(jìn)行監(jiān)督檢驗(yàn)。由于動物在攝食喹乙醇后，3-甲基-喹噁啉-2-羧酸(MQCA)是最后離開動物機(jī)體的代謝物，也是喹乙醇的標(biāo)示殘留物，所以在監(jiān)控喹乙醇?xì)埩魰r通常要分析其代謝產(chǎn)物MQCA的含量。目前的喹乙醇檢測方法多為色譜法，但是需要復(fù)雜昂貴的儀器，且樣品前處理過程繁瑣，不適應(yīng)現(xiàn)場大量樣本的篩查?；诳乖贵w免疫反應(yīng)的免疫學(xué)檢測技術(shù)為小分子殘留物的分析檢測提供了一個新的途徑。該技術(shù)研究的關(guān)鍵是半抗原分子的設(shè)計、合成和人工全抗原及抗體的制備。因?yàn)猷掖即x物是小分子化合物，本身沒有免疫原性，必須將其與大分子載體蛋白偶聯(lián)得到具有免疫原性的人工抗原。在此基礎(chǔ)上建立起來的酶聯(lián)免疫檢測試劑盒可快速、方便、準(zhǔn)確的檢測動物組織中的喹乙醇代謝物殘留，可為建立監(jiān)控動物源性食品中喹乙醇?xì)埩籼峁┘夹g(shù)支持
實(shí)用新型內(nèi)容
[0007]本實(shí)用新型所要解決的問題是提供一種小巧輕便的喹乙醇代謝物殘留量檢測試劑盒，其操作簡便，檢測快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，成本低，穩(wěn)定性好，需要的技術(shù)含量不高，可進(jìn)行一次連續(xù)多個樣品中喹乙醇代謝物殘留量的測定，減少了檢測樣本所需要的時間。本實(shí)用新型的技術(shù)方案是一種檢測喹乙醇代謝物的ELISA試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標(biāo)板、14瓶試劑,其特征在于酶標(biāo)板是米用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔中預(yù)包被喹乙醇代謝物偶聯(lián)抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶喹乙醇代謝物標(biāo)準(zhǔn)品溶液、酶標(biāo)二抗、抗體濃縮液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶工作液。檢測喹乙醇代謝物的ELISA試劑盒還包括一張蓋板膜和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋，其特征在于盒體是硬紙盒；96孔試劑板為聚苯乙烯酶標(biāo)板，放于真空鋁鉬袋內(nèi)；蓋板膜是塑料硬膜；標(biāo)準(zhǔn)品溶液和高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶標(biāo)二抗用紅色帽的白色PE塑料瓶，抗體濃縮液用綠色帽的白色PE塑料瓶，顯色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，顯色液B液用紅色帽的黑色PE塑料瓶，終止液用黃色帽的白色PE塑料瓶，濃縮洗滌液用透明帽的半透明PE塑料瓶，復(fù)溶工作液用藍(lán)色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位共15個，由塑料泡沫制成。酶標(biāo)板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個反應(yīng)孔，每個反應(yīng)孔預(yù)包被喹乙醇代謝物偶聯(lián)抗原；蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致；標(biāo)準(zhǔn)品溶液7瓶，ImL/瓶 ；酶標(biāo)二抗I瓶，12mL ;抗體濃縮液I瓶，ImL ;顯色液A液I瓶，7mL ;顯色液B液I瓶，7mL ;終止液I瓶，7mL ;濃縮洗滌液I瓶，40mL ;復(fù)溶工作液I瓶，lOOmL。經(jīng)實(shí)驗(yàn)表明本試劑盒具有很高的靈敏度動物組織樣本的最低檢測限為2. 0μ g/kg,回收率為95%土 15%，相對于其他喹乙醇代謝物檢測方法，本試劑盒所需儀器較少，且所需儀器同類實(shí)驗(yàn)室一般均有配備，所需成本較低。本實(shí)用新型的有益效果是能快速、簡便、靈敏、準(zhǔn)確地用于動物組織中喹乙醇代謝物殘留量的檢測。

圖I為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的側(cè)面縱剖面圖；圖2為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的側(cè)面橫剖面圖；圖3為本實(shí)用新型酶標(biāo)板的俯視圖；圖4為本實(shí)用新型蓋板膜平面圖；圖5為本實(shí)用新型試劑瓶縱剖面平面圖；圖6為本實(shí)用新型固定泡沫模具的俯視圖；圖7為本實(shí)用新型盒體與固定泡沫模具的側(cè)視圖。
具體實(shí)施方式
酶標(biāo)反應(yīng)微孔條2預(yù)包被喹乙醇代謝物偶聯(lián)抗原3固定于酶標(biāo)板的外框支撐架I上，酶標(biāo)反應(yīng)微孔條2可隨要求拆卸；蓋板膜4用于酶標(biāo)板置水浴或恒溫箱內(nèi)反應(yīng)時封蓋酶標(biāo)反應(yīng)微孔條2 ;透明帽的半透明塑料試劑瓶5用于封裝40mL濃縮洗滌液；藍(lán)色帽的半透明塑料試劑瓶5用于封裝IOOmL復(fù)溶工作液；白色帽6的白色塑料試劑瓶7用于封裝7mL顯色液A液，紅色帽6的黑色塑料試劑瓶7用于封裝7mL顯色液B液，黃色帽6的白色塑料試劑瓶7用于封裝7mL終止液，紅色帽的白色塑料試劑瓶8用于封裝12mL酶標(biāo)二抗，綠色帽的白色塑料試劑瓶8用于封裝ImL喹乙醇代謝物抗體濃縮液，黑色帽的白色塑料試劑瓶9用于封裝ImL/瓶的標(biāo)準(zhǔn)品溶液；泡沫塑料模具10有15個瓶位，放置位置依次為40mL
濃縮洗滌液瓶位18，IOOmL復(fù)溶工作液瓶位11，7mL顯色液A液瓶位14，7mL顯色液B液瓶位13，7mL終止液瓶位12，ImL喹乙醇代謝物抗體濃縮液瓶位16，7mL酶標(biāo)二抗瓶位15，7瓶ImL/瓶各種濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液瓶位17，盒體19是硬紙盒。
權(quán)利要求1.一種檢測喹乙醇代謝物的ELISA試劑盒，包括盒體和盒內(nèi)的一塊96孔的酶標(biāo)板、14瓶試劑，其特征在于酶標(biāo)板是采用96孔試劑板作為固相載體，在試劑盒微孔中預(yù)包被喹乙醇代謝物偶聯(lián)抗原制成的檢測板，14瓶試劑分別為7瓶喹乙醇代謝物標(biāo)準(zhǔn)品溶液、酶標(biāo)二抗、抗體濃縮液、顯色液A液、顯色液B液、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶工作液。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，還包括一張蓋板膜和放試劑的下凹瓶位、一個自封袋，其特征在于盒體是硬紙盒；96孔試劑板為聚苯乙烯酶標(biāo)板，放于真空鋁鉬袋內(nèi)；蓋板膜是塑料硬膜；標(biāo)準(zhǔn)品溶液和高濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液均用黑色帽的白色PE塑料瓶，酶標(biāo)二抗用紅色帽的白色PE塑料瓶，抗體濃縮液用綠色帽的白色PE塑料瓶，顯色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，顯色液B液用紅色帽的黑色PE塑料瓶，終止液用黃色帽的白色PE塑料瓶，濃縮洗滌液用透明帽的半透明PE塑料瓶，復(fù)溶工作液用藍(lán)色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位共15個，由塑料泡沫制成。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的試劑盒，其特征在于酶標(biāo)板是由外框支撐架及放置其上的可拆的12條酶標(biāo)反應(yīng)微孔條組成，每個可拆裝酶標(biāo)反應(yīng)微孔條有8個反應(yīng)孔，每個反應(yīng)孔預(yù)包被喹乙醇代謝物偶聯(lián)抗原；蓋板膜大小與酶標(biāo)板橫切面大小一致；標(biāo)準(zhǔn)品溶液7瓶，ImL/瓶；酶標(biāo)二抗I瓶，12mL ;抗體濃縮液I瓶，ImL ;顯色液A液I瓶，7mL ;顯色液B液I瓶，7mL ;終止液I瓶，7mL ;濃縮洗滌液I瓶，40mL ;復(fù)溶工作液I瓶，lOOmL。
專利摘要本實(shí)用新型涉及一種檢測喹乙醇代謝物的ELISA試劑盒。該試劑盒組成包括96孔酶標(biāo)板、酶標(biāo)二抗、喹乙醇代謝物抗體濃縮液、喹乙醇代謝物6個濃度的標(biāo)準(zhǔn)品溶液、底物顯色液、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶工作液、高濃度標(biāo)準(zhǔn)品、蓋板膜、自封袋、說明書和質(zhì)檢報告。采用間接競爭ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔中預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中含有的喹乙醇代謝物將和微孔中預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭結(jié)合抗喹乙醇代謝物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中喹乙醇代謝物的殘留量。與儀器分析技術(shù)相比具有使用方便、高靈敏度等特點(diǎn)，可在動物組織中喹乙醇代謝物的殘留量檢測中發(fā)揮重要作用。
文檔編號G01N33/545GK202794171SQ201220091509

公開日2013年3月13日 申請日期2012年3月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年3月13日
發(fā)明者何方洋, 萬宇平, 孫震, 馮靜, 羅曉琴, 崔海峰, 余厚美, 韓京朋, 段盈盈 申請人:北京勤邦生物技術(shù)有限公司