植物材料的表面消毒方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種安全、有效的植物材料(植物外植體)表面的消毒方法。該方法將待消毒的植物外植體放置在帶有濾網或濾膜的濾芯中，然后通過高速離心使植物材料表面的微生物在離心力作用下轉移到離心管底部，從而達到除菌的目的。方法簡單有效，不污染環(huán)境，有望在實驗中廣泛采用。
【專利說明】
植物材料的表面消毒方法
技術領域
[0001 ]本發(fā)明涉及生物技術，尤其涉及一種植物材料的表面消毒方法。
【背景技術】
[0002]植物組織培養(yǎng)技術，是植物細胞工程學、遺傳學、植物生理學、生物化學與分子生物學研究的重要基本技術。植物組織培養(yǎng)技術不僅僅用于快速繁殖，在單倍體育種、種質保存、生理學研究和基因轉化等方面也有著廣泛的用途。在植物組織培養(yǎng)中始終貫穿著一個無菌的概念，一個植物外植體在接種之前，必須先通過表面消毒然后才能獲得無菌材料。
[0003]傳統(tǒng)的用于植物外植體接種前消毒的方法是:把外植體在消毒溶液或者有毒氣體下處理。這種方法的缺點是:1.操作繁瑣;2.有毒成分滲透到植物組織內部后，對后續(xù)培養(yǎng)造成不利影響;3.使用過的有毒廢液污染環(huán)境。

【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明的目的，就是為了解決上述現(xiàn)有技術存在的問題，提供一種植物材料的表面消毒方法。
[0005]為了達到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術方案:一種植物材料的表面消毒方法，包括以下步驟:
[0006]步驟一、將待消毒的植物材料在流動的自來水下清洗干凈；
[0007]步驟二、將清洗干凈的植物材料轉移到濾芯并置于第一個離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000rpm-20000rpm下高速離心10_15分鐘；
[0008]步驟三、將裝有植物材料的濾芯轉移到第二個離心管中，離心管和濾芯都加滿無菌水，在12000rpm下高速離心5分鐘，重復3次；
[0009]步驟四、將步驟三中裝有植物材料的濾芯轉移到第三個離心管中，然后用無菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復3次，最終得到無菌的植物材料。
[0010]步驟二到步驟四在無菌設備上操作。
[0011]各離心管均經高壓滅菌后使用。
[0012]步驟二到步驟三中使用的濾芯底部設有濾網，濾網的孔徑為0.5-1毫米。
[0013]步驟四中使用的濾芯底部設有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米。
[0014]本發(fā)明提供了一種安全、有效的植物材料(植物外植體)的表面消毒方法。本方法將待消毒的植物外植體放置在帶有濾網或濾膜的濾芯中，然后通過高速離心使植物材料表面的微生物在離心力作用下轉移到離心管底部，從而達到除菌的目的。方法簡單有效，不污染環(huán)境，有望在實驗中廣泛采用。
【具體實施方式】
[0015]本發(fā)明植物材料的表面消毒方法是，首先將待消毒的植物外植體在流動的自來水下清洗，洗掉肉眼可見的泥沙和其它污物;然后植物材料轉移到帶有濾芯(濾芯底部設有濾網，濾網的孔徑為0.5-1毫米)的離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000rpm-20000rpm下高速離心10-15分鐘;接著將裝有植物材料的濾芯轉移到另一個干凈的離心管中，離心管和濾芯都加滿無菌水，然后在12000rpm下高速離心5分鐘;重復三次。然后將帶有植物材料的濾芯(濾芯底部設有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米)轉移到另一個空的干凈離心管中，用無菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復三次，最終得到無菌的外植體。
[0016]上述步驟二到步驟四必須在超凈工作臺等無菌設備上操作；
[0017]上述步驟二到步驟四使用的離心管，須高壓滅菌后使用，其體積視植物外植體的大小而定。
[0018]
【申請人】按照上述方法對溫莪術塊莖，小蔓長春花葉片和大豆種子進行了接種前表面消毒，離心管體積為20毫升，濾芯體積為10毫升。濾芯中濾膜的孔徑為ΙΟΟμπι，上述材料消毒后，全部接種MS固體培養(yǎng)基，結果溫莪術塊莖污染率50%，小蔓長春花污染率20 %，大豆種子無一例污染。
[0019]本實施例中使用的方法，適用于大部分植物的外植體接種前表面消毒，具有很大的應用價值。
【主權項】
1.一種植物材料的表面消毒方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一、將待消毒的植物材料在流動的自來水下清洗干凈； 步驟二、將清洗干凈的植物材料轉移到濾芯并置于第一個離心管中，離心管和濾芯都加滿水，然后在12000印111-20000印1]1下高速離心10-15分鐘； 步驟三、將裝有植物材料的濾芯轉移到第二個離心管中，離心管和濾芯都加滿無菌水，在12000rpm下高速離心5分鐘，重復3次； 步驟四、將步驟三中裝有植物材料的濾芯轉移到第三個離心管中，然后用無菌水把濾芯裝滿，并在12000rpm下高速離心2分鐘，重復3次，最終得到無菌的植物材料。2.根據(jù)權利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟二到步驟四在無菌設備上操作。3.根據(jù)權利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:各離心管均經高壓滅菌后使用。4.根據(jù)權利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟二到步驟三中使用的濾芯底部設有濾網，濾網的孔徑為0.5-1毫米。5.根據(jù)權利要求1所述的植物材料的表面消毒方法，其特征在于:步驟四中使用的濾芯底部設有濾膜，濾膜的孔徑為50-100微米。
【文檔編號】A01H4/00GK105850730SQ201610211341
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月6日
【發(fā)明人】唐寧, 張邊江, 陳全戰(zhàn), 王立科, 楊平
【申請人】南京曉莊學院