巨菌草一次成苗組培快繁方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物的組培快繁培養(yǎng)基及組培快繁方法，尤其涉及巨菌草組培快繁培養(yǎng)基及一次成苗組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002]菌草新技術(shù)由福建農(nóng)林大學(xué)研究員、被譽(yù)為“世界菌草之父”的林占嬉發(fā)明。這一技術(shù)成功地解決了 “菌林矛盾”這道世界性難題，以草代木，變廢為寶，為解決人類貧困、保護(hù)人類之“肺”一一森林做出巨大的貢獻(xiàn)。經(jīng)過(guò)近30年的創(chuàng)新研發(fā)，該項(xiàng)技術(shù)已日趨成熟，從成千上萬(wàn)種野草中精選出近60種可取代木頭育菌的野草，并把菌草的研究和運(yùn)用擴(kuò)展到培育、制作藥用菌，從事水土保持，荒漠化治理，保護(hù)生態(tài)、減災(zāi)防災(zāi)和開(kāi)發(fā)生物質(zhì)新能源等方面，先后進(jìn)行70多個(gè)課題的系統(tǒng)研究，創(chuàng)立起一個(gè)全新的學(xué)科一一菌草學(xué)，開(kāi)發(fā)出國(guó)際領(lǐng)先的菌草綜合技術(shù)。
[0003]“綠洲一號(hào)”作為優(yōu)良的菌草之一，屬于蘆竹屬。一般的說(shuō)蘆竹屬植物是多年生挺水高大宿根草本，形如蘆葦。地下莖短縮、粗壯，多分枝，葉片廣披針形，圓錐花序頂生，穗狀呈掃帚狀，9-12月為花果期。為主要水邊觀景植物。蘆竹是一種非常有效的玉米替代物，就生物質(zhì)而言，蘆竹是一種有著巨大增產(chǎn)潛力的一年生植物，其生產(chǎn)力可保持10-15年，而且能適應(yīng)邊際土壤。此外，蘆竹還有一個(gè)很大優(yōu)點(diǎn)，即在生產(chǎn)作物的同時(shí)不會(huì)帶走土壤的肥力。桿為制管樂(lè)器中的簧片。莖纖維長(zhǎng)，長(zhǎng)寬比值大，纖維素含量高，是制優(yōu)質(zhì)紙漿和人造絲的原料。幼嫩枝葉的粗蛋白質(zhì)達(dá)12%，是牲畜的良好青飼料。根狀莖(蘆竹):苦，寒。清熱利水。用于熱病發(fā)狂，虛勞骨蒸，淋證，小便淋痛不利，風(fēng)火牙痛。
[0004]而綠洲一號(hào)菌草除了這些特點(diǎn)和功用外最大的優(yōu)點(diǎn)在于:一般的蘆竹分布于熱帶、亞熱帶，中國(guó)華東、華南和西南等地，喜溫暖，喜水濕，耐寒性不強(qiáng)，北方需要保護(hù)地越冬。而綠洲一號(hào)菌草可以在北方越冬，耐干旱和瘠薄，根系發(fā)達(dá)，在西藏正常越冬二年生的綠洲I號(hào)平均高度135cm，平均分蘗數(shù)15，畝產(chǎn)鮮重8500公斤；根系茂密發(fā)達(dá)，深度超過(guò)150cm，沙地被完全固定，效果非常明顯。能在較短時(shí)間內(nèi)重建沙地植被，固定流沙，生物生產(chǎn)量高，同時(shí)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，適口性好，可做為牛羊的優(yōu)良牧草，生態(tài)經(jīng)濟(jì)效益顯著，對(duì)我國(guó)濕潤(rùn)區(qū)的零星沙地治理和高效開(kāi)發(fā)具有重要意義，對(duì)其他沙地的治理也有試驗(yàn)前景。所以利用“綠洲一號(hào)菌草”造林固沙、濕地改造、觀賞林帶、生產(chǎn)牧草、種植食用菌、治理污水等有著廣泛的用途，尤其對(duì)我國(guó)北方的生態(tài)治理具有深遠(yuǎn)的意義。
[0005]然而，“綠洲一號(hào)菌草”的種子結(jié)實(shí)率低，種節(jié)繁殖成活率極低，限制了其大面積的推廣應(yīng)用。通常的方法是在南方，尤其是在我國(guó)海南、云南等地通過(guò)種苗種植，然后在來(lái)年溫度適宜的季節(jié)通過(guò)收割種苗并整根運(yùn)輸至北方地區(qū)，在當(dāng)?shù)噩F(xiàn)場(chǎng)砍斷種苗獲得適于栽培的節(jié)段。采用這種方法明顯的缺點(diǎn)就是運(yùn)輸成本高、運(yùn)輸過(guò)程中可能對(duì)種苗有不可逆轉(zhuǎn)的破壞，從而造成種苗利用率低。本發(fā)明通過(guò)組織培養(yǎng)方法能大量繁殖種苗，綠洲一號(hào)菌草組培育苗未見(jiàn)任何報(bào)道，常規(guī)的組培育苗方法分繼代增殖和生根誘導(dǎo)兩個(gè)步驟，采用的培養(yǎng)基分繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基，育苗周期長(zhǎng)，而本發(fā)明在同一種培養(yǎng)基中同步進(jìn)行綠洲一號(hào)菌草繼代增殖和生根誘導(dǎo)，一次成苗，可節(jié)省成本及縮短組培苗育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種綠洲一號(hào)菌草組培快繁培養(yǎng)基和一次成苗組培快繁方法，在該培養(yǎng)基中繼代增殖和生根誘導(dǎo)同步進(jìn)行，一次成苗，縮短“綠洲一號(hào)菌草”的組培育苗周期，有利于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
[0007]本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為:
[0008]I)外植體消毒:于晴天選取生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的綠洲一號(hào)菌草植株，剪取莖段作為外植體，剪去葉片，剝?nèi)ト~鞘，清洗，消毒；
[0009]2)外植體初代培養(yǎng):將已經(jīng)消毒好的外植體剪切成2cm的長(zhǎng)段，每段留一個(gè)節(jié)位腋芽，節(jié)下0.5cm，節(jié)上1.5cm，然后斜插或垂直插在裝有配制好的培養(yǎng)基的廣口瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基附加高濃度的IBA:l/2MS+5-30mg/L IBA+15g蔗糖+7g瓊脂，或MS+5-30mg/L IBA+15g蔗糖+7g瓊脂，利用NAOH將PH值調(diào)至7.0，不斷攪拌的同時(shí)，盡快將培養(yǎng)基分裝到廣口瓶中，以免培養(yǎng)基凝固或變稠而難以分裝，分裝培養(yǎng)基時(shí)應(yīng)避免培養(yǎng)基粘到瓶口，一旦粘上，應(yīng)擦除干凈，否則容易引起污染；培養(yǎng)室溫度為28±2°C，光周期為D/N = 16h/8h，光照度為2000-50001X ;3_4天后觀察到腋芽萌動(dòng)，6_20天葉芽基部萌發(fā)出根系，即可形成完整的小植株，此時(shí)此植株連在較粗的莖段，即原外植體上；
[0010]3)苗的增殖培養(yǎng):初代培養(yǎng)的小植株在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)20-40天，發(fā)育成1cm左右有2-5個(gè)莖節(jié)的植株，在超凈臺(tái)上無(wú)菌操作將上述植株從初代培養(yǎng)的原外植體上剝離并切斷，每段一個(gè)節(jié)位，根部也要留一個(gè)節(jié)位接種，斜插或垂直接種在裝有上述培養(yǎng)基的玻璃瓶中，進(jìn)行新一輪的培養(yǎng)，30天左右，新一輪的1cm左右有2-5個(gè)莖節(jié)的植株長(zhǎng)成，切斷重復(fù)進(jìn)行苗的增殖和培養(yǎng)，不斷繼代增殖；
[0011]4)移栽:小苗根系良好，葉片舒展，葉色濃綠，苗莖深綠，莖軸伸長(zhǎng)有5cm以上均可進(jìn)行移栽，移栽時(shí)倒出培養(yǎng)基，取出小苗，用清水洗凈殘留在根上的培養(yǎng)基，移栽至經(jīng)高錳酸鉀消毒過(guò)的苗床中，苗床基質(zhì)要求不嚴(yán)，苗床基質(zhì)采用運(yùn)城當(dāng)?shù)氐拇筇稂S土、細(xì)河沙泥炭土、蛭石、珍珠巖以及它們的復(fù)配基質(zhì)，淋透水，加蓋塑料薄膜拱棚及黑網(wǎng)，避免陽(yáng)光直射，移栽3天后，在薄膜上打孔透氣，以薄膜上沒(méi)有水滴為適宜打孔密度，10天后接膜，每間隔5天交替噴施殺菌劑，施葉面肥和復(fù)合肥。
【具體實(shí)施方式】
[0012]1.外植體獲得:于晴天選取生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲(chóng)害的綠洲一號(hào)菌草植株，剪取莖段作為外植體，剪去葉片，剝?nèi)ト~鞘，用酒精消毒的剪枝剪剪成2cm左右的切段，每切段帶有一個(gè)節(jié)位(腋芽)，節(jié)下0.5cm，節(jié)上1.5cm。帶節(jié)帶腋芽的莖段，不剝下腋芽，莖段中的營(yíng)養(yǎng)可促使腋芽迅速生長(zhǎng)。
[0013]2.外植體消毒:75%酒精處理30秒，然后在超凈工作臺(tái)上用8萬(wàn)單位的慶大霉素?zé)o菌溶液持續(xù)震蕩搖晃沖洗3次，1.5-2%。的氯化汞消毒5-10分鐘并搖動(dòng)數(shù)次，最后用8萬(wàn)單位的慶大霉素?zé)o菌溶液震