專(zhuān)利名稱(chēng)：一種適用于大規(guī)模種植的構(gòu)樹(shù)種苗組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要是涉及一種適用于大規(guī)模種植的構(gòu)樹(shù)種苗組織培養(yǎng)方法，屬于植物繁殖領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
構(gòu)樹(shù)是我國(guó)特有的含纖維樹(shù)種，屬特種經(jīng)濟(jì)林，其韌皮纖維和樹(shù)葉等利用價(jià)值極高，市場(chǎng)開(kāi)發(fā)前景廣闊。它分布廣，適應(yīng)性極強(qiáng)，繁殖容易，耐干旱瘠薄，又是很好的生態(tài)和薪材樹(shù)種。構(gòu)樹(shù)的葉片中蛋白質(zhì)含量非常高，可達(dá)到20 30%，遠(yuǎn)高于大米、玉米、小麥，僅次于大豆；另外氨基酸、維生素、碳水化合物以及微量元素含量都非常豐富，是生產(chǎn)加工畜類(lèi)飼料的純天然原料，用該飼料喂養(yǎng)的豬，瘦肉率高，肉質(zhì)純正，味道鮮美，堪稱(chēng)為真正的畜類(lèi)綠色食品。加速培育構(gòu)樹(shù)，擴(kuò)大構(gòu)樹(shù)資源是保證宣紙制造和飼料加工業(yè)持續(xù)發(fā)展的重要基礎(chǔ)，也是增加農(nóng)民收益的重要途徑。當(dāng)前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)構(gòu)樹(shù)的研究主要集中于造紙?jiān)虾退幚沓煞值确矫?，遠(yuǎn)未發(fā)揮其應(yīng)有的生態(tài)效益和經(jīng)濟(jì)效益，構(gòu)樹(shù)優(yōu)良種源的引進(jìn)與選育、應(yīng)用研究等方面急需加強(qiáng)科研開(kāi)發(fā)力度。所以，開(kāi)展構(gòu)樹(shù)良種選育和組培快繁研究，利用現(xiàn)代生物技術(shù)手段，在建立組培再生和遺傳轉(zhuǎn)化的基礎(chǔ)上，選育出適合在全國(guó)范圍內(nèi)推廣種植的優(yōu)良新品種是目前研究的重要方面。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種適用于大規(guī)模種植構(gòu)樹(shù)的組織培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)方法包括芽誘導(dǎo)培養(yǎng)和不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)數(shù)輪繼代培養(yǎng)后，芽生長(zhǎng)正常，煉苗成活率達(dá)到 90%以上，可以顯著提高構(gòu)樹(shù)葉的產(chǎn)量。本發(fā)明的方法，采用如下步驟(1)材料的處理。采來(lái)的構(gòu)樹(shù)頂端胚芽，要經(jīng)過(guò)無(wú)菌處理，才能進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)。( 芽的誘導(dǎo)。經(jīng)表面滅菌處理好的材料接種在空白萌發(fā)培養(yǎng)基上，然后轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，每瓶接種一個(gè)腋芽，3周后記錄并計(jì)算誘導(dǎo)率，確定繁殖系數(shù)。(3)根的誘導(dǎo)。芽誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)。在萌發(fā)培養(yǎng)基中添加6-BA、 NAA和IBA得到不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基。試驗(yàn)選用IBA為誘導(dǎo)生根激素，濃度為0. lmg/L。3周后記錄并計(jì)算誘導(dǎo)率。(4)移栽。誘導(dǎo)出根的小苗，需移栽到泥炭細(xì)沙混合培養(yǎng)基質(zhì)中，栽培煉苗，然后移栽到室外大田上。四周后統(tǒng)計(jì)移栽成活率。在上述方法中，步驟(1)材料要用棉花團(tuán)醮加入了少量洗潔精的水液輕擦枝條及其液芽處，自來(lái)水沖洗1 池，在超凈工作臺(tái)上，70%酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗3 4次， 0. 1 %升汞滅菌3 ^iin，無(wú)菌水沖洗3 4次。在上述方法中，步驟(2)培養(yǎng)條件溫度25(士2)°C，光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度 15001x,培養(yǎng)基pH 5. 8，蔗糖30g/L,卡拉膠6. 4g/L，滅菌溫度121 °C，滅菌時(shí)間18 20min。
在上述方法中，步驟(3)培養(yǎng)條件為溫度25(士2)°C，光照時(shí)間10h/d，光照強(qiáng)度 20001x，滅菌溫度121 °C，滅菌時(shí)間18 20min。在上述方法中，步驟(4)根必須長(zhǎng)0.5cm時(shí)才能移栽，培養(yǎng)條件為溫度 25(士幻°〇，濕度65%。本發(fā)明以構(gòu)樹(shù)的頂端胚芽為外植體，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)基的篩選，制成了誘導(dǎo)的專(zhuān)用培養(yǎng)基，成功的建立了構(gòu)樹(shù)組織培養(yǎng)育苗的全套體系，為構(gòu)樹(shù)大量組織培養(yǎng)快速繁殖提供了一條可靠的技術(shù)和方法。本發(fā)明的積極效果是采用組織培養(yǎng)方法，繁殖系數(shù)達(dá)6 7倍，在短期內(nèi)能提供大量的優(yōu)質(zhì)種苗，加快了構(gòu)樹(shù)推廣應(yīng)用的速度。與同類(lèi)方法相比具有很大優(yōu)勢(shì)。如根插育苗雖然比較容易操作，但是會(huì)嚴(yán)重?fù)p害母株，枝插繁殖生根困難，成活率低；種籽育苗方法中由于構(gòu)樹(shù)種子較小，種皮堅(jiān)硬，常規(guī)田間發(fā)芽率不足4%，造成種子的大量浪費(fèi)和造林中構(gòu)樹(shù)種苗的缺乏。所以本發(fā)明具有很強(qiáng)的實(shí)用意義，采用組織培養(yǎng)法繁育種苗，實(shí)現(xiàn)矮、密、 早、豐栽種管理技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)一年種樹(shù)，第二年見(jiàn)成效，為大規(guī)模構(gòu)樹(shù)育種提供了快速有效途徑。
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明實(shí)施例1取采來(lái)的健康飽滿(mǎn)的構(gòu)樹(shù)頂端胚芽材料，用棉花團(tuán)醮加入了少量洗潔精的水液輕擦枝條及其液芽處，自來(lái)水沖洗1.5h，在超凈工作臺(tái)上，70%酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗3 次，0. 升汞滅菌:3min，無(wú)菌水沖洗3次。經(jīng)表面滅菌處理好的材料接種在空白DCR萌發(fā)培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分別取50個(gè)頂端胚芽，設(shè)3組重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在溫度25(士2) °C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度15001x條件下培養(yǎng)3周，以長(zhǎng)出幼葉為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)萌芽率。然后取苗高1. 0 3. Ocm的萌發(fā)小苗50株，剪成5 IOmm長(zhǎng)度的帶葉莖段， 轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，每瓶接種一個(gè)腋芽，培養(yǎng)條件為溫度25(士幻°〇，光照時(shí)間 14h/d，光照強(qiáng)度 18001x，培養(yǎng)基 pH 5. 8,6-BA 2. Omg/L, NAA 0. 5mg/L，蔗糖 30g/L，卡拉膠6.4g/L，滅菌溫度121°C，滅菌時(shí)間20min。3周后記錄并計(jì)算誘導(dǎo)率。芽誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)。在萌發(fā)培養(yǎng)基中添加6-BAO. 2mg/L,NAA0. lmg/L, IBAO. lmg/L得到不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基。在溫度25( 士 2)°C，光照時(shí)間10h/d，光照強(qiáng)度22001x，培養(yǎng)6周。當(dāng)誘導(dǎo)出得根長(zhǎng)0. 5cm時(shí)移栽到泥炭細(xì)沙混合培養(yǎng)基質(zhì)中，在溫度25 (士幻°C，濕度65 %的條件下培養(yǎng)4周，之后逐漸加大光照強(qiáng)度，植株成活率可達(dá)91%。待植株發(fā)育成熟后，將其植入室外大田上種植。實(shí)施例2取采來(lái)的健康飽滿(mǎn)的構(gòu)樹(shù)頂端胚芽材料，用棉花團(tuán)醮加入了少量洗潔精的水液輕擦枝條及其液芽處，自來(lái)水沖洗1.5h，在超凈工作臺(tái)上，70%酒精滅菌30s，無(wú)菌水沖洗3 次，0. 升汞滅菌:3min，無(wú)菌水沖洗3次。經(jīng)表面滅菌處理好的材料接種在空白DCR萌發(fā)培養(yǎng)基上，置于光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)分別取50個(gè)頂端胚芽，設(shè)3組重復(fù)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，在溫度25(士2) °C，光照時(shí)間14h/d，光照強(qiáng)度ISOOIx條件下培養(yǎng)3周，以長(zhǎng)出幼葉為萌發(fā)標(biāo)準(zhǔn)統(tǒng)計(jì)萌芽率。然后取苗高1. 0 3. Ocm的萌發(fā)小苗50株，剪成5 IOmm長(zhǎng)度的帶葉莖段，
4轉(zhuǎn)入誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，每瓶接種一個(gè)腋芽，培養(yǎng)條件為溫度25(士幻°〇，光照時(shí)間 16h/d，光照強(qiáng)度 20001x，培養(yǎng)基 pH 5. 8,6-BA1.0mg/L,NAA 0. :3mg/L，蔗糖 20g/L，卡拉膠 6. 4g/L，滅菌溫度121°C，滅菌時(shí)間20min。3周后記錄并計(jì)算誘導(dǎo)率。芽誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)。在萌發(fā)培養(yǎng)基中添加6-BAO. 3mg/L,NAA 0. 2mg/L, IBA 0. 2mg/L得到不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基。在溫度25( 士 2)°C，光照時(shí)間12h/d，光照強(qiáng)度MOOlx，培養(yǎng)6周。當(dāng)誘導(dǎo)出得根長(zhǎng)0. 5cm時(shí)移栽到泥炭細(xì)沙混合培養(yǎng)基質(zhì)中，在溫度25 (士幻°C，濕度65 %的條件下培養(yǎng)4周，之后逐漸加大光照強(qiáng)度，植株成活率可達(dá)94 %。待植株發(fā)育成熟后，將其植入室外大田上種植。
權(quán)利要求
1.一種適用于大規(guī)模種植的構(gòu)樹(shù)種苗組織培養(yǎng)方法，特征在于包括胚芽預(yù)處理，芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)，根的誘導(dǎo)培養(yǎng)以及移栽培植等步驟。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于將構(gòu)樹(shù)頂芽在萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)，萌發(fā)培養(yǎng)基為DCR培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于將萌發(fā)培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到的幼芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行不定芽誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)，得到無(wú)根苗。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組織培養(yǎng)方法，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在萌發(fā)培養(yǎng)基中添加 6-BA和NAA得到的培養(yǎng)基。所述6-BA的濃度為0. 1 2. Omg/L, NAA的濃度為0. 1 0. 5mg/ L0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)之后進(jìn)行不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)。不定根誘導(dǎo)培養(yǎng)基是在萌發(fā)培養(yǎng)基中添加6-BA、NAA和IBA得到的培養(yǎng)基。所述6-BA 的濃度為0. 2 2. 5mg/L, NAA的濃度為0. 1 1. Omg/L, IBA的濃度為0. 1 0. 3mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組織培養(yǎng)方法，其特征在于所述萌發(fā)培養(yǎng)的條件為溫度25(士2) °C，光照時(shí)間12 14h/d，光照強(qiáng)度1500 20001x ；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的條件為溫度25(士2) °C，光照時(shí)間14 16h/d，光照強(qiáng)度1500 20001x ；根誘導(dǎo)培養(yǎng)條件為溫度 25(士2)°〇，光照時(shí)間10 12h/d，光照強(qiáng)度2000 25001x。
全文摘要
屬于植物繁殖領(lǐng)域。本發(fā)明公開(kāi)了一種適用于大規(guī)模種植構(gòu)樹(shù)的組織培養(yǎng)方法，是將頂端胚芽在萌發(fā)培養(yǎng)基上長(zhǎng)出幼芽后，接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繁殖，長(zhǎng)出腋芽和不定芽后得到無(wú)根苗，然后將生長(zhǎng)健壯的無(wú)根苗轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行不定根誘導(dǎo)。所述的培養(yǎng)基組分分別為萌發(fā)培養(yǎng)基DCR；芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基在萌發(fā)培養(yǎng)基上加入6-BA和NAA，根誘導(dǎo)培養(yǎng)基在萌發(fā)培養(yǎng)基上加入6-芐氨基嘌呤(6-BA)、α-萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)。經(jīng)過(guò)誘導(dǎo)增殖，大多數(shù)不定芽葉片肥厚，莖干膨大，經(jīng)過(guò)數(shù)輪繼代培養(yǎng)后，芽生長(zhǎng)正常。本發(fā)明具有變異率低，增殖系數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)，煉苗成活率達(dá)到90％以上，適用于大規(guī)模種植構(gòu)樹(shù)的種苗提供，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
文檔編號(hào)A01H4/00GK102461463SQ20101055389
公開(kāi)日2012年5月23日 申請(qǐng)日期2010年11月17日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月17日
發(fā)明者張?jiān)品? 胡伶俐, 謝明利, 陳曉煒 申請(qǐng)人:湖北國(guó)力生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司