專利名稱：一種扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種扁座殼孢培養(yǎng)基，特別涉及一種扁座殼孢半合成培養(yǎng)基。
背景技術(shù)：
扁座殼抱\_Aschersonia placenta Berk.]隸屬于真菌界(Kingdom Fungi)、子囊菌門(Ascomycota)、幾菌綱{Sordariomycetes)、肉座菌目 iffypocreales)、麥角菌科(67avi_ci]pi_taceae)、座殼抱屬(Aschersonia)，是粉風(fēng)( Jileyrodidae)和介殼蟲{Coccidae)的重要病原真菌,廣泛分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。早期國內(nèi)外研究表明，扁座殼孢能有效控制粉虱和介殼蟲這兩類刺吸式口器害蟲，在害蟲生物防治、環(huán)保農(nóng)藥開發(fā)等方面有較好的應(yīng)用前景。但是，近年來國內(nèi)外許多單位進行了扁座殼孢菌的人工培養(yǎng)研究，有的進入了工業(yè)化生產(chǎn)，但發(fā)酵培養(yǎng)基均采用天然培養(yǎng)基(如用動物、植物、微生物或其他天然有機成分配制而成的培養(yǎng)基)。因為天然培養(yǎng)基成分復(fù)雜，各批次原料營養(yǎng)成分含量不穩(wěn)定，發(fā)酵過程和產(chǎn)品質(zhì)量不易控制。此外，天然培養(yǎng)基各營養(yǎng)成分不明確，不適于扁座殼孢菌生理生化的研究。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其組成成分明確，發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量可控，適于該菌工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)。本發(fā)明的一種扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，由碳源、氮源、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和水組成，其中碳(按分子量計算的碳元素含量)5. 0 20. 0克，氮(氮元素含量)0. 5 2. 5克，磷酸二氫鉀0. 5 I. 5克，硫酸鎂0. 5 I. 0克，用水定容至I升；所述碳源為蔗糖、可溶性淀粉或甘露醇，氮源為酵母浸粉、胰蛋白胨或牛肉浸膏。在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到固體培養(yǎng)基。優(yōu)選地，所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基為蔗糖25. 0 45. 0克，酵母浸粉5. 0
10.0克，磷酸二氫鉀0.5 I. 5克，硫酸鎂0.5 1.0克，用水定容至I升。在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到固體培養(yǎng)基。更優(yōu)選地，所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基為蔗糖45. 0克，酵母浸粉10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，用水定容至I升。在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到固體培養(yǎng)基。上述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基都可按常規(guī)方法配制，如秤取上述質(zhì)量配比的原料放入容器，加熱溶解，混合均勻，滅菌即可。本發(fā)明的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其組成成分明確，發(fā)酵的原料均一，發(fā)酵產(chǎn)品質(zhì)量可以控制，利用這一培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)扁座殼孢具有工藝簡單、不存在重金屬污染，菌體生長速度快，菌絲產(chǎn)率高(可達28 g/L以上)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點，既適于扁座殼孢菌生理生化特性的研究，也適于該菌工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)。
具體實施例方式實施例I、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(23 g/L) 28 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為蔗糖(35.0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。上述括號中表示不同配方得到的菌絲產(chǎn)率。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸餾水I升。實施例2、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(22 g/L) 26 g/L，對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為甘露醇(35. 0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。實施例3、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(12 g/L) 15 g/L，對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為甘露醇(35. 0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。實施例4、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(20 g/L) 24 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為蔗糖(35.0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸餾水I升。實施例5、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(15 g/L) 18 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為蔗糖(35.0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸餾水I升。實施例6、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(19 g/L) 23 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，酵母浸粉(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。實施例7、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(12 g/L) 17 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。實施例8、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(9 g/L) 12 g/L,對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為可溶淀粉(35. 0克)45. 0克，牛肉浸膏(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。實施例9、利用扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基生產(chǎn)扁座殼孢菌絲
將從自然侵染扁座殼孢菌的粉虱蟲尸上分離純化，并借助形態(tài)特征和分子生物學(xué)證據(jù)鑒定為真正扁座殼孢的菌株接種至扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基和對照培養(yǎng)基中，分別按照常規(guī)方法發(fā)酵生產(chǎn)菌絲。結(jié)果表明扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率達(16 g/L) 20 g/L，對照培養(yǎng)基的菌絲產(chǎn)率僅為5. I g/L。其中，扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基的配方為甘露醇(35. 0克)45. 0克，胰蛋白胨(7. 5克)10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，蒸餾水I升。對照培養(yǎng)基配方為硫酸銨2g、氯化鉀0. 5g、硫酸鎂0. 5g、磷酸二氫鉀0. 5g、磷酸氫二鈉0. 65g、蒸懼水I升。
權(quán)利要求
1.一種扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，由碳源、氮源、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和水組成，其中碳5. O 20. O克，氮0. 5 2. 5克，磷酸二氫鉀0. 5 I. 5克，硫酸鎂0. 5 I. 0克，用水定容至I升；所述碳源為蔗糖、可溶性淀粉或甘露醇，氮源為酵母浸粉、胰蛋白胨或牛肉浸膏。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其特征在于在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到固體培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其特征在于所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基為蔗糖25. 0 45. 0克，酵母浸粉5. 0 10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5 I. 5克，硫酸鎂0. 5 I. 0克，用水定容至I升。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其特征在于在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到 固體培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其特征在于所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基為蔗糖45. 0克，酵母浸粉10. 0克，磷酸二氫鉀0. 5克，硫酸鎂0. 5克，用水定容至I升。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基,其特征在于在所述扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基中加入質(zhì)量百分含量為I. 5 2. 0%的瓊脂得到固體培養(yǎng)基。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種扁座殼孢培養(yǎng)基，特別涉及一種扁座殼孢半合成培養(yǎng)基。本發(fā)明所提供的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，包括5.0～20.0克碳，0.5～2.5克氮，0.5～1.5克磷酸二氫鉀和0.5～1.0克硫酸鎂，用水定容至1升。所述碳源為蔗糖或可溶性淀粉或甘露醇，氮源為酵母浸粉或胰蛋白胨或牛肉浸膏。本發(fā)明的扁座殼孢菌半合成培養(yǎng)基，其組成成分明確，采用該培養(yǎng)基發(fā)酵生產(chǎn)扁座殼孢菌絲體具有工藝簡單、不存在重金屬污染，菌體生長速度快，菌絲產(chǎn)率高(可達28g/L以上)，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等優(yōu)點，既適合于扁座殼孢菌生理生化的研究，也適合其工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)。
文檔編號C12N1/14GK102676402SQ20121016622
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月26日
發(fā)明者關(guān)雄, 宋飛飛, 蘇玉斌, 謝小聰, 邱云鋒, 邱君志 申請人:福建農(nóng)林大學(xué)