專利名稱：一種桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，具體來說涉及一種桂南靈芝 (Ganodermaguinanense J. D. Zhao et X. Q. Zhang)子實(shí)體的人工栽培方法。
背景技術(shù)：
靈芝(Ganoderma Iucidum(Curtis)P. Karst.)由于含有靈芝多糖、靈芝多肽、三萜類、氨基酸、蛋白質(zhì)、留類、甘露醇、香豆精苷、生物堿、有機(jī)酸以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、 Mn、加等，具有抑制腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗放射、保肝解毒、抗過敏、調(diào)節(jié)血壓、降血脂和降血糖、鎮(zhèn)咳祛痰平喘、抗缺氧抗衰老等功效，藥食兼用且無毒副作用，從而受到廣大消費(fèi)者的青瞇，市場(chǎng)需求旺盛。中國靈芝種類豐富，已知種類已超過100種，民間或文獻(xiàn)中記述能利用的靈芝不少于20種，其中還有紫芝(Ganoderma sinense J.D.Zhao，L. W. Hsu&X. Q. Zhang)禾口松杉靈芝(Ganoderma tsugae Murri 11)等。桂南靈芝(Ganodermaguinanense J.D.Zhao et X. Q. Zhang)在當(dāng)?shù)赜址Q黑芝等， 在分類上隸屬于真菌界(Fungi)、擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、傘菌綱(Agaricomycetes)、 多孑L菌目(Polyporales)、靈芝禾斗(Ganodermatacea)、靈芝屬(Ganoderma),目前僅在廣西、 海南等地有分布。桂南靈芝的主要特征是擔(dān)子果一年生，有柄，木栓質(zhì)；菌蓋近圓形，中央部分下凹，直徑約7. 5cm，厚3 8mm，表面暗褐色到黑色，具有同心環(huán)紋但不明顯，有縱皺，光滑，有似漆樣光澤，邊緣完整，銳，下面具狹窄的不孕帶；菌肉呈均勻的褐色，厚3 5. 5mm，趨向邊緣漸變??；菌管長1 2mm，孔面褐色，管口近圓形，每毫米4 5個(gè)；菌柄中生，長約11cm，粗1 1. 2cm，具強(qiáng)烈的似漆樣光澤，靠菌柄外層的菌肉稍硬，厚2 3mm， 淡褐色，內(nèi)層軟，褐色；皮殼構(gòu)造由透明、薄壁的生殖菌絲和近無色、實(shí)心的骨架菌絲膠粘在一起而構(gòu)成，彼此間不易分離開，組成菌絲多向一方傾斜，頂端膨大或者稍尖，通常寬2 4 μ m，長20 30 μ m;菌絲系統(tǒng)三體型生殖菌絲透明，薄壁，直徑3 6 μ m，有橫膈膜； 骨架菌絲稍帶褐色或淡褐色，厚壁到實(shí)心，有時(shí)扭曲，樹狀分?；虺梳槧睿羌苡谥睆? 4 μ m,分枝末端形成鞭毛狀無色纏繞菌絲；纏繞菌絲無色，厚壁，直徑1. 5 2 μ m ；擔(dān)孢子寬卵圓形或近球形，雙層壁，外壁無色透明，平滑，內(nèi)壁具不清楚的小刺，無色到稍帶褐色，
5-)6 11μπιΧ5 8μπι。當(dāng)?shù)鼗蛎耖g認(rèn)為桂南靈芝具有鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、保肝解毒、降血脂和降血糖、鎮(zhèn)咳祛痰平喘等功效，或當(dāng)作靈芝的替代品，其野生資源十分有限，且至今又還沒有成功的人工栽培方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于開發(fā)出一種桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法。我們通過將野生或栽培成功后獲得的桂南靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離或孢子分離，然后在斜面PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到斜面母種，斜面母種在斜面綜合PDA培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯得到生產(chǎn)用母種，再接種到原種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到原種，其后經(jīng)過生產(chǎn)種培養(yǎng)基的培養(yǎng)得到生產(chǎn)種，將生產(chǎn)種接種到生產(chǎn)用栽培基中，培養(yǎng)至長出成熟的子實(shí)體，從而實(shí)現(xiàn)了本發(fā)明的目的。本發(fā)明的桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征包括以下的步驟(1)將桂南靈芝(Ganoderma guinanense J.D.Zhao et X. · Q. Zhang)的新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，然后按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 5%接種量接種到斜面PDA培養(yǎng)基，于23 30°C、濕度60% 70%時(shí)培養(yǎng)6 18d，至菌絲長滿斜面，挑取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊于 4°C保藏備用或進(jìn)一步培養(yǎng)，所述的斜面PDA培養(yǎng)基的原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份和松針3 5份并通過下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條再與松針放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后， 冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?2)將步驟(1)得到的菌塊按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 5%的接種量接種至斜面綜合PDA 培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于23 30°C，濕度60% 70%時(shí)培養(yǎng)6 18d，直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)用母種，所述的斜面綜合PDA培養(yǎng)基的原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份，磷酸二氫鉀0. 2 1. 5份，硫酸鎂0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通過下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5 倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?3)步驟( 得到的生產(chǎn)用母種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至原種培養(yǎng)基中，于23 30°C，濕度60% 75%時(shí)，培養(yǎng)12 25d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基， 選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)原種，所述的原種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比 1 1.0 1.3組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(4)將步驟C3)得到的生產(chǎn)原種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于23 30°C，濕度60% 75%時(shí)，培養(yǎng)12 25d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基， 得到桂南靈芝生產(chǎn)種，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.0 1.3組成， 所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(5)將步驟(4)得到的生產(chǎn)種按培養(yǎng)基質(zhì)量5% 15%的接種量接種至生產(chǎn)用栽培基中，于溫度23 30°C，相對(duì)濕度60% 80%的培菌房中，黑培養(yǎng)15 25d，至菌絲充滿生產(chǎn)用栽培基料，則可移入栽培房，所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比 1 1.0 1.3組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑 20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(6)將步驟(5)獲得的長滿菌絲的栽培基料，在15 20°C培養(yǎng)2 4d直至出現(xiàn)Icm高的原基，原基在溫度23 30°C，相對(duì)濕度80 % 95 %，散射光光照強(qiáng)度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1 2次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度 85% 98%，每天通風(fēng)2 3次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000 20001x，溫度25 ，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000 50001x，繼續(xù)培養(yǎng)8 15天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色，則得到桂南靈芝子實(shí)體。步驟(1)所述的新鮮子實(shí)體可以從野生子實(shí)體或其后人工栽培中得到，所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量4%，培養(yǎng)條件最好是溫度沈 ^°C，濕度65%，培養(yǎng)9 12d。步驟( 所述接種量最好是4 %，培養(yǎng)條件最好是沈 觀°C，濕度65 %，培養(yǎng)10 12d。步驟C3)所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量5%，培養(yǎng)條件最好是溫度沈 ^°C， 濕度65%，培養(yǎng)15 20d，所述原種培養(yǎng)基的制備方法是將各栽培基料組分分別稱重后與水并均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，所述的栽培基料的組成最好是玉米芯 45%，木屑30%，麩皮或米糠20 %，蔗糖3%和石膏粉2%。步驟(4)所述的接種量最好是培養(yǎng)基質(zhì)量8%，培養(yǎng)條件最好是溫度^ ^°C， 濕度70%，培養(yǎng)15 20d，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基的制備方法是各組分分別稱重并與水均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，所述的栽培基料的組成最好是玉米芯45 %，木屑 30%，麩皮或米糠20%，蔗糖3%和石膏粉2%。步驟( 所述的接種量最好是12%，所述的生產(chǎn)用栽培基的制備方法是將組分分別稱重并與水均勻攪拌在一起，栽培基料和水按質(zhì)量比最好是1 1.1，裝入高密度聚乙烯袋或聚丙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用。步驟(6)所述的原基出現(xiàn)后的最好溫度沈 觀！，相對(duì)濕度最好是95%，散射光在300 15001x之間逐步加強(qiáng)，至菌蓋顏色逐步加深至米黃褐色，所述的桂南靈芝子實(shí)體在采收時(shí)可以用鋒利刀片或剪刀從菌柄基部處割下或剪下，注意不要掰傷菌皮，以利再出第二茬菇，采下的子實(shí)體于陽光下曬干脫水，則得到成熟、干燥的桂皮，可包裝或于室溫保藏或用于研究等用途。本發(fā)明的人工栽培方法可以使桂南靈芝子實(shí)體的生物效率達(dá)到35% 75%，即每IOOg生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得35g 75g新鮮的桂南靈芝子實(shí)體，可作原料或作研究材料使用。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步說明，不是對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例1 稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯75g，蔗糖6g，瓊脂6g，松針3g，將馬鈴薯切成小條再與松針放入鍋中，加入405g水，煮沸20分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6層紗布過濾，取濾汁于鍋中，加水補(bǔ)至原水量，加入瓊脂熔化，再加蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到 45°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基；稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯75g，蔗糖6g，瓊脂6g，磷酸二氫鉀0. 2g，硫酸鎂0. 2g 和VB1O. 02g，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入306g水，煮沸20分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)， 用6層紗布過濾，取濾汁于鍋中，加水補(bǔ)至原水量后，加瓊脂熔化，再加蔗糖、磷酸二氫鉀、 硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45°C倒成斜面，得到斜面綜合PDA培養(yǎng)基。
稱取玉米芯150g，木屑200g，麩皮110g，蔗糖25g，石膏粉15g混合得到500g栽培基料，加入500g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯1500g，木屑2000g，麩皮llOOg，蔗糖250g，石膏粉150g混合得到 5000g栽培基料，加入5000g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯15000g，木屑20000g，麩皮llOOOg，蔗糖2500g，石膏粉1500g混合得到50kg栽培基料，加入50kg水，均勻攪拌在一起，裝入高密度聚乙烯袋，常規(guī)1. ^g/cm2壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將野生桂南靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，取約4. 5g接種于150g斜面PDA培養(yǎng)基，于濕度60%時(shí)培養(yǎng)6d，至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將15g桂南菌塊接種至500g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，25°C，濕度60%時(shí)培養(yǎng)12d， 直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為桂南靈芝母種。將50g母種接種至1 IOOg原種培養(yǎng)基中，于23°C，濕度70%時(shí)，培養(yǎng)15d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝原種。將500g桂南靈芝原種接種至12kg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于27°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng) 12d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝生產(chǎn)種。將Ilkg桂南靈芝生產(chǎn)種接種于IlOkg生產(chǎn)用栽培基中，于溫度25°C，相對(duì)濕度 65%的培菌房中，黑培養(yǎng)15d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在15°C培養(yǎng)3d直至出現(xiàn) Icm高的原基，原基在溫度^°C，相對(duì)濕度80%，散射光光照強(qiáng)度ΙΟΟΙχ，每天通風(fēng)1次，每次1小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度85%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到ΙΟΟΟΙχ，溫度25°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到20001χ，繼續(xù)培養(yǎng)8天， 菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到35%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽光下曬干或干燥脫水以及分裝。實(shí)施例2 稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯850g，蔗糖100g，瓊脂100g，松針50g，將馬鈴薯切成小條再與松針放入鍋中，加入3850g水，煮沸30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到50°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基。稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯850g，蔗糖100g，瓊脂100g，磷酸二氫鉀15g，硫酸鎂 15g和VB1O. 06g，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入4860g水，煮沸30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到50°C倒成斜面，得到斜面綜合 PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯250g，木屑140g，米糠100g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入550水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯2500g，木屑1400g，米糠lOOOg，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入6000g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯lOOOOg，木屑5600g，米糠4000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到20kg栽培基料，加入^kg水，均勻攪拌在一起，裝入聚丙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60分鐘滅菌，冷卻后備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將IOg野生的桂南靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于200g斜面PDA培養(yǎng)基， 于30°C濕度70%時(shí)培養(yǎng)10d，至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將16g桂南菌塊接種至400g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，30°C，濕度70%時(shí)培養(yǎng)18d， 直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為桂南靈芝母種。將IOOg母種接種至IOOOg原種培養(yǎng)基中，于30°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng)25d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝原種。將IOOOg桂南靈芝原種接種至IOOOOg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于30°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng)25d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝生產(chǎn)種。將7200g桂南靈芝生產(chǎn)種接種于48000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度30°C，相對(duì)濕度 80%的培菌房中，黑培養(yǎng)25d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在20°C培養(yǎng)4d直至出現(xiàn) Icm高的原基，原基在溫度30°C，相對(duì)濕度95%，散射光光照強(qiáng)度ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)2次，每次0. 5小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度98%，每天通風(fēng)3次，每次0. 5小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到20001x，溫度^°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到50001χ，繼續(xù)培養(yǎng) 15d，菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色而成熟，此時(shí)用剪刀將子實(shí)體沿菌柄基部處剪下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到75%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽光下曬干或干燥脫水以及分裝。實(shí)施例3 稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯800g，蔗糖80g，瓊脂80g，松針40g，將馬鈴薯切成小條再與松針放入鍋中，加入4000g水，煮沸25分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用7層紗布過濾， 取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到48°C倒成斜面，得到斜面PDA培養(yǎng)基。稱取已去皮去芽眼的馬鈴薯800g，蔗糖80g，瓊脂80g，磷酸二氫鉀10g，硫酸鎂IOg 和VB1O. 04g，，將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入3920g水，煮沸25分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用7層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到48°C倒成斜面，得到斜面綜合 PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯240g，木屑100g，米糠150g，蔗糖5g，石膏粉5g混合得到500g栽培基料，加入650g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯M00g，木屑lOOOg，米糠1500g，蔗糖50g，石膏粉50g混合得到5000g 栽培基料，加入6500g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯9600g，木屑4000g，米糠6000g，蔗糖200g，石膏粉200g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻攪拌在一起，裝入高密度聚乙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2 壓力，60分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將9g野生的桂南靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于300g斜面PDA培養(yǎng)基，于 23°C濕度65%時(shí)培養(yǎng)14d，至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將40g菌塊接種至800g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，25°C，濕度65 %時(shí)培養(yǎng)15d，直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為桂南靈芝母種。
將50g母種接種至IOOOg原種培養(yǎng)基中，于25°C，濕度60%時(shí)，培養(yǎng)12d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝原種。將900g桂南靈芝原種接種至9000g生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于23°C，濕度60%時(shí)，培養(yǎng) 23d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝生產(chǎn)種。將4500g桂南靈芝生產(chǎn)種接種于45000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度^°C，相對(duì)濕度 60%的培菌房中，黑培養(yǎng)23d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在18°C培養(yǎng)2d直至出現(xiàn) Icm高的原基，原基在溫度25 V，相對(duì)濕度90 %，散射光光照強(qiáng)度5001x，每天通風(fēng)1次，每次1小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度95%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到15001x，溫度^TC,全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到30001χ，繼續(xù)培養(yǎng)6d， 菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到60%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽光下曬干或干燥脫水以及分裝。實(shí)施例4 按實(shí)施例1的方法制備斜面PDA培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基。稱取玉米芯225g，木屑150g，米糠100g，蔗糖15g，石膏粉IOg混合得到500g栽培基料，加入650g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到原種培養(yǎng)基。稱取玉米芯2250g，木屑1500g，米糠lOOOg，蔗糖150g，石膏粉IOOg混合得到 5000g栽培基料，加入6500g水，均勻攪拌在一起，裝瓶常規(guī)滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)種培養(yǎng)基。稱取玉米芯9000g，木屑6000g，米糠4000g，蔗糖600g，石膏粉400g混合得到 20000g栽培基料，加入^OOOg水，均勻攪拌在一起，裝入聚丙烯袋，常規(guī)1. 5kg/cm2壓力，60 分鐘滅菌，冷卻備用，得到生產(chǎn)用栽培基。將9g實(shí)施例2得到的桂南靈芝新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，接種于300g斜面PDA 培養(yǎng)基，于濕度70%時(shí)培養(yǎng)18d，至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊。將80g菌塊接種至2000g斜面綜合PDA培養(yǎng)基中，23°C，濕度70 %時(shí)培養(yǎng)6d，直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌種作為桂南靈芝母種。 將33g母種接種至1 IOOg原種培養(yǎng)基中，于，濕度70%時(shí)，培養(yǎng)18d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝原種。將300g桂南靈芝原種接種至IOOOOg生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于^°C，濕度75%時(shí)，培養(yǎng) 25d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝生產(chǎn)種。將2250g桂南靈芝生產(chǎn)種接種于45000g生產(chǎn)用栽培基中，于溫度23°C，相對(duì)濕度 70%的培菌房中，黑培養(yǎng)25d，至菌絲充滿培養(yǎng)基，則移入栽培房，在15°C培養(yǎng)2d直至出現(xiàn) Icm高的原基，原基在溫度23°C，相對(duì)濕度85 %，散射光光照強(qiáng)度8001x，每天通風(fēng)1次，每次1小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度95%，每天通風(fēng)2次，每次1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到18001x，溫度^°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到40001χ，繼續(xù)培養(yǎng)8d， 菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色而成熟，此時(shí)用鋒利刀片將子實(shí)體沿菌柄基部處割下，其生物轉(zhuǎn)化率可達(dá)到55%，采下的子實(shí)體要及時(shí)于陽光下曬干或干燥脫水以及分裝。
權(quán)利要求
1. 一種桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征包括以下的步驟(1)將桂南靈芝(Ganodermaguinanense J. D. Zhao et X. . Q. Zhang)的新鮮子實(shí)體進(jìn)行組織分離，然后按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 5%接種量接種到斜面PDA培養(yǎng)基，于23 30°C、濕度60% 70%時(shí)培養(yǎng)6 18d，至菌絲長滿斜面，挑取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的菌塊于4°C保藏備用或進(jìn)一步培養(yǎng)，所述的斜面PDA培養(yǎng)基的原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份和松針3 5份，并通過下述方法制得 原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條再與松針放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?2)將步驟⑴得到的菌塊按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 5%的接種量接種至斜面綜合PDA培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)或復(fù)壯，于23 30°C，濕度60% 70%時(shí)培養(yǎng)6 18d，直至菌絲長滿斜面，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)用母種，所述的斜面綜合PDA培養(yǎng)基的原料組成按質(zhì)量份計(jì)，為已去皮去芽眼的馬鈴薯75 85份，蔗糖6 10份，瓊脂6 10份，磷酸二氫鉀0. 2 1. 5份，硫酸鎂0. 2 1. 5份和VB1O. 002 0. 006份，并通過下述方法制得原料按所述組成分別稱重后，先將馬鈴薯切成小條放入鍋中，加入原料組成總質(zhì)量3. 5 4. 5倍的水，煮沸20 30分鐘至馬鈴薯軟而不爛時(shí)，用6 8層紗布過濾，取濾汁于鍋中，補(bǔ)至原加水量后，加入瓊脂熔化，再加入蔗糖、磷酸二氫鉀、硫酸鎂和VB1攪拌均勻，趁熱裝于試管滅菌后，冷卻到45 50°C倒成斜面?zhèn)溆茫?3)步驟( 得到的生產(chǎn)用母種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至原種培養(yǎng)基中，于23 30°C，濕度60% 75%時(shí)，培養(yǎng)12 25d，直至菌絲長滿原種培養(yǎng)基，選取長勢(shì)旺盛、粗壯均一的作為生產(chǎn)原種，所述的原種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.0 1.3組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(4)將步驟C3)得到的生產(chǎn)原種按培養(yǎng)基質(zhì)量3% 10%的接種量接種至生產(chǎn)種培養(yǎng)基中，于23 30°C，濕度60% 75%時(shí)，培養(yǎng)12 25d，直至菌絲長滿生產(chǎn)種培養(yǎng)基，得到桂南靈芝生產(chǎn)種，所述的生產(chǎn)種培養(yǎng)基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.0 1.3組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100 %計(jì)，由玉米芯30 % 50 %，木屑20 % 40 %，麩皮或米糠 20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(5)將步驟(4)得到的生產(chǎn)種按培養(yǎng)基質(zhì)量5% 15%的接種量接種至生產(chǎn)用栽培基中，于溫度23 30°C，相對(duì)濕度60% 85%的培菌房中，黑培養(yǎng)15 25d，至菌絲充滿生產(chǎn)用栽培基料，則可移入栽培房，所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1.0 1.3組成，所述的栽培基料按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計(jì)，由玉米芯30% 50%，木屑20% 40%，麩皮或米糠20% 30%，蔗糖 5%和石膏粉 3%組成；(6)將步驟(5)獲得的長滿菌絲的栽培基料，在15 20°C培養(yǎng)2 4d直至出現(xiàn)Icm高的原基，原基在溫度23 30°C，相對(duì)濕度80% 95%，散射光光照強(qiáng)度100 ΙΟΟΟΙχ，每天通風(fēng)1 2次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下培育至長出菌柄，然后保持濕度85% 98%，每天通風(fēng)2 3次，每次0. 5 1小時(shí)的條件下菌蓋逐漸分化，室內(nèi)光照強(qiáng)度增強(qiáng)到1000 20001x，溫度25 ^°C，全天通風(fēng)，使菌蓋和菌柄顏色加深，菌蓋邊緣淺色生長線消失，開始釋放孢子，加大室內(nèi)光照強(qiáng)度到2000 50001x，繼續(xù)培養(yǎng)8 15天，菌蓋顏色進(jìn)一步加深呈米黃色至黃褐色，則得到桂南靈芝子實(shí)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征是步驟(1)中所述的新鮮子實(shí)體從野生子實(shí)體或其后人工栽培中得到，所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量4%， 于沈 ^°C，濕度65%，培養(yǎng)9 12d，步驟O)中所述接種量是4%，于沈 ^°C，濕度 65%，培養(yǎng)10 12d ；步驟(3)中所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量5 %，于沈 ^°C，濕度65%， 培養(yǎng)15 20d，所述的栽培基料的組成是玉米芯45 %，木屑30 %，麩皮或米糠20 %，蔗糖 3<%，石膏粉2%，步驟中所述的接種量是培養(yǎng)基質(zhì)量8%，于沈 觀1，濕度70%，培養(yǎng)15 20d，所述的栽培基料的組成是玉米芯45 %，木屑30 %，麩皮或米糠20 %，蔗糖3 %， 石膏粉2%;步驟(5)中所述的接種量是12%，所述的生產(chǎn)用栽培基由栽培基料和水按質(zhì)量比1 1. 1組成；步驟(6)中所述的原基出現(xiàn)后在溫度沈 ^°C，相對(duì)濕度95%，散射光在300 15001x之間逐步加強(qiáng)，培養(yǎng)至菌蓋顏色逐步加深至米黃褐色。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種桂南靈芝子實(shí)體的人工栽培方法，其特征是通過將新鮮桂南靈芝(Ganoderma guinanense J.D.Zhao et X.Q.Zhang)子實(shí)體進(jìn)行組織分離或孢子分離，然后在PDA斜面培養(yǎng)基和斜面綜合PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到生產(chǎn)用母種，再接種到原種培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到原種，其后經(jīng)過生產(chǎn)種培養(yǎng)基的培養(yǎng)得到生產(chǎn)種，最后將生產(chǎn)種接種到生產(chǎn)用栽培基中，培養(yǎng)至長出成熟的子實(shí)體。本發(fā)明的人工栽培方法可以使桂南靈芝子實(shí)體的生物效率達(dá)到35％～75％，即每100g生產(chǎn)用培養(yǎng)料可得35g～75g新鮮的桂南靈芝子實(shí)體，可作原料或作研究材料使用。
文檔編號(hào)C05G3/00GK102301913SQ201110193128
公開日2012年1月4日 申請(qǐng)日期2011年7月11日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月11日
發(fā)明者吳興亮, 宋斌, 李泰輝, 鄒方倫 申請(qǐng)人:廣東省微生物研究所