專利名稱：一種牛肝菌母種培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于真菌培養(yǎng)基領(lǐng)域，尤其涉及一種牛肝菌母種培養(yǎng)基及其制備方法。
背景技術(shù)：
牛肝菌類是牛肝菌科和松塔牛肝菌科等真菌的統(tǒng)稱，其中除少數(shù)品種有毒或味苦而不能食用外，大部分品種均可食用。有些牛肝菌味道鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，如美味牛肝菌、黃褐牛肝菌和灰褐牛肝菌等。食用牛肝菌普遍菌體較大，肉肥厚，柄粗壯，食味香甜可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，是一類世界性著名食用菌。
牛肝菌富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及鈣、磷、鐵等礦物質(zhì)。牛肝菌是珍貴菌類，有些牛肝菌品種香味獨(dú)特、營(yíng)養(yǎng)豐富，有些牛肝菌品種有防病治病、強(qiáng)身健體的功能，特別對(duì)糖尿病有很好的療效。此外，有些品種的牛肝菌其水提物對(duì)小白鼠肉瘤S-180的生長(zhǎng)有阻抑作用，對(duì)肉瘤S-180的抑制率為100%，對(duì)艾氏腹水癌的抑制率為90%，同時(shí)還有抗流感病毒、防治感冒的作用，是我國(guó)遠(yuǎn)銷歐美的著名食用菌。據(jù)分析，100克牛肝菌干品中可含蛋白質(zhì)20. 2克，碳水化合物64. 2克，熱量338千卡，灰分4. O克，Ca23毫克，P500毫克，F(xiàn)e50毫克，核黃素3. 68毫克.牛肝菌具有清熱解煩、養(yǎng)血和中、追風(fēng)散寒、舒筋和血、補(bǔ)虛提神等功效，是中成藥“舒筋丸”的原料之一；又是婦科良藥，可治婦女白帶癥及不孕癥。另外，還有抗流感病毒、防治感冒的作用?？梢娕８尉_是眾多菌類中功能齊全、食藥兼用的珍品。經(jīng)常食用牛肝菌可明顯增強(qiáng)機(jī)體免疫力、改善機(jī)體微循環(huán)。但，牛肝菌的人工培養(yǎng)很困難，培養(yǎng)過程中，菌絲生產(chǎn)慢，在菌絲生長(zhǎng)階段容易形成原基，影響菌絲體對(duì)營(yíng)養(yǎng)的積累，導(dǎo)致不能正常形成子實(shí)體。母種培養(yǎng)基各組份種類比較多，選擇合適生長(zhǎng)的原料困難；且配方成份用量的微量變化會(huì)導(dǎo)致牛肝菌生長(zhǎng)過程的不同。傳統(tǒng)母種培養(yǎng)基培養(yǎng)的牛肝菌菌絲體雖可以在栽培料中獲得子實(shí)體，但其母種菌絲體很難長(zhǎng)滿試管斜面，在生長(zhǎng)的第4-7天就會(huì)形成原基，而影響牛肝菌以后的正常生長(zhǎng)，且培養(yǎng)料產(chǎn)出的子實(shí)體產(chǎn)量低。所以，合適的牛肝菌生長(zhǎng)的牛肝菌母種培養(yǎng)基是目前所需。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)所述問題，本發(fā)明的目的是提供一種牛肝菌母種培養(yǎng)基及制備方法。這種牛肝菌菌絲生長(zhǎng)快，在菌絲生長(zhǎng)期間不會(huì)形成原基，同時(shí)為子實(shí)體的人工栽培提供了產(chǎn)量高的優(yōu)良母種。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的技術(shù)方案是
一種牛肝菌母種培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計(jì)量包括有下述組份
葡萄糖 18-24份酵母粉 5-8份
黃豆粉 2-4份
KH2PO4 O. 2-0. 6 份
MgSO4 · H2O O. 25-0. 65 份
腐殖土15-23份
干松針40-55份 瓊脂14-26份
水800-1500 份
作為優(yōu)選方案，本發(fā)明中各組份的優(yōu)選用量為
葡萄糖19-22份
酵母粉6-7. 5份
黃豆粉2. 5-3. 5份
KH2PO4O. 3-0. 53 份
MgSO4 · H2O O. 4-0. 6 份腐殖土18-21份
干松針48-52份
瓊脂16-24份
水900-1300 份
本發(fā)明中各組份的最佳用量為
葡萄糖 20份 酵母粉 6. 5份 黃豆粉 3份 KH2PO4 O. 5 份 MgSO4 · H2O O. 45 份 腐殖土 20份 干松針 50份 瓊脂20份
水1000份
制備本發(fā)明牛肝菌母種培養(yǎng)基的方法，按以下步驟操作
步驟一、原料稱量，清潔容器設(shè)備；
步驟二、將稱好的18-24份葡萄糖，5-8份酵母粉，2-4份黃豆粉、O. 2-0. 6份 KH2PO4,0. 25-0. 65份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置備用；
步驟三、將稱好的15-23份腐殖土放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提20分鐘，過濾，濾液加到容器中；
步驟四、將40-55份干松針放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提15分鐘，取浸提液加入到同一容器中；
步驟五、將上述容器中的混合液加熱1-3分鐘，使溫度達(dá)到90-100°C ;再加入14-26份瓊脂，加熱2-3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
步驟六、將試管中的物料在溫度120°C、壓力101. 33 KPa下，用20-30分鐘滅菌，即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。所述葡萄糖為醫(yī)藥用葡萄糖。葡萄糖提供牛肝菌生長(zhǎng)所需碳源。酵母粉使微生物吸收利用各種營(yíng)養(yǎng)的速度和效率更高。黃豆粉提供牛肝菌絲生長(zhǎng)所需氮源，KH2PO4與MgSO4 · H2O提供牛肝菌絲生長(zhǎng)所需要的磷鉀和鎂等礦物質(zhì)；腐殖土增加牛肝菌原生長(zhǎng)地的營(yíng)養(yǎng)成份，使牛肝菌的菌絲體能適應(yīng)人工培養(yǎng)基，加快其生長(zhǎng)速度。腐殖土的生物循環(huán)過程中積累了大量礦物質(zhì)，以鈣、鉀為主，還有硫、磷等。牛肝菌是與松樹共生的外生菌根真菌，在培養(yǎng)基中添加干松針成份，主要是彌補(bǔ)人工培養(yǎng)基所缺乏的牛肝菌需要的松樹中的元素。松針富含糖類、粗蛋白、粗脂肪、多種氨基酸和多種微量礦元素、多種維生素、生物黃酮類物質(zhì)、精油、葉綠素、不飽和脂肪酸、酶與輔酶等活性物質(zhì)。 瓊脂溶解冷卻呈凝固液體，使培養(yǎng)基成為固體狀態(tài)，便于操作，便于轉(zhuǎn)接傳代，也方便保存。本發(fā)明中的母種培養(yǎng)基，培養(yǎng)牛肝菌的菌絲體生長(zhǎng)速度快，生長(zhǎng)初期不形成原基；菌絲14-16天可長(zhǎng)滿5-8厘米的試管斜面，不在試管中形成原基，牛肝菌產(chǎn)量比傳統(tǒng)的母種培養(yǎng)基增長(zhǎng)20-30%。
具體實(shí)施例以下干松針和腐殖土采自于野生牛肝菌生長(zhǎng)地，其它地方的干松針和腐殖土也適用。實(shí)施例1
將稱好的18-24份葡萄糖，5-8份酵母粉，2-4份黃豆粉，O. 2-0. 6份 KH2PO4,0. 25-0. 65份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置備用；
將稱好的15-23份腐殖土放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提15-22分鐘，過濾，濾液加到容器中；將40-55份干松針放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提15-20分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱1-3分鐘，溫度90-100°C ;再加入14-22份瓊脂，加熱2_3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例2
將稱好的19-22份葡萄糖，6-7. 5份酵母粉，2. 5-3. 5份黃豆粉、O. 3-0. 53份KH2PO4,0. 4-0. 6份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置備用；將稱好的18-21份腐殖土放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提15-22分鐘，過濾，濾液加到容器中；將48-52份干松針放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提15-20分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱1-3分鐘，溫度90-100°C ;再加入16-21份瓊脂，加熱2_3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間25分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。
實(shí)施例3
將稱好的20份葡萄糖，6. 5份酵母粉，3份黃豆粉、O. 5份KH2PO4,0. 45份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入300份水，放置備用；將稱好的20份腐殖土放入燒杯中加入200份水煮沸浸提15-22分鐘，過濾，濾液加到容器中；將50份干松針放入燒杯中加入200份水煮沸浸提15-20分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱1-3分鐘，溫度90-100°C ;再加入20份瓊脂，加熱2-3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例4
將稱好的藥用葡萄糖20克，酵母粉6. 5克，黃豆粉3克KH2PO4O. 5克，MgSO4 · H2O O. 5 克，放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置備用；將稱好的腐殖土放入燒杯中加入200毫升水煮沸浸提20分鐘，過濾，濾液加到1000毫升量盅中；將干松針加入200毫升水煮沸浸提15分鐘，取浸提液倒入1000毫升量盅；
以上材料一起煮沸1-2分鐘，待所有藥品溶解后，加入20克瓊脂，加熱至瓊脂完全溶解后，加水定容至1000毫升，分裝到試管中，常規(guī)高溫高壓滅菌，溫度120°C，壓力101.33KPa, 30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例5
將稱好的18份葡萄糖，5份酵母粉，2份黃豆粉、O. 2份KH2PO4,0. 25份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入220份水，放置備用；將稱好的15份腐殖土放入燒杯中加入240份水煮沸浸提20分鐘，過濾，濾液加到容器中；將40份干松針放入燒杯中加入250份水煮沸浸提15分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱3分鐘，溫度100°C ;再加入14份瓊脂，加熱3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例6
將稱好的24份葡萄糖，8份酵母粉，4份黃豆粉、O. 6份KH2PO4,0. 65份MgSO4 -H2O,放入容器中，加入200-300份水，放置備用；將稱好的23份腐殖土放入燒杯中加入200-250份水煮沸浸提20分鐘，過濾，濾液加到容器中；將55份干松針放入燒杯中加入50份水煮沸浸提20分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱3分鐘，溫度100°C ;再加入22份瓊脂，加熱3分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間40分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例7
將稱好的19份葡萄糖，6份酵母粉，2. 5份黃豆粉、O. 3份KH2PO4,0. 4份MgSO4 · H2O,放入容器中，加入200份水，放置備用；將稱好的18份腐殖土放入燒杯中加入250份水煮沸浸提15分鐘，過濾，濾液加到容器中；將48份干松針放入燒杯中加入200份水煮沸浸提15分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱2分鐘，溫度100°C ;再加入16份瓊脂，加熱2分鐘至瓊脂完全溶解后，加水定容，分裝到試管中；滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間20分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例8
將稱好的22份葡萄糖，7. 5份酵母粉，3. 5份黃豆粉、O. 53份KH2PO4,0. 6份MgSO4 -H2O,放入容器中，加入300份水，放置備用；將稱好的18-21份腐殖土放入燒杯中加入250份水煮沸浸提22分鐘，過濾，濾液加到容器中；將48-52份干松針放入燒杯中加入200份水煮沸浸提20分鐘，取浸提液加入容器中；
以上材料在容器中加熱3分鐘，溫度100°C ;再加入21份瓊脂，加熱3分鐘至瓊脂完全 溶解后，加水定容，分裝到試管中；
滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa，時(shí)間30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例9 (對(duì)照組I)
以傳統(tǒng)培養(yǎng)基MMN培養(yǎng)基為對(duì)照組I
把稱好量的 O. 25 克(NH4)2HPO4,0. 5 克 KH2PO4,0. 15 克 MgSO4 · 7H20，10 克葡萄糖，3 克麥芽糖，55毫克CaCl2 · 2H20,0. 25毫克NaCl，20毫克FeCl3,100微克硫胺素，25微克生物素放入容器中，加500毫升水煮沸1-2分鐘，加入20克瓊脂至溶解，用水定容到1000毫升，高溫高壓滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa, 30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。
實(shí)施例10 (對(duì)照組2)
將稱好的馬鈴薯200克，葡萄糖20克，酵母浸出液2克，I克KH2PO4,40微克/毫升維生素&，放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置備用；以上材料一起煮沸30分鐘，待所有材料溶解后，加入20克瓊脂，加熱至瓊脂完全溶解后，用剩余的水定容至1000毫升，分裝到試管中，常規(guī)高溫高壓滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa, 30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。實(shí)施例11 (對(duì)照組3)
將稱好的葡萄糖20克，酵母粉7克，黃豆粉3克，I克KH2PO4,0. 5克MgSO4 -H2O7O. 5克MnSO4 · H2O,放入1000毫升量盅，加入300毫升水，放置備用；以上材料一起煮沸1_2分鐘，待所有藥品溶解后，加入20克瓊脂,加熱至瓊脂完全溶解后,用剩余的水定容至1000毫升，分裝到試管中，常規(guī)高溫高壓滅菌，溫度120°C，壓力101. 33 KPa, 30分鐘即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。培養(yǎng)方法
將牛肝菌植入母種培養(yǎng)基中，25度培養(yǎng)箱中靜態(tài)培養(yǎng)，如雙色牛肝菌、美味牛肝菌或灰褐牛肝菌等。性能指標(biāo)，如下表(實(shí)施例9-11為對(duì)照組)
權(quán)利要求
1.一種牛肝菌母種培養(yǎng)基，按重量份數(shù)計(jì)量包括有下述組份葡萄糖 18-24份酵母粉 5-8份黃豆粉 2-4份 KH2PO4 O. 2-0. 6 份 MgSO4 · H2O O. 25-0. 65 份腐殖土 15-23份干松針 40-55份瓊脂14-22份水800-1500 份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的牛肝菌母種培養(yǎng)基，其特征在于其各組份的優(yōu)選用量為 葡萄糖 19-22份酵母粉 6-7. 5份黃豆粉 2. 5-3. 5份 KH2PO4 O. 3-0. 53 份 MgSO4 · H2O O. 4-0. 6 份腐殖土18-21份干松針48-52份瓊脂16-21份水900-1300 份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的牛肝菌母種培養(yǎng)基，其特征在于其各組份的最佳用量為 葡萄糖20份酵母粉6. 5份黃豆粉3份KH2PO4 O. 5 份 MgSO4 · H2O O. 45 份腐殖土 20份干松針 50份瓊脂20份水1000份。
4.制備權(quán)利要求1-3之一所述的牛肝菌母種培養(yǎng)基的方法，按以下步驟操作 步驟一、原料稱量，清潔容器設(shè)備；步驟二、將稱量好的葡萄糖18-24份，酵母粉5-8份，黃豆粉2-4份、KH2PO4 O. 2-0. 6份，MgSO4 · H2O O. 25-0. 65份，放入容器中加入200-300份水，放置備用；步驟三、將稱量好的腐殖土 15-23份放入燒杯中，加入200-250份水，煮沸浸提20分鐘后過濾，將濾液加到容器中；步驟四、將干松針40-55份放入燒杯中，加入200-250份水，煮沸浸提15分鐘，取浸提液加入到同一容器中；步驟五、將上述容器中的混合液加熱1-3分鐘，使溫度達(dá)到90-100°C ;再加入14-22份瓊脂，加熱2-3分鐘至瓊脂完全溶解，加水定容，分裝到試管中；步驟六、將試管中的物料在溫度120°C、壓力101. 33 KPa下，滅菌20-30分鐘，即得牛肝菌母種培養(yǎng)基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4之一所述的牛肝菌母種培養(yǎng)基及制備方法，其特征在于所用葡萄糖為醫(yī)用葡萄糖。
全文摘要
本發(fā)明屬于真菌培養(yǎng)基領(lǐng)域，尤其涉及一種牛肝菌母種培養(yǎng)基及其制備方法，按重量份數(shù)計(jì)量包括有下述組份葡萄糖18-24份，酵母粉5-8份，黃豆粉2-4份，KH2PO40.2-0.6份，MgSO4·H2O0.25-0.65份，腐殖土15-23份，干松針40-55份，瓊脂14-26份，水800-1500份。本發(fā)明中牛肝菌菌絲生長(zhǎng)速度快，在菌絲生長(zhǎng)期間不會(huì)形成原基，同時(shí)為子實(shí)體的人工栽培提供了產(chǎn)量高的優(yōu)良母種；菌絲14-16天可長(zhǎng)滿5-8厘米的試管斜面，牛肝菌產(chǎn)量比傳統(tǒng)的母種培養(yǎng)基增長(zhǎng)20-30%。
文檔編號(hào)C05G1/00GK103011935SQ20121055766
公開日2013年4月3日 申請(qǐng)日期2012年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月20日
發(fā)明者張丹, 李付杰, 李偉 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院、水利部成都山地災(zāi)害與環(huán)境研究所