一種檢測肺癌的sall4免疫組織化學(xué)染色試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實用新型涉及一種免疫組織化學(xué)染色試劑盒，尤其涉及一種能夠檢測肺癌的SALL4免疫組織化學(xué)染色試劑盒，屬于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)檢測領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]肺癌是當(dāng)今全球最常見的惡性腫瘤之一，危害嚴(yán)重并呈上升趨勢，是全球發(fā)病率和死亡率增加最快的疾病。肺癌的高病死率主要是由于無法做到早期診斷，因此，利用肺癌標(biāo)志物進(jìn)行肺癌早期診斷是及時規(guī)范治療并改善其預(yù)后的最有效措施。目前用于腫瘤早期診斷的腫瘤標(biāo)志物，大多由于缺乏靈敏度和特異性而不能在實際檢測中廣泛應(yīng)用。而針對高發(fā)病率和死亡率的肺癌，尋找高敏感性和特異性的標(biāo)志物，對肺癌的診斷和治療肺癌具有重大意義，已成為肺癌防治的當(dāng)務(wù)之急。
[0003]SALL4蛋白由人源基因SALL4編碼翻譯，其全稱為Sal樣蛋白4(Sal-like protein4)，別名鋅指蛋白 797 (Zinc finger protein 797)和鋅指蛋白 SALL4(Zinc fingerprotein SALL4)。SALL4屬于Sal C2H2類鋅指蛋白家族，包含有C2H2類鋅指結(jié)構(gòu)。SALL4蛋白有兩個亞型，即SALL4A和SALL4B，其分子量大小分別為112.2KD和65.7KD。SALL4蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中。
[0004]目前，在臨床上，免疫組織化學(xué)染色已經(jīng)在腫瘤病理診斷中得到了廣泛應(yīng)用，涉及領(lǐng)域包括腫瘤組織起源的鑒別、未分化惡性腫瘤性質(zhì)的判定、各種形態(tài)系統(tǒng)腫瘤鑒別、確定腫瘤原發(fā)部位等。其原理是用標(biāo)記的抗體對細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)的抗原進(jìn)行定性、定位或定量檢測，經(jīng)過組織化學(xué)的呈色反應(yīng)而呈現(xiàn)醒目的陽性色彩，再用光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察。但迄今為止，市面上尚未有檢測肺癌的SALL4免疫組織化學(xué)染色試劑盒。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本實用新型的目的，是提供一種用于肺癌檢測的免疫組織化學(xué)試劑盒。該試劑盒利用肺癌標(biāo)志物SALL4進(jìn)行肺癌早期診斷，具有特異性高、敏感性高、差異性表達(dá)等優(yōu)點，且本試劑盒的結(jié)構(gòu)設(shè)計合理、操作簡單、省時省力。
[0006]本實用新型解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:一種檢測肺癌的SALL4免疫組織化學(xué)染色試劑盒，包括盒體和設(shè)置在所述盒體開口處的盒蓋，所述盒體為長方體硬紙盒，所述盒體內(nèi)設(shè)置有用于裝載試劑瓶的泡沫墊和I份使用說明書，所述泡沫墊上設(shè)有12瓶試劑和2個對照標(biāo)準(zhǔn)品，2個對照標(biāo)準(zhǔn)品分別為陽性標(biāo)準(zhǔn)品和陰性標(biāo)準(zhǔn)品，12瓶試劑分別為一抗、二抗、DAB稀釋液、DAB底物儲存液、穩(wěn)定的過氧化物酶、DAB增色液、抗原修復(fù)粉劑、通透劑濃縮液、過氧化物酶失活劑濃縮液、非特異性蛋白阻斷劑原液、染色劑和PBS片劑。
[0007]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為精原細(xì)胞瘤組織蠟塊，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品為肺鱗癌組織蠟塊。
[0008]所述一抗為小鼠來源的抗人SALL4單克隆抗體，所述二抗為生物素標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，所述抗原修復(fù)粉劑為Tris/EDTA，所述通透劑濃縮液為Triton X-100，所述過氧化物酶失活劑濃縮液為30% v/v的過氧化氫，所述非特異性蛋白阻斷劑原液為羊血清，所述染色劑為蘇木精。
[0009]所述泡沫墊包括位于盒體內(nèi)部靠上的第一泡沫墊和位于盒體內(nèi)部靠下的第二泡沫墊，且所述第一泡沫墊和第二泡沫墊上下平行設(shè)置，所述第一泡沫墊上開有2個分別放置陽性標(biāo)準(zhǔn)品和陰性標(biāo)準(zhǔn)品的方形的凹槽和6個分別放置一抗、二抗、DAB稀釋液、DAB底物儲存液、穩(wěn)定的過氧化物酶和DAB增色液試劑瓶的圓形的凹槽，在所述第一泡沫墊上還設(shè)有兩個圓形的通孔，所述兩個圓形的通孔可以伸進(jìn)手指，用于取出第一泡沫墊，所述第二泡沫墊上開有6個分別放置抗原修復(fù)粉劑、通透劑濃縮液、過氧化物酶失活劑濃縮液、非特異性蛋白阻斷劑原液、染色劑和PBS片劑試劑瓶的圓形的凹槽。
[0010]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗為白色帽的白色PE塑料管，所述二抗為棕褐色帽的棕褐色PE塑料管，所述DAB稀釋液為黑色帽的白色PE塑料瓶，所述DAB底物儲存液為黑色帽的白色PE塑料管，所述穩(wěn)定的過氧化物酶為白色帽的白色PE塑料管，所述DAB增色液為黑色帽的黑色PE塑料管，所述抗原修復(fù)粉劑為白色帽的白色PE塑料瓶，所述通透劑濃縮液為黃色帽的白色PE塑料瓶，所述過氧化物酶失活劑濃縮液為藍(lán)色帽的白色PE塑料瓶，所述非特異性蛋白阻斷劑原液為紅色帽的白色PE塑料瓶，所述染色劑為綠色帽的白色PE塑料瓶，所述PBS片劑為白色帽的白色PE塑料瓶。
[0011]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品為I塊、體積2cmX 2cmX 2cm，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品為I塊、體積2cm X 2cm X 2cm，所述一抗為I管、lml，所述二抗為I管、lml，所述DAB稀釋液為I瓶、20ml，所述DAB底物儲存液為I管、1ml，所述穩(wěn)定的過氧化物酶為I管、1ml，所述DAB增色液為I管、lml，所述抗原修復(fù)粉劑為I瓶、5g，所述通透劑濃縮液為I瓶、5ml，所述過氧化物酶失活劑濃縮液為I瓶、20ml，所述非特異性蛋白阻斷劑原液為I瓶、20ml，所述染色劑為I瓶、20ml，所述PBS片劑為I瓶、20片。
[0012]在肺癌檢測的免疫組化實驗前，將所需的片劑、粉劑，濃縮液按說明書配成所需試劑，即可使用。一個試劑盒中的試劑足夠150張切片的使用。
[0013]本實用新型的有益效果為:
[0014]1.本實用新型的試劑盒具有操作方便、易于攜帶、檢測所用試劑全面等優(yōu)點。
[0015]2.本實用新型的試劑盒可用于肺癌檢測，具有特異性高、靈敏度高、穩(wěn)定性好等特點，可用于肺癌檢測和癌癥分型。
[0016]3.本實用新型的試劑盒可最大程度地將肺癌的檢出時間提前，并提高了肺癌檢出的準(zhǔn)確性，解決了很多現(xiàn)有檢測手段準(zhǔn)確性差的問題，具有較高的臨床應(yīng)用價值和社會效益。
【附圖說明】
[0017]圖1為本實用新型打開盒蓋后的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0018]圖中，1、盒體，2、盒蓋，3a、第一泡沫墊，3b、第二泡沫墊，4、陽性標(biāo)準(zhǔn)品，5、陰性標(biāo)準(zhǔn)品，6、一抗，7、二抗，8、DAB稀釋液，9、DAB底物儲存液，10、穩(wěn)定的過氧化物酶、11、DAB增色液，12、抗原修復(fù)粉劑，13、通透劑濃縮液，14、過氧化物酶失活劑濃縮液，15、非特異性蛋白阻斷劑原液，16、染色劑，17、PBS片劑，18、通孔。
【具體實施方式】
[0019]以下結(jié)合附圖對本實用新型的原理和特征進(jìn)行描述，所舉實例只用于解釋本實用新型，并非用于限定本實用新型的范圍。
[0020]如圖1所示，一種檢測肺癌的SALL4免疫組織化學(xué)染色試劑盒，包括盒體(I)和設(shè)置在所述盒體(I)開口處的盒蓋(2)，所述盒體(I)為長方體硬紙盒，所述盒體(I)內(nèi)設(shè)置有用于裝載試劑瓶的泡沫墊和I份使用說明書，所述泡沫墊上設(shè)有12瓶試劑和2個對照標(biāo)準(zhǔn)品，2個對照標(biāo)準(zhǔn)品分別為陽性標(biāo)準(zhǔn)品(4)和陰性標(biāo)準(zhǔn)品(5)，12瓶試劑分別為一抗(6)、二抗(7)、DAB稀釋液(8)、DAB底物儲存液(9)、穩(wěn)定的過氧化物酶(10)、DAB增色液(11)、抗原修復(fù)粉劑(12)、通透劑濃縮液(13)、過氧化物酶失活劑濃縮液(14)、非特異性蛋白阻斷劑原液(15)、染色劑(16)和PBS片劑(17) ο
[0021]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品(4)為精原細(xì)胞瘤組織蠟塊，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品(5)為肺鱗癌組織錯塊。
[0022]所述一抗(6)為小鼠來源的抗人SALL4單克隆抗體，所述二抗(7)為生物素標(biāo)記的山羊抗小鼠IgG，所述抗原修復(fù)粉劑(12)為Tris/EDTA，所述通透劑濃縮液(13)為Triton X-100，所述過氧化物酶失活劑濃縮液(14)為30% v/v的過氧化氫，所述非特異性蛋白阻斷劑原液(15)為羊血清，所述染色劑(16)為蘇木精。
[0023]所述泡沫墊包括位于盒體(I)內(nèi)部靠上的第一泡沫墊(3a)和位于盒體(I)內(nèi)部靠下的第二泡沫墊(3b)，且所述第一泡沫墊(3a)和第二泡沫墊(3b)上下平行設(shè)置，所述第一泡沫墊(3a)上開有2個分別放置陽性標(biāo)準(zhǔn)品(4)和陰性標(biāo)準(zhǔn)品(5)的方形的凹槽和6個分別放置一抗(6)、二抗(7)、DAB稀釋液(8)、DAB底物儲存液(9)、穩(wěn)定的過氧化物酶
(10)和DAB增色液(11)試劑瓶的圓形的凹槽，在所述第一泡沫墊(3a)上還設(shè)有兩個圓形的通孔(18)，所述兩個圓形的通孔(18)可以伸進(jìn)手指，用于取出第一泡沫墊(3a)，所述第二泡沫墊(3b)上開有6個分別放置抗原修復(fù)粉劑(12)、通透劑濃縮液(13)、過氧化物酶失活劑濃縮液(14)、非特異性蛋白阻斷劑原液(15)、染色劑(16)和PBS片劑(17)試劑瓶的圓形的凹槽。
[0024]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品(4)為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品(5)為白色自封袋包裹的立方體蠟塊，所述一抗(6)為白色帽的白色PE塑料管，所述二抗(7)為棕褐色帽的棕褐色PE塑料管，所述DAB稀釋液(8)為黑色帽的白色PE塑料瓶，所述DAB底物儲存液(9)為黑色帽的白色PE塑料管，所述穩(wěn)定的過氧化物酶(10)為白色帽的白色PE塑料管，所述DAB增色液(11)為黑色帽的黑色PE塑料管，所述抗原修復(fù)粉劑(12)為白色帽的白色PE塑料瓶，所述通透劑濃縮液(13)為黃色帽的白色PE塑料瓶，所述過氧化物酶失活劑濃縮液(14)為藍(lán)色帽的白色PE塑料瓶，所述非特異性蛋白阻斷劑原液(15)為紅色帽的白色PE塑料瓶，所述染色劑(16)為綠色帽的白色PE塑料瓶，所述PBS片劑(17)為白色帽的白色PE塑料瓶。
[0025]所述陽性標(biāo)準(zhǔn)品⑷為I塊、體積2cmX 2cmX 2cm，所述陰性標(biāo)準(zhǔn)品(5)為I塊、體積2cmX 2cmX 2cm，所述一抗(6)為I管、lml，所述二抗(7)為I管、lml，所述DAB稀釋液
(8)為I瓶、20ml，所述DAB底物儲存液(9)為I管、lml，所述穩(wěn)定的過氧化物酶(10)為I管、lml，所述DAB增色液(11)為I管、lml，所述抗原修復(fù)粉劑(12)為I瓶、5g，所述通透劑濃縮液(13)為I瓶、5ml，所述過氧化物酶失活劑濃縮液(14)為I瓶、20ml，所述非特異