一種毛竹組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)的方法，具體地說(shuō)，涉及一種毛竹組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]毛iPhyllostachys又名楠竹，屬于禾本科剛竹屬植物，是一種大型的多年生常綠散生竹類(lèi)，具有生長(zhǎng)快、繁殖強(qiáng)、成材早、用途廣、投資少、收益大等特點(diǎn)。我國(guó)是毛竹的中心分布區(qū)之一，素有“東亞文明及竹子文明”之稱(chēng)，主要分布于長(zhǎng)江以南，南嶺以北，戴云山以西，武陵山以東。毛竹林在創(chuàng)造生態(tài)環(huán)境佳境的同時(shí)，在農(nóng)業(yè)建設(shè)中占據(jù)重要的地位，在國(guó)民經(jīng)濟(jì)中也占有一定的比例。毛竹利用及應(yīng)用遍及各行各業(yè)，主要在農(nóng)村和農(nóng)業(yè)用竹、手工業(yè)用竹、建筑業(yè)用竹、造紙業(yè)用竹、竹等加工利用等方面，而且“以竹代木”，“以竹代塑”等正為解決我國(guó)資源緊缺提供了廣闊的前景，具有深遠(yuǎn)的戰(zhàn)略意義。因此，發(fā)展竹林是發(fā)展林業(yè)的重大措施，也是山區(qū)致富的重要途徑。
[0003]毛竹是集經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)功能和觀賞價(jià)值于一身的竹種，產(chǎn)生著巨大的社會(huì)、經(jīng)濟(jì)和生態(tài)價(jià)值。傳統(tǒng)的毛竹繁殖方式主要以埋鞭、埋桿、埋節(jié)等無(wú)性繁殖方式為主，但傳統(tǒng)無(wú)性繁殖方法取材比較困難、繁殖系數(shù)不高、成本難以控制在較低水平，難以滿足當(dāng)前生產(chǎn)的需要。組織培養(yǎng)育苗具有繁殖快、花費(fèi)少、增殖系數(shù)高等特點(diǎn)。竹子組織培養(yǎng)技術(shù)體系的建立，有助于竹子的快速繁殖，轉(zhuǎn)基因培育優(yōu)質(zhì)竹種等研宄，并有望實(shí)現(xiàn)毛竹產(chǎn)業(yè)化的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供出一種毛竹組織培養(yǎng)方法，本發(fā)明以毛竹種子為外植體，經(jīng)過(guò)種子消毒、誘導(dǎo)、增殖、生根以及煉苗移栽等步驟建立了建立了毛竹組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。
[0005]本發(fā)明的一種毛竹組織培養(yǎng)方法，包括以下的步驟:
(I)種子萌發(fā):采集回來(lái)的種子在通風(fēng)陰涼處干燥后置于4°c的冰箱中密封保存?zhèn)溆?。去掉種子的外稃，選擇顆粒飽滿，色澤明亮的完整種子并去掉毛尖。淸水洗去表面附著物后，洗衣服液浸泡5?15min,然后流水沖洗I?3h。于30?40°C中浸種10?18h后，在超凈工作臺(tái)中用4%?8%次氯酸鈉溶液中消毒10?30min，后用無(wú)菌水洗3?5次，再用
0.1%?0.3%升未溶液消毒10?25min，用無(wú)菌水沖洗4?6次后用無(wú)菌濾紙吸去水分后以平放方式接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)7?14天，然后置于每天光照12?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)直至形成叢生芽。
[0006](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)得到的小苗，從基部切取芽并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照12?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000?30001x，置于培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)，30天繼代一次。
[0007](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)的叢生芽長(zhǎng)至3?4cm高時(shí)，切割成單芽并接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25?28°C條件下全暗培養(yǎng)I?3天，然后置于每天光照14?16小時(shí)，光照強(qiáng)度為3000?50001x，培養(yǎng)溫度為25?28°C的條件下培養(yǎng)至生根。
[0008](4)煉苗移栽:將高約5?6cm的生根試管苗的培養(yǎng)瓶蓋半開(kāi)煉苗3?5天，再全開(kāi)瓶蓋加入適量的自來(lái)水并置于自然光照下煉苗5?7天，將試管苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗掉根部培養(yǎng)基，栽入由泥炭土:黃沙泥=2:1混合成的基質(zhì)中并定植于大田中。
[0009]上述步驟(I)所述的萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+1.0?3.0mg/L 6-BA+2.0?6.0mg/LTDZ+4.0 ?8mg/LGA3+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0010]上述步驟(2)所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.1?1.0mg/L 6-BA+1.0?3.0mg/LTDZ+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0011]上述步驟(3)所述的生根培養(yǎng)基為:1/2MS+1.0?5.0mg/L GGR +1.0?3.0g/LGA3+0.1 ?0.5mg/L IBA+1.0 ?5.0mg/L La (NO3) 3+15 ?30g/L 蔗糖 +3.5 ?6.0g/L 瓊脂，pH 為 5.4 ?5.8。
[0012]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是?.毛iPhyllostachys又名楠竹，屬于禾本科剛竹屬植物，是集經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)功能和觀賞價(jià)值于一身的竹種，具有生長(zhǎng)快、繁殖強(qiáng)、成材早、用途廣、投資少、收益大等特點(diǎn)。組織培養(yǎng)育苗具有繁殖快、花費(fèi)少、增殖系數(shù)高等特點(diǎn)。本發(fā)明以毛竹種子為外植體，經(jīng)過(guò)種子消毒、誘導(dǎo)、增殖、生根以及煉苗移栽等步驟建立了建立了毛竹組織培養(yǎng)快繁技術(shù)體系，為毛竹組培的進(jìn)一步工廠化育苗提供技術(shù)支撐，并為毛竹的遺傳轉(zhuǎn)化和品種改良等奠定基礎(chǔ)。
【具體實(shí)施方式】
[0013]以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說(shuō)明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0014]實(shí)施例1:
(I)種子萌發(fā):采集回來(lái)的種子在通風(fēng)陰涼處干燥后置于4°c的冰箱中密封保存?zhèn)溆?。去掉種子的外稃，選擇顆粒飽滿，色澤明亮的完整種子并去掉毛尖。淸水洗去表面附著物后，洗衣服液浸泡5min，然后流水沖洗lh。于30°C中浸種1h后，在超凈工作臺(tái)中用4%次氯酸鈉溶液中消毒lOmin，后用無(wú)菌水洗3次，再用0.1%升汞溶液消毒lOmin，用無(wú)菌水沖洗4次后用無(wú)菌濾紙吸去水分后以平放方式接種到種子萌發(fā)培養(yǎng)基中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)。接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)7天，然后置于每天光照14小時(shí)，光照強(qiáng)度為30001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)直至形成叢生芽，誘導(dǎo)率90%。所述的萌發(fā)培養(yǎng)基為:MS+1.0mg/L 6-BA+4.0mg/LTDZ+4.0mg/LGA3+23g/L 蔗糖 +5.0g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0015](2)增殖培養(yǎng):將步驟(I)培養(yǎng)得到的小苗，從基部切取芽并轉(zhuǎn)入增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行繼代培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全暗培養(yǎng)I天，然后置于每天光照12小時(shí)，光照強(qiáng)度為20001x，置于培養(yǎng)溫度為25°C的條件下培養(yǎng)，30天繼代一次，增殖系數(shù)為5.8。所述的增殖培養(yǎng)基為:MS+0.6mg/L 6-BA+l.5mg/LTDZ+30g/L 蔗糖 +4.2g/L 瓊脂，pH 為 5.6。
[0016](3)生根培養(yǎng):將步驟(I)或(2)的叢生芽長(zhǎng)至3?4cm高時(shí)，切割成單芽并接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)，接種后先在25°C條件下全