專利名稱：使紅細(xì)胞沉降的方法
相關(guān)申請本申請要求2001年12月5日提交的美國臨時(shí)專利申請60/251,047號的優(yōu)先權(quán)。
通過沉降分離紅細(xì)胞的已知裝置包括美國專利5,282,982和PCT申請公開WO99/44711中記載的那些。這些結(jié)構(gòu)一般是通過提供用于接收紅細(xì)胞與清洗液的混合物的淺容器來工作的。容器被傾斜，從而使由于密度差而借助重力從溶液沉降出來的紅細(xì)胞沿容器的底面向下流到收集漏斗，以排出到重新注入設(shè)備。
上述現(xiàn)有系統(tǒng)的方法還包括將血液收集到含有ACD-A作為抗凝劑的容器的步驟，以及加入有利于紅細(xì)胞聚集的試劑的步驟。優(yōu)選的試劑是羥乙基淀粉，它可以促進(jìn)紅細(xì)胞相互電吸引，從而紅細(xì)胞聚集并形成層疊的輥筒形狀(roll configuration)的凝塊，這被稱作緡錢體(rouleau)。人們認(rèn)為羥乙基淀粉是通過在隔得遠(yuǎn)的紅細(xì)胞之間形成電橋而促進(jìn)緡錢體的形成。緡錢體在溶液中表現(xiàn)出較小的水動阻力，因此預(yù)計(jì)更快速地沉到容器底部。
申請人面臨的問題是上述的方法在實(shí)踐中不可靠。也就是說，該方法中緡錢體經(jīng)常不能根據(jù)需要而形成，或不能在合理長的時(shí)間內(nèi)從血漿-羥乙基淀粉溶液中沉降出來，以提供具有適合對病人重新注入的血細(xì)胞比容的溶液。
作為此處使用的“惰性”或“惰性抗凝劑”，是指一種抗凝劑，它防止凝固，但是不影響紅細(xì)胞有效形成緡錢體，從而適于通過沉降分離的能力。申請人發(fā)現(xiàn)的這樣的一種惰性抗凝劑為檸檬酸磷酸葡萄糖(CPD)(citrate phosphate dextrose)。肝素是另一種惰性抗凝劑，它不會阻礙緡錢體的形成。但是，在本發(fā)明的方法中較少優(yōu)選使用肝素，原因是為將血液返回至病人體內(nèi)通常要將血液保存起來。肝素可能會對病人產(chǎn)生不希望的作用，并且將這樣的血液返回病人體內(nèi)可能也是不合適的。因此，優(yōu)選的抗凝劑是CPD，因?yàn)樗桓蓴_紅細(xì)胞的沉降，還因?yàn)椴∪丝梢院苋菀椎貙⑵浯x。
申請人認(rèn)為，現(xiàn)有技術(shù)的方法之所以沒有用，是因?yàn)樵谠摲椒ㄖ惺褂玫目鼓齽〢CD-A對紅細(xì)胞具有不利影響。特別地，現(xiàn)在人們認(rèn)為紅細(xì)胞吸收ACD-A會對細(xì)胞產(chǎn)生物理作用，防止它們形成希望的緡錢體以及按照需要在重力作用下沉降出來。申請人發(fā)展的一項(xiàng)理論是，ACD-A的吸收改變了紅細(xì)胞的形狀，使它們膨脹，并妨礙它們形成緡錢體的能力?？赡苓€存在抗凝劑產(chǎn)生干擾的其它原因。
可能會發(fā)現(xiàn)或開發(fā)CPD和肝素以外的惰性抗凝劑。另外，對ACD-A進(jìn)行物理或化學(xué)處理，使其對該目的而言變?yōu)槎栊砸彩强赡艿摹?br> 再者，含有羥乙基淀粉以外的試劑的清洗液也可以使用。已知紅細(xì)胞相互電吸引，并且羥乙基淀粉看起來通過在隔得遠(yuǎn)的紅細(xì)胞間提供電橋有助于緡錢體的形成。也可能會發(fā)現(xiàn)促進(jìn)緡錢體形成的其它試劑，包括其它的淀粉試劑如pentastarch(低分子量羥乙基淀粉)。因此，本發(fā)明期待含有其它試劑的其它清洗液的使用。本發(fā)明的詳細(xì)說明在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，通過真空系統(tǒng)將血液收集到容器中，該真空系統(tǒng)產(chǎn)生壓差小的受控真空度，以減小收集時(shí)對紅細(xì)胞的損害。這可用WO99/44711公開的系統(tǒng)或本領(lǐng)域已知的其它系統(tǒng)來實(shí)現(xiàn)。收集的血液在收集時(shí)與用作惰性抗凝劑的CPD混合。CPD以適合防止在該過程中發(fā)生凝血的CPD/血液比加到血液中。該比例最高可達(dá)到1份CPD對15份血液，優(yōu)選在1∶5至1∶15的范圍內(nèi)，更優(yōu)選1份CPD對10份收集的血液。
然后，收集的血液與含有試劑的清洗液(優(yōu)選含有6％羥乙基淀粉的鹽水)混合，并被放置到沉降室中進(jìn)行處理。羥乙基淀粉的優(yōu)選添加比例是8份羥乙基淀粉對5份血液/抗凝劑混合物，但可以發(fā)現(xiàn)，大范圍的比例對從血液中除去不需要的物質(zhì)都是有用的。
然后將溶液靜置一段時(shí)間，以使大部分(如果不是全部)紅細(xì)胞形成緡錢體并沉降到容器底部。該段時(shí)間可變化，但發(fā)現(xiàn)約20分鐘就足夠了。然后按照通常方法從容器中取出紅細(xì)胞，并將其重新注入到病人體內(nèi)。
利用WO99/44711公開的裝置實(shí)行上述技術(shù)的臨床試驗(yàn)顯示，紅細(xì)胞在約20分鐘內(nèi)從清洗液中分離，挽救的細(xì)胞的血細(xì)胞比容為30-64Hct。
在附加的權(quán)利要求范圍內(nèi)的變更對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員是顯而易見的。
權(quán)利要求
1.通過從含有血液和抗凝劑的溶液中沉降紅細(xì)胞進(jìn)行分離的改進(jìn)方法，其中所述的抗凝劑基本上由惰性抗凝劑組成。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述的惰性抗凝劑為檸檬酸磷酸葡萄糖(CPD)。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述的CPD以1份CPD對最多達(dá)15份血液的比例與所述的血液混合。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述的惰性抗凝劑為肝素。
5.通過從含有血液和抗凝劑的溶液中沉降紅細(xì)胞進(jìn)行分離的改進(jìn)方法，其中所述的抗凝劑基本上由選自CPD和肝素的抗凝劑組成。
6.清洗血液的方法，包括以下步驟提供含有惰性抗凝劑的所述血液；將所述血液與清洗液混合；以及通過沉降使紅細(xì)胞從所述的清洗液中分離出來。
7.權(quán)利要求6的方法，其中所述的惰性抗凝劑為CPD。
8.權(quán)利要求7的方法，其中所述的清洗液含有淀粉溶液。
9.權(quán)利要求7的方法，其中所述的清洗液含有羥乙基淀粉。
10.權(quán)利要求7的方法，其中所述的清洗液為含有6％羥乙基淀粉的溶液。
11.權(quán)利要求6的方法，其中所述的惰性抗凝劑為肝素。
12.含有血液、抗凝劑和清洗液的溶液，其中所述的抗凝劑選自CPD和肝素。
13.權(quán)利要求12的溶液，其中所述的清洗液含有淀粉。
14.權(quán)利要求13的溶液，其中所述的淀粉為羥乙基淀粉。
15.基本上由血液、惰性抗凝劑和清洗液組成的溶液。
16.權(quán)利要求15的溶液，其中所述的惰性抗凝劑為CPD。
17.權(quán)利要求15的溶液，其中所述的惰性抗凝劑為肝素。
18.權(quán)利要求15的溶液，其中所述的血液為血液的沉積層。
19.權(quán)利要求18的溶液，其中所述的沉積層含有所述血液的大部分紅細(xì)胞。
20.權(quán)利要求19的溶液，其中所述的沉積層的血細(xì)胞比容為約30-64。
全文摘要
一種用于清洗收集的血液的方法，它在收集血液時(shí)使用惰性抗凝劑。所述的惰性抗凝劑不干擾紅細(xì)胞的聚集，從而促進(jìn)重力沉降分離。優(yōu)選的惰性抗凝劑是CPD(檸檬酸磷酸葡萄糖)。
文檔編號A01N1/02GK1479592SQ01820071
公開日2004年3月3日 申請日期2001年12月5日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月5日
發(fā)明者韋斯利·H·維卡特, 韋斯利 H 維卡特, R 埃爾斯沃斯, 詹姆斯·R·埃爾斯沃斯 申請人:豐收技術(shù)股份有限公司