專利名稱：紅細胞瞬間磁化方法
技術領域：
本發(fā)明屬于生物技術領域。
背景技術：
磁性微球是1978年由Senyei A E首先研制成功的，現(xiàn)在在科學 研究與臨床檢驗方面得到廣泛應用。免疫磁珠分離技術操作簡便，分 離純度高，保留靶物質(zhì)活性，且高效、快速、低毒，大大提高了分離 速度和富集效率，進而提高檢測的靈敏性，減少其他物質(zhì)的干擾；利
用免疫磁珠技術可省去離心步驟，磁場力就可以達到分離的目的，節(jié) 省費用、能源和時間；免疫磁珠技術可以與其他傳統(tǒng)檢測技術，如 ELISA、免疫熒光分析、放射免疫分析、PCR、流式細胞儀等相結(jié)合。 可使傳統(tǒng)檢測技術更加靈敏、方便，檢測結(jié)果更加可靠；免疫磁珠技 術有利于實現(xiàn)試劑的標準化，操作的自動化，并可做到用一份標本進 行多項檢測。
血型血清學檢測主要涉及以下三方面血型鑒定、抗體篩檢和鑒 定、交叉配血。
1、血型鑒定采用正反定型來進行血型鑒定。
正定型是用已知抗體來測定紅細胞上有無相應的抗原。 反定型是用已知抗原的細胞來測定血清中有無相應的抗體。
4目前常用方法玻片法、試管法、微板法、微柱凝膠法
2、 抗體篩檢和鑒定 完全抗體的檢測一鹽水血凝試驗
不完全抗體的檢測一篩檢-促凝集方法包括酶法、聚凝胺法，確 定試驗是抗人球蛋白試驗，包括傳統(tǒng)的試管抗人球蛋白試驗和微柱凝 膠試驗。
3、 交叉配血
即相容性配血試驗，檢測受血者血清中抗體和獻血者紅細胞抗原 是否相合試驗為主側(cè)交叉配血試驗，檢測受血者紅細胞和獻血者血清 中抗體是否相合試驗為次側(cè)交叉配血試驗相容性，對其中是不完全抗 體的，只能應用間接抗人球蛋白試驗確定其相容性。
在上述方法中，大部分均需離心這一步驟，常用的有試管離心法 及微孔板離心法。離心完畢后需將試管從離心機中取出觀察結(jié)果。這 一過程為手工操作，每一次離心的試管數(shù)量有限，且需要專用離心機 及消耗電力。無法在野戰(zhàn)、緊急救援等缺乏電力供應的情況下進行檢

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是利用金屬離子合成具有順磁性的磁性粒子，并將 其配置成合適濃度，與木瓜酶溶液一起組成瞬間磁化紅細胞的方法。 本發(fā)明的步驟是勻，最后用容量瓶定容至200ml，然后用0.22um濾器過濾；
二、 合成磁粒
a、 反應釜中加入NaOH溶液，開啟攪拌裝置，攪拌速度緩慢上 升至12000 rpm，持續(xù)攪拌10分鐘；
b、 在持續(xù)攪拌的同時以3L/分鐘的流量通入高純氮氣驅(qū)氧20分
鐘；
c、 驅(qū)氧完畢后緩慢加入步驟一制備的鐵液，同時以12000 rpm 攪拌，劇烈反應30分鐘，至pH值大于9終止反應，既得磁性粒子；
d、 將反應釜中液體磁力吸附20分鐘；
e、 吸去上清液，然后加入300ml生理鹽水，混勻磁粒；重復步 驟d直至檢測洗滌液為中性為止；
f、 最后將所得磁性重懸于1%牛血清白蛋白生理鹽水中，并調(diào)整 濃度為0.6mg/ml ，即為紅細胞磁化液；
三、 木瓜酶溶液配制
a、 稱取木瓜酶溶于PH5.4的PBS中；
b、 室溫攪拌15min，過濾或離心，收集上清；
c、 37°C， 1小時激活；
d、 加入1/15M PH5.4PBS及至終體積200ml并加入終濃度為0.1% 的疊氮鈉；
e、 濾過除菌，分裝，4X:保存；
四、 紅細胞的瞬間磁化
取新鮮血標本，離心、洗滌取得壓積紅細胞，取壓積紅細胞，紅細胞磁化液，木瓜酶溶液，混勻，即制得瞬間磁化紅細胞，其中壓積
紅細胞紅細胞磁化液木瓜酶溶液=4 : 21 : 75。
本發(fā)明采用化學共沉淀法制備出大小合適，粒徑均一的且具有瞬 間磁化特性的磁性粒子，然后以此磁化試劑使紅細胞具有瞬間磁化特 性，即在存在磁場時，紅細胞具有磁性， 一旦撤去磁場，紅細胞的磁 性立即消失，沒有剩磁。磁化紅細胞具有與新鮮紅細胞相同的生物學 性質(zhì)，但其具有的瞬間磁化特性可以實現(xiàn)快速、簡便的分離，可以在 血型血清學中廣泛應用，例如用于紅細胞表型鑒定，不規(guī)則抗體篩查 及紅細胞輸血相容性檢測等方面。將免疫磁珠技術與血型血清學技術 相結(jié)合，使得磁珠的優(yōu)點的以發(fā)揮，使得血型血清學試驗過程更簡便， 自動化程度提高，結(jié)果也更加可靠。
具體實施例方式
一、 制備鐵溶液
稱取三氯化鐵4.05 g和氯化亞鐵1.94 g，分別將其溶于80ml 0.17MHCL溶液中，攪拌混勻，最后用容量瓶定容至200 ml，然后 用0.22um濾器過濾；
二、 合成磁粒
a、 反應釜中加入75mllMNaOH溶液100ml，開啟攪拌裝置， 攪拌速度緩慢上升至12000 rpm，持續(xù)攪拌10分鐘；
b、 在持續(xù)攪拌的同時以3L/分鐘的流量通入高純氮氣驅(qū)氧20分
鐘；
c、 驅(qū)氧完畢后緩慢加入步驟一制備的鐵液，同時以12000 rpm攪拌，劇烈反應30分鐘，至pH值大于9終止反應，既得磁性粒子， 磁場狀態(tài)下進行分離。
d、 將反應釜中液體轉(zhuǎn)移至錐形瓶，然后將錐形瓶置于磁座上磁 力吸附20分鐘；
e、 吸去上清液，然后加入300ml生理鹽水，混勻磁粒；重復步 驟d直至檢測洗滌液為中性為止；
f、 最后將所得磁性重懸于1%牛血清白蛋白生理鹽水中，并調(diào)整
濃度為0.6mg/ml ，即為紅細胞磁化液；
其中磁性粒子的合成方法，為化學共沉淀法。采用的化學反應為
Fe2+2Fe3+80H=Fe304+4H20
三、 木瓜酶溶液配制
a、 稱取2g木瓜酶溶于100ml 1/15M PH5.4PBS中；
b、 室溫攪拌15min，過濾或離心，收集上清；
c、 37°C， 1小時激活；
d、 加入l/15MPH5.4PBS及至終體積200ml并加入終濃度為0.1。/。
e、 濾過除菌，分裝，4"C保存；
四、 紅細胞的瞬間磁化
取新鮮血標本，離心、洗滌取得壓積紅細胞，取壓積紅細胞，紅 細胞磁化液，木瓜酶溶液，混勻，即制得瞬間磁化紅細胞，其中壓積
紅細胞紅細胞磁化液木瓜酶溶液二4 : 21 : 75。
實施例一 紅細胞正定型向標記好的反應板中分別加入正定型所用的抗血請50ul，然后加 入磁化紅細胞50ul，混勻，置磁性分離器上分離1分鐘，震蕩反應板， 觀察結(jié)果。
實施例二抗體篩檢
按照本發(fā)明所述方法制備瞬間磁化篩檢細胞。向標記好的反應板
中加入待檢標本，然后分別加入磁化篩檢細胞50ul，置磁性分離器上
分離1分鐘，震蕩反應板，觀察結(jié)果。 實施例三交叉配血
按照本發(fā)明所述方法制備瞬間磁化供者細胞。向反應板中加入受 者血清及瞬間磁化供者細胞，混勻置磁性分離器上分離l分鐘，震蕩 反應板，觀察結(jié)果。
權(quán)利要求
1、一種紅細胞瞬間磁化方法，其特征在于一、制備鐵溶液稱取三氯化鐵和氯化亞鐵，分別將其溶于HCL溶液中，攪拌混勻，最后用容量瓶定容至200ml，然后用0.22um濾器過濾；二、合成磁粒a、反應釜中加入NaOH溶液，開啟攪拌裝置，攪拌速度緩慢上升至12000rpm，持續(xù)攪拌10分鐘；b、在持續(xù)攪拌的同時以3L/分鐘的流量通入高純氮氣驅(qū)氧20分鐘；c、驅(qū)氧完畢后緩慢加入步驟一制備的鐵液，同時以12000rpm攪拌，劇烈反應30分鐘，至pH值大于9終止反應，既得磁性粒子；d、將反應釜中液體磁力吸附20分鐘；e、吸去上清液，然后加入300ml生理鹽水，混勻磁粒；重復步驟d直至檢測洗滌液為中性為止；f、最后將所得磁性重懸于1％牛血清白蛋白生理鹽水中，并調(diào)整濃度為0.6mg/ml，即為紅細胞磁化液；三、木瓜酶溶液配制a、稱取木瓜酶溶于PH5.4的PBS中；b、室溫攪拌15min，過濾或離心，收集上清；c、37℃，1小時激活；d、加入1/15M PH5.4PBS及至終體積200ml并加入終濃度為0.1％的疊氮鈉；e、濾過除菌，分裝，4℃保存；四、紅細胞的瞬間磁化取新鮮血標本，離心、洗滌取得壓積紅細胞，取壓積紅細胞，紅細胞磁化液，木瓜酶溶液，混勻，即制得瞬間磁化紅細胞，其中壓積紅細胞∶紅細胞磁化液∶木瓜酶溶液＝4∶21∶75。
全文摘要
一種紅細胞瞬間磁化方法，屬于生物技術領域。本發(fā)明的目的是利用金屬離子合成具有順磁性的磁性粒子，并將其配置成合適濃度，與木瓜酶溶液一起組成瞬間磁化紅細胞的方法。本發(fā)明的過程包括制備鐵溶液、合成磁粒、木瓜酶溶液配制、紅細胞的瞬間磁化四大步驟。本發(fā)明免疫磁珠技術與血型血清學技術相結(jié)合，使得磁珠的優(yōu)點的以發(fā)揮，使得血型血清學試驗過程更簡便，自動化程度提高，結(jié)果也更加可靠。
文檔編號G01N1/28GK101487774SQ20091006656
公開日2009年7月22日 申請日期2009年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年2月25日
發(fā)明者孔維臣, 宇 張, 東 李, 勇 李, 楊文沖, 軍 童, 凱 蘇, 隋寶真 申請人:勇 李