本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種鐵皮石斛離體培養(yǎng)再生植株的方法。
背景技術(shù)：
鐵皮石斛是蘭科草本植物，生于海拔達(dá)1600米的山地半陰濕的巖石上，主要分布于中國(guó)安徽、浙江、福建等地；其莖入藥，屬補(bǔ)益藥中的補(bǔ)陰藥；益胃生津，滋陰清熱。
組織培養(yǎng)已在蘭花生產(chǎn)中廣泛使用，并且不斷有改進(jìn)的技術(shù)和新方法推出。直接以組織培養(yǎng)物替代使用原藥材或者生產(chǎn)活性成分也是解決石斛資源短缺的方法之一，但目前涉及到該方面的研究還很少。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種鐵皮石斛離體培養(yǎng)再生植株的方法，本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種鐵皮石斛離體培養(yǎng)再生植株的方法。
為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
這種鐵皮石斛離體培養(yǎng)再生植株的方法依次包括外植體前預(yù)理、愈傷組織培養(yǎng)、不定芽培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)，壯苗培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根培養(yǎng)；
外植體為新鮮、無(wú)病害的鐵皮石斛葉子；
不定根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有5克/升～10克/升吲哚乙酸、80克/升～100克/升肌醇、10克/升～20克/升腺嘌呤、50毫克/升～100毫克/升水解酪蛋白和8克/升～14克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
上述鐵皮石斛離體培養(yǎng)再生植株的方法技術(shù)方案中，更具體的技術(shù)方案還可以是：愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有1.5mg/l～2mg/l2，4-d、20mg/l～32mg/lga、1.0mg/l～1.2mg/l6-ba和30g/l～50g/l的蔗糖的ms培養(yǎng)基。
進(jìn)一步的，愈傷組織培養(yǎng)的溫度為23℃～26℃，光照度為1200～1500lx。
進(jìn)一步的，不定芽培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中采用的培養(yǎng)基為含有100g/l～150g/l蘋(píng)果汁和2mg/l～3mg/l萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
進(jìn)一步的，不定芽培養(yǎng)、壯苗培養(yǎng)和不定根培養(yǎng)過(guò)程中的溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx。
進(jìn)一步的，壯苗培養(yǎng)過(guò)程中的壯苗培養(yǎng)基為含有添加5克/升～15克/升萘乙酸、5克/升～10克/升的硝酸鉀和36克/升～50克/升蛋白胨的ms培養(yǎng)基。
更進(jìn)一步的，生根培養(yǎng)過(guò)程中的生根培養(yǎng)基為含有10克/升～20克/升吲哚乙酸、80克/升～100克/升葡萄糖和8克/升～14克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下有益效果：
1、本發(fā)明以鐵皮石斛葉子作為外植體，在不定芽培養(yǎng)和壯苗培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根培養(yǎng)，不定根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有5克/升～10克/升吲哚乙酸、80克/升～100克/升肌醇、10克/升～20克/升腺嘌呤、50毫克/升～100毫克/升水解酪蛋白和8克/升～14克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基，與現(xiàn)有的鐵皮石斛組織培養(yǎng)方法相比，本發(fā)明出根量大，生根效果好。
2、本發(fā)明壯苗培養(yǎng)基中添加硝酸鉀，鉀元素的加入能夠有效抑制鐵皮石斛植株褐變。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳述：
實(shí)施例1
本實(shí)施例采用新鮮、無(wú)病害的鐵皮石斛葉子作為外植體，采用75%的酒精消毒；然后轉(zhuǎn)入愈傷組織培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為愈傷組織培養(yǎng)的溫度為23℃～26℃，光照度為1200～1500lx，培養(yǎng)15天；然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)10天；再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)13天；最后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)10天。
本實(shí)施例愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有1.5mg/l2，4-d、20mg/lga、1.0mg/l6-ba和40g/l的蔗糖的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例不定根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有7克/升吲哚乙酸、80克/升肌醇、17克/升腺嘌呤、100毫克/升水解酪蛋白和8克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例壯苗培養(yǎng)過(guò)程中的壯苗培養(yǎng)基為含有添加5克/升萘乙酸、10克/升的硝酸鉀和50克/升蛋白胨的ms培養(yǎng)基
本實(shí)施例不定芽培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中采用的培養(yǎng)基為含有150g/l蘋(píng)果汁和2mg/l萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
實(shí)施例2
本實(shí)施例采用新鮮、無(wú)病害的鐵皮石斛葉子作為外植體，采用75%的酒精消毒；然后轉(zhuǎn)入愈傷組織培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為愈傷組織培養(yǎng)的溫度為23℃～26℃，光照度為1200～1500lx，培養(yǎng)17天；然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)13天；再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)18天；最后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)15天。
本實(shí)施例愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有1.65mg/l2，4-d、27mg/lga、1.1mg/l6-ba和30g/l的蔗糖的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例不定根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有10克/升吲哚乙酸、90克/升肌醇、20克/升腺嘌呤、80毫克/升水解酪蛋白和11克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例壯苗培養(yǎng)過(guò)程中的壯苗培養(yǎng)基為含有添加8克/升萘乙酸、5克/升的硝酸鉀和42克/升蛋白胨的ms培養(yǎng)基
本實(shí)施例不定芽培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中采用的培養(yǎng)基為含有120g/l蘋(píng)果汁和2.4mg/l萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
實(shí)施例3
本實(shí)施例采用新鮮、無(wú)病害的鐵皮石斛葉子作為外植體，采用75%的酒精消毒；然后轉(zhuǎn)入愈傷組織培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為愈傷組織培養(yǎng)的溫度為23℃～26℃，光照度為1200～1500lx，培養(yǎng)20天；然后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)16天；再轉(zhuǎn)入壯苗培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)15天；最后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中，設(shè)置溫度為26℃～28℃，光照度為1400～1700lx，培養(yǎng)13天。
本實(shí)施例愈傷組織培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有2mg/l2，4-d、32mg/lga、1.2mg/l6-ba和50g/l的蔗糖的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例不定根培養(yǎng)的培養(yǎng)基為含有5克/升吲哚乙酸、100克/升肌醇、10克/升腺嘌呤、50毫克/升水解酪蛋白和14克/升萘乙酸的ms培養(yǎng)基。
本實(shí)施例壯苗培養(yǎng)過(guò)程中的壯苗培養(yǎng)基為含有添加15克/升萘乙酸、8克/升的硝酸鉀和36克/升蛋白胨的ms培養(yǎng)基
本實(shí)施例不定芽培養(yǎng)培養(yǎng)過(guò)程中采用的培養(yǎng)基為含有100g/l蘋(píng)果汁和3mg/l萘乙酸的ms培養(yǎng)基。