一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus）三炬-04及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌(Bacillus?methylotrophicus)三炬-04及其應(yīng)用，該菌株保藏于保藏于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號(hào)為CCTCC?No:M2012169。本發(fā)明具有很好的防治辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩(wěn)定，無有毒的化學(xué)物殘留，不污染農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境，性價(jià)比高和施用方便的優(yōu)點(diǎn)。其將在植物的青枯病、炭疽病的防治中發(fā)揮重要的作用，應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】-種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌（Bac i I I us methy I otroph i cus) 三炬-04及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一株甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌與具體應(yīng)用，特別是涉及一株甲基營(yíng)養(yǎng)型芽 孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04菌及其菌劑與該菌劑在防治植物病害中的 應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 青枯病是一種廣泛分布于熱帶、亞熱帶和某些溫帶地區(qū)的世界性病害，是多種農(nóng) 作物減產(chǎn)的主要原因，在我國(guó)福建、廣東、廣西、四川、云南、湖南、江西、浙江、上海、江蘇、安 徽等省、市（區(qū)）都有分布。辣椒的青枯病是辣椒種植過程中最為嚴(yán)重的土傳病害之一，由 于近幾年塑料大棚辣椒春早熟和秋延遲栽培的迅速發(fā)展，辣椒青枯病呈逐步上升趨勢(shì)。春 早熟栽培從剛進(jìn)入盛花結(jié)果期（一般在5月上旬）開始發(fā)生，秋延遲栽培從10?11月份 開始發(fā)生。一旦發(fā)生，損失嚴(yán)重，常常造成20%?30%的死亡，嚴(yán)重的高達(dá)50%以上。秋延 遲栽培比春早熟栽培為害更為突出，也是近年來影響辣椒種植的突出問題。
[0003] 柑桔炭疽病是一種世界性的、為害較重的病害。可引起落葉、枝梢枯死，嚴(yán)重時(shí)會(huì) 造成連片的果園感染，樹捎全部枯死，損失慘重，2007年廣東的德慶柑橘產(chǎn)區(qū)就出現(xiàn)了大面 積感染炭疽病，造成嚴(yán)重減產(chǎn)，是一種毀滅性的病害。對(duì)于輕微的果實(shí)感染會(huì)造成果實(shí)腐爛 及落果，帶病果實(shí)常在貯運(yùn)期間發(fā)生腐爛，所以又是一種重要的采后病害。柑桔炭疽病對(duì)我 國(guó)的柑橘主產(chǎn)區(qū)福建、廣東、江西、四川都造成過嚴(yán)重的危害和較大經(jīng)濟(jì)損失，對(duì)柑橘產(chǎn)業(yè) 的發(fā)展造成嚴(yán)重影響。
[0004] 對(duì)于以上病害傳統(tǒng)防治方法大都采用化學(xué)農(nóng)藥，然而化學(xué)農(nóng)藥效果大都不顯著， 卻同時(shí)帶來了環(huán)境污染、化學(xué)殘留等副作用，對(duì)農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量造成不良影響。對(duì)此，具有污 染小、而且對(duì)人畜毒性小、環(huán)境兼容性好、病蟲害不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點(diǎn)的生物修復(fù)技術(shù)應(yīng)運(yùn) 而生。生物修復(fù)劑是利用微生物本身或其代謝物防治和修復(fù)病、蟲、雜草等影響的生物制 齊?，其更符合現(xiàn)代社會(huì)對(duì)農(nóng)業(yè)生產(chǎn)要求。目前我國(guó)在生物修復(fù)劑生產(chǎn)始終未能形成規(guī)模產(chǎn) 業(yè)。生物修復(fù)劑和生物農(nóng)藥在農(nóng)藥總量中的占有量只為4%左右，與發(fā)達(dá)國(guó)家相比還有較大 差距。近年來，我國(guó)開發(fā)的生物修復(fù)劑、生物農(nóng)藥及其它高新技術(shù)越來越受到國(guó)際生物、農(nóng) 藥界的關(guān)注。但在品種、劑型、質(zhì)量和數(shù)量方面與發(fā)達(dá)國(guó)家相差甚遠(yuǎn)，仍遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足國(guó)內(nèi) 外市場(chǎng)的需求。發(fā)展生物修復(fù)劑、生物農(nóng)藥產(chǎn)業(yè)對(duì)保證農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展、保障人們的生命與 健康、保護(hù)生態(tài)環(huán)境都十分重要，將為我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品出口創(chuàng)造十分有利的條件，極大地增強(qiáng)我 國(guó)農(nóng)產(chǎn)品的國(guó)際競(jìng)爭(zhēng)力。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一株對(duì)植物青枯病、炭疽病具有防治作用的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢 桿菌。該甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. Μ2012169， 該菌株已于2012年5月16日保藏于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC No. M2012169。
[0006] 所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC N〇.M2012169,其菌株的16S rRNA基因序列如序列表中SEQ ID NO 1所示。
[0007] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其 用于防治植物的青枯病或炭疽病。尤其是用于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
[0008] 本發(fā)明的再一目的在于提供前述的甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，即 將其發(fā)酵，制成發(fā)酵液使用。
[0009] 在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，所述的發(fā)酵為液體發(fā)酵，以1-10%接種量接種發(fā)酵罐， 進(jìn)行好氧深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度20-30°C，發(fā)酵周期36-45h。
[0010] 在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，液體發(fā)酵培養(yǎng)基包括：蔗糖〇. 5-2%、酵母膏0. 5-2%、 磷酸二氫鉀 0.05-0. 02 %、硫酸鎂 0.01-0. 10 %、氯化鈉 0.01-0. 10 %、碳酸鈣 0.01-0. 10%、 PH5-9。
[0011] 在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，發(fā)酵液再制成液體產(chǎn)品或固體產(chǎn)品使用。
[0012] 在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，發(fā)酵液中加入穩(wěn)定劑后，經(jīng)無菌灌裝即為液體產(chǎn)品。
[0013] 在本發(fā)明的較佳實(shí)施例中，固態(tài)產(chǎn)品為：把發(fā)酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌 后的有機(jī)培養(yǎng)基上，混合攪拌均勻，在放置至少l〇h后包裝成袋。
[0014] 本發(fā)明的有益效果是：
[0015] 本發(fā)明提供了一株對(duì)辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病具有較高防治效果的甲基營(yíng)養(yǎng) 型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. M2012169 及其菌劑。該菌 劑具有很好的防治和修復(fù)辣椒的青枯病、柑橘的炭疽病功效，且較為穩(wěn)定，無有毒的化學(xué)物 殘留，不污染農(nóng)產(chǎn)品和環(huán)境，性價(jià)比高和施用方便的優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明將在辣椒的青枯病、柑橘 的炭疽病的防治中發(fā)揮重要的作用，應(yīng)用前景廣闊。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 圖1為本發(fā)明菌種的顯微照片圖（放大1000倍）

【具體實(shí)施方式】
[0017] 以下通過【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步描述本發(fā)明：
[0018] 實(shí)施例1菌種分離和鑒定
[0019] 甲基營(yíng)養(yǎng)型芽抱桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04CCTCC No. M2012169菌的分離：采集福建省南靖縣和溪鎮(zhèn)樂土村六斗山（東經(jīng)117° 1 z 30〃，北緯 24° 56^20"，海拔360米）的土壤，從該土壤中通過營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板分離獲得一株甲基營(yíng)養(yǎng) 型芽孢桿菌，命名為三炬-04,已于2012年5月16日保藏于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏 中心，保藏編號(hào)CCTCC NO.M2012169。經(jīng)鑒定，該菌為甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌，具有以下特征： 單個(gè)細(xì)胞0.7?0.8X2?3微米，著色均勻。無莢膜，周生鞭毛，能運(yùn)動(dòng)。革蘭氏陽(yáng)性菌， 芽孢0. 6?0. 9 X 1. 0?1. 5微米，橢圓到柱狀，位于菌體中央或稍偏，芽孢形成后菌體不膨 大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黃色，在液體培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)，常形成皺醭，需氧菌， 適宜生長(zhǎng)溫度28?30°C，適宜pH值為5-9。菌種的顯微照片見圖1。
[0020] 菌株三炬-04生理生化特性
[0021] 表型及生理生化特性一酶活、碳源同化
[0022]
[0023]

【權(quán)利要求】
1. 一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌（Bacillus methylotrophicus)三炬-04,保藏于保藏 于武漢大學(xué)中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期為2012年5月16日，保藏號(hào)為CCTCC No. M2012169。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于：其用 于防治植物的青枯病或炭疽病。
3. 如權(quán)利要求1所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的用途，其特征在于：其用 于防治辣椒的青枯病或柑橘的炭疽病。
4. 如權(quán)利要求1所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 將其發(fā)酵，制成發(fā)酵液使用。
5. 如權(quán)利要求4所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在 于：所述的發(fā)酵為液體發(fā)酵，以1-10%接種量接種發(fā)酵罐，進(jìn)行好氧深層發(fā)酵，發(fā)酵溫度 20-30°C，發(fā)酵周期 36-45h。
6. 如權(quán)利要求4所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 液體發(fā)酵培養(yǎng)基包括：蔗糖〇. 5-2%、酵母膏0. 5-2 %、磷酸二氫鉀0. 05-0. 02 %、硫酸鎂 0· 01-0. 10%、氯化鈉 0· 01-0. 10%、碳酸鈣 0· 01-0. 10%、pH5-9。
7. 如權(quán)利要求4所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 發(fā)酵液再制成液體產(chǎn)品或固體產(chǎn)品使用。
8. 如權(quán)利要求7所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 發(fā)酵液中加入穩(wěn)定劑后，經(jīng)無菌灌裝即為液體產(chǎn)品。
9. 如權(quán)利要求7所述的一種甲基營(yíng)養(yǎng)型芽孢桿菌三炬-04的使用方法，其特征在于： 固態(tài)產(chǎn)品為：把發(fā)酵液按10-20%的比例噴灑在滅菌后的有機(jī)培養(yǎng)基上，混合攪拌均勻，再 放置至少l〇h后包裝成袋。
【文檔編號(hào)】A01N63/04GK104195076SQ201410403220
【公開日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2012年12月17日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月17日
【發(fā)明者】林克明, 尤越 申請(qǐng)人:福建三炬生物科技股份有限公司