專利名稱：用Alteromonas sp.nov.SY37-12菌株生產(chǎn)瓊膠酶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種新的微生物Alteromonas sp.nov.SY37-12以及該菌株產(chǎn)生的瓊膠酶。
背景技術(shù)：
據(jù)本發(fā)明人通過查閱資料、文獻檢索所知，產(chǎn)生瓊膠酶的菌種主要來源于海洋。Cytophage，Vibrio；Streptomyces，Alteromonas，Pseudoalteromonas，Pseudomonas中的某些菌株均可以產(chǎn)生瓊膠酶。根據(jù)伯杰氏手冊第九版，本發(fā)明的菌株的形態(tài)和生理生化特征均不同于已知菌，是從自然界分離出的新種(該菌種區(qū)別與其它該屬菌的特征見表1)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種來源于海藻的新種Alteromonas sp.nov.SY37-12以及利用該菌株生產(chǎn)瓊膠酶的方法。
本發(fā)明分離純化出一株來源于海藻的新種Alteromonas sp.nov.SY37-12，其具有產(chǎn)生瓊膠酶的特性，保藏單位簡稱CCTCC，保藏號為M204009。該瓊膠酶作用于瓊膠可產(chǎn)生不同分子量大小的瓊膠糖片段。
本發(fā)明的特點是首次分離出產(chǎn)瓊膠酶的Alteromonas sp.nov.SY37-12菌株。

圖1顯示了該菌株的電鏡照片。該菌株為桿狀，革蘭氏陰性菌，0.5～0.6μm×1.8～2.1μm。端生單鞭毛，不積累聚羥丁酸鹽顆粒作為胞內(nèi)貯存物。該菌種來源于海洋環(huán)境，生長必須需要NaCl。根據(jù)伯杰氏手冊第九版確定其為交替單胞菌屬。此菌株在2216E培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24h形成單菌落，菌落乳白色，圓形，邊緣整齊。該菌種具有營養(yǎng)要求范圍廣，容易培養(yǎng)和培養(yǎng)時間短的特點，特別是具有高的產(chǎn)酶活性，在2216E培養(yǎng)基中發(fā)酵16h，其發(fā)酵液中酶的活力即達到300U/ml。用本發(fā)明的菌株作為瓊膠酶的生產(chǎn)菌株，具有產(chǎn)品的活性高、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)周期短、成本低的特點，能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化的生產(chǎn)。
分離純化后，利用SDS-PAGE測定了該菌株產(chǎn)生的瓊膠酶的分子量。圖2顯示該瓊膠酶的分子量為39Kda。由表2可知它不同于已報導的瓊膠酶的分子量。
下面通過實施例說明本發(fā)明實施例從南海海域采集樣品，通過選擇菌落在2216E培養(yǎng)基上產(chǎn)生透明圈的大小進行初篩，通過測定酶活力復篩得到具有高產(chǎn)瓊膠酶活力的一株細菌。該菌株通過形態(tài)觀察和生理生化鑒定為交替單胞菌屬中的一個新種。(2216E培養(yǎng)基的組成酵母膏1g，蛋白胨5g，磷酸高鐵0.1g，瓊膠15g，NaCl 20g，H2O 1000ml)將菌種用2216E培養(yǎng)基活化后，以1％的接種量接入裝有100ml發(fā)酵培養(yǎng)基的250ml三角瓶中，35℃搖瓶培養(yǎng)16h后，將培養(yǎng)液用冷凍離心機以4000rpm離心10分鐘去除菌體，獲得發(fā)酵酶液。酶活力測定的條件1mL酶液加入20mL0.5％瓊膠底物中，35℃反應(yīng)30min。沸水浴滅活5min，用DNS法測定還原糖的量。在上述反應(yīng)條件下，1mL酶液1min產(chǎn)生1μg還原糖作為一個酶活力單位，以D-半乳糖作為標準。
該菌種產(chǎn)生瓊膠酶的分子量測定采用(NH4)2SO4沉淀得到的酶蛋白在50mmol Tris-HCl pH7.5的緩沖液中透析、干燥后。經(jīng)DEAE-Sepharose離子交換柱層析和Sephacryl S-100凝膠柱層析分離純化酶蛋白。SDS-PAGE得到一條單帶，分子量為39Kda。
A.aur- A.ci- A.colw- A.denit- A.esp- A.halo- A.ha- A.luteo- A.macl- A.nigrif- A.r- A.un- A.sp.
antia trea elliana rificans ejiana planktis nedai violacea eodii aciensubra dina nov細胞形狀直 + + + ++ ++ + + ++ -+彎 - - - -- -- d - -- +-有鞘鞭毛- - +- -+ d - -- -+生長4℃ + - - +- -+ d - -- d-35℃- d - -d d- + + -+ -+40℃- d - -- -- - d -- -+硝酸鹽還原 - - + -- d+ - - -- --反硝化產(chǎn)氣 - - - +- -- - - -- --產(chǎn)生物熒光 - - - -- -+ - - -- --需有機因子 + + + ++ d+ + - ++ +-產(chǎn)生淀粉酶 + + + ++ d- + + -+ d+藻朊酸酶- ++ -- d - -+幾丁質(zhì)酶- d - +- d+ - - -- +-利用D-葡萄糖+ + - ++ +d + ++ ++D-甘露糖+ + -d +- d - -+ -+D-半乳糖- - - -+ dd - + +- -+D-果糖 + + - -d d- d + +- -蔗糖- - - -+ +- - + -- +-麥芽糖 d - - ++ +- + +- +-纖維二糖- - -d -- - + -- --蜜二糖 - + -- - + +- -乳糖- - - -+ -- - + +- --水楊苷 - - -- -- - + -- -D-葡萄糖酸 - - + -- -d - + +- -鹽N-乙基葡萄 + - -- ++ + d - +糖酸銨琥珀酸 - - - -- +- - - ++ -富馬酸 - - + -- +- - - +- +DL-乳酸鹽 - - - -- -- d d +- -DL-甘油酸鹽 - -- -+ - + - -L-酮戊二酸 - - +- -- - - -- -檸檬酸鹽- - -+ +- - - +- - -烏頭酸鹽- + +- - + - -D-甘露醇- - - -+ d- - d -- - -甘油- - - -- -- - + +- - -L-蘇氨酸 - -+ -- + - -+L-酪氨酸+ - ++ +d d + + + +L-谷氨酸- - +- d+ - d + - -L-精氨酸+ - +d d- d d - d -腐胺 - -- -+ - - - -水溶性褐色素- - + -- -d - - -- - -水溶性紅色素- - - +- -- - - -+ - -水溶性紫色素- - - -- -- + - -- - -水溶性黃色素- + - -- -- + - -- - -水溶性橙色素+ - - -- -- - - -- - -水溶性黑色素- - - -- -- - - +- - -表1交替單胞菌屬種間的鑒別菌種 酶系 分子量 KDaVibrio sp.Strain JT010772Alteromonas sp.E-1 82Bacillus cereus ASK202 90Vibrio sp.PO-3034A87.5B115C57Bacillus sp.MK03 92Pseudomonas atlantica 32Vibrio sp.AP-2 20Alteromonus sp.strain C-1. 52Pseudomonas sp.PT-531Pseudomonas sp.strain W7 59Alteromonas sp.nov.SY 37-1239表2 Alteromonas sp.nov.SY 37-12菌株產(chǎn)酶與其他菌株產(chǎn)酶的比較
權(quán)利要求
1對瓊膠酶生產(chǎn)菌種Alteromonas sp.nov.SY 37-12實施專利保護。
2對利用Alteromonas sp.nov.SY 37-12產(chǎn)生的瓊膠酶實施專利保護。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種新的微生物，特別是涉及一種能產(chǎn)生的瓊膠酶的新穎的微生物Alteromonas sp.nov.SY37－12.以及該菌種產(chǎn)生的瓊膠酶。本發(fā)明的目的是提供一種來源于自然界的新種Alteromonas sp.nov.SY37－12以及利用該菌株生產(chǎn)瓊膠酶的方法。本發(fā)明從南海海域分離純化出一株菌Alteromonas sp.nov. SY37－12，其具有產(chǎn)生瓊膠酶的特性。該菌種的形態(tài)和生理生化特征均不同于已知菌種。根據(jù)伯杰氏手冊第九版確定其為交替單胞菌屬的一個新種。該菌種具有營養(yǎng)要求范圍廣，容易培養(yǎng)和培養(yǎng)時間短的特點，產(chǎn)生的瓊膠酶具有很高的活性。用本發(fā)明的菌株作為瓊膠酶的生產(chǎn)菌株，具有產(chǎn)品的活性高、穩(wěn)定性好、生產(chǎn)周期短、成本低的特點，能夠?qū)崿F(xiàn)工業(yè)化的生產(chǎn)。該酶作用于瓊膠可產(chǎn)生不同分子量大小的瓊膠糖片段。
文檔編號C12P21/02GK1560226SQ20041002365
公開日2005年1月5日 申請日期2004年3月2日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月2日
發(fā)明者江曉路, 管華詩, 王靜雪 申請人:中國海洋大學