專利名稱：用于培養(yǎng)外生菌根性食用菌和藥用菌菌根苗的苗床的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及培養(yǎng)菌根苗的苗床，苗床的獲得方法。本發(fā)明還涉及菌根苗的培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
菌根性食用菌和藥用菌指能與松科、殼斗科、榛科、安息香科、樺木科、楊柳科等植物根系形成共生關(guān)系，具有外生菌根特性的一類真菌。這些真菌包括黑孢塊菌(Tuber melanosporum Vitt.)、尊塊菌(Tuber magnatumPora.)、中華塊菌(Tuber sinense K.Tao et Liu)、印度塊菌(Tuber indicumCooke et Massee)，夏塊菌(Tuber aestivum Vittad.)等塊菌目(Tuberales)、雞油菌(Cantharellus cibarius Fr.)、干巴菌(Thelephora ganbajun Zang)、紫紅擬鎖瑚菌(Clavulinopsis miyabeana(Ito.)Ito.)等非褶菌目(Aphyllophorales)、松茸(Tricholoma matsutake(Ito et Imai)sing.)、美味牛肝菌(Boletus edulis bullFr.)、小美牛肝菌(Boletus speciosus Frost)、褐環(huán)乳牛肝菌(Suillus luteus(LFr.)Gray)、厚環(huán)乳牛肝菌(Suillus greviller(KL.)sing.)、松乳菇(Lactariusdeliciosus(Fr.)Gray)、紅汁乳菇(Lactarius hatsutake Tanaka)、變綠紅菇(Russula virescens(schaeff.)Fr.)、大紅菇(Russula alutacea(Pers.)Fr.)、正紅菇(Russula vinosa Lindbl.)、橙蓋鵝膏(Amanita caesarea(ScopFr.)Pers.exschw.)、玉蕈離褶傘(Lyophyllum honshimeji(kawam.)Hongo)、煙色離褶傘(Lyophyllum fumosum(Pers.Fr.)Orton)、灰花紋鵝膏(Amanita fuligineaHongo)、亞稀褶黑菇(Russula subnigricans Hongo)等傘菌目(Agaricales)、大禿馬勃(Calvatia gigantean(Batsch ex Fr.)Lloyd)等馬勃目(Lycoperdales)、彩色豆馬勃(Pisolithus tinctorius(Pers.)Coker et couch)等硬皮馬勃目(Sclerodermatales)、紅須腹菌(Rhizopogon rubescens(Tul.)Tul.)等須腹菌目(Hymenogastrales)等具有食用和藥用價值的菌根性真菌。
培育菌根苗通常是用孢子或純培養(yǎng)菌絲體直接接種到無菌植物根部，并控制一定的溫度、濕度、光照、營養(yǎng)等培養(yǎng)條件，由孢子自然萌發(fā)而成的菌絲或組織培養(yǎng)的菌絲直接浸染植物根尖，并引起根尖組織一系列變化，最終形成菌根。這一感染過程多次重復(fù)，最終獲得合格的菌根苗。此方法雖行之有效，但過程煩瑣、條件要求嚴、成本較高。如果控制不好，還易感染競爭性菌根雜菌。實際操作時，植物菌根化率往往較低。
到目前為止，全世界僅有黑孢塊菌、勃艮第塊菌等少數(shù)幾種食用菌根性真菌的菌根苗在法國、意大利等國家實現(xiàn)規(guī)?；敝澈彤a(chǎn)業(yè)化栽培。其菌根苗的繁殖方法是采用孢子接種植株個體，并在三明治式紙質(zhì)容器中合成培養(yǎng)的方法。這一方法雖然對塊菌目真菌等有效，但繁殖效率不高。而且用該法繁殖其他菌根真菌效果不理想。瑞典的E.Danell[1]在實驗室內(nèi)建立了一套在無菌條件下，將雞油菌(Cantharellus cibarius)菌絲接種到松樹根上的方法。1995年1月接種，1996年4月收獲第1個子實體，1996年11月在同一栽培箱中收獲3個子實體。但該方法操作過程繁瑣，成本高。
美國專利4345403還公開了生產(chǎn)子實體的方法。該方法是在無菌土壤中栽培一定數(shù)量幼苗，并使幼苗與已接種了目的菌的植物接觸而被感染，再將這些被目的菌感染的植物(稱作誘導(dǎo)植物或先鋒植物)栽植于滅菌溫室或苗圃內(nèi)，然后將滅菌之成年植物移栽進來，并使之與上述誘導(dǎo)植物根系接觸，進而感染上目的菌。這樣這些大樹即可較快產(chǎn)生子實體。該方法的缺點是，由于成年樹往往被多種菌根菌感染，感染目的菌之前難以將競爭性雜菌徹底消毒。而且移栽大樹也較費時費力。
關(guān)于菌根苗的培養(yǎng)方法，現(xiàn)有技術(shù)中已有報道對宿主植物作切根處理，能促進菌根的形成。例如日本《公開特許公報》特開平7-147841號公開一種方法，該方法是在促進菌根形成的容器中，對宿主植物作切根處理，并在切口附近加入促根物質(zhì)，促進宿主植物發(fā)根，使其在無菌條件下與純培養(yǎng)的目的菌根菌穩(wěn)定形成菌根。伍家榮，譚著明，蔣麗娟等，也公開了對馬尾松當年生實生苗進行截(切)根處理的方法，并對截根方法進行了描述。研究證明該方法能刺激苗木須根發(fā)育，促進菌根形成[2]。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種能大面積培養(yǎng)菌根苗的苗床，并提供該苗床的制備方法，和用該苗床培養(yǎng)菌根苗的方法。
在敘述本發(fā)明的技術(shù)方案前，先說明本發(fā)明中所用的術(shù)語的定義。
1、目的菌根菌是指栽培活動所期望獲得的菌根性真菌。
2、菌根菌繁殖體是指有性或無性的孢子、菌絲或二者的混合體。
3、非競爭性菌根雜菌，是指與目的菌根菌沒有競爭性，即不會導(dǎo)致目的菌根菌生長受阻、發(fā)育不良、產(chǎn)量降低或死亡的其它菌根菌。
所述非競爭性是指由于環(huán)境因子(溫度、濕度、光照、pH值、營養(yǎng)元素等)不適于某些菌根真菌發(fā)育而使這些真菌對目的菌根菌不構(gòu)成競爭，或者目的真菌在一定條件下有顯著的競爭優(yōu)勢，以至非目的真菌的競爭受到抑制。
4、窒息滅菌是指通過降低氧氣分壓，使菌根菌或其他真菌無法正常生長發(fā)育直至死亡的一種滅菌方法。
本發(fā)明提供的培養(yǎng)外生菌根性食用菌和藥用菌菌根苗的苗床，其基質(zhì)是土壤或/和人工基質(zhì)，該基質(zhì)僅無菌根性競爭雜菌。
根據(jù)所培養(yǎng)的苗木的種類，所選擇的土壤是適合該苗木生長的土壤。
人工基質(zhì)是可選自蛭石、泥炭土、腐質(zhì)土、苔蘚、珍珠巖中的一種或幾種。優(yōu)選如下配比(體積比)蛭石30-50％，珍珠巖20-40％，泥炭土或苔蘚或腐殖土20-40％。
為得到所需的苗床，本發(fā)明采用的方法是對用于該苗床的基質(zhì)用消毒的方法去除菌根性競爭雜菌。
優(yōu)選化學(xué)滅菌法和窒息滅菌法。這些滅菌方法能有效地殺滅競爭性菌根菌，但并不要求徹底殺滅其他非競爭性菌。化學(xué)滅菌法采用的試劑可以是臭氧或甲醛。
特別優(yōu)選窒息滅菌法。該方法是成本最低，無污染的有效殺滅競爭性菌根菌的方法。降低氧分壓的方法很多，可以抽真空，或注入液體或惰性氣體。一般將用于苗床的基質(zhì)置于缺氧條件下至少20天，即可達到殺滅競爭性菌根菌的目的。
本發(fā)明提供的苗床應(yīng)置于隔離的環(huán)境中，如大棚，溫室等，使該苗床不因菌根性競爭雜菌侵入而受到污染。重要的是，這樣的苗床面積大，與其他培養(yǎng)方法相比，更適于大規(guī)模培養(yǎng)。由于只需控制無菌根性競爭菌，因而，維護成本較低。只要按上述方法制備了大量的苗床基質(zhì)，用本發(fā)明提供的苗床就可以大面積繁殖菌根苗。
用本發(fā)明提供的苗床培養(yǎng)菌根苗的方法，包括如下步驟1)將菌根真菌的繁殖體或攜帶繁殖體的載體接種到本發(fā)明提供的苗床上培養(yǎng)，所說的載體是適用于做苗床的人工基質(zhì)或/和土壤；2)再將相應(yīng)的共生植物的無菌或無菌根性競爭雜菌的幼苗或種子或插穗移植到上述基質(zhì)上。
在培養(yǎng)過程中，需使用營養(yǎng)液或復(fù)合肥。
為促使苗木的根系發(fā)達，以利于真菌的生長，在培養(yǎng)過程中，采用切根的方法。
所用的苗床在培養(yǎng)過一批菌根苗后，可以繼續(xù)用于下一批菌根苗的培養(yǎng)。
本發(fā)明實施例中分別用黑孢塊菌、中國塊菌、印度塊菌、松乳菇、紅汁乳菇、美味牛肝菌、乳牛肝菌等的孢子和純培養(yǎng)菌絲體接種到用甲醛消毒或其他方法處理的無菌根性競爭菌的人工基質(zhì)(蛭石30-50％+珍珠巖20-40％+泥炭土20-40％)上，以及甲醛消毒或窒息消毒的土壤上，并分別以板栗(Castanea mollissima Blume)、華榛(Corylus chinensis Franch.)、檉櫟(Quecus ilex L.)、白櫟(Quecus fabri Hance)、歐洲榛(Coryllus avellana L.)、青岡(Cyclobalanopsis glauca(Thumb.)oerst)、烏岡櫟(Quecus phillyraeoidesA.Gray)、黃背櫟(Quercus pannosa Hand.-Mzt.)馬尾松(Pinus massonianaLamb)、濕地松(Pinus elliottii Engelm)、火炬松(Pinus taeda L.)、赤松Pinusdensiflora sieb.et Zucc、輻射松P.radiata D.Don等的無菌苗或種子移植(或播種)于上述已接種目的菌根真菌的基質(zhì)上，控溫、控濕、控光，連續(xù)培養(yǎng)120天后，進行切根處理。100-240天內(nèi)均檢測到相應(yīng)的菌根。其中黑孢塊菌菌根為灰黑色，先端膨大，菌絲套致密的棒狀菌根；松乳菇與馬尾松形成的菌根橙黃色，具二叉分枝；紅汁乳菇與馬尾松形成的菌根血紅色，具二叉分枝；乳牛肝菌與馬尾松形成的菌根為二叉分枝，被棉絮狀銹褐色菌絲套。用這些菌根苗移栽于無菌根性競爭菌的土壤上，按1.5-8×1.5-8米的株行距種植，并任其自然發(fā)育，30個月后，分別獲得松乳菇、紅汁乳菇、乳牛肝菌子實體。35個月和41個月時在同一地段連續(xù)獲得同種類的子實體，產(chǎn)量達到每平方米0.4千克。35個月后獲得黑孢塊菌、中國塊菌、印度塊菌子實體。說明使用本發(fā)明提供的苗床以及培養(yǎng)方法，對菌根性食用菌和藥用菌的菌根苗進行規(guī)?；敝澈烷_放式栽培是切實可行的。
本發(fā)明提供的苗床制備方便，易得，為菌根苗大規(guī)模培養(yǎng)提供了條件。菌根苗的培養(yǎng)方法具有成本低，規(guī)模大的優(yōu)點。
實施例1用分離得到的松乳菇純培養(yǎng)菌絲體，接種到高溫滅菌的蛭石35％、珍珠巖35％和泥炭土28％以及營養(yǎng)液2％的人工基質(zhì)作成的固體培養(yǎng)基上，在10-28℃條件下，培養(yǎng)35天，將上述帶菌基質(zhì)接種于無競爭性菌根雜菌的苗床基質(zhì)(蛭石35％，珍珠巖35％，泥炭土28％和復(fù)合肥2％)上層，并混合均勻。然后將提前培養(yǎng)了25天的無競爭性菌根雜菌的馬尾松苗移栽至該菌床上，在自然條件下培養(yǎng)120天后切根，繼續(xù)培養(yǎng)至180天后，即獲得合格的松乳菇—馬尾松菌根苗，每平方米菌根苗產(chǎn)苗量達到80-100株。將上述合格菌根苗11000株按2×2米株行距移栽到4.5hm2紅壤土上，33個月后即獲得與天然松乳菇形態(tài)、風(fēng)味一致的子實體。每平方米子實體14個，重量0.4千克。
實施例2用分離得到的紅汁乳菇菌種，在蛭石30％、珍珠巖40％、泥炭土28％及營養(yǎng)液2％配制的固體培養(yǎng)基條件下，控溫控濕培養(yǎng)，后接種于無菌根性雜菌的苗床基質(zhì)(蛭石30％、珍珠巖40％、泥炭土28％)上層，并加入復(fù)合肥2％，混合均勻，將提前培養(yǎng)了25天的無菌根性雜菌的馬尾松苗移栽至該菌床上，在自然條件下培養(yǎng)180天后，按2×1.5米株行距移栽到無菌根性雜菌的紫色砂巖發(fā)育的1公頃砂壤土上，33個月后獲得第一批紅汁乳菇子實體，39個月后獲得第二批紅汁乳菇子實體，44個月后獲得第三批子實體。所有子實體與天然紅汁乳菇子實體形態(tài)、風(fēng)味完全一致。產(chǎn)量一平方米子實體達16個，重量0.48千克。
實施例3用分離得到的乳牛肝菌菌種，在蛭石40％、珍珠巖30％和泥炭土28％和營養(yǎng)液2％混合的固體培養(yǎng)基條件下，在23℃條件下培養(yǎng)40天后，接種于無競爭性菌根真菌的苗床基質(zhì)(蛭石40％、珍珠巖30％和腐殖土28％)上層，并加入復(fù)合肥2％，混合均勻。將培養(yǎng)了20天的無菌馬尾松苗移栽至該苗床上，在自然條件下培養(yǎng)200天后，移栽到紫色砂土上，45個月后獲得乳牛肝菌子實體，子實體數(shù)量為每平方米10個，新鮮子實體重量0.52千克。
實施例4用中華塊菌孢子接種于板栗和烏岡櫟無菌幼苗(培養(yǎng)了50天)根上，在用甲醛消毒的人工基質(zhì)(蛭石25％，珍珠巖40％，腐殖土28％，石灰6％)和復(fù)合肥1％作成的苗床上(pH6.5-7.5)培養(yǎng)10個月，獲得典型的中華塊菌菌根，該菌根呈棒狀，先端膨大，外層形成較致密的菌絲套。
實施例5用黑孢塊菌菌種接種蛭石25％、珍珠巖40％、泥炭土26％、石灰8％、營養(yǎng)液1％配制的基質(zhì)(pH7.2-8.2)，并分別移入板栗、青岡櫟、烏岡櫟、檉櫟、黃背櫟、華榛、歐洲榛的無菌苗，并一同培養(yǎng)9個月，均獲得了典型的黑孢塊菌菌根。在上述合格黑孢塊菌菌根苗移走后的菌(苗)床上，移入新的無菌板栗、烏岡櫟、檉櫟、青岡、歐洲榛無菌苗，繼續(xù)培養(yǎng)10個月，也獲得了合格的黑孢塊菌菌根苗，菌根感染率達到80-95％。
實施例6用紅汁乳菇、小美牛肝菌胞子接種到經(jīng)窒息滅菌的酸性(pH4.2-6.3)土壤上，然后將無競爭性菌根雜菌的馬尾松苗和種子分別移植于上述土壤上，適當隔離條件下，使其自然生長。經(jīng)6個月即獲得健康、純度高的目的菌根菌感染的菌根苗。上述菌根苗移栽于無競爭性菌根雜菌的山坡地上，任其生長。連續(xù)干旱季節(jié)，每4-8天澆灌一次透水。2.5年后分別獲得紅汁乳菇和小美牛肝菌子實體。
參考文獻1、Eric Danell，Successful cultivation ofthe golden chanterelle，Nature，1997，vol.3853032、伍家榮，譚著明，蔣麗娟等，馬尾松播種苗截根提高造林成活率研究，林業(yè)科技通訊，1994.616-1權(quán)利要求
1.一種用于培養(yǎng)外生菌根性食用菌和藥用菌菌根苗的苗床，其特征在于其基質(zhì)是由土壤或/和人工基質(zhì)組成的，該基質(zhì)無菌根性競爭雜菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苗床，其特征在于所選擇的土壤是適合苗木生長的土壤。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的苗床，其特征在于人工基質(zhì)選自蛭石、珍珠巖、泥炭土或苔蘚或腐殖土。
4.制備權(quán)利要求1-3之一的苗床的方法，其特征在于對用于該苗床的基質(zhì)用消毒的方法去除菌根性競爭雜菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備苗床的方法，其特征在于采用化學(xué)滅菌法。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備苗床的方法，其特征在于采用窒息滅菌法。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備苗床的方法，其特征在于將用于苗床的基質(zhì)置于缺氧條件下至少20天。
8.培養(yǎng)菌根苗的方法，包括如下步驟1)將菌根真菌的繁殖體或攜帶繁殖體的載體接種到權(quán)利要求1-3之一所述的苗床上培養(yǎng)，2)再將相應(yīng)的共生植物的無菌或無菌根性競爭雜菌的幼苗或種子或插穗移植到上述基質(zhì)上。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的培養(yǎng)菌根苗的方法，其特征在于在培養(yǎng)過程中，采用切根的方法。
10.培養(yǎng)菌根苗的方法，其特征在于所用的苗床是已經(jīng)培養(yǎng)過菌根苗的權(quán)利要求1-3之一所述的苗床。
全文摘要
本發(fā)明涉及培養(yǎng)菌根苗的苗床，苗床的獲得方法。本發(fā)明還涉及菌根苗的培養(yǎng)方法。本發(fā)明提供的培養(yǎng)外生菌根性食用菌和藥用菌菌根苗的苗床，其基質(zhì)是土壤或/和人工基質(zhì)，該基質(zhì)僅無菌根性競爭雜菌。為得到所需的苗床，本發(fā)明采用的方法是對用于該苗床的基質(zhì)用消毒的方法去除菌根性競爭雜菌。本發(fā)明提供的苗床制備方便，易得，為菌根苗大規(guī)模培養(yǎng)提供了條件。菌根苗的培養(yǎng)方法具有成本低，規(guī)模大的優(yōu)點。
文檔編號A01H17/00GK1541511SQ03124830
公開日2004年11月3日 申請日期2003年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月17日
發(fā)明者譚著明, 傅紹春, 陳宏喜, 張燦明, 蔣麗娟 申請人:湖南省林業(yè)科學(xué)院