小檗堿作為農(nóng)用殺菌劑的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于農(nóng)藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，涉及小檗堿的新用途，具體的說是涉及小檗堿作 為農(nóng)用殺菌劑的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 小檗堿又稱黃連素。是一種常見的異喹啉生物堿，分子式C2(]H1SN0 4，其結(jié)構(gòu)如下：
[0003]
[0004] 小檗堿存在于小檗科等四個(gè)科十個(gè)屬的許多植物中。1826年M.-E.夏瓦利埃和 G.佩爾坦從Xanthoxylonclava樹皮中首次獲得。小檗堿為一種季銨生物堿。從乙醚中可 析出黃色針狀晶體；熔點(diǎn)145°C ;溶于水，難溶于苯、乙醚和氯仿。主要用于治療胃腸炎、細(xì) 菌性痢疾等腸道感染、眼結(jié)膜炎、化膿性中耳炎等有效。近來還發(fā)現(xiàn)本品有阻斷a-受體， 抗心律失常作用。
[0005] 小檗堿對(duì)溶血性鏈球菌，金黃色葡萄球菌，淋球菌和弗氏、志賀氏痢疾桿菌等均有 抗菌作用，并有增強(qiáng)白血球吞噬作用，對(duì)結(jié)核桿菌、鼠疫菌也有不同程度的抑制作用，對(duì)大 鼠的阿米巴菌也有抑制效用。小檗堿在動(dòng)物身上有抗箭毒作用，并具有末梢性的降壓及解 熱作用。小檗堿的鹽酸鹽（俗稱鹽酸黃連素）已廣泛用于治療胃腸炎、細(xì)菌性痢疾等，對(duì)肺 結(jié)核、猩紅熱、急性扁桃腺炎和呼吸道感染也有一定療效。中醫(yī)常用黃連、黃柏、三顆針及十 大功勞等作清熱解毒藥物，其中主要有效成分即小檗堿。
[0006] 目前，小檗堿主要用于醫(yī)藥領(lǐng)域，而有關(guān)小檗堿的活性物質(zhì)在農(nóng)用抑菌活性方面 的研究較少。有報(bào)道指出，小檗堿能抵抗引起植物根腐病的多種瘤梗孢的侵染；鄧業(yè)成 等研究發(fā)現(xiàn)，狹葉十大功勞根莖提取物對(duì)梨褐斑病具有較好的抑制作用，其有效中濃度為 1.798g/L〇
[0007] 公開于該【背景技術(shù)】部分的信息僅僅旨在增加對(duì)本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng) 當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的目的是拓展小檗堿的用途，為小檗堿作為農(nóng)用殺菌劑的用途提供理論基 礎(chǔ)。
[0009] 本發(fā)明提供的技術(shù)方案為：
[0010] 小檗堿作為農(nóng)用殺菌劑的新用途，所述的農(nóng)用殺菌劑的新用途是在防治植物病原 菌引起的植物病害的用途。
[0011] 作為優(yōu)選，所述的植物病原菌包括植物病原真菌和植物病原細(xì)菌。
[0012] 作為優(yōu)選，所述的植物病原真菌為玉米小斑病菌、香蕉彎孢霉葉斑病菌、煙草疫霉 病菌、柑橘綠霉病菌和煙草白絹病菌。
[0013] 作為優(yōu)選，所述的植物病原細(xì)菌為水稻白葉枯病菌、水稻細(xì)菌性條斑病菌、李細(xì)菌 性穿孔病菌、核桃黑斑病菌和柑橘潰瘍病菌。
[0014] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0015] 1.本發(fā)明使用的小檗堿是從狹葉十大功勞中提取、分離得到的，為將狹葉十大功 勞開發(fā)成一種植物源殺菌劑奠定了基礎(chǔ)，豐富了具有殺菌作用的植物品種。
[0016] 2.發(fā)明人對(duì)小檗堿抑制多種植物病原菌的活性進(jìn)行了深入研究，實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn) 小檗堿對(duì)多種植物病原菌具有較好的抑制作用，本發(fā)明為把小檗堿開發(fā)成為一種新農(nóng)藥提 供了理論基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保 護(hù)范圍并不受【具體實(shí)施方式】的限制。
[0018] 除非另有其它明確表示，否則在整個(gè)說明書和權(quán)利要求書中，術(shù)語"包括"或其變 換如"包含"或"包括有"等等將被理解為包括所陳述的元件或組成部分，而并未排除其它 元件或其它組成部分。
[0019] 發(fā)明人通過大量的篩選試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)小檗堿對(duì)多種農(nóng)業(yè)植物病原菌具有較好的抑制 作用，這從以下生物測(cè)定實(shí)例可以清楚看出。
[0020]實(shí)施例1:小檗堿對(duì)棺物病原真菌的抑制作用
[0021] 參照慕立義（1991)的菌絲生長速率法，測(cè)試供試樣品對(duì)不同植物病原真菌菌絲 生長速率的影響。
[0022] (1)供試菌種的活化：將供試真菌接種于9cm的PSA平板培養(yǎng)皿中，于28°C恒溫培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待菌落長至培養(yǎng)皿的2/3,用直徑為7_的滅菌打孔器于菌落邊緣打孔，制成 直徑為7mm的菌餅，備用。
[0023] (2)帶毒平板培養(yǎng)基的制備：稱取適量的供試樣品，用甲醇將其完全溶解后，用滅 菌水稀釋制成樣品溶液，吸取樣品溶液加至定量為l〇〇mL的熱融化并冷卻至50°C左右的 PSA熱培養(yǎng)基中，充分混勻，倒入直徑9cm培養(yǎng)皿中，制成厚薄一致的帶毒培養(yǎng)基，充分凝固 備用。
[0024] (3)對(duì)照設(shè)置：①空白對(duì)照（CK1):滅菌水對(duì)照；②溶劑對(duì)照（CK2):以能夠溶解供 試樣品且對(duì)真菌生長無明顯影響的溶劑作為溶劑對(duì)照。
[0025] (4)處理步驟：分別挑取供試菌種的菌餅，倒置于帶毒平板培養(yǎng)基的中央，每皿接 一個(gè)菌餅，每個(gè)處理3次重復(fù)，作好標(biāo)記。將處理皿放置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，定時(shí)觀 察菌落生長狀況。待對(duì)照組菌落的直徑達(dá)培養(yǎng)皿直徑的2/3以上時(shí)，用十字交叉法測(cè)量菌 落直徑，作好記錄。利用下列公式，計(jì)算活性物質(zhì)對(duì)植物病原真菌的抑菌率：
[0026]
[0027] 在小檗堿濃度為0. lg/L下，采用上述的菌絲生長速率法測(cè)試小檗堿對(duì)16種植物 病原真菌的抑菌效果。結(jié)果表明，小檗堿對(duì)15種植物病原真菌具有一定的抑菌作用（表1)。 其中，小檗堿對(duì)玉米小斑病菌表現(xiàn)為完全抑制（抑制率達(dá)100% )，對(duì)香蕉彎孢霉葉斑病菌 和煙草疫霉病菌的抑制作用較強(qiáng)，抑制率在80%以上，對(duì)柑橘綠霉病菌和煙草白絹病菌也 有較好的抑制作用，抑制率在60%以上，但對(duì)茉莉葉點(diǎn)霉葉斑病菌、杧果擬盤多毛孢葉枯病 菌、獼猴桃棒孢霉、煙草棒孢霉葉斑病菌、煙草灰霉病菌、甘藍(lán)黑斑病菌、香蕉炭疽病菌、水 稻稻瘟病菌、西瓜枯萎病菌及柑橘樹脂病菌的抑制作用一般或較差，抑制率在6%~44% 之間，對(duì)水稻紋枯病菌幾乎沒有抑制作用。與清水處理相比，所用的溶劑對(duì)照對(duì)供試病原菌 無抑制作用。
[0028] 表1小檗堿對(duì)植物病原真菌的抑菌活性
[0029]
[0031] 實(shí)施例2:小檗堿對(duì)細(xì)菌的抑制作用
[0032] 參照抑菌圈法中的瓊脂打孔擴(kuò)散法，操作步驟如下：
[0033] (1)菌液的制備：將供試細(xì)菌于NA培養(yǎng)基中劃線活化，于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48h，再用滅菌環(huán)挑取培養(yǎng)好的細(xì)菌至NA液體培養(yǎng)中，置于28°C、120r/m振蕩培養(yǎng)箱中振蕩 培養(yǎng)24h，備用。
[0034] (2)帶菌培養(yǎng)基的制備：將定量為lOOmL的NA培養(yǎng)基熱融化完全，待其冷卻至 45°C左右，吸取lmL培養(yǎng)好的細(xì)菌懸浮液注入培養(yǎng)基中，充分搖勻，均勻倒入直徑為9cm培 養(yǎng)皿中，每皿約25mL NA培養(yǎng)基，凝固后備用。
[0035] (3)樣品溶液制備：取完全溶解的樣品溶液，用滅菌水稀釋配制成需要的濃度，備 用。
[0036] ⑷對(duì)照設(shè)置：(a)藥劑對(duì)照（CK1):以100mg/L醫(yī)用鏈霉素作為陽性對(duì)照；(b)清 水對(duì)照（CK2):滅菌水對(duì)照；（c)溶劑對(duì)照（CK3):以溶解供試樣品的溶劑作為溶劑對(duì)照。
[0037] (5)處理步驟：將直徑為5_的打孔器用酒精燈火焰滅菌消毒，待其冷卻后，在帶 菌培養(yǎng)基上打孔，每皿打3-4孔（呈三角形或四方形），用滅菌的牙簽挑走小孔里的培養(yǎng)基。 將配置好的樣品溶液和對(duì)照溶劑依次有序的注入小孔中，每孔45 y L，做好標(biāo)記，每個(gè)處理 3次重復(fù)。將處理好的皿置于28°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，采用十字交叉法測(cè)量抑菌圈 直徑。
[0038] 在濃度為lg/L下，測(cè)試小檗堿對(duì)7種植物病原細(xì)菌、2種常用植物病害生防細(xì)菌及 大腸桿菌和金黃色葡萄球菌這2種常見人體致病菌的抑菌活性。
[0039] 表2小檗堿對(duì)細(xì)菌的抑菌活性
[0040]
[0042]如表2所示，小檗堿對(duì)6種植物病原細(xì)菌均具有一定的抑菌活性，其中對(duì)水稻白葉 枯病菌的抑菌效果最好，抑菌圈直徑達(dá)到32. 00mm ;其次為水稻細(xì)菌性條斑病菌和李細(xì)菌 性穿孔病菌，抑菌圈直徑分別為14. 17mm和13. 17mm ;對(duì)核桃黑斑病菌、金黃色葡萄球菌和 柑橘潰瘍病菌的抑菌圈直徑在3-10mm之間；對(duì)生防菌枯草芽孢桿菌B47和B96的生長幾 乎沒有影響，抑菌圈直徑分別為1. 50mm和0. 83mm ;對(duì)魔芋軟腐病菌和大腸桿菌沒有抑菌效 果。
[0043] 賣施例3:小檗堿對(duì)水稻細(xì)菌件條斑病菌的毒力
[0044] 參照杜連祥（2005) 0D值法測(cè)定樣品對(duì)供試細(xì)菌的毒力。
[0045] (1)菌種制備