專利名稱：大豆抗大豆花葉病毒基因聚合及篩選的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及大豆抗大豆花葉病毒基因聚合及篩選的方法，具體來說，涉及與抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記的鑒定和開發(fā)結(jié)合分子標(biāo)記輔助抗性基因的選擇，得到攜帶3個(gè)抗性基因的大豆種質(zhì)。
背景技術(shù)：
大豆花葉病毒(Soybean mosaic virus, SMV)病是大豆生產(chǎn)上的一種世界性病害，嚴(yán)重影響大豆產(chǎn)量和品質(zhì)。由于它分布廣，危害重，化學(xué)藥劑難以防治，培育和種植抗病品種是防治該病害最經(jīng)濟(jì)、安全、有效的途徑。黃淮海流域是我國大豆的第二產(chǎn)區(qū)和夏大豆的最大產(chǎn)區(qū)，常年播種面積3000多 萬畝，而平均單產(chǎn)每畝不足130公斤。除了單產(chǎn)低以外，該地區(qū)存在的另一主要問題是大豆病毒病危害嚴(yán)重，導(dǎo)致大豆產(chǎn)量下降和品質(zhì)變劣。解決上述問題的有效途徑是培育高產(chǎn)抗病大豆新品種在生產(chǎn)上推廣應(yīng)用。大豆對(duì)SMV的抗性育種一般是利用單個(gè)抗性基因，日本、韓國和加拿大生產(chǎn)上發(fā)生的抗病品種抗性“喪失”的現(xiàn)象已經(jīng)引起育種家的高度重視。Saghai Maroof等(2008)和Shi等(2009)對(duì)SMV抗性基因Rsvl、Rsv3和Rsv4的聚合研究表明，聚合有2個(gè)或3個(gè)抗性基因的材料其抗性具有廣譜、持久的特性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明一方面涉及一種大豆抗大豆花葉病毒基因聚合及篩選的方法，其特征在于首先鑒定出分別攜帶不同抗性基因的3個(gè)抗性種質(zhì)齊黃I號(hào)、科豐I號(hào)和大白麻以及農(nóng)藝性狀較好的品種南農(nóng)1138-2，然后將齊黃I號(hào)與科豐I號(hào)和大白麻與南農(nóng)1138-2采用常規(guī)方法進(jìn)行雜交，獲得F1代，將兩個(gè)F1進(jìn)行復(fù)合雜交，種植復(fù)交F1代，自交后收獲F2代種子，自F2到F5代連續(xù)利用本發(fā)明確定的與抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記篩選3個(gè)抗大豆花葉病毒基因聚合的大豆植株。采用本發(fā)明的方法，獲得了攜帶3個(gè)SMV株系抗性基因的種質(zhì)。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，其特征所述的篩選方法是通過接種病毒3個(gè)株系的方法證實(shí)所得到的材料具有抗3個(gè)病毒株系的能力。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，其特征在于所篩選得到的大豆抗性材料是抗性基因已經(jīng)純合的大豆材料。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，其特征在于鑒定和開發(fā)出與3個(gè)抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，其特征在于自復(fù)合雜交的F2開始，連續(xù)利用分子標(biāo)記輔助選擇3個(gè)抗性基因聚合的后代材料。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式中，其特征在于所使用的分子標(biāo)記為
權(quán)利要求
1.一種大豆抗大豆花葉病毒基因聚合及篩選的方法，其特征在于首先鑒定出分別攜帶不同抗性基因的3個(gè)抗性種質(zhì)齊黃I號(hào)、科豐I號(hào)和大白麻以及南農(nóng)1138-2，然后將齊黃I號(hào)與科豐I號(hào)和大白麻與南農(nóng)1138-2采用常規(guī)方法進(jìn)行雜交，獲得F1代，將兩個(gè)F1進(jìn)行復(fù)合雜交，種植復(fù)交F1代，自交后收獲F2代種子，自F2到F5代連續(xù)利用本發(fā)明確定的與抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記篩選3個(gè)抗大豆花葉病毒基因聚合的大豆植株，所述的抗性基因?yàn)?RsC14Q、RsC8 和 RsC4。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征所述的篩選方法是通過接種病毒3個(gè)株系的方法證實(shí)所得到的材料具有抗3個(gè)病毒株系的能力。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征在于所篩選得到的大豆抗性材料是抗性基因已經(jīng)純合的大豆材料。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征在于鑒定和開發(fā)出與3個(gè)抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征在于自復(fù)合雜交的F2開始，連續(xù)利用分子標(biāo)記輔助選擇3個(gè)抗性基因聚合的后代材料。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的篩選方法，其特征在于所使用的分子標(biāo)記為
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征在于抗性基因選擇的步驟包括提取雜交后代材料的DNA，采用分子標(biāo)記進(jìn)行PCR擴(kuò)增以及對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳的步驟。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的篩選方法，其特征在于齊黃I號(hào)攜帶民。14(3抗性基因，科豐I號(hào)攜帶Rse8抗性基因，大白麻攜帶Rse4抗性基因。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種大豆抗大豆花葉病毒基因聚合及篩選的方法，其特征在于首先鑒定出分別攜帶不同抗性基因的3個(gè)抗性種質(zhì)齊黃1號(hào)、科豐1號(hào)和大白麻以及農(nóng)藝性狀較好的品種南農(nóng)1138-2，然后將齊黃1號(hào)與科豐1號(hào)和大白麻與南農(nóng)1138-2采用常規(guī)方法進(jìn)行雜交，獲得F1代，將兩個(gè)F1進(jìn)行復(fù)合雜交，種植復(fù)交F1代，自交后收獲F2代種子，自F2到F5代連續(xù)利用本發(fā)明確定的與抗性基因緊密連鎖的分子標(biāo)記篩選3個(gè)抗大豆花葉病毒基因聚合的大豆植株。本發(fā)明能夠同時(shí)對(duì)3個(gè)抗性基因進(jìn)行選擇，減少了抗病育種選擇的盲目性，能較快地選擇到純合的多個(gè)抗性基因聚合的后代材料，從而縮短抗病育種的年限，提高抗病育種的效率。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102808021SQ20121022575
公開日2012年12月5日 申請(qǐng)日期2012年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月3日
發(fā)明者智海劍, 王大剛, 馬瑩, 李海朝, 趙琳 申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)