專利名稱：：乳桿菌發(fā)酵劑及其制備方法與專用菌株的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及乳桿菌發(fā)酵劑及其制備方法與專用菌株。
背景技術(shù)：
：乳酸菌(lacticacidbacteria,LAB)是對人類健康有益的GRAS(美國FDA評價食品添加劑的安全性指標(biāo)generallyrecognizedassafe)的微生物。有些乳酸菌能分泌胞外多糖(exopolysaccharide，EPS)，這些胞外多糖以莢膜多糖(c即sularpolysaccharide,CPS)黏附于菌體表面或以粘質(zhì)多糖(ropypolysaccharide)形式分泌到細胞外環(huán)境中。不同種類乳酸菌所產(chǎn)的胞外多糖也不同，其結(jié)構(gòu)變化多樣，生物活性也有所不同。乳酸菌胞外多糖能夠保護菌體細胞抵抗干燥、噬菌體和抗菌素侵襲、抵御抗生素或有毒物質(zhì)的傷害，幫助細菌黏附到固體表面以及參與細胞間的相互作用等。產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌及其產(chǎn)生的胞外多糖廣泛應(yīng)用于酸奶、低脂奶酪、餐后甜點等發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)中，胞外多糖是天然的增稠劑和質(zhì)地改良劑，可以增強發(fā)酵乳制品的流變學(xué)特性，同時胞外多糖也是一種物理穩(wěn)定劑，能夠結(jié)合水并限制物料脫水收縮，減少乳清析出，賦予產(chǎn)品吸引人的外觀和令人滿意的口感。此外，某些乳酸菌產(chǎn)生的胞外多糖具有降低膽固醇、免疫調(diào)節(jié)和抗癌活性，對人體起到保健作用。多年來歐洲的各公司研究了很多乳酸菌胞外多糖的特性，生產(chǎn)出一系列具有特殊性能的發(fā)酵產(chǎn)品。乳品制造者還利用含有胞外多糖的發(fā)酵劑來控制酸奶的脫水收縮，尤其在很多禁止添加動物或植物來源穩(wěn)定劑的國家，乳酸菌胞外多糖普遍應(yīng)用于酸奶中。此外，產(chǎn)胞外多糖乳酸菌還用于低脂乳制品中，從而減少了消費者對脂肪的攝入。我國天然發(fā)酵制品種類繁多，各地區(qū)都有其獨特的發(fā)酵食品，但是對這些資源的開發(fā)利用比較有限，因此從這些資源中分離篩選產(chǎn)胞外多糖的乳酸菌制備發(fā)酵劑用于發(fā)酵乳制品的生產(chǎn)中具有現(xiàn)實意義，有助于解決發(fā)酵乳生產(chǎn)過程中遇到的實際問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種乳桿菌發(fā)酵劑及其制備方法與專用菌株。本發(fā)明所提供的乳桿菌，命名為植物乳桿菌SC79，其保藏編號為CCTCCM208151，是從東北自然發(fā)酵白菜_酸菜中分離的。所述植物乳桿菌SC79(lactobacillusplantarum)已于2008年8月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為中國武漢武漢大學(xué))，保藏號為CCTCCNO.M208151。所述植物乳桿菌SC79CCTCCM208151可產(chǎn)生乳酸菌胞外多糖。本發(fā)明的另一個目的是提供一種乳桿菌發(fā)酵劑。本發(fā)明所提供的乳桿菌發(fā)酵劑，其活性成分為植物乳桿菌SC79CCTCCM208151。其中，所述發(fā)酵劑中含植物乳桿菌SC79CCTCCM2081511.3X1011-2.1X1011cfu/g。所述發(fā)酵劑中還包括如下至少一種物質(zhì)脫脂乳粉、甘油、脯氨酸、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇。所述發(fā)酵劑中可包括脫脂乳粉、甘露醇、葡萄糖、海藻糖和麥芽糖；所述發(fā)酵劑中，所述脫脂乳粉的含量為8.0-9.0g/100g，所述葡萄糖的含量為0.8-1.2g/100g，所述海藻糖的含量為0.8-1.0g/100g，所述甘露醇的含量為0.8-1.0g/100g，所述麥芽糖的含量為1.6-2.0g/100g。本發(fā)明的另一個目的是提供一種制備所述發(fā)酵劑的方法。本發(fā)明所提供的制備所述發(fā)酵劑的方法，包括如下步驟1)植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)；2)收集步驟1)的菌體，然后向所述菌體中加入保護劑，獲得所述發(fā)酵劑；所述每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基包括如下物質(zhì)乳清780-800mL，葡萄糖20-25g，大豆蛋白胨10-12g，酵母膏10-12g，乙酸鈉5-6g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5-0.7g，吐溫801.0-1.5mL，鹽溶液(0.4g/LMgS047H20，0.15g/LMnS044H20，0.18g/LFeS047H20，0.05g/LNaCl)1.0-1.5mL，150_160mL胡蘿卜汁、50-60mL平燕汁、0.005-0.006mol氯化f丐、2.5-3.Og干酪素；所述保護劑選自如下至少一種脫脂乳粉、甘油、脯氨酸、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇。其中，所述保護劑具體為脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物；每100g所述菌體中可加入45-50g所述脫脂乳粉、5.0-6.0g所述葡萄糖、5.0-5.5g所述海藻糖和5.0-6.Og所述甘露醇、11.0-13.Og所述麥芽糖。所述步驟1)的發(fā)酵培養(yǎng)過程中，可向所述SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中添加0.lMNa2HP04_KH2P04緩沖鹽溶液，同時用20g/100mLNaOH溶液或NH3H20調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值在5.8-6.0。所述步驟l)的發(fā)酵培養(yǎng)過程中，在發(fā)酵10h、13h、15h時，每升發(fā)酵液分別添加20g葡萄糖、13.3g大豆蛋白胨和13.3g酵母粉的混合物。本發(fā)明的植物乳桿菌SC79CCTCCM208151胞外多糖的產(chǎn)量高。本發(fā)明的植物乳桿菌發(fā)酵劑以植物乳桿菌SC79CCTCCM208151為活性成分，植物乳桿菌SC79CCTCCM208151活菌含量高。本發(fā)明的乳桿菌發(fā)酵劑用量小、將該乳桿菌發(fā)酵劑和不產(chǎn)胞外多糖的酸奶菌株混合制備酸奶，產(chǎn)酸速度快，相對粘度、彈性、稠度、黏附性均優(yōu)于常規(guī)酸乳，并且形成的粘性酸乳膠體脫水收縮作用敏感性小，持水力大于常規(guī)酸乳，不易析出乳清。用本發(fā)明的乳桿菌發(fā)酵劑和不產(chǎn)胞外多糖的酸奶菌株混合制備酸奶，能夠提高酸奶的黏度，賦予產(chǎn)品吸引人的外觀和令人滿意的口感。圖1為SC79全細胞脂肪酸組分圖譜。具體實施例方式下述實施例中的實驗結(jié)果均為3次重復(fù)實驗的平均值。實施例1、分離植物乳桿菌SC79CCTCCM208151分離培養(yǎng)基(MRS培養(yǎng)基)蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、酵母膏5g/L、KH2P042g/L、無水乙酸鈉5g/L、檸檬酸鈉5g/L、MgS047H200.2g/L、MnS044H200.05g/L、吐溫801mL、瓊脂15g/L、葡萄糖20g/L，pH6.6，121。C滅菌15min取lmL酸菜汁接入11g/100mL脫脂乳中，37t:培養(yǎng)，凝乳后取樣逐級稀釋，選3個稀釋度，每個稀釋度取0.lmL涂布于MRS瓊脂平板上，37t:培養(yǎng)48h，選取合適的平板，挑取其上的典型菌落進行革蘭氏染色和過氧化氫酶試驗，革蘭氏染色陽性，顯微鏡下觀察為桿狀，過氧化氫酶試驗陽性的菌株初步鑒定為乳桿菌，繼續(xù)劃線培養(yǎng)分離純化，直至得到純菌。用苯酚硫酸法測定多株純培養(yǎng)菌種胞外多糖的產(chǎn)量，篩選出一株胞外多糖產(chǎn)量較高的乳桿菌SC79，負染法觀察乳桿菌SC79，此菌株同時產(chǎn)生莢膜多糖。對乳桿菌SC79進行以下三方面的檢測①形態(tài)特征與生理生化特性的檢測；②全細胞脂肪酸組分的測定；③16SrRNA基因測序。形態(tài)特征與生理生化特性的檢測如表1所示。表1.乳桿菌SC79形態(tài)特征與生理生化特性檢測項目<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>全細胞脂肪酸組分的測定結(jié)果如圖15所示'16SrRNA基因測序結(jié)果表明，乳桿菌SC79的16SrRNA基因的核苷酸序列如序列表中序列1所示。形態(tài)特征與生理生化特性、全細胞脂肪酸組分、16SrRNA基因的結(jié)果表明乳桿菌SC79為植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum)。植物乳桿菌SC79已于2008年8月5日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱CCTCC，地址為:武漢大學(xué))，保藏號為CCTCCNO.M208151。植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在MRS液體培養(yǎng)基中37。C培養(yǎng)32h，測定培養(yǎng)過程中胞外多糖產(chǎn)量和莢膜多糖產(chǎn)量。胞外多糖和莢膜多糖產(chǎn)量測定結(jié)果表明，植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的胞外多糖和莢膜多糖產(chǎn)量分別達到175mg/L和42mg/L。實施例2、乳桿菌發(fā)酵劑—、乳桿菌發(fā)酵劑的生產(chǎn)工藝的優(yōu)化a、優(yōu)化培養(yǎng)基本發(fā)明選用營養(yǎng)豐富、易于細胞分離的乳清培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在基礎(chǔ)乳清培養(yǎng)基中，植物乳桿菌SC79CCTCCM208151于37。C培養(yǎng)16h后的活菌數(shù)為6.2X109cfu/mL。I碳源的優(yōu)化在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中分別以麥芽糖、乳糖、果糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇代替葡萄糖，培養(yǎng)16h后，檢測發(fā)酵液的0De。。、活菌數(shù)。檢測結(jié)果表明，在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加葡萄糖(2g/100mL)植物乳桿菌SC79CCTCCM208151活菌數(shù)最高。綜上實驗結(jié)果，以2g/100mL葡萄糖作為植物乳桿菌SC79CCTCCM208151生長的最佳碳源。II氮源的優(yōu)化分別用lg/100mL的蛋白胨、大豆蛋白胨、牛肉蛋白胨、酪蛋白胨、胰蛋白胨、牛肉膏、酵母粉、0.5g/100mL檸檬酸銨、磷酸二氫銨代替添加2g/100mL葡萄糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的氮源，培養(yǎng)16h后，檢測發(fā)酵液的0D值、活菌數(shù)。檢測結(jié)果表明大豆蛋白胨、酵母粉和牛肉膏對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的促生長作用較好。將大豆蛋白胨、酵母粉和牛肉膏分別按lg/100mL、1.5g/100mL、2g/100mL、2.5g/100mL、3g/100mL的濃度添加到含2g/100mL葡萄糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)16h后，檢測發(fā)酵液的OD值、pH值。檢測結(jié)果表明2g/100mL和2.5g/100mL的大豆蛋白胨、酵母粉或牛肉膏對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151都有一定的促生長作用。為檢測復(fù)合氮源對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的影響，大豆蛋白胨、酵母粉、牛肉膏多種配比混合后添加到含2g/100mL葡萄糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，培養(yǎng)16h后，檢測發(fā)酵液的OD值、活菌數(shù)。檢測結(jié)果表明大豆蛋白胨酵母粉=1:1添加，對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的促生長作用的效果最好。綜上實驗結(jié)果，選擇lg/100mL大豆蛋白胨和lg/100mL酵母粉作為植物乳桿菌SC79CCTCCM208151生長的最佳氮源。III促生長因子的選擇各種蔬菜汁的制備方法胡蘿卜汁取新鮮的胡蘿卜清洗、去皮、切丁，按100g胡蘿卜與100mL蒸餾水的比例，用果汁機打碎，80目濾布濾除果渣，95t:煮沸10min后，10000r/min，4t:，離心10min，將上清115t:流通蒸汽滅菌15min，4t:備用。西紅柿汁取新鮮的西紅柿清洗、切丁，用果汁機打碎，80目濾布濾除果渣，95t:煮沸10min后，10000r/min，4。C，離心10min，將上清115"C流通蒸汽滅菌15min，4t:備用。平菇汁取新鮮的平菇清洗，切丁，按100g平菇與100mL蒸餾水的比例，用果汁機打碎，80目濾布除渣，95。C煮沸10min后，10000r/min，4°C，離心10min，將上清115。C流通蒸汽滅菌15min，4t:備用。香菇汁取新鮮的香菇清洗，切丁，按100g香菇與100mL蒸餾水的比例，用果汁機打碎，80目濾布除渣，95。C煮沸10min后，10000r/min，4°C，離心10min，將上清115。C流通蒸汽滅菌15min，4t:備用。黃豆芽汁取新鮮的黃豆芽清洗，用果汁機打碎，80目濾布除渣，95t:煮沸10min后，10000r/min，4。C，離心10min，將上清115。C流通蒸汽滅菌15min，4。C備用。啤酒哈爾濱啤酒，95t:煮沸15-20min后，115t:流通蒸汽滅菌15min，4t:備用。將胡蘿卜汁、西紅柿汁、平菇汁、香菇汁、啤酒、氯化鈣、半胱氨酸鹽酸鹽、干酪素、乳清粉、黃豆芽汁等分別添加到基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含有2g/100mL葡萄糖、lg/100mL大豆蛋白胨和lg/100mL酵母粉)中，培養(yǎng)16h后檢測發(fā)酵液的OD值、活菌數(shù)。檢測結(jié)果表明，胡蘿卜汁、香菇汁、西紅柿汁、氯化鈣、半胱氨酸鹽酸鹽、干酪素對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的促生長效果較好。將優(yōu)選的生長因子按不同量添加進行試驗，結(jié)果表明添加15mL/100mL胡蘿卜汁、5mL/100mL平菇汁、0.005mol氯化鈣、0.25g/100mL干酪素時，對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的促生長作用效果最好。綜上所述，每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基為包含乳清780-800mL，葡萄糖20_25g，大豆蛋白胨10-12g，酵母膏10-12g，乙酸鈉5-6g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5-0.7g，吐溫801.0-1.5mL，鹽溶液(0.4g/LMgS047跳0.15g/LMnS044H20，0.18g/LFeS047H20，0.05g/LNaCl)1.0-1.5mL，150_160mL胡蘿卜汁、50-60mL平燕汁、0.005-0.006mol氯化f丐、2.5-3.Og干酪素。b、優(yōu)化培養(yǎng)條件選擇培養(yǎng)溫度30。C、34。C、37。C、40。C、43。C，培養(yǎng)基初始pH5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，搖床轉(zhuǎn)數(shù)80r/min、180r/min等不同的培養(yǎng)條件進行單因素試驗，實驗結(jié)果表明植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度37。C、培養(yǎng)基初始pH為6.5、80r/min搖床培養(yǎng)。c、菌體的富集分另ij用0.2MNaAC_HAC、0.2MNa2HP04_NaH2P04、0.2MK2HP04_KH2P04、0.2MNa2HP04-KH2P04、0.1MK2HP04_KH2P04禾P10g/100mL擰檬酸銨_5g/100mL乙酸鈉-2g/100mL丙酮酸鈉對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151進行富集培養(yǎng)，測定富集培養(yǎng)7發(fā)酵液的0D值和活菌數(shù)。測定結(jié)果表明，植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中添加O.2MNa2HP04-KH2P04緩沖鹽溶液對植物乳桿菌SC79CCTCCM208151的促生長作用效果最佳，活菌數(shù)達到5.6X10"cfu/mL。植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中添加0.2MNa2HP04-KH2P04緩沖鹽溶液，然后分別用20g/100mLNaOH溶液、20g/100mLKOH溶液、飽和Ca(OH)2溶液、NH3H20和20g/100mLNa2C03溶液作為中和劑，調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH維持在5.9-6.1左右，測定發(fā)酵液的OD值、pH值及活菌數(shù)。測定結(jié)果表明以NH3H20作為中和劑效果最佳，活菌數(shù)為5.5X10"cfu/mL。植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中添加0.2MNa2HP04-KH2P04緩沖鹽溶液，然后用NH3H20作為中和劑，調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH維持在5.8-6.0左右，在不同的時間段補加氮源和碳源，測定不同條件下發(fā)酵液的OD值及活菌數(shù)。測定結(jié)果表明在培養(yǎng)10h、13h、15h分別添加葡萄糖(2g/100mL)、大豆蛋白胨(1.33g/100mL)和酵母粉(1.33g/100mL)的混合物，培養(yǎng)16h后活菌數(shù)最高，達到8.0X1011cfu/mL。d、真空冷凍干燥制備發(fā)酵劑1.真空冷凍干燥條件的選擇用真空冷凍干燥機(LabconcoFreeZone6)進行真空冷凍干燥，下述真空冷凍干燥的基本參數(shù)均為-80-7(rC預(yù)凍1-1.5h，冷阱溫度為-45_50°C，真空度為0.03-0.05mbar，真空冷凍干燥時間為18_24h。通過測定凍干發(fā)酵劑粉中的活菌數(shù)對制備過程中脫脂乳濃度(8g/100mL、11g/100mL、15g/100mL)，離心條件(6000r/min、7000r/min、8000r/min、9000r/min)，菌體與脫脂乳的混勻時間(0min、10min、20min)進行真空冷凍干燥條件的篩選。結(jié)果表明加入脫脂乳的濃度(llg/lOOmL)、8000r/min離心、加完脫脂乳直接預(yù)凍可提高凍干發(fā)酵劑粉中的活菌數(shù)。2.保護劑的篩選將下述保護劑分別添加到乳桿菌SC79CCTCCM208151發(fā)酵液中進行真空冷凍干燥脫脂乳粉、環(huán)狀糊精、甘露醇、山梨醇、維生素C、半胱氨酸鹽酸鹽、半乳糖、脯氨酸、蔗糖、海藻糖、果糖、麥芽糖、谷氨酸鈉、葡萄糖和甘油，測定添加不同保護劑的發(fā)酵劑粉中活菌數(shù)。測定結(jié)果表明，脫脂乳粉、甘油、脯氨酸、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇對乳桿菌SC79CCTCCM208151有一定的保護作用。將脫脂乳粉、甘露醇、半胱氨酸鹽酸鹽、海藻糖、果糖、谷氨酸鈉、葡萄糖、甘油按不同的配比添加到乳桿菌SC79CCTCCM208151中進行真空冷凍干燥，測定添加不同配比的保護劑的發(fā)酵劑粉中活菌數(shù)。測定結(jié)果表明，每100g菌體中加入45-50g脫脂乳粉、5.0-6.Og葡萄糖、5.0-5.5g海藻糖和5.0-6.Og甘露醇、11.0-13.Og麥芽糖的混合作為乳桿菌SC79CCTCCM208151的保護劑，發(fā)酵劑菌粉的活菌數(shù)為1.45X10"cfu/g。二、制備乳桿菌發(fā)酵劑a)乳桿菌發(fā)酵劑1將活化的SC79CCTCCM208151按重量比3%接種到增菌改良培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，37t:培養(yǎng)16h;發(fā)酵完畢后，將發(fā)酵液在4t:條件下，8000r/min離心10min，向菌體中添加脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物作為保護劑，每100g菌體中加入45g脫脂乳粉、5.Og葡萄糖、5.Og海藻糖和5.Og甘露醇、11.Og麥芽糖，然后在-7(TC溫度下預(yù)冷凍60min，真空度為0.03mbar，冷阱溫度為_45°C的條件下進行真空冷凍干燥處理，真空包裝制成含活菌數(shù)為1.3X10"cfu/g乳桿菌發(fā)酵劑1。乳桿菌發(fā)酵劑1中脫脂乳粉的含量為8.Og/100g，葡萄糖的含量為0.8g/100g，海藻糖的含量為0.8g/100g，甘露醇的含量為0.8g/100g，麥芽糖的含量為1.6g/100g。每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基由如下物質(zhì)組成乳清800mL，葡萄糖20g，大豆蛋白胨10g，酵母膏10g，乙酸鈉5g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，吐溫801.OmL，鹽溶液(0.4g/LMgS04*7H20，0.15g/LMnS04,20，0.18g/LFeS047H20，0.05g/LNaCl)1.OmL，150mL胡蘿卜汁、50mL平菇汁、0.005mol氯化鈣、2.5g干酪素。將新鮮的無抗牛奶，均質(zhì)，向其中添加蔗糖(6g/100mL)，殺菌后將乳桿菌發(fā)酵劑1按0.015g/100g添加到牛奶中，37t:培養(yǎng)6h后，無菌添加0.015g/100g嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)，42"發(fā)酵3h，凝乳的pH降到4.4，取出4"后酸化24h，檢測pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性等各項指標(biāo)。pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性各項指標(biāo)的測定方法pH:采用PB-10酸度計(Sartorius)直接測定。黏度采用DV-IIIUltra型粘度計(Brookfield公司)在25。C進行測定，采用LV3轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速100r/min，作用時間lmin。持水性取重量W為10g發(fā)酵乳于離心管中，6000r/min，4t:，10min，稱量上清液的重量W1，持水性二(W-W1)/WX100%。硬度、凝聚性采用TA.XT.Plus質(zhì)構(gòu)分析儀(StableMicroSystem公司)在25。C進行測定，采用A/BE探頭(35mm)。測定結(jié)果表明，酸奶的pH為4.42，黏度為975厘泊，持水性為56.5%，硬度為228.2g，凝聚性為68.5g。b)乳桿菌發(fā)酵劑2將活化的SC79CCTCCM208151按重量比為3%的比例接種到SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中按照5mL/100mL添加為0.1MNa2HP04_KH2P04緩沖鹽溶液，37t:條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中流加20g/100mLNaOH調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值在5.5，培養(yǎng)14h，得到高濃度菌液。發(fā)酵完畢后，將發(fā)酵液在4t:條件下，8000r/min離心10min，向菌體中添加脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物作為保護劑，每100g菌體中加入45g脫脂乳粉、5.Og葡萄糖、5.Og海藻糖和5.Og甘露醇、11.Og麥芽糖，然后在_70°C溫度下預(yù)冷凍60min，真空度為0.03mbar，冷阱溫度為_45°C的條件下進行真空冷凍干燥處理，真空包裝制成含活菌數(shù)為1.5X10"cfu/g乳桿菌發(fā)酵劑2，乳桿菌發(fā)酵劑2中脫脂乳粉的含量為8.Og/100g，葡萄糖的含量為0.8g/100g，海藻糖的含量為0.8g/100g，甘露醇的含量為0.8g/100g，麥芽糖的含量為1.6g/100g。每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基由如下物質(zhì)組成乳清780mL，葡萄糖25g，大豆蛋白胨12g，酵母膏12g，乙酸鈉6g，半胱氨酸鹽酸鹽0.7g，吐溫801.5mL，鹽溶液(0.4g/LMgS047H20，0.15g/LMnS04,20，0.18g/LFeS047H20，0.05g/LNaCl)1.5mL，160mL胡蘿卜汁、60mL平菇汁、0.006mol氯化鈣、3.Og干酪素。新鮮的無抗牛奶，均質(zhì)，然后向其中添加蔗糖(6g/100mL)，殺菌后將乳桿菌發(fā)酵劑2按0.0075g/100g添加到牛奶中，37t:培養(yǎng)6h后，無菌添加0.015g/100g嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)和0.0075g/100g保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)，42°C發(fā)酵4h，凝乳的pH降到4.5，取出于『C后酸化24h，檢測pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性等各項指標(biāo)。pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性各項指標(biāo)的測定方法同步驟a)。測定結(jié)果表明，酸奶的pH為4.45，黏度為985厘泊，持水性為59.5%，硬度為218.lg，凝聚性為66.8g。c)乳桿菌發(fā)酵劑3將活化的SC79CCTCCM208151按重量比為3%的比例接種到SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中按照5mL/100mL添加為0.1MNa2HP04_KH2P04緩沖鹽溶液，37t:條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中流加NH3'H20調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為5.5，培養(yǎng)10h和13h分別添加葡萄糖(2g/100mL)、大豆蛋白胨(1.33g/100mL)和酵母粉(1.33g/100mL)的混合物，培養(yǎng)18h后，得到高濃度菌液。發(fā)酵完畢后，將發(fā)酵液在4°C條件下，8000r/min離心10min，向菌體中添加脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物作為保護劑，每100g菌體中加入50g脫脂乳粉、6.Og葡萄糖、5.5g海藻糖和6.Og甘露醇、13.Og麥芽糖，然后在-7(rC溫度下預(yù)冷凍60min，真空度為0.03mbar，冷阱溫度為_45°C的條件下進行真空冷凍干燥處理，真空包裝制成含活菌數(shù)為1.8X10"cfu/g乳桿菌發(fā)酵劑3，乳桿菌發(fā)酵劑3中脫脂乳粉的含量為9.Og/100g，葡萄糖的含量為1.2g/100g，海藻糖的含量為1.Og/100g，甘露醇的含量為1.Og/100g，麥芽糖的含量為2.Og/100g。每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基由如下物質(zhì)組成乳清800mL，葡萄糖20g，大豆蛋白胨10g，酵母膏10g，乙酸鈉5g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5g，吐溫801.OmL，鹽溶液(0.4g/LMgS047H20，0.15g/LMnS04,20，0.18g/LFeS047H20，0.05g/LNaCl)1.OmL，150mL胡蘿卜汁、50mL平菇汁、0.005mol氯化鈣、2.5g干酪素。將新鮮的無抗牛奶，均質(zhì)，向其中添加蔗糖(6g/100mL)，殺菌后，將乳桿菌發(fā)酵劑3和嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)分別按O.015g/100g的比例添加到牛奶中，25t:培養(yǎng)40min，28。C培養(yǎng)50min，3rC培養(yǎng)lh，34。C培養(yǎng)1.5h，37。C培養(yǎng)2h，42。C培養(yǎng)4h，凝乳的pH降到4.5，取出『C后酸化24h，檢測pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性等各項指標(biāo)。pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性各項指標(biāo)的測定方法同步驟a)。測定結(jié)果表明，酸奶的pH為4.50，黏度為1032厘泊，持水性為60.0%，硬度為272.3g，凝聚性為72.lg。d)乳桿菌發(fā)酵劑4將活化的SC79CCTCCM208151按重量比為3%的比例接種到SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中進行發(fā)酵培養(yǎng)，并向培養(yǎng)基中按照5mL/100mL添加為0.1MNa2HP04_KH2P04緩沖鹽溶液，37°〇條件下進行發(fā)酵培養(yǎng)，培養(yǎng)過程中流加朋3'H^調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值在5.5，培養(yǎng)10h和13h分別添加葡萄糖(2g/100mL)、大豆蛋白胨(1.33g/100mL)和酵母粉(1.33g/100mL)的10混合物，培養(yǎng)18h后，得到高濃度菌液。發(fā)酵完畢后，將發(fā)酵液在fC條件下，8000r/min離心10min，向菌體中添加脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物作為保護劑，每100g菌體中加入50g脫脂乳粉、6.Og葡萄糖、5.5g海藻糖和6.Og甘露醇、13.Og麥芽糖，然后在-7(rC溫度下預(yù)冷凍60min，真空度為0.03mbar，冷阱溫度為_45°C的條件下進行真空冷凍干燥處理，真空包裝制成含活菌數(shù)為2.1X10"cfu/g乳桿菌發(fā)酵劑4，乳桿菌發(fā)酵劑4中脫脂乳粉的含量為9.Og/100g，葡萄糖的含量為1.2g/100g，海藻糖的含量為1.Og/100g，甘露醇的含量為1.0g/100g，麥芽糖的含量為2.Og/100g。每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基由如下物質(zhì)組成乳清780mL，葡萄糖25g，大豆蛋白胨12g，酵母膏12g，乙酸鈉6g，半胱氨酸鹽酸鹽0.7g，吐溫801.5mL，鹽溶液(0.4g/LMgS047H20，0.15g/LMnS04,0，0.18g/LFeS04*7H20，0.05g/LNaCl)1.5mL，160mL胡蘿卜汁、60mL平菇汁、0.006mol氯化鈣、3.Og干酪素。將新鮮的無抗牛奶，均質(zhì)，向其中添加蔗糖(6g/100mL)，殺菌后，將乳桿菌發(fā)酵劑4、嗜熱鏈球菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)和保加利亞乳桿菌發(fā)酵劑(法國羅地亞公司)分別按0.0075g/100g、0.015g/100g和0.0075g/100g的比例添加到牛奶中，25。C培養(yǎng)40min，28t:培養(yǎng)50min，3rC培養(yǎng)lh，34。C培養(yǎng)1.5h，37。C培養(yǎng)2h，42。C培養(yǎng)4h，凝乳的pH降到4.5，取出『C后酸化24h，檢測pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性等各項指標(biāo)。pH、黏度、持水性、硬度、凝聚性各項指標(biāo)的測定方法同步驟a)。測定結(jié)果表明，酸奶的pH為4.43，黏度為1052厘泊，持水性為60.5%，硬度為278.5g，凝聚性為72.6g。序列表〈110〉吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院〈120〉乳桿菌發(fā)酵劑及其制備方法與專用菌株〈130〉CGGNARW81995〈160>1〈210>1〈211>1445〈212>DNA〈213>植物乳桿菌(Lactobacillusplanta進)〈400〉13tecatgc皿gtcg皿cg皿ctctggtettgattggtgcttgcatcatgatttecatttg603gtg3gtggCg雄tggtgagteacacgtggga皿cctgcCC3g皿gCgggggatearac120Ctgg皿3C3gatgcteateccgc3teac皿cttggaccgc3tggtCCg3g180ggcttcggctatcacttttggatggtcccgcggcgtettegct卿tggtggggt雄gg240ctcaccatggc皿tgatecgtegccgacctg卿gggt皿tcggccacattgggactgag300acacggcccaaactcctecggteggg皿tcttccacaatggacga皿gtc360acgccgcgtgggtttcggctcgteaaactctgttgtteaa420g皿g皿catetctgagagteactgttcaggtettgacggtattteaccag皿3gCC3Cgg■cteactecgtgccagcagccgcggteatecgteggtggraagcgttgtccggatttettg540ggcgte皿gcgagcgc郷cggtttttteagtctgatgtgaaagccttcggctcaaccga600cgga皿ctggg皿acttgagtgcag皿gagg3C3gtgg皿ctccatgtgt6603gCggtg皿3tgcgtegatetetggga卿3C3CC3gtggcg皿ggcggctgtctggtct720gteactgacgctgaggctcg腿gtetggggattegateccctggtegtc780cateccgteacteagtgttggagggtttccgcccttcagtgctgcagcte840cattccgcctggggagtecggccgc皿ggc■gggggcccgc3C皿gCggtggagratgtggttteattcga3gctecgcgaagaaccttec960caggtcttgacatectatgc朋atcteag3gattegacgttcccttcggg1020caggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtg卿tgttgggtt皿gtcccgcaacg1080agcgcaacccttettetcagttgccagcatt皿gttgggcactctggtgagactgccggt1140g3C皿3CCgg郷皿ggtggggatgacgtcgccccttetgacctgggcte1200cacacgtgctgtec皿cgagttgcgaactcgcgagagteagcteatctct1260teaagccattctcagttcggattgteggctgcaactcgcctecatg皿gtcggaatcgct1320agteatcgcgccgcggtg皿tecgttcccgggccttgtecacaccgcccg1380tcacaccatgagagtttgte3C3CCC皿3gtcggtggggtaaccttttegg皿ccagccg1440144權(quán)利要求一種乳桿菌，其保藏編號為CCTCCM208151。2.—種生產(chǎn)乳酸菌胞外多糖的方法，是發(fā)酵權(quán)利要求1所述的乳桿菌生產(chǎn)乳酸菌胞外多糖。3.—種乳桿菌發(fā)酵劑，其活性成分為權(quán)利要求1所述的乳桿菌。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的乳桿菌發(fā)酵劑，其特征在于所述發(fā)酵劑中含權(quán)利要求1所述的乳桿菌1.3X10"-2.1X10"cfu/g。5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的乳桿菌發(fā)酵劑，其特征在于所述發(fā)酵劑中還包括如下至少一種物質(zhì)脫脂乳粉、甘油、脯氨酸、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖和甘露醇；所述發(fā)酵劑中優(yōu)選包括脫脂乳粉、甘露醇、葡萄糖、海藻糖和麥芽糖；所述發(fā)酵劑中，所述脫脂乳粉的含量為8.0-9.0g/100g，所述葡萄糖的含量為0.8-1.2g/100g，所述海藻糖的含量為0.8-1.0g/100g，所述甘露醇的含量為0.8-1.0g/100g，所述麥芽糖的含量為1.6-2.0g/100g。6.制備權(quán)利要求3至5中任一所述乳桿菌發(fā)酵劑的方法，包括如下步驟1)植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)；2)收集步驟l)的菌體，然后向所述菌體中加入保護劑，獲得所述發(fā)酵劑；所述每升SC79優(yōu)化培養(yǎng)基包括如下物質(zhì)乳清780-800mL，葡萄糖20_25g，大豆蛋白胨10-12g，酵母膏10-12g，乙酸鈉5-6g，半胱氨酸鹽酸鹽0.5-0.7g，吐溫801.0_1.5mL，鹽溶液(0.4g/LMgS04*71120，0.15g/LMnS04*41120，0.18g/LFeS04*71120，0.05g/LNaCl)1.0—1.5mL，150-160mL胡蘿卜汁、50-60mL平燕汁、0.005-0.006mol氯化f丐、2.5-3.Og干酪素；所述保護劑選自如下至少一種脫脂乳粉、甘油、脯氨酸、海藻糖、麥芽糖、葡萄糖、甘露醇。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于所述保護劑為脫脂乳粉、葡萄糖、海藻糖、甘露醇和麥芽糖的混合物；每100g所述菌體中加入45-50g所述脫脂乳粉、5.0_6.0g所述葡萄糖、5.0-5.5g所述海藻糖和5.0-6.0g所述甘露醇、11.0-13.0g所述麥芽糖。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述步驟1)的發(fā)酵培養(yǎng)過程中，向所述SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中添加0.1MNa2HP04-KH2P04緩沖鹽溶液，同時用20g/100mLNaOH溶液或NH3H20調(diào)節(jié)發(fā)酵液的pH值為5.8-6.0。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于所述步驟l)的發(fā)酵培養(yǎng)過程中，發(fā)酵10h和13h時，每升發(fā)酵液添加20g葡萄糖、13.3g大豆蛋白胨和13.3g酵母粉的混合物。10.權(quán)利要求1所述乳桿菌、權(quán)利要求3至5中任一所述的乳桿菌發(fā)酵劑在生產(chǎn)乳制品中的應(yīng)用。全文摘要本發(fā)明公開了一種乳桿菌發(fā)酵劑及其制備方法與專用菌株。本發(fā)明的乳桿菌，其保藏編號為CCTCCM208151。本發(fā)明的乳桿菌發(fā)酵劑，其活性成分為所述的乳桿菌。本發(fā)明還公開了制備所述乳桿菌發(fā)酵劑的方法，包括如下步驟1)植物乳桿菌SC79CCTCCM208151在SC79優(yōu)化培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)；2)收集步驟1)的菌體，然后向所述菌體中加入保護劑，獲得所述發(fā)酵劑。本發(fā)明的乳桿菌發(fā)酵劑用量小、將該乳桿菌發(fā)酵劑和不產(chǎn)胞外多糖的酸奶菌株混合制備酸奶，產(chǎn)酸速度快，相對粘度、彈性、稠度、黏附性均優(yōu)于常規(guī)酸乳，并且形成的粘性酸乳膠體脫水收縮作用敏感性小，持水力大于常規(guī)酸乳，不易析出乳清。文檔編號A23C9/12GK101748082SQ20081023947公開日2010年6月23日申請日期2008年12月11日優(yōu)先權(quán)日2008年12月11日發(fā)明者張雪,李達,楊貞耐,牛春華,趙玉娟申請人:吉林省農(nóng)業(yè)科學(xué)院