調(diào)節(jié)體系的pH為6. 5后，高壓蒸汽滅菌20min，得混合液；
[0078] 3)在超凈工作臺中，向步驟2)所得混合液中加入鞘氨醇單胞菌菌液，然后用滅菌 后的蒸餾水定容，至體系中y-PGA最終質(zhì)量濃度為1%，殼寡糖質(zhì)量濃度為0.5%，鞘氨醇 單胞菌菌液所占的質(zhì)量百分比為1% (所述鞘氨醇單胞菌菌液中，鞘氨醇單胞菌的濃度為 IXIO7);最后密封保存，即得小麥種衣劑安全添加劑。
[0079] 本實(shí)施例的小麥種衣劑安全添加劑的應(yīng)用，將小麥種衣劑安全添加劑與小麥種衣 劑按照體積比為1:1的比例混合后，按照小麥種衣劑與小麥種子的藥種比（即2ml小麥種 衣劑對應(yīng)400g小麥種子），對小麥種子進(jìn)行包衣，晾干后即可進(jìn)行播種。
[0080] 試驗(yàn)例
[0081] (1)小麥種衣劑安全添加劑對小麥活力指數(shù)、發(fā)芽勢和發(fā)芽率的影響
[0082] 試驗(yàn)方法：用4ml實(shí)施例1所得的小麥種衣劑安全添加劑和小麥種衣劑等體積復(fù) 配的混合液，對400g小麥種子進(jìn)行包衣，然后晾干后進(jìn)行播種，即為NA-MY2的處理方法；用 2ml小麥種衣劑，對400g小麥種子進(jìn)行包衣，然后晾干后進(jìn)行播種，即為CK-I的處理方法； 不對小麥種子進(jìn)行任何處理，直接播種，即為CK-2空白對照。
[0083] 其中，發(fā)芽勢：小麥播種后第三天的發(fā)芽個數(shù)占小麥種植總數(shù)的比率；發(fā)芽率：小 麥播種后第7天的發(fā)芽個數(shù)占小麥種植總數(shù)的比率；活力指數(shù)：發(fā)芽指數(shù)*苗高；發(fā)芽指數(shù) (GI)=EGt/Dt，Gt-在不同時間（7d)的發(fā)芽數(shù)，Dt-發(fā)芽日數(shù)。
[0084] 試驗(yàn)結(jié)果見圖1，圖中NA-MY2 :采用小麥種衣劑安全添加劑和種衣劑混合后包衣； CK-I:僅采用種衣劑包衣；CK-2 :空白對照，未做任何處理。
[0085] 從圖1可以看出，NA-MY2處理組中小麥的活力指數(shù)、發(fā)芽勢及發(fā)芽率均較CK-1、 CK-2處理組高，說明小麥種衣劑安全添加劑不僅能解除種衣劑副作用的發(fā)生，還能在一定 程度上提高種子活力，使其發(fā)芽整齊、出苗一致。
[0086] (2)小麥種衣劑添加劑對麥苗生長的影響
[0087] 試驗(yàn)方法：用4ml實(shí)施例1所得的小麥種衣劑安全添加劑和小麥種衣劑等體積復(fù) 配的混合液，對400g小麥種子進(jìn)行包衣，然后晾干后進(jìn)行播種，即為NA-MY2的處理方法；用 2ml小麥種衣劑，對400g小麥種子進(jìn)行包衣，然后晾干后進(jìn)行播種，即為CK-I的處理方法； 不對小麥種子進(jìn)行任何處理，直接播種，即為CK-2空白對照。
[0088] 在小麥播種20d后，對每個處理分別采用五點(diǎn)取樣法，調(diào)查統(tǒng)計每個處理的總根 數(shù)、次生根數(shù)、須根數(shù)，分蘗數(shù)用鋼尺量取苗高，用游標(biāo)卡尺量取苗基寬，用電子天平量取單 株鮮重和干重，單株干重：將幼苗在70°C恒溫條件下，直至恒重，然后再測定其干重。以上 各個指標(biāo)的數(shù)據(jù)采用Statistix9. 0軟件分析其差異顯著性。
[0089] POD測定：分別在小麥幼苗期、越冬期、返青期、孕穗期、籽粒形成期，采用五點(diǎn)取 樣法對每個處理采樣，然后按照POD的測定方法進(jìn)行采樣。POD具體測定方法：
[0090] 1.稱取小麥材料0.lg，剪碎，放入研缽中，加入適量的磷酸緩沖液研磨成勻漿，殘 澄再用5ml磷酸緩沖液提取一次，以4000rpm低溫離心15min，上清液即為粗酶液，定容至 IOml刻度，貯于低溫下備用。
[0091] 2.取2支試管，于1只中加入反應(yīng)混合液3ml和磷酸緩沖液lmL，作為對照，另1 支中加入反應(yīng)混合液3ml和上述酶液Iml(如酶活性過高可稀釋之）。迅速將兩支試管中溶 液混勻后，倒入比色杯，置于分光光度計樣品室內(nèi)，立即開啟秒表記錄時間，于470nm處測 定吸光度（OD)值，每隔IOS讀數(shù)一次。
[0092] 3.結(jié)果計算：以每分鐘OD變化值（AA470/gFW?min)表示酶活性大小，也可以用 每minOD值變化0. 01作為1個過氧化物酶活性單位（U)表示。
[0093] 過氧化物酶活性（U/gFW?min) =AA470XVT/WXVSX0? 01Xt;
[0094] 式中：
[0095] AA470--反應(yīng)時間內(nèi)OD變化值；
[0096] VT--提取酶液總體積（ml);
[0097] W--植物鮮重（g);
[0098] Vs--測定時取用酶液體積（ml);
[0099] t--反應(yīng)時間（min)。
[0100] 試驗(yàn)結(jié)果見下表1和圖2。
[0101] 表1小麥種衣劑安全添加劑對麥苗生長的影響
[0102]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 小麥種衣劑安全添加劑，其特征在于：主要由γ-聚谷氨酸（γ-PGA)、殼寡糖和 鞘氨醇單胞菌組成，以質(zhì)量比計，γ-聚谷氨酸：殼寡糖：鞘氨醇單胞菌菌液=(1? 30) : (0· OOOl ?1) : (1 ?10) 〇
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的小麥種衣劑安全添加劑，其特征在于：所述鞘氨醇單胞菌菌 液中，鞘氨醇單胞菌的濃度為IX IO7?4X 10 7個/ml。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的小麥種衣劑安全添加劑，其特征在于：所述鞘氨醇單胞菌菌 液是由以下方法制備的：將鞘氨醇單胞菌單菌落接種到液體培養(yǎng)基中，在28?35°C下培養(yǎng) 至OD 6tltl為0. 5?0. 7,離心、洗絳后，再用無菌水懸浮，即得。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的小麥種衣劑安全添加劑，其特征在于：所述離心是在4°C條件 下、以8000r/min的轉(zhuǎn)速離心lOmin。
5. -種如權(quán)利要求1所述的小麥種衣劑安全添加劑的制備方法，其特征在于：包括以 下步驟： 1) 按比例將殼寡糖溶液加入奈安大力士中，調(diào)節(jié)pH為4. 5?7. 5,滅菌，得混合液； 2) 將鞘氨醇單胞菌菌液加入步驟1)所得混合液中，用滅菌后的蒸餾水定容，至體系中 γ -聚谷氨酸的質(zhì)量濃度為1 %?30%、殼寡糖的質(zhì)量濃度為0. OOOl%?1 %、鞘氨醇單胞 菌菌液所占的質(zhì)量百分比為1%?10%，即得。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的小麥種衣劑安全添加劑的制備方法，其特征在于：步驟1) 中，所述殼寡糖溶液中殼寡糖的質(zhì)量濃度為10%。
7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的小麥種衣劑安全添加劑的制備方法，其特征在于：步驟1) 中，調(diào)節(jié)pH的方法是用質(zhì)量濃度為10%的醋酸或濃度為5mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)。
8. -種如權(quán)利要求1所述的小麥種衣劑安全添加劑的應(yīng)用，其特征在于：將小麥種衣 劑安全添加劑與小麥種衣劑按照體積比為1:1的比例混合后，按照小麥種衣劑與小麥種子 的藥種比，對小麥種子進(jìn)行包衣，晾干后即可播種。
9. 一種如權(quán)利要求1所述的小麥種衣劑安全添加劑的應(yīng)用，其特征在于：按照藥種比 為1:200的比例，將小麥種衣劑安全添加劑對小麥種子進(jìn)行包衣，晾干后即可播種。
10. -種如權(quán)利要求1所述的小麥種衣劑安全添加劑的應(yīng)用，其特征在于：將小麥種 衣劑安全添加劑兌水后對小麥進(jìn)行噴施使用；每1畝小麥田使用小麥種衣劑安全添加劑 250ml，兌水 30kg。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種小麥種衣劑安全添加劑、制備方法及應(yīng)用，該添加劑由γ-聚谷氨酸(γ-PGA)、殼寡糖和鞘氨醇單胞菌組成，以質(zhì)量比計，γ-聚谷氨酸:殼寡糖:鞘氨醇單胞菌菌液＝(1～30):(0.0001～1):(1～10)。其中，γ-聚谷氨酸能有效防止種衣劑抑制種子萌發(fā)、降低發(fā)芽勢及活力指數(shù)等副作用的發(fā)生，使小麥增產(chǎn)增收；殼寡糖具有誘導(dǎo)植物產(chǎn)生抗病蟲害能力、抑菌以及提高殺蟲劑殺蟲效果等功能，還能有效防止小麥種衣劑抑制小麥生長發(fā)育、降低單株鮮重從而影響小麥抗逆性等副作用的發(fā)生；鞘氨醇單胞菌能有效防止種衣劑影響土壤微生物、破壞土壤環(huán)境等副作用的發(fā)生，起到增產(chǎn)作用。
【IPC分類】A01C1-06, A01N63-00, A01P21-00, A01N25-32
【公開號】CN104585169
【申請?zhí)枴緾N201410809501
【發(fā)明人】黨永富, 吉慶勛, 韓松, 曹育博, 喬傳令
【申請人】黨永富
【公開日】2015年5月6日
【申請日】2014年12月22日