專利名稱：紫花苜蓿Na的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及紫花苜蓿中Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白MsNHX1基因的克隆、重組及耐鹽能力功能的分析及應用，屬于分子生物學和生物技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
鹽脅迫能引起離子滲透脅迫，產(chǎn)生活性氧，破壞植物的滲透勢及離子分配的均衡，結(jié)果導致植物傷害，特別是影響農(nóng)作物的產(chǎn)量。因此，提高作物的耐鹽能力愈來愈受到人們的重視。在高鹽條件下，植物通過產(chǎn)生脅迫蛋白和可溶性滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來減輕鹽脅迫造成的毒害。早期的耐鹽基因工程主要集中在清除自由基和增加滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)兩個方面，轉(zhuǎn)基因植株的耐鹽能力有所提高，但效果不太明顯。最近，定位在質(zhì)膜和液泡膜上的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白從許多植物中分離出來。研究結(jié)果表明質(zhì)膜上的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白負責Na+的外排，從而保持植物細胞內(nèi)低Na+水平。而液泡膜上的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白則負責將Na+運入液泡，維持細胞內(nèi)的離子均衡。這大大促進了耐鹽基因工程方面的研究工作，并取得突破性進展。Blumwald等利用基因工程手段在番茄和油菜中過量表達Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因，得到了世界上第一批真正意義上的耐鹽植株(Hong-Xia Zhang，Eduardo Blumwald，2001，Nature biotechnology，19765-768)。
由于Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因在耐鹽過程中所起的作用，本發(fā)明人從耐鹽植物紫花苜蓿中分離編碼Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白的基因。根據(jù)其它植物中發(fā)表的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白的氨基酸序列，設計引物，利用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應，從紫花苜蓿中分離出編碼液泡膜上的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白的基因。進一步構(gòu)建正義表達載體，轉(zhuǎn)化模式植物擬南芥，轉(zhuǎn)基因植株具有較高的耐鹽能力，可達200mM。該基因可用于雙子葉植物的遺傳轉(zhuǎn)化，提高其耐鹽能力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明首次從紫花苜蓿中分離出編碼Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白的基因MsNHX1的全長cDNA，將其連接到表達載體上，利用農(nóng)桿菌侵染法轉(zhuǎn)化擬南芥，獲得的轉(zhuǎn)基因植株可在含有200mM NaCl的培養(yǎng)基上正常生長。
該基因的全長cDNA為1752bp，其中開放閱讀框部分為1626bp，由此推得具有541個氨基酸的一段序列，將此氨基酸序列在國際基因庫中進行檢索，表明與已發(fā)表的棉花、水稻和擬南芥的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白相比，氨基酸同源性分別為77.25％、72.69％和75.69％(見附圖1)，表明經(jīng)過上述克隆步驟得到了編碼Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白的基因。該基因的序列如下序列表(1)SEQ ID NO 1的信息(a)序列特征*長度1752堿基對*類型核酸*鏈型雙鏈*拓撲結(jié)構(gòu)線性
(b)分子類型cDNA(c)假設否(d)反義否(e)最初來源紫花苜蓿(f)序列描述1GACAGCTCAG AAACATAAAT ATCTGGGATT CATTATTACT ACTGGACTTT GAAATTTGGA 6061 AATTCAGCAA TAATCTCAAT TTGTTTTTAA ATCTGCTTTT GAAATTTGTG GAGGGTGGAC 120121 GACATCATGG CTATTGAAAT GACTTCTATT GTTTCAAAAC TATCAATGTT ATCCACTTCC 180181 GATCATGCTT CTGTTGTTTC TATGAACTTG TTTGTGGCAC TTCTGTGTGC TTGTATTGTC 240241 CTTGGTCATC TTCTCGAGGA GAATCGATGG ATGAATGAAT CCATCACTGC CCTTTTGATT 301301 GGTATTTGCA CTGGTGTAGT GATTTTGCTG TTTAGTGGTG GAAAAAGTTC GCATATTCTT 360361 GTTTTCAGTG AAGATCTTTT CTTTATATAC CTTCTGCCGC CTATTATATT CAATGCCGGG 420421 TTTCAAGTAA AGAAAAAGCA GTTTTTTGTC AACTTCATGA CTATCACATC ATTTGGAGCT 480481 ATTGGCACAT TAATATCTTG TGTCATTATA ACCACGGGTG CTACTTTTGC TTTTAAGAGG 540541 ATGGATATTG GGCCACTGGA AATCGGCGAT TATCTAGCTA TTGGAGCAAT ATTTGCCGCA 600601 ACAGACTCTG TTTGCACATT GCAGGTGCTA AATCAGGATG AGACACCTTT ATTGTATAGT 660661 CTTGTATTTG GGGAAGGTGT TGTGAATGAT GCTACCTCAG TGGTTCTTTT CAATGCAATT 720721 CAAAGCTTTG ATCTTAACCA ACTGAACCCT TCAATTGCAT TGCATTTCTT GGGCAACTTC 780781 CTGTATTTGT TTGTAGCAAG CACACTCCTT GGCGTTGTGA CAGGTCTGCT CAGTGCTTAT 840841 GTTATTAAAA AGCTGTACAT TGGCAGGCAC TCCACAGATC GTGAGGTTGC TCTTATGATG 900901 CTAATGGCAT ACCTCTCCTA TATGCTGGCT GAGTTAACCT ATCTGAGTGG CATTCTTACC 960961 GTATTCTTTT GTGGTATTGT TATGTCTCAT TATACTTGGC ATAATGTGAC GCAGAGTTCA 10201021 AGAATCACTA CCAAGCATTC TTTTGCTACC TTGTCCTTTG TTGCTGAGAT CTTTATCTTC 10801081 CTTTATGTTG GTATGGATGC CCTGGACATT GAAAAATGGA AGTTTGTTAG TGATAGTCCT 11401141 GGAACATCTA TAGCTGCAAG TTCAGTATTG TTGGGTCTAA TACTTCTTGG AAGAGCAGCG 12001201 TTTGTTTTTC CCTTATCCTT CTTATCCAAC TTGACTAAAA AATCACAACA TCAGAAGATT 12601261 TCCTTCAGAC AGCAAGTTAT CATTTGGTGG GCTGGTCTTA TGAGAGGTGC TGTTTCAATG 13201321 GCACTTGCGT ATAATCAGTT CACCATGTCG GGGCATACTC AACTACGTAG CAATGCAATC 13801381 ATGATAACCA GCACCATCAC TGTTGTCCTT TTCAGCACAG TGGTGTTTGG TTTGCTGACT 14401441 AAGCCACTCA TAAGGCTTCT ACTACCTCAT CCTAAAATCA CAAGCAGCAT GACAACCACA 15001501 GAATCGACTA CTCCAAAATC ATTCATTGTC CCACTTCTAG GAGATTCCCG AGATTCTGAA 15601561 GCTGATCTTG AAGGCCATGA AATTCACCGA CCGAACAGCC TTCGTGCTTT ACTATCAACT 16201621 CCAACTCACA CTGTTCATCG ATTATGGCGA AAGTTTGATG ATTCATTCAT GCGTCCTGTT 16801681 TTTGGTGGCA GAGGTTTTGT TCCTGTAGAA CCTGGCTCAC CAAGTGAACG CAATGGTAAT 17401741 CAATGGGGTT GA(2)SEQ ID NO.2的信息(a)序列特征
*長度541氨基酸*類型氨基酸*鏈型單鏈*拓撲結(jié)構(gòu)線性(b)分子類型蛋白質(zhì)(c)序列描述001 MAIEMTSIVS KLSMLSTSDH ASVVSMNLFV ALLCACIVLG HLLEENRWMN ESITALLIGI 060061 CTGVVILLFS GGKSSHILVF SEDLFFIYLL PPIIFNAGFQ VKKKQFFVNF MTITSFGAIG 120121 TLISCVIITT GATFAFKRMD IGPLEIGDYL AIGAIFAATD SVCTLQVLNQ DETPLLYSLV 180181 FGEGVVNDAT SVVLFNAIQS FDLNQLNPSI ALHFLGNFLY LFVASTLLGV VTGLLSAYVI 240241 KKLYIGRHST DREVALMMLM AYLSYMLAEL TYLSGILTVF FCGIVMSHYT WHNVTQSSRI 300301 TTKHSFATLS FVAEIFIFLY VGMDALDIEK WKFVSDSPGT SIAASSVLLG LILLGRAAFV 360361 FPLSFLSNLT KKSQHQKISF RQQVIIWWAG LMRGAVSMAL AYNQFTMSGH TQLRSNAIMI 420421 TSTITVVLFS TVVFGLLTKP LIRLLLPHPK ITSSMTTTES TTPKSFIVPL LGDSRDSEAD 480481 LEGHEIHRPN SLRALLSTPT HTVHRLWRKF DDSFMRPVFG GRGFVPVEPG SPSERNGNQW 540541 G 541利用200mM氯化鈉處理水培紫花苜蓿并分別提取葉片和根的總RNA做Northen雜交，結(jié)果表明該基因的表達受氯化鈉脅迫誘導(見附圖2)；Southern雜交結(jié)果表明在苜蓿中存在一個Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因的家族(見附圖3)。利用過量表達策略，該基因轉(zhuǎn)化擬南芥，將篩選出的轉(zhuǎn)基因苗在150mM和200mM氯化鈉的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。結(jié)果顯示，與野生型植株很快死亡相比，轉(zhuǎn)基因植株仍能正常生長，表明轉(zhuǎn)基因植株具有較高的耐鹽能力(見附圖4)。
根據(jù)上述技術(shù)，從紫花苜蓿中分離出編碼Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因MsNHX1，該基因過量表達能導致轉(zhuǎn)基因擬南芥具有較高的耐鹽能力。紫花苜蓿為雙子葉植物，該基因在苜蓿或其它雙子葉植物中表達，將會提高其耐鹽能力，從而提高其產(chǎn)量和品質(zhì)，可以擴大雙子葉植物在鹽堿地上的種植面積，具有非常重要的經(jīng)濟效益和社會效益。


圖1苜蓿與其它幾個物種NHX1氨基酸序列的比較結(jié)果。其中相同的氨基酸殘基用涂黑表示?；蜚y行的登記號及其物種的來源如下所示MsNHX1(苜蓿，AY513732)，GhNHX1(棉花，AF515632)，OsNHX1(水稻，NM_186088)，AgNHX1(濱黎，AB038492)，AtNHX1(擬南芥，AF056190)。
圖2在200mM NaCl處理的葉和根中，紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因MsNHX1的表達上調(diào)。從水培10天的紫花苜蓿葉和根中提取總RNA(每孔20μg)，與經(jīng)過32P標記的MsNHX13’端進行雜交。
圖3紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因MsNHX1的Southern雜交分析。提取苜蓿葉片總DNA(15μg)分別用EcoRV(泳道1)和EcoRI(泳道2)酶切，然后與經(jīng)過32P標記的MsNHX13’端進行雜交。
圖4過量表達MsNHX1基因的轉(zhuǎn)基因擬南芥與野生型擬南芥在含200mMNaCl的1/2 MS培養(yǎng)基上的生長情況。
(A)野生型擬南芥在含200mM NaCl的1/2 MS培養(yǎng)基上的生長情況。
(B)轉(zhuǎn)基因擬南芥在含200mM NaCl的1/2 MS培養(yǎng)基上的生長情況。
(五)具體發(fā)明實施方式實施方式1紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因的克隆方法(1)RNA的提取采用CTAB法或RNA kit提取總RNA。
(2)DNA第一條鏈的合成取1μg總RNA，加入5×反應緩沖液4μl，10mM脫氧核糖核酸(dNTP)2μl，核糖核酸酶抑制劑(40-200u/μl)0.5μl，引物oligodT(1μg/μl)1μl，反轉(zhuǎn)錄酶(10u/μl)2μl，42℃條件下反應60分鐘，然后在85℃條件下，放置10分鐘，終止反應。
(3)PCR反應聚合酶鏈式反應(PCR)試劑與條件為首先將下列試劑混在一起10×反應緩沖液5μl脫氧核苷酸混合物(dNTP)4μl正向引物(5μM)4μl反向引物(5μM)4μl模板cDNA 4μlTaq DNA聚合酶 0.5μl總體積50μlPCR反應條件為94℃ 3分鐘；然后進入下列循環(huán)94℃ 1分鐘，56℃ 1分鐘，72℃ 1分鐘，共35個循環(huán)；最后72℃延伸10分鐘。
(4)基因克隆取2μl PCR產(chǎn)物與pGEM-T easy載體進行連接，操作步驟按Promega公司產(chǎn)品pGEM-T easy and pGEM-T easy Vector system說明書進行。然后連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株，在表面涂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷和X-gal的含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB平板上生長過夜。挑取白色菌落，在LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)。
(5)質(zhì)粒DNA的提取堿法提取質(zhì)粒DNA。
(6)序列測定本工作在大連寶生物工程公司進行。
(7)3′和5′序列的分離按Clontech公司的SMART RACE cDNAAmplification Kit說明書進行。
(8)同源檢索利用BLAST軟件將分離出的序列與基因銀行中的序列進行比較。
實施方式2紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因(MsNHX1)的序列見“發(fā)明內(nèi)容”部分。
實施方式3表達載體的構(gòu)建(1)根據(jù)分離出的Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因的核苷酸序列，設計引物正向引物5′-TATTCTAGACGAGGTGGCGACCGGCATGG-3′反向引物5′-GACGAGCTCCTTAACTACGGTCTTCTGC-3′以根的總RNA反轉(zhuǎn)錄的cDNA為模板，進行聚合酶鏈式反應。
(2)取2μl PCR產(chǎn)物與pGEM-T easy載體進行連接，操作步驟按Promega公司產(chǎn)品pGEM-T easy and pGEM-T easy Vector system說明書進行。然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α菌株，在表面涂5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷和X-gal的含氨芐青霉素(100μg/ml)的LB平板上生長過夜。挑取白色菌落，在LB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜。然后堿法提取質(zhì)粒DNA，進行序列測定。
(3)用XbaI和SalI兩個限制性內(nèi)切酶將該基因從pGEM-T easy載體上切下，與相同酶酶切的pBI121連接。連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α細胞，然后在含氨芐青霉素的LB固體平板上培養(yǎng)，對菌落進行PCR鑒定和質(zhì)粒DNA的酶切分析。
(4)將構(gòu)建好的表達載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌，所用菌株為EHA105。
實施方式4轉(zhuǎn)基因植物耐鹽能力分析(1)種植擬南芥。
(2)挑取鑒定好的農(nóng)桿菌單克隆于含50μg/ml卡那霉素的LB液體培養(yǎng)基中，28℃振蕩培養(yǎng)。
(3)離心收集菌體，沉淀用滲透培養(yǎng)基(5％蔗糖，0.1M MgCl2，0.5％Silwet L-77)懸浮，菌液OD600值在0.8左右。
(4)將擬南芥花序浸入滲透液中，浸泡5分鐘。
(5)收獲的種子在篩選培養(yǎng)基(1×MS鹽，1％蔗糖，pH5.7，0.8％瓊脂，卡那霉素30μg/ml)上篩選，得到抗性植株。
(6)將T3代純合株系種子種于150mM，200mM氯化鈉培養(yǎng)基上培養(yǎng)，2周后觀察生長狀況。見附圖4。
序列表<110>山東農(nóng)業(yè)大學<120>紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因及其克隆與應用<160>1<170>patent In 3.1<210>1<211>1752<212>cDNA<213>紫花苜蓿(Medicago sativa)<221>1-1752<400>11GACAGCTCAG AAACATAAAT ATCTGGGATT CATTATTACT ACTGGACTTT GAAATTTGGA 6061 AATTCAGCAA TAATCTCAAT TTGTTTTTAA ATCTGCTTTT GAAATTTGTG GAGGGTGGAC 120121 GACATCATGG CTATTGAAAT GACTTCTATT GTTTCAAAAC TATCAATGTT ATCCACTTCC 180181 GATCATGCTT CTGTTGTTTC TATGAACTTG TTTGTGGCAC TTCTGTGTGC TTGTATTGTC 240241 CTTGGTCATC TTCTCGAGGA GAATCGATGG ATGAATGAAT CCATCACTGC CCTTTTGATT 301301 GGTATTTGCA CTGGTGTAGT GATTTTGCTG TTTAGTGGTG GAAAAAGTTC GCATATTCTT 360361 GTTTTCAGTG AAGATCTTTT CTTTATATAC CTTCTGCCGC CTATTATATT CAATGCCGGG 420421 TTTCAAGTAA AGAAAAAGCA GTTTTTTGTC AACTTCATGA CTATCACATC ATTTGGAGCT 480481 ATTGGCACAT TAATATCTTG TGTCATTATA ACCACGGGTG CTACTTTTGC TTTTAAGAGG 540541 ATGGATATTG GGCCACTGGA AATCGGCGAT TATCTAGCTA TTGGAGCAAT ATTTGCCGCA 600601 ACAGACTCTG TTTGCACATT GCAGGTGCTA AATCAGGATG AGACACCTTT ATTGTATAGT 660661 CTTGTATTTG GGGAAGGTGT TGTGAATGAT GCTACCTCAG TGGTTCTTTT CAATGCAATT 720721 CAAAGCTTTG ATCTTAACCA ACTGAACCCT TCAATTGCAT TGCATTTCTT GGGCAACTTC 780781 CTGTATTTGT TTGTAGCAAG CACACTCCTT GGCGTTGTGA CAGGTCTGCT CAGTGCTTAT 840841 GTTATTAAAA AGCTGTACAT TGGCAGGCAC TCCACAGATC GTGAGGTTGC TCTTATGATG 900901 CTAATGGCAT ACCTCTCCTA TATGCTGGCT GAGTTAACCT ATCTGAGTGG CATTCTTACC 960961 GTATTCTTTT GTGGTATTGT TATGTCTCAT TATACTTGGC ATAATGTGAC GCAGAGTTCA 10201021 AGAATCACTA CCAAGCATTC TTTTGCTACC TTGTCCTTTG TTGCTGAGAT CTTTATCTTC 10801081 CTTTATGTTG GTATGGATGC CCTGGACATT GAAAAATGGA AGTTTGTTAG TGATAGTCCT 11401141 GGAACATCTA TAGCTGCAAG TTCAGTATTG TTGGGTCTAA TACTTCTTGG AAGAGCAGCG 12001201 TTTGTTTTTC CCTTATCCTT CTTATCCAAC TTGACTAAAA AATCACAACA TCAGAAGATT 12601261 TCCTTCAGAC AGCAAGTTAT CATTTGGTGG GCTGGTCTTA TGAGAGGTGC TGTTTCAATG 13201321 GCACTTGCGT ATAATCAGTT CACCATGTCG GGGCATACTC AACTACGTAG CAATGCAATC 13801381 ATGATAACCA GCACCATCAC TGTTGTCCTT TTCAGCACAG TGGTGTTTGG TTTGCTGACT 14401441 AAGCCACTCA TAAGGCTTCT ACTACCTCAT CCTAAAATCA CAAGCAGCAT GACAACCACA 15001501 GAATCGACTA CTCCAAAATC ATTCATTGTC CCACTTCTAG GAGATTCCCG AGATTCTGAA 15601561 GCTGATCTTG AAGGCCATGA AATTCACCGA CCGAACAGCC TTCGTGCTTT ACTATCAACT 16201621 CCAACTCACA CTGTTCATCG ATTATGGCGA AAGTTTGATG ATTCATTCAT GCGTCCTGTT 16801681 TTTGGTGGCA GAGGTTTTGT TCCTGTAGAA CCTGGCTCAC CAAGTGAACG CAATGGTAAT 17401741 CAATGGGGTT GA 175權(quán)利要求
1.一種紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因MsNHX1，其特征在于它具有下述所示的序列1 GACAGCTCAG AAACATAAAT ATCTGGGATT CATTATTACT ACTGGACTTT GAAATTTGGA 6061AATTCAGCAA TAATCTCAAT TTGTTTTTAA ATCTGCTTTT GAAATTTGTG GAGGGTGGAC 120121 GACATCATGG CTATTGAAAT GACTTCTATT GTTTCAAAAC TATCAATGTT ATCCACTTCC 180181 GATCATGCTT CTGTTGTTTC TATGAACTTG TTTGTGGCAC TTCTGTGTGC TTGTATTGTC 240241 CTTGGTCATC TTCTCGAGGA GAATCGATGG ATGAATGAAT CCATCACTGC CCTTTTGATT 301301 GGTATTTGCA CTGGTGTAGT GATTTTGCTG TTTAGTGGTG GAAAAAGTTC GCATATTCTT 360361 GTTTTCAGTG AAGATCTTTT CTTTATATAC CTTCTGCCGC CTATTATATT CAATGCCGGG 420421 TTTCAAGTAA AGAAAAAGCA GTTTTTTGTC AACTTCATGA CTATCACATC ATTTGGAGCT 480481 ATTGGCACAT TAATATCTTG TGTCATTATA ACCACGGGTG CTACTTTTGC TTTTAAGAGG 540541 ATGGATATTG GGCCACTGGA AATCGGCGAT TATCTAGCTA TTGGAGCAAT ATTTGCCGCA 600601 ACAGACTCTG TTTGCACATT GCAGGTGCTA AATCAGGATG AGACACCTTT ATTGTATAGT 660661 CTTGTATTTG GGGAAGGTGT TGTGAATGAT GCTACCTCAG TGGTTCTTTT CAATGCAATT 720721 CAAAGCTTTG ATCTTAACCA ACTGAACCCT TCAATTGCAT TGCATTTCTT GGGCAACTTC 780781 CTGTATTTGT TTGTAGCAAG CACACTCCTT GGCGTTGTGA CAGGTCTGCT CAGTGCTTAT 840841 GTTATTAAAA AGCTGTACAT TGGCAGGCAC TCCACAGATC GTGAGGTTGC TCTTATGATG 900901 CTAATGGCAT ACCTCTCCTA TATGCTGGCT GAGTTAACCT ATCTGAGTGG CATTCTTACC 960961 GTATTCTTTT GTGGTATTGT TATGTCTCAT TATACTTGGC ATAATGTGAC GCAGAGTTCA 10201021 AGAATCACTA CCAAGCATTC TTTTGCTACC TTGTCCTTTG TTGCTGAGAT CTTTATCTTC 10801081 CTTTATGTTG GTATGGATGC CCTGGACATT GAAAAATGGA AGTTTGTTAG TGATAGTCCT 11401141 GGAACATCTA TAGCTGCAAG TTCAGTATTG TTGGGTCTAA TACTTCTTGG AAGAGCAGCG 12001201 TTTGTTTTTC CCTTATCCTT CTTATCCAAC TTGACTAAAA AATCACAACA TCAGAAGATT 12601261 TCCTTCAGAC AGCAAGTTAT CATTTGGTGG GCTGGTCTTA TGAGAGGTGC TGTTTCAATG 13201321 GCACTTGCGT ATAATCAGTT CACCATGTCG GGGCATACTC AACTACGTAG CAATGCAATC 13801381 ATGATAACCA GCACCATCAC TGTTGTCCTT TTCAGCACAG TGGTGTTTGG TTTGCTGACT 14401441 AAGCCACTCA TAAGGCTTCT ACTACCTCAT CCTAAAATCA CAAGCAGCAT GACAACCACA 15001501 GAATCGACTA CTCCAAAATC ATTCATTGTC CCACTTCTAG GAGATTCCCG AGATTCTGAA 15601561 GCTGATCTTG AAGGCCATGA AATTCACCGA CCGAACAGCC TTCGTGCTTT ACTATCAACT 16201621 CCAACTCACA CTGTTCATCG ATTATGGCGA AAGTTTGATG ATTCATTCAT GCGTCCTGTT 16801681 TTTGGTGGCA GAGGTTTTGT TCCTGTAGAA CCTGGCTCAC CAAGTGAACG CAATGGTAAT 17401741 CAATGGGGTT GA 1752
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種紫花苜蓿Na+/H+反向轉(zhuǎn)運蛋白基因MsNHX1的應用，其特征在于該基因在擬南芥中過量表達，顯著提高其耐鹽能力。
全文摘要
本發(fā)明涉及紫花苜蓿Na
文檔編號C12N15/82GK1632122SQ20041003591
公開日2005年6月29日 申請日期2004年10月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年10月13日
發(fā)明者張憲省, 安寶燕, 李加瑞, 李祥 申請人:山東農(nóng)業(yè)大學