本發(fā)明屬于花卉繁殖方法，具體涉及花卉的無性快速繁殖方法。

背景技術(shù)：

玉露，是百合科，十二卷屬，多年生草本植物，葉片肉質(zhì)，肥厚飽滿。原產(chǎn)于南非，耐干旱，不耐寒，忌高溫潮濕和烈日暴曬。玉露幼株多為單生，后逐漸呈群生狀，肉質(zhì)葉呈緊湊的蓮座狀排列。玉露外形玲瓏小巧，種類豐富，葉色晶瑩剔透，富于變化，深受國內(nèi)外花卉愛好者的喜愛，具有十分高的市場需求和經(jīng)濟價值。玉露的傳統(tǒng)繁殖方法，多采用播種繁殖，扦插繁殖和分株繁殖。其中，扦插繁殖和分株繁殖為無性繁殖，可以保持植株的性狀穩(wěn)定，但是繁殖周期長，產(chǎn)出效率較低，另外，播種繁殖為有性繁殖，容易使性狀產(chǎn)生分離，丟失母本的優(yōu)良性狀，并且幼苗成活率低，以上因素都極大的影響了生產(chǎn)效率和產(chǎn)品質(zhì)量。植物組織培養(yǎng)即植物離體培養(yǎng)技術(shù)，根據(jù)植物細胞的全能性，利用植物體離體的器官(如根、莖、葉、莖尖、花、果實等)、組織(如形成層、表皮、皮層、胚乳等)或細胞(如大孢子、小孢子、體細胞等)以及原生體，在無菌和適宜的人工培養(yǎng)基及光照、溫度等人工條件下，能誘導出愈傷組織、不定芽、不定根，形成完整的植株或產(chǎn)生具有經(jīng)濟價值的其它產(chǎn)品的技術(shù)。由植物組織培養(yǎng)所產(chǎn)生的再生植株除了極低的變異外，基本都能保持親本(外植體來源植株)的優(yōu)良性狀。植株組織培養(yǎng)技術(shù)發(fā)明以來已經(jīng)取得了很大的進展。利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)離體快速繁殖玉露可以大規(guī)模產(chǎn)生株型齊整的植株，進一步滿足市場需求。前人所做的玉露組培實驗雖然也有成功的先例，但是愈傷組織叢生芽誘導分化率低，導致產(chǎn)出效率低，極大阻礙了玉露的組織培養(yǎng)離體快繁在實際生產(chǎn)的大規(guī)模應用，并不具備市場化生產(chǎn)條件。本發(fā)明可使玉露在一年以內(nèi)實現(xiàn)快速繁殖，而且繁殖效率高，非常適合工廠化生產(chǎn)。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為克服傳統(tǒng)玉露繁殖方法存在的繁殖速度慢，性狀不穩(wěn)定，成活率低等缺點；也為了克服前人玉露組織培養(yǎng)試驗中叢生芽誘導分化率低，再生周期長，不適合工廠化生產(chǎn)等缺點。提供一種玉露的離體快速繁殖方法，使玉露在相對短的時間內(nèi)產(chǎn)生大量遺傳背景穩(wěn)定，株型一致的再生植株。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

1.外植體接種及愈傷組織誘導：取玉露植株的幼嫩葉片，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡30～60s，用無菌水沖洗2～3次后，迅速倒入1.5～3％(質(zhì)量/體積)次氯酸鈉溶液中浸泡8～10min，傾去次氯酸鈉溶液，再用無菌水沖洗4～5次，將處理好的玉露葉片，橫切成1cm左右小段；接種在含6-ba0.5mg/l，naa0.1mg/l，kt1mg/l，蔗糖3.0％(質(zhì)量/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為5.6～6.0的ms固體培養(yǎng)基上，光照強度為1500～2000lux，光照時間每天12～14小時，培養(yǎng)溫度在24℃～28℃，40～50天繼代一次，待長出黃綠色粒狀愈傷時即可誘導分化。

2.叢生芽的誘導：將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基：ms+kt0.5mg/l+6-ba(0.1～0.2mg/l)+naa(0～0.1mg/l)+iaa(0.1～0.5mg/l)+20.0％天然椰汁(體積/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為5.6～6.0的ms培養(yǎng)基上。光照強度為1500～2000lux，光照時間每天12～14小時，培養(yǎng)溫度在24℃～28℃，40～50天繼代一次，該愈傷分化能力可持續(xù)一年以上。從一塊愈傷經(jīng)過反復繼代可分化出800株左右的再生苗。

3.壯苗培養(yǎng)：再生苗轉(zhuǎn)到1/2ms+20％天然椰汁(體積/體積)，ph值為5.6～6.0的壯苗培養(yǎng)基上，光照強度1500～2000lux，光照時間每天12～14小時，培養(yǎng)溫度在24℃～28℃。

4.再生植株移栽：壯苗植株長到3～4厘米后，將壯苗植株的組培瓶拿到溫室中打開，使壯苗植株適應溫室環(huán)境5～7天后，將壯苗植株從組培瓶中取出，將培養(yǎng)基清洗干凈，移栽至100％蛭石或是赤玉土栽培基質(zhì)中，栽培基質(zhì)需要經(jīng)過121℃滅菌30～60分鐘。7～15天左右澆一次透水便可成活。

本發(fā)明使玉露在相對較短的時間內(nèi)大量產(chǎn)生基因背景相同、株型統(tǒng)一的再生植株。以玉露葉片切塊為外植體，通過合理的培養(yǎng)基協(xié)同搭配以及外界的環(huán)境調(diào)控措施，脫分化率可達43％，叢生芽誘導率可達84.1％現(xiàn)對于現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)提高15％以上，葉片外植體產(chǎn)生的愈傷組織，分化后產(chǎn)生叢生芽，叢生芽經(jīng)繼代后可分化出800株左右的再生苗，再生苗的壯苗存活率可達95％，在適宜環(huán)境下移栽成活率達100％，現(xiàn)對于現(xiàn)有技術(shù)提高20％以上。本發(fā)明可以在不影響母株正常發(fā)育及繁殖的情況下使玉露在相對短的時間內(nèi)大規(guī)模繁殖，并且取材不受季節(jié)限制，再生周期短，愈傷組織誘導率高，叢生芽分化率高，植株移栽后生長狀態(tài)良好。非常適用于玉露稀缺品種的快速繁殖，平均單株再生苗的成本極低，非常適合工廠化生產(chǎn)。

具體實施方式

下面將結(jié)合實例對本發(fā)明做進一步的說明，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅限于以下2個實施例：

實施例一：

選擇n1玉露葉片為外植體進行離體快繁。

1.外植體接種及愈傷組織誘導：取n1玉露植株的幼嫩葉片，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡60s，用無菌水沖洗2～3次后，迅速倒入3％(質(zhì)量/體積)次氯酸鈉溶液中浸泡8min，傾去次氯酸鈉溶液，再用無菌水沖洗4～5次，將處理好的玉露葉片，橫切成1cm左右小段；接種在含6-ba0.5mg/l，naa0.1mg/l，kt1mg/l，蔗糖3.0％(質(zhì)量/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為5.8的ms固體培養(yǎng)基上，光照強度為2000lux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)溫度在25℃，50天繼代一次，待長出黃綠色粒狀愈傷時即可誘導分化。

2.叢生芽的誘導：將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基：ms+kt0.5mg/l+6-ba0.1mg/l+iaa0.1mg/l+20.0％天然椰汁(體積/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為5.8的ms培養(yǎng)基上。光照強度為1800lux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)溫度在25℃，45天繼代一次，該愈傷分化能力可持續(xù)一年以上。從一塊愈傷經(jīng)過反復繼代可分化出820株的再生苗。

3.壯苗培養(yǎng)：再生苗轉(zhuǎn)到1/2ms+20％天然椰汁(體積/體積)，ph值為5.8的壯苗培養(yǎng)基上，光照強度2000lux，光照時間每天12小時，培養(yǎng)溫度在25℃。

4.再生植株移栽：壯苗植株長到3～4厘米后，將壯苗植株的組培瓶拿到溫室中打開，使壯苗植株適應溫室環(huán)境5天后，將壯苗植株從組培瓶中取出，將培養(yǎng)基清洗干凈，移栽至100％蛭石栽培基質(zhì)中，蛭石需要經(jīng)過121℃滅菌30～60分鐘。15天左右澆一次透水便可成活。實施例二：

選擇ob1玉露葉片為外植體進行離體快繁。

1.外植體接種及愈傷組織誘導：取ob1玉露植株的幼嫩葉片，放入無菌超凈臺中，用75％(體積/體積)酒精浸泡45s，用無菌水沖洗2～3次后，迅速倒入1.5％(質(zhì)量/體積)次氯酸鈉溶液中浸泡10min，傾去次氯酸鈉溶液，再用無菌水沖洗4～5次，將處理好的玉露葉片，橫切成1cm左右小段；接種在含6-ba0.5mg/l，naa0.1mg/l，kt1mg/l，蔗糖3.0％(質(zhì)量/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為6.0的ms固體培養(yǎng)基上，光照強度為1500lux，光照時間每天14小時，培養(yǎng)溫度在24℃，50天繼代一次，待長出黃綠色粒狀愈傷時即可誘導分化。

2.叢生芽的誘導：將愈傷轉(zhuǎn)接到誘導分化培養(yǎng)基：ms+kt0.5mg/l+6-ba0.1mg/l+naa0.1mg/l+iaa0.1mg/l+20.0％天然椰汁(體積/體積)，瓊脂6.0％(質(zhì)量/體積)，ph值為6.0的ms培養(yǎng)基上。光照強度為1500lux，光照時間每天14小時，培養(yǎng)溫度在24℃，45天繼代一次，該愈傷分化能力可持續(xù)一年以上。從一塊愈傷經(jīng)過反復繼代可分化出795株的再生苗。

3.壯苗培養(yǎng)：再生苗轉(zhuǎn)到1/2ms+20％天然椰汁(體積/體積)，ph值為6.0的壯苗培養(yǎng)基上，光照強度1500lux，光照時間每天14小時，培養(yǎng)溫度在24℃。

4.再生植株移栽：壯苗植株長到3～4厘米后，將壯苗植株的組培瓶拿到溫室中打開，使壯苗植株適應溫室環(huán)境7天后，將壯苗植株從組培瓶中取出，將培養(yǎng)基清洗干凈，移栽至100％赤玉土栽培基質(zhì)中，赤玉土需要經(jīng)過121℃滅菌30～60分鐘。7天左右澆一次透水便可成活。

以玉露葉片切塊為外植體，通過合理的培養(yǎng)基協(xié)同搭配以及外界的環(huán)境調(diào)控措施，脫分化率可達43％，叢生芽誘導率可達84.1％現(xiàn)對于現(xiàn)有技術(shù)培養(yǎng)提高15％以上，葉片外植體產(chǎn)生的愈傷組織，分化后產(chǎn)生叢生芽，叢生芽經(jīng)繼代后可分化出800株左右的再生苗，再生苗的壯苗存活率可達95％，在適宜環(huán)境下移栽成活率達100％，現(xiàn)對于現(xiàn)有技術(shù)提高20％以上。本發(fā)明可以在不影響母株正常發(fā)育及繁殖的情況下使玉露在相對短的時間內(nèi)大規(guī)模繁殖，并且取材不受季節(jié)限制，再生周期短，愈傷組織誘導率高，叢生芽分化率高，植株移栽后生長狀態(tài)良好。非常適用于玉露稀缺品種的快速繁殖，平均單株再生苗的成本極低，非常適合工廠化生產(chǎn)。