專利名稱：一種同時(shí)分析犬基因組dna 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒及其檢測(cè)方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，具體是涉及一種通過復(fù)合擴(kuò)增同時(shí)分析犬基因組DNA16個(gè)STR基因座和DAmel基因座的五色熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
STR (short tandem r印eat，短串聯(lián)重復(fù)序列)是存在于真核生物基因組中的一類具有長(zhǎng)度多態(tài)性的DNA序列，其核心序列由2 6個(gè)堿基構(gòu)成，因該核心序列在不同個(gè)體間呈不同數(shù)目的串聯(lián)重復(fù)而呈現(xiàn)出長(zhǎng)度多態(tài)性，因而短串聯(lián)重復(fù)序列遺傳多態(tài)性在個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定、法醫(yī)鑒定、遺傳育種及遺傳連鎖圖譜構(gòu)建等應(yīng)用上起著非常重要的作用。STR基因座具有因片段小而容易擴(kuò)增、各基因座的擴(kuò)增條件相似而能夠構(gòu)建檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)，因而具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、信息量大等優(yōu)點(diǎn)，尤其是在建立DNA數(shù)據(jù)庫(kù)方面，STR復(fù)合擴(kuò)增技術(shù)具有極大的優(yōu)越性。長(zhǎng)期的DNA檢驗(yàn)實(shí)踐表明，STR基因座的遺傳多態(tài)性在品種間存在一定的差異，各個(gè)基因座間差別也很大。在犬類的個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定和遺傳育種等方面多采用美國(guó)ABI公司推薦的MockMarks Animal Genotyping System的10 個(gè)犬基因座。在實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的過程中，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)至少存在以下問題美國(guó)ABI公司推薦的MockMarks Animal Genotyping System中僅有10個(gè)犬基因座，而且有部分基因座遺傳多態(tài)性不高，或是不同犬群間差異較大，由此給DNA檢驗(yàn)技術(shù)的應(yīng)用及其效率帶來(lái)一定的影響，不能滿足使用的要求。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的
本發(fā)明的目的是提供一種犬17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，提高了系統(tǒng)的累計(jì)個(gè)體識(shí)別力和累積非父排除率，滿足犬的個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定和遺傳育種等方面應(yīng)用的需要。技術(shù)方案
一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于該試劑盒含有引物混合物如下
權(quán)利要求
1. 一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于該試劑盒含有引物混合物如下
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種同時(shí)分析犬基因組DNA17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的17個(gè)基因座對(duì)應(yīng)的引物分四組并分別用四種不同的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記；其中PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5 和 PEZ12 為一組，DAmel、PEZ21、PEZ3、PEZ6 和 PEZ8 為一組；FH2054、VWFX、F!E611 和 FH2132 為一組；PEZ20、PEZ15 和 FH2079 為一組；根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于四種熒光染料為FAM、HEX、TAMRA, R0X。
3.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種同時(shí)分析犬基因組DNA17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于PEZ1、PEZ2、FH2010、PEZ5 和 PEZ12 為一組，其對(duì)應(yīng)的引物采用 FAM 標(biāo)記；DAmel、PEZ21、 PEZ3、PEZ6 和 PEZ8 為一組，其對(duì)應(yīng)的引物采用 HEX 標(biāo)記；FH2054、VffFX, FH2611 和 FH2132 為一組，其對(duì)應(yīng)的引物采用TAMRA標(biāo)記；PEZ20、PEZ15和 2079為一組，其對(duì)應(yīng)的引物采用 ROX標(biāo)記；具體為
4.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述的一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒，其特征在于所述的試劑盒為
5. 一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于按如下步驟實(shí)現(xiàn)A、犬基因組DNA提?。籅、按權(quán)利要求3或4所述的17個(gè)基因座的分組并對(duì)相應(yīng)的引物進(jìn)行熒光標(biāo)記；C、PCR擴(kuò)增體系
6.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種同時(shí)分析犬基因組DNA17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒的檢測(cè)方法，其特征在于步驟A中的犬基因組DNA樣品來(lái)源包括血液、血痕、組織、精斑、口腔拭子或毛發(fā)。
7.一種同時(shí)分析犬基因組DNA 17個(gè)基因座的熒光標(biāo)記檢測(cè)試劑盒的應(yīng)用，其特征在于該試劑盒應(yīng)用于鑒別犬性別。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種犬17個(gè)基因座熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒，該系統(tǒng)可以同時(shí)分析犬基因組DNA17個(gè)基因座的遺傳多態(tài)性，其中的17個(gè)基因座DAmel、PEZ1、PEZ2、PEZ3、PEZ5、PEZ6、PEZ8、PEZ12、PEZ15、PEZ20、PEZ21、FH2010、FH2054、FH2079、FH2132、FH2611、VWFX分為4組，共涉及5種顏色的熒光標(biāo)記。本發(fā)明的熒光標(biāo)記復(fù)合擴(kuò)增檢測(cè)試劑盒提供用于復(fù)合擴(kuò)增17個(gè)基因座的寡核苷酸引物混合物；系統(tǒng)中包含的用于鑒別DNA樣品性別的基因座是DAmel基因座。該系統(tǒng)的檢測(cè)結(jié)果表明其多態(tài)性高、平衡性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、分型結(jié)果準(zhǔn)確、種屬特異性強(qiáng)，完全能夠滿足犬類個(gè)體識(shí)別、親權(quán)鑒定以及DNA數(shù)據(jù)庫(kù)建設(shè)的需要。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK102321752SQ20111023246
公開日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者付平峰, 蘭康, 葉俊華, 李濤, 杜蔚安, 楊前勇, 熊勇華, 王博, 鄭衛(wèi)國(guó), 陳麗娜 申請(qǐng)人:公安部南昌警犬基地, 無(wú)錫中德美聯(lián)生物技術(shù)有限公司