專利名稱：一株產(chǎn)酯酵母及其生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，具體涉及一株產(chǎn)酯酵母及其生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法。
背景技術(shù)：
目前，國家對白酒產(chǎn)業(yè)政策進(jìn)行調(diào)整，嚴(yán)禁在成品酒中添加香味成分以豐富酒體， 鼓勵酒廠通過發(fā)酵過程的調(diào)控來增加酒體香味成分，而釀酒工業(yè)，尤其是廣大清香型、豉香型小曲和生料釀酒企業(yè)，由于技術(shù)落后，在發(fā)酵中很難提高酒中香味成分的含量。小曲米酒中的呈香呈味物質(zhì)含量較少，口味淡薄，與固態(tài)發(fā)酵酒相比豐滿度及放香不足；采用生物技術(shù)方法提高齋酒的總酯、總酸、苯乙醇的含量，可提高小曲白酒的豐滿度及放香，進(jìn)而提高小曲白酒的質(zhì)量，使生產(chǎn)的小曲白酒成為高檔白酒。選用產(chǎn)酯、酸、苯乙醇能力強(qiáng)的酵母菌種并設(shè)法應(yīng)用于白酒生產(chǎn)工藝是提高白酒呈香呈味物質(zhì)含量的有效途徑之一。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一株產(chǎn)酯酵母JJJC-2。本發(fā)明提供的產(chǎn)酯酵母JJJC-2是從酒曲中分離純化獲得的，產(chǎn)酯酵母JJJC-2 (釀酒酵母&iccharomyces cerevisiae JJJC-2)已于2011年9月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(其簡稱為CGMCC)，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏編號為CGMCC No :52320產(chǎn)酯酵母JJJC-2 (CGMCC No :523 為橢圓形，菌落扁平、無光澤、乳白色、邊緣整齊。最適生長溫度為，最適生長pH為5. 0-6. 0.本發(fā)明的另一目的是提供一種利用上述產(chǎn)酯酵母同時(shí)高產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法。為實(shí)現(xiàn)這一目的，本發(fā)明采取以下設(shè)計(jì)方案一種同時(shí)生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法，包括以下步驟1)將產(chǎn)酯酵母JJJC-2接種于總還原糖濃度為80_400g/L，含10_50g/L乙醇和 l-3g/L乙酸，lg/L磷酸二氫鉀，pH為4. 5-6. 5的發(fā)酵培養(yǎng)基中，25_35°C條件下攪拌培養(yǎng) 72-120 小時(shí)。2)將得到的發(fā)酵液與小曲米酒發(fā)酵成熟的醪液以1 30的比例混合串蒸。獲得的齋酒(30% ν/ν)的乙酸乙酯達(dá)到3. 0-3. 2g/L，出酒率明顯提高。串蒸過程中，初蒸時(shí)汽壓不得超過0. 4Mpa，流酒時(shí)保持0. 10-0. 15Mpa，流酒溫度應(yīng)在30°C以下。獲得的齋酒(30% ν/ν)酯香突出、舒適且酒體更豐滿。這是一種工藝簡單、成本低廉的白酒增香增產(chǎn)生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)的齋酒質(zhì)量及出酒率均高于日常生產(chǎn)齋酒。在上述過程中，所述菌種的量為2-20% (體積比)，指接種種子液的量占發(fā)酵培養(yǎng)基和種子液的體積(接種種子液與發(fā)酵培養(yǎng)基的體積比)，其中最優(yōu)選的是5%。
齋酒可稱為剛蒸餾出來的新酒。把剛蒸餾出來的新酒混勻，取IOOml裝入IOOml 量筒，用溫度計(jì)測酒溫，用酒度計(jì)測酒度，通過查換算表把測得的酒度換算成酒溫20°C時(shí)的酒度，要求換算后新蒸餾出來的新酒的酒度為30% V/V，即要求一邊蒸餾一邊作在線測量。 直至全部剛蒸餾出來的新酒的換算成酒溫20°C時(shí)的酒度為30% V/V時(shí)，停止收酒。所述培養(yǎng)基的還原糖為大米淀粉糖化液、大麥淀粉糖化液。所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為4. 5-6. 5，優(yōu)選為5. 5。所述的發(fā)酵培養(yǎng)條件優(yōu)選為攪拌培養(yǎng)80小時(shí)。為了使發(fā)酵的效果較好，所述接種的產(chǎn)酯酵母JJJC-2在接種之前，應(yīng)將斜面培養(yǎng)的菌種活化，培養(yǎng)成液體菌種，液體菌種經(jīng)過至少二級種子培養(yǎng)后，接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。所述的斜面菌種是將產(chǎn)酯酵母JJJC-2接種于總糖含量為20_120g/L的麥芽汁固體斜面上，在25-35 °C條件下培養(yǎng)30-72小時(shí)后，放入4°C冰箱保存。所述的液體菌種是將保存的產(chǎn)酯酵母JJJC-2菌種活化后，接種一環(huán)細(xì)胞于裝有 100毫升總糖含量為80-160g/L的麥芽汁或米曲汁液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22小時(shí)，即為液體菌種。所述的至少二級液體種子培養(yǎng)是指一級液體種子培養(yǎng)，是將液體菌種按5-15% 的接種量，即培養(yǎng)基體積的5-15%，接入裝有200毫升，總糖含量為80-160g/L的糖化液的三角瓶中，于25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22小時(shí)，即為一級液體種子培養(yǎng)物；所述二級液體種子培養(yǎng)，是將一級種子培養(yǎng)液按5-15%的接種量，即培養(yǎng)基體積的5-15%，接入裝有 300升，總糖含量為80-160g/L的糖化液的種子培養(yǎng)罐，在25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22 小時(shí)，即為二級液體種子培養(yǎng)物。本發(fā)明使用的發(fā)酵底物是普通的麥芽汁、大米淀粉糖化液，只需要調(diào)節(jié)其還原糖總含量，適當(dāng)添加乙醇、乙酸、磷酸二氫鉀，即可進(jìn)行正常生產(chǎn)，方法簡單，生產(chǎn)投資較少。本發(fā)明的方法生產(chǎn)的乙酸乙酯和酒精與成熟發(fā)酵醪液串蒸后獲得的齋酒，既提高了乙酸乙酯的含量又提高了出酒率，獲得的齋酒的乙酸乙酯、總酯、乙酸、β-苯乙醇含量高，酯香突出、酒體更豐滿。本發(fā)明的方法實(shí)用性強(qiáng)，操作簡便，易于推廣。由于一次發(fā)酵同時(shí)獲得乙酸乙酯和酒精兩個(gè)產(chǎn)品，所以投資少、見效快、效益高，具有很強(qiáng)的市場競爭力。色譜檢測方法為氣相色譜儀(Agilent 6890)，色譜柱(HP19095F123 (J&W Scientific))，內(nèi)標(biāo)(乙酸正戊酯，2-乙基正丁酸)，GC-FlD 條件=HP-FFAP (30m 長，0. 53mm 內(nèi)徑，Ι.Ομπι膜厚)，載氣高純氮，分流模式不分流，升溫程序35°C保持3. 5min，再以 IO0C /min升溫至110°C保持lmin，然后以12°C /min升溫至200°C保持:3min ；檢測器 300°C，進(jìn)樣口 2500C ο
具體實(shí)施例方式下面通過具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但不作為本發(fā)明的限制。實(shí)施例1利用產(chǎn)酯酵母JJJC-2發(fā)酵生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精，步驟如下1)斜面菌種將產(chǎn)酯酵母JJJC-2菌種接種于含有總糖含量為60g/L的麥芽汁固體斜面上，在條件下培養(yǎng)48小時(shí)后，放入4°C冰箱保存；
2)液體菌種將保存的產(chǎn)酯酵母JJJC-2斜面菌種活化后，接一環(huán)細(xì)胞于裝有100 毫升，總糖含量為120g/L的麥芽汁液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于30°C條件下攪拌培養(yǎng)20小時(shí)，即為液體菌種；3) 一級液體種子培養(yǎng)將液體菌種按5%的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為 120g/L的大米淀粉糖化液三角瓶中，于30°C條件下攪拌培養(yǎng)18小時(shí)，得到一級液體種子培養(yǎng)物；4) 二級液體種子培養(yǎng)將一級種子培養(yǎng)液按5%的接種量接入裝有300升，總糖含量為120g/L的大米淀粉糖化液種子罐，在30°C條件下攪拌培養(yǎng)18小時(shí)，得到二級液體種子培養(yǎng)物；5)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基是總還原糖濃度為200g/L的大米淀粉糖化液，添加 20g/L乙醇、2g/L乙酸、lg/L磷酸二氫鉀，培養(yǎng)基的pH為5. 5。6)發(fā)酵罐發(fā)酵將二級種子培養(yǎng)液按5%的接種量接入裝有1000升上一步配制的總糖含量為200g/L的大米淀粉糖化液培養(yǎng)基中，在30°C條件下攪拌培養(yǎng)80小時(shí)；7)將得到的發(fā)酵液與小曲米酒發(fā)酵成熟的醪液以1 30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的(30% ν/ν)齋酒。試驗(yàn)對比數(shù)據(jù)如下表表1.與日常齋酒對比數(shù)據(jù)
樣品名稱乙酸乙酯(g/L)總酯(g/L)乙酸(g/L)出酒量(L)曰常齋酒1. 2171. 8760. 50422本發(fā)明齋酒3. 1863. 7950. 62495注1.表中齋酒酒度均為30% ν/ν。2.表中數(shù)據(jù)為小曲米酒的齋酒數(shù)據(jù)。2.日常齋酒是指發(fā)酵成熟的醪液直接蒸餾，與本發(fā)明齋酒的不同點(diǎn)只在于沒有添加本發(fā)明生產(chǎn)的發(fā)酵液與其串蒸，蒸餾方法相同。實(shí)施例2利用產(chǎn)酯酵母JJJC-2發(fā)酵生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精，步驟如下1)斜面JJJC-2在30°C條件下培養(yǎng)36小時(shí)后，放入4°C冰箱保存；2)液體菌種將保存的產(chǎn)酯酵母JJJC-2斜面菌種活化后，接一環(huán)細(xì)胞于裝有100 毫升，總糖含量為160g/L的麥芽汁液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于30°C條件下攪拌培養(yǎng)20小時(shí)，即為液體菌種；3) 一級液體種子培養(yǎng)將液體菌種按10%的接種量接入裝有200毫升，總糖含量為160g/L的大米淀粉糖化液三角瓶中，于30°C條件下攪拌培養(yǎng)20小時(shí)，得到一級液體種子培養(yǎng)物；4) 二級液體種子培養(yǎng)將一級種子培養(yǎng)液按10%的接種量接入裝有300升，總糖含量為160g/L的大米淀粉糖化液種子罐，在30°C條件下攪拌培養(yǎng)20小時(shí)，得到二級液體種子培養(yǎng)物；5)三級液體種子培養(yǎng)將二級種子培養(yǎng)液按10%的接種量接入裝有3000升，總糖含量為160g/L的大米淀粉糖化液種子罐，在30°C條件下攪拌培養(yǎng)20小時(shí)，得到三級液體種子培養(yǎng)物；6)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基是總還原糖濃度為300g/L的大米淀粉糖化液，添加 30g/L乙醇、lg/L乙酸、lg/L磷酸二氫鉀，培養(yǎng)基的pH為6. 0。
7)發(fā)酵罐發(fā)酵將三級種子培養(yǎng)液按15%的接種量接入裝有1000升上一步配制的總糖含量為300g/L的大米淀粉糖化液培養(yǎng)基中，在30°C條件下攪拌培養(yǎng)72小時(shí)；8)將得到的發(fā)酵液與小曲米酒發(fā)酵成熟的醪液以1 30的比例混合串蒸，獲得既提高了乙酸乙酯含量且提高了出酒率的(52% ν/ν)齋酒。試驗(yàn)對比數(shù)據(jù)如下表表2.與日常齋酒對比數(shù)據(jù)
權(quán)利要求
1.產(chǎn)酯酵母JJJC-2，其保藏號為CGMCCNO :5232.
2.一種利用權(quán)利要求1所述的產(chǎn)酯酵母生產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法，具體包括以下步驟菌種斜面培養(yǎng)，活化后培養(yǎng)成液體菌種，液體菌種經(jīng)過至少二級液體種子培養(yǎng)后，接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)的步驟為1)將所述酵母JJJC-2接種于總還原糖濃度為80-400g/L，含10-50g/L乙醇和l_3g/L 乙酸，lg/L磷酸二氫鉀，pH為4. 5-6. 5的發(fā)酵培養(yǎng)基中，25_35°C條件下攪拌培養(yǎng)72-120小時(shí)；2)將得到的發(fā)酵液與小曲米酒發(fā)酵成熟的醪液以1 30的比例混合串蒸。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述菌種的接種量為2%_20%，指接種種子液的量占發(fā)酵培養(yǎng)基和種子液的體積。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述菌種的接種量為5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述培養(yǎng)基的還原糖為大米淀粉糖化液或大麥淀粉糖化液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于所述的發(fā)酵培養(yǎng)基的pH值為5.5。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的菌種斜面培養(yǎng)是指將產(chǎn)酯酵母 JJJC-2菌種接種于總糖含量為20-120g/L的麥芽汁固體斜面上，在25-35°C條件下培養(yǎng) 30-72小時(shí)后，放入4°C冰箱保存。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述的液體菌種是將保存的產(chǎn)酯酵母 JJJC-2菌種活化后，接一環(huán)細(xì)胞于裝有100毫升總糖含量為80-160g/L的麥芽汁或米曲汁液體培養(yǎng)基的三角瓶中，于25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22小時(shí)，即為液體菌種。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于所述至少二級液體種子培養(yǎng)是指一級液體種子培養(yǎng)，是將液體菌種按5-15%的接種量，即培養(yǎng)基體積的5-15%，接入裝有200毫升，總糖含量為80-160g/L的糖化液的三角瓶中，于25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22小時(shí)， 即為一級液體種子培養(yǎng)物；所述二級液體種子培養(yǎng)，是將一級種子培養(yǎng)液按5-15%的接種量，即培養(yǎng)基體積的5-15%，接入裝有300升，總糖含量為80-160g/L的糖化液的種子培養(yǎng)罐，在25-35°C條件下攪拌培養(yǎng)16-22小時(shí)，即為二級液體種子培養(yǎng)物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種產(chǎn)酯酵母以及一種用該產(chǎn)酯酵母同時(shí)高產(chǎn)乙酸乙酯和酒精的方法，獲得的齋酒酯香突出、舒適且酒體更豐滿。這是一種工藝簡單、成本低廉的白酒增香提產(chǎn)生產(chǎn)工藝，生產(chǎn)的齋酒質(zhì)量及出酒率均高于日常生產(chǎn)齋酒。
文檔編號C12G3/02GK102559519SQ201110278859
公開日2012年7月11日 申請日期2011年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月20日
發(fā)明者何松貴, 余劍霞, 吳雪梅 申請人:廣東省九江酒廠有限公司