專利名稱：：發(fā)酵高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種透明質(zhì)酸鈉的發(fā)酵生產(chǎn)所采用菌種的培育優(yōu)化技術(shù)，特別是一種發(fā)酵高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法。
背景技術(shù)：
：人體內(nèi)所有組織中都存在透明質(zhì)酸，由此可見不能低估透明質(zhì)酸的重要性。透明質(zhì)酸最重要的生物學(xué)功能之一是它的保水性。其次發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸能夠給不能直接獲得血液供給的細(xì)胞如軟骨細(xì)胞提供養(yǎng)分并清除這些細(xì)胞中的廢物。當(dāng)透明質(zhì)酸含量低于適宜數(shù)量時(shí)，養(yǎng)分不能進(jìn)入這些細(xì)胞，廢物不能從這些細(xì)胞中排出。透明質(zhì)酸簡(jiǎn)寫為HA。科學(xué)研究證明，在關(guān)節(jié)滑液、眼睛玻璃體、軟骨、血管、胞外基質(zhì)、皮膚以及臍帶中都發(fā)現(xiàn)有透明質(zhì)酸。在化妝品里透明質(zhì)酸鈉的應(yīng)用也范圍十分廣闊，膏、霜、露里都可以添加。透明質(zhì)酸鈉在眼藥里的應(yīng)用也十分廣泛，多數(shù)眼藥都添加使用！透明質(zhì)酸鈉是一種穩(wěn)定性差的產(chǎn)品，主要表現(xiàn)在容易降解，分子量在液體狀態(tài)下，極易變小，運(yùn)動(dòng)粘度下降，熱不穩(wěn)定。作為保濕因子的透明質(zhì)酸鈉在化妝品應(yīng)用中，就是用它大分子高保濕性的特性。容易降解的透明質(zhì)酸鈉在應(yīng)用中保濕和成膜效果會(huì)受到影響！在藥品的應(yīng)用中也希望它相對(duì)的穩(wěn)定。目前發(fā)酵培養(yǎng)出的透明質(zhì)酸鈉往往穩(wěn)定性不好，嚴(yán)重影響了透明質(zhì)酸鈉的有效使用，如何培養(yǎng)出高穩(wěn)定性的透明質(zhì)酸鈉顯得十分必要。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是為了解決上述技術(shù)的不足而提供一種具有高穩(wěn)定性的發(fā)酵高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法。為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明所提供的高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法，包括采用編號(hào)ATCC39920為獸疫鏈球菌，其特征是對(duì)編號(hào)為ATCC39920的獸疫鏈球菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)-第一生產(chǎn)透明質(zhì)酸鈉的獸疫鏈球菌，在下述條件下進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)優(yōu)化；條件如下高糖培育——單菌挑選——發(fā)酵試驗(yàn)步驟日常生產(chǎn)用斜面菌種——搖瓶培養(yǎng)15小時(shí)一一發(fā)酵培養(yǎng)30小時(shí)發(fā)酵時(shí)的糖濃度在10%，正常發(fā)酵的糖濃度在5%左右。配方如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.56磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100100消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制。發(fā)酵培養(yǎng)20小時(shí)后，在無菌操作下取樣，在超凈工作臺(tái)劃線，培養(yǎng)單菌落。再重復(fù)上述步驟，如此反復(fù)試驗(yàn)200次，獲得待發(fā)酵菌種；第二對(duì)所獲得的待發(fā)酵菌種進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵的透明質(zhì)酸鈉，發(fā)酵生產(chǎn)條件如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.510磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100100消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制，培養(yǎng)30小時(shí)進(jìn)入后處理步驟。按本發(fā)明提供的發(fā)酵高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法所得到的透明質(zhì)酸鈉，在同樣條件下用原來沒有優(yōu)化處理的菌種來發(fā)酵生產(chǎn)透明質(zhì)酸鈉，兩者進(jìn)行穩(wěn)定性對(duì)照考察。本發(fā)明提供的透明質(zhì)酸鈉成品穩(wěn)定性明顯高于外來透明質(zhì)酸鈉樣品。如下表所示<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>本發(fā)明培育出高穩(wěn)定的透明質(zhì)酸鈉的發(fā)酵用菌種，能生產(chǎn)出高穩(wěn)定性的透明質(zhì)酸鈉，使之在應(yīng)用中增加了使用的效果。具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。實(shí)施例1本實(shí)施例所提供的高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法，包括采用編號(hào)ATCC39920為獸疫鏈球菌，其特征是對(duì)編號(hào)為ATCC39920的獸疫鏈球菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)第一生產(chǎn)透明質(zhì)酸鈉的獸疫鏈球菌，在下述條件下進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)優(yōu)化；條件如下高糖培育——單菌挑選——發(fā)酵試驗(yàn)步驟日常生產(chǎn)用斜面菌種——搖瓶培養(yǎng)15小時(shí)——發(fā)酵培養(yǎng)30小時(shí)發(fā)酵時(shí)的糖濃度在10%，正常發(fā)酵的糖濃度在5%左右。配方如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.56磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100100消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制。發(fā)酵培養(yǎng)20小時(shí)后，在無菌操作下取樣，在超凈工作臺(tái)劃線，培養(yǎng)單菌落。再重復(fù)上述步驟，如此反復(fù)試驗(yàn)200次，獲得待發(fā)酵菌種；第二對(duì)所獲得的待發(fā)酵菌種進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵的透明質(zhì)酸鈉，發(fā)酵生產(chǎn)條件如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.510磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100畫消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng),通氣量無限制,培養(yǎng)30小時(shí)進(jìn)入后處理步驟，從而得到本發(fā)明的高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉。權(quán)利要求1、一種高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法，包括采用編號(hào)ATCC39920為獸疫鏈球菌，其特征是對(duì)編號(hào)為ATCC39920的獸疫鏈球菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)第一生產(chǎn)透明質(zhì)酸鈉的獸疫鏈球菌，在下述條件下進(jìn)行長(zhǎng)期培養(yǎng)優(yōu)化；條件如下高糖培育——單菌挑選——發(fā)酵試驗(yàn)步驟日常生產(chǎn)用斜面菌種——搖瓶培養(yǎng)15小時(shí)——發(fā)酵培養(yǎng)30小時(shí)發(fā)酵時(shí)的糖濃度在10％，正常發(fā)酵的糖濃度在5％左右。配方如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.56磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100100消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制。發(fā)酵培養(yǎng)20小時(shí)后，在無菌操作下取樣，在超凈工作臺(tái)劃線，培養(yǎng)單菌落。再重復(fù)上述步驟，如此反復(fù)試驗(yàn)200次，獲得待發(fā)酵菌種；第二對(duì)所獲得的待發(fā)酵菌種進(jìn)行發(fā)酵，獲得發(fā)酵的透明質(zhì)酸鈉，發(fā)酵生產(chǎn)條件如下斜面和搖瓶％發(fā)酵配方％牛肉膏11酵母粉0.50.5谷氨酸鈉0.20.3蠶蛹氨基酸00.2葡萄糖0.510磷酸二氫鉀0.150.2氯化鎂0.050.05純化水100100消泡劑0.010.01培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，PH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制，培養(yǎng)30小時(shí)進(jìn)入后處理步驟。全文摘要本發(fā)明公開了一種高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉菌種的培育方法，包括采用編號(hào)ATCC39920為獸疫鏈球菌，其特征是對(duì)編號(hào)為ATCC39920的獸疫鏈球菌進(jìn)行菌種培養(yǎng)和發(fā)酵培養(yǎng)，重復(fù)上述步驟，如此反復(fù)試驗(yàn)200次，獲得待發(fā)酵菌種；再在發(fā)酵培養(yǎng)劑中進(jìn)行透明質(zhì)酸鈉發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵培養(yǎng)基在121攝氏度小滅菌20分鐘，冷卻后在36-37攝氏度，pH6.8-7.1下培養(yǎng)，通氣量無限制，培養(yǎng)30小時(shí)進(jìn)入后處理步驟，得到高穩(wěn)定性透明質(zhì)酸鈉，在同樣條件下用原來沒有優(yōu)化處理的菌種來發(fā)酵生產(chǎn)透明質(zhì)酸鈉，兩者進(jìn)行穩(wěn)定性對(duì)照考察，本發(fā)明提供的透明質(zhì)酸鈉成品穩(wěn)定性明顯高于外來透明質(zhì)酸鈉樣品。文檔編號(hào)C12N1/20GK101451114SQ200810163780公開日2009年6月10日申請(qǐng)日期2008年12月31日優(yōu)先權(quán)日2008年12月31日發(fā)明者倪海良,陳雪梅申請(qǐng)人:桐鄉(xiāng)市恒基生物科技有限公司