集成化在線樣品預處理裝置及其應用
【專利摘要】一種集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于：即將酶反應器、固相萃取柱與液相色譜?質(zhì)譜系統(tǒng)在線聯(lián)用，構建集酶水解?固相萃取富集?液相色譜?質(zhì)譜分離分析的一體化樣品預處理分析平臺系統(tǒng)，具體包括一級切換閥，二級切換閥，連接在兩級切換閥之間的酶反應器，連接在一級切換閥上的定量環(huán)和固相萃取柱Ⅰ，連接在二級切換閥上的固相萃取柱Ⅱ和分離柱及質(zhì)譜儀。將本發(fā)明的預處理裝置應用于煙氣代謝物分析檢測，可實現(xiàn)目標化合物在線高效水解，并集多種SPE富集凈化一體，富集倍數(shù)高，重現(xiàn)性好，為實現(xiàn)復雜基質(zhì)樣品中煙氣代謝物的高靈敏、高通量分析研究提供了重要的技術支撐。
【專利說明】
集成化在線樣品預處理裝置及其應用
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及一種樣品在線預處理裝置，即將固定化酶反應器、離子交換柱、固相萃取柱與液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)在線聯(lián)用，構建集酶水解-固相萃取富集-液相色譜-質(zhì)譜分離分析的一體化樣品預處理分析平臺系統(tǒng)。利用該裝置可提高體液內(nèi)煙氣代謝物的分析檢測的速度。
【背景技術】
[0002]惡性腫瘤由于具有死亡率高、發(fā)病率高等特點，是威脅人類健康的病魔之一，已成為各科學研究領域關注的熱點之一。肺癌作為一種常見的惡性腫瘤，其死亡率居各種惡性腫瘤的首位，并且發(fā)病率呈明顯上升趨勢，有研究報道90%的肺癌相關死亡與吸煙行為密切相關[I]。吸煙誘發(fā)肺癌的一個重要影響因素是吸煙過程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物具有強致癌性[2-3]。因此，檢測體內(nèi)煙氣成分代謝標志物對系統(tǒng)研究其在體內(nèi)的代謝機制，揭示不同煙氣有害成分對人體健康的危害具有非常重要的意義。
[0003]以尼古丁與4_甲基亞硝胺_1_(3_卩比啶)_1_丁酬(NNK)為例，兩者是煙草制品中非常重要的兩類化合物。尼古丁是煙草植物及其制品中含量最豐富的生物堿，約占總生物堿含量的98%，吸煙成癮與其密不可分。它在體內(nèi)半衰期較短(約2h)，約70-80%被代謝成可天寧，并相繼產(chǎn)生可天寧衍生的代謝產(chǎn)物，因此，可天寧是評價吸煙劑量及暴露環(huán)境煙氣量的生物標記物[4] ANK是尼古丁亞硝基化或微量煙堿亞硝基化形成的一種煙氣致癌物，其在細胞色素P450酶和谷胱甘肽轉硫酶調(diào)控下的體內(nèi)代謝產(chǎn)物4-甲基亞硝胺基-1-(3-吡啶)-1_ 丁醇(NNAL)及其糖苷態(tài)衍生物(NNAL-Glucs)是研究NNK在人體內(nèi)代謝過程中致毒與解毒機制非常有價值的接觸生物標志物。游離NNAL及NNAL-Glucs的含量總和與游離態(tài)NNAL含量的比值可用于評估與NNK有關的癌癥發(fā)生的風險[5]。然而，在煙氣暴露者體液中，可天寧及其代謝產(chǎn)物的濃度通常在ng/mL數(shù)量級，NNAL及NNAL-Glucs—般在pg/mL級別;體液樣品的復雜程度較高，檢測受到基質(zhì)嚴重干擾。
[0004]目前，游離可天寧與NNAL分析通常包括兩個基本步驟:(I)液液萃取或固相萃取等前處理技術對樣品進行富集純化；(2)基于氣相色譜(GC)或液相色譜(LC)分離與熱能分析(TEA)或串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)聯(lián)用的技術進行分析檢測。在當前的研究中，總可天寧和NNAL的分析需要在富集凈化步驟前首先將其糖苷衍生物進行去糖基化，從而得到游離的可天寧與NNAL。該過程可以通過酸堿水解或酶水解等方式進行，其中通過β_葡萄糖醛酸酶水解的方式應用較多。這種傳統(tǒng)的水解反應存在耗時較長(16-24h)，水解效率較低等缺點。除此之外，雖然目前常采用的方法較Carmella等人最早開發(fā)的經(jīng)典方法[6]相對簡單，無需多次提取和純化等步驟，但是現(xiàn)有技術中代謝物的水解與富集過程依然需要離線操作，在分離分析檢測之前仍需要進行真空濃縮、重溶等過程，多步樣品處理容易造成樣品損失污染，并且操作繁瑣、耗時較長，嚴重阻礙了煙氣代謝物的高靈敏和高通量分析。另外，總可天寧與總NNAL濃度動態(tài)范圍寬，在體液內(nèi)含量差異達3-4個數(shù)量級，也難以實現(xiàn)同時分析
[7]。因此，為了解決現(xiàn)有分析技術檢測體液中總可天寧及總NNAL等代謝標記物方面存在的問題，發(fā)展集成化在線樣品預處理技術有望為可天寧、NNAL等多種煙氣代謝標記物高靈敏、高通量分析研究提供重要技術支撐。
[0005]固定化酶反應器(MER)使酶在較長時間內(nèi)可以反復使用，不僅酶的穩(wěn)定性提高，而且易與底物和產(chǎn)物分開，水解效率增加，水解時間顯著縮短。袁等[8]通過制備有機-硅膠雜化整體柱基質(zhì)的胰蛋白酶反應器，將蛋白質(zhì)水解時間縮短到2.5分鐘，大大提高了水解效率，并將其成功與陽離子交換-反相二維液相色譜質(zhì)譜在線聯(lián)用，為實現(xiàn)大分子的高通量分離分析提供了必要條件?；诠滔噍腿?SPE)的樣品富集方法與液液萃取技術相比，具有回收率高、富集倍數(shù)高，重現(xiàn)性好的特點，最重要的是容易實現(xiàn)在線、自動化和樣品的批量處理。多種固相萃取技術，如混合型陽離子交換(MCX)、C18、分子印跡(MIP)等技術的發(fā)展，為實現(xiàn)煙氣代謝物的高效富集與高靈敏分析奠定了基礎。將固相萃取技術與液相色譜質(zhì)譜在線聯(lián)用的分析策略能夠顯著減少分析時間，提高分析通量[9-10]。但是將固定化酶反應器用于目標化合物在線高效水解，并集多種SPE富集凈化一體，與液相色譜-質(zhì)譜分析結合的集成化技術用于體液等復雜基質(zhì)樣品中煙氣代謝物的高靈敏、高通量分析尚未見報道。
[0006]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的正是基于上述現(xiàn)有技術狀況，針對體液內(nèi)煙氣代謝物分析檢測過程中，離線操作效率低、分析通量低和靈敏度低等方面的問題，提供一種集成化在線樣品預處理裝置及其應用，構建了集酶水解-固相萃取富集-液相色譜分離-質(zhì)譜鑒定分析的一體化樣品預處理分析平臺。
[0008]本發(fā)明的目的是通過以下技術方案來實現(xiàn)的:
一種集成化在線樣品預處理裝置，即將酶反應器、固相萃取柱與液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)在線聯(lián)用，構建集酶水解-固相萃取富集-液相色譜-質(zhì)譜分離分析的一體化樣品預處理分析平臺系統(tǒng)，具體包括一級切換閥，二級切換閥，連接在兩級切換閥之間的酶反應器，連接在一級切換閥上的定量環(huán)和固相萃取柱I，連接在二級切換閥上的固相萃取柱Π和分離柱及質(zhì)譜儀；
所述一級切換閥為十通閥，定量環(huán)連接在一級切換閥的B、E位之間、并可切換連接在J、G位，固相萃取柱I連接在一級切換閥的C、G位之間，一級切換閥的D位和I位分別連接有輸液栗，一級切換閥的A位、F位分別為進樣口和廢液出口 ；
所述二級切換閥為六通閥，固相萃取柱Π連接在二級切換閥的B、E位之間，質(zhì)譜儀通過分離柱連接在二級切換閥的C位，二級切換閥的D位連接有輸液栗，F(xiàn)位為廢液出口 ；
所述酶反應器的進、出口分別連接在一級切換閥的H位和二級切換閥的B位。
[0009]在本發(fā)明中，所述酶反應器是以微米或納米顆?；|(zhì)為載體，包括聚合物顆粒、碳顆粒、硅氧化物顆?；驈秃喜牧项w粒基質(zhì);或者是以整體材料基質(zhì)為載體，包括聚合物整體材料、硅基質(zhì)整體材料、有機無機雜化基質(zhì)整體材料;或者是納米顆粒摻雜的整體材料，包括金納米顆粒摻雜或其他無機納米顆粒摻雜;酶是蛋白酶、脂肪酶、葡萄糖醛酸酶、萄糖氧化酶中的一種或多種;酶以物理吸附、包埋或共價鍵合方式中的任意一種或兩種修飾在基質(zhì)材料表面。[00?0]所述定量環(huán)規(guī)格為2 yL-5 mL范圍中的任意一種。所述栗的流量為I nL/min.-5mL/min。
[0011]連接在一、二級切換閥上的固相萃取柱均可以是陽離子交換柱、陰離子交換柱、混合型離子交換柱、正相萃取柱、反相萃取柱、分子印跡柱中任意一種。
[0012]所述分離柱可為反相色譜柱、正相色譜柱、疏水色譜柱、親和色譜柱、固定化金屬親和色譜柱或體積排阻色譜柱。
[0013]將本發(fā)明的集成化在線樣品預處理裝置用于分析檢測煙氣代謝物，依次包括以下五大步驟:(I)通過固相萃取柱(4)對樣品進行初步富集與凈化；(2)通過酶反應器(5)實現(xiàn)目標代謝物的高效水解；(3)通過串聯(lián)固相萃取柱(7)，對水解后目標物進行富集凈化；(4)采用分離柱9對目標分析物進行分離;(5)質(zhì)譜儀10分析檢測目標代謝物碎片離子。
[0014]分析檢測過程包括五個管路連接模式:①進樣模式(參見圖2):—級切換閥(3)的AB位相通，將定量環(huán)連接在一級切換閥(3)的B、E位，完成進樣過程;②在線固相萃取(參見圖3):—級切換閥(3)的B、C位相通，由輸液栗(I)輸送的流動相將定量環(huán)(2)中的樣品以一定流速通過固相萃取柱1(4)完成樣品固相萃取過程;③再進樣過程(參見圖4): 一級切換閥
(3)的BC位相通，定量環(huán)(2)連接一級切換閥(3)的J、G位，將②中收集的樣品進到定量環(huán)(2)中完成再次進樣;④在線樣品水解與固相萃取(參見圖5):切換一級切換閥位置，使I位與J位相通，切換二級切換閥位置，使A、B位相通，酶反應器(5)與固相萃取柱Π (7)串聯(lián)連接，經(jīng)輸液栗(11)流出的緩沖液將定量環(huán)中的樣品推送到酶反應器(5)中，樣品發(fā)生酶水解，并通過固相萃取柱Π (7)進行捕集;⑤色譜分離與質(zhì)譜鑒定(參見圖6):切換二級切換閥(6)，使D、E位相通，固相萃取柱Π (7)與分離柱(9)串聯(lián)連接，輸液栗(8)流出的流動相依次經(jīng)固相萃取柱Π (7)與分離柱(9)對樣品進行分離，再經(jīng)質(zhì)譜儀(10)完成檢測。
[0015]所述進樣方式可以為手動進樣，也可以是自動進樣器進樣。
[0016]本發(fā)明相比現(xiàn)有技術具有以下優(yōu)點:集酶水解-固相萃取富集-液相色譜-質(zhì)譜分離分析為一體，可實現(xiàn)目標化合物在線高效水解，并集多種SPE富集凈化一體，富集倍數(shù)高，重現(xiàn)性好，為實現(xiàn)復雜基質(zhì)樣品中煙氣代謝物的高靈敏、高通量分析研究提供了重要的技術支撐。
【附圖說明】
[0017]圖1為本發(fā)明專用的裝置示意圖。
[0018]圖中:1.輸液栗、2.定量環(huán)、3.一級切換閥、4.固相萃取柱1、5.酶反應器、6.二級切換閥、7.固相萃取柱Π、8.輸液栗、9.分離柱、10.質(zhì)譜儀、11.輸液栗。A-J是切換閥進出口位置。
[0019]圖2為樣品進樣狀態(tài)示意圖。
[0020]圖3為在線固相萃取狀態(tài)示意圖。
[0021 ]圖4是二次進樣模式狀態(tài)示意圖。
[0022]圖5是在線樣品水解與固相萃取過程狀態(tài)示意圖。
[0023]圖6是樣品分離狀態(tài)示意圖。
[0024]圖7是尿液或血液中煙氣代謝物預處理過程示意圖。其中a狀態(tài)為進樣狀態(tài);b表示樣品在線固相萃取狀態(tài);c表示在線固相萃取后的樣品二次進樣狀態(tài);d表示樣品在線水解與固相萃取狀態(tài);e為樣品分離分析鑒定狀態(tài)。
【具體實施方式】
[0025]本發(fā)明以下結合附圖對本發(fā)明的集成化在線樣品預處理裝置的構成及分析檢測過程做進一步描述:
參見圖1-6:—種集成化在線樣品預處理裝置，具體包括輸液栗1、定量環(huán)2、一級切換閥
3、固相萃取柱14、酶反應器5、二級切換閥6、固相萃取柱Π 7、輸液栗8、分離柱9、質(zhì)譜儀10、輸液栗11組成。定量環(huán)2通過一級切換閥3的B、E進出口分別連接。固相萃取柱14通過一級切換閥3的C、G進出口連接，固相萃取柱Π 7連接二級切換閥6的B、E位。酶反應器通過一級切換閥H位與二級切換閥A位連接。
[0026]具體分析檢測過程依次分為以下五大步驟:(I)通過固相萃取柱14對樣品進行初步富集與凈化;(2)通過酶反應器5實現(xiàn)目標代謝物的高效水解;(3)通過串聯(lián)固相萃取柱Π7，對水解后目標物進行富集凈化；(4)采用分離柱9對目標分析物進行分離；(5)質(zhì)譜10分析檢測目標代謝物碎片離子。
[0027]整個預處理系統(tǒng)共有5個管路連接模式。①進樣模式(圖2):—級切換閥3的AB位相通，將定量環(huán)2連接在一級切換閥3的B、E位，完成進樣過程。②在線固相萃取(圖3):—級切換閥3的B、C位相通，由輸液栗I輸送的流動相將定量環(huán)2中的樣品以一定流速通過固相萃取柱14完成樣品固相萃取過程。③再進樣過程(圖4): 一級切換閥3的BC位相通，定量環(huán)2連接一級切換閥的J、G位，將②中收集的樣品進到定量環(huán)2中完成再次進樣。④在線樣品水解與固相萃取(圖5):切換一級切換閥位置，使I位與J位相通，切換二級切換閥位置，使A、B位相通，酶反應器5與固相萃取柱Π 7串聯(lián)連接，經(jīng)輸液栗11流出的緩沖液將定量環(huán)2中的樣品推送到酶反應器5中，樣品發(fā)生酶水解，并通過固相萃取柱Π7進行捕集;⑤色譜分離與質(zhì)譜鑒定(圖6):切換二級切換閥6，使D、E位相通，固相萃取柱Π 7與分離柱9串聯(lián)連接，輸液栗8流出的流動相依次經(jīng)固相萃取柱Π7與分離柱9對樣品進行分離，再經(jīng)質(zhì)譜儀10完成檢測。
[0028]本發(fā)明以下結合應用實施例進行說明實施例1
樣品采用吸煙人群尿液樣品。
[0029]參見圖7:將定量環(huán)2連接在一級切換閥3的B，E位置，輸液栗I為二元梯度栗，與一級切換閥3的D位連接，固相萃取柱14為混合型陰陽離子交換柱(MCX)，連接一級切換閥3的C，G位。樣品經(jīng)自動進樣器或手動進樣注入定量環(huán)2(圖7a)，切換一級切換閥，使B，C位相通，定量環(huán)中樣品經(jīng)輸液栗I流動相推送進入MCX萃取柱進行在線固相萃取，流速為5yL/min，經(jīng)洗脫后收集洗脫液(圖7b)。
[0030]定量環(huán)2連接在一級切換閥3的J，G位置。輸液栗11為二元梯度栗，與一級切換閥3的I位連接。酶反應器5為有機聚合物基質(zhì)酶反應器(尿液中蛋白質(zhì)含量較少，蛋白質(zhì)在基質(zhì)材料上吸附相對較少，因此使用機械強度高的有機聚合物基質(zhì)酶反應器)，連接一級切換閥3的H位與二級切換閥6的A位。固相萃取柱Π 7為C18固相萃取柱，連接在二級切換閥6的B，E位。將一級切換閥3的A，J位相通，上述洗脫液稀釋或凍干重溶后經(jīng)自動進樣器或手動進樣注入定量環(huán)2(圖7c)，再切換一級切換閥3，使J，I位相通，切換二級切換閥使A，B位相通，定量環(huán)2中樣品經(jīng)輸液栗11中流動相注入酶反應器5進行在線酶水解，流速為lyL/min，并通過串聯(lián)的Cl8固相萃取柱Π 7進彳丁在線捕集(圖7d)。
[0031]輸液栗8為二元梯度栗，與二級切換閥6的D位連接。分離柱9為C18分離柱，連接在二級切換閥6的C位。切換閥位置，二級切換閥D，E位相通，使C18固相萃取柱Π 7與C18分離柱9串聯(lián)連接。輸液栗8流出的流動相依次經(jīng)固相萃取柱Π 7與分離柱9對樣品進行分離，再經(jīng)質(zhì)譜儀10完成檢測(圖7e)。
[0032]實施例2
樣品采用吸煙人群血液樣品。
[0033]參見圖7:將定量環(huán)2連接在一級切換閥3的B，E位置，輸液栗I為二元梯度栗，與一級切換閥3的D位連接，固相萃取柱14為混合型陰陽離子交換柱(MCX)，連接一級切換閥3的C，G位。樣品經(jīng)自動進樣器或手動進樣注入定量環(huán)2(圖7a)，切換一級切換閥3，使B，C位相通，定量環(huán)中樣品經(jīng)輸液栗I流動相推送進入MCX萃取柱進行在線固相萃取，流速為5μ!7min，經(jīng)洗脫后收集洗脫液(圖7b)。
[0034]定量環(huán)2連接在一級切換閥3的J，G位置。輸液栗11為二元梯度栗，與一級切換閥3的I位連接。酶反應器5為有機硅雜化基質(zhì)酶反應器(為了盡量減少血液中蛋白質(zhì)在基質(zhì)材料上的吸附)，連接一級切換閥3的H位與二級切換閥6的A位。固相萃取柱Π 7為親水固相萃取柱，連接在二級切換閥6的B，E位。將一級切換閥3的A，J位相通，上述洗脫液稀釋或凍干重溶后經(jīng)自動進樣器或手動進樣注入定量環(huán)2(圖7c)，再切換一級切換閥3，使J，I位相通，切換二級切換閥使A，B位相通，定量環(huán)2中樣品經(jīng)輸液栗11中流動相注入酶反應器5進行在線酶水解，流速為lyL/min，并通過串聯(lián)的親水固相萃取柱Π7進行在線捕集(圖7d)。
[0035]輸液栗8為二元梯度栗，與二級切換閥6的D位連接。分離柱9為親水色譜分離柱，連接在切換閥的C位。切換閥位置，二級切換閥D，E位相通，使親水固相萃取柱Π 7與親水色譜分離柱9串聯(lián)連接。輸液栗8流出的流動相依次經(jīng)固相萃取柱Π 7與分離柱9對樣品進行分離，再經(jīng)質(zhì)譜儀10完成檢測(圖7e)。
[0036]
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10.Quantificat1n of endogenous brassinosteroids in sub-gram planttissues by in-line matrix solid-phase dispers1n — tandem sol id phaseextract1n coupled with high performance liquid chromatography-tandem massspectrometry, J Ch romatogr A.2014， 1359， 44-510
【主權項】
1.一種集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于:即將酶反應器(5)、固相萃取柱、與液相色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)在線聯(lián)用，構建集酶水解-固相萃取富集-液相色譜-質(zhì)譜分離分析的一體化樣品預處理分析平臺系統(tǒng)，具體包括一級切換閥(3)，二級切換閥(6)，連接在兩級切換閥之間的酶反應器(5)，連接在一級切換閥(3)上的定量環(huán)(2)和固相萃取柱1(4)，連接在二級切換閥(6)上的固相萃取柱Π (7)和分離柱(9)及質(zhì)譜儀(10); 所述一級切換閥(3)為十通閥，定量環(huán)(2)連接在一級切換閥的B、E位之間、并可切換連接在J、G位，固相萃取柱I (4)連接在一級切換閥的C、G位之間，一級切換閥(3)的D位和I位分別連接有輸液栗(1、11)，一級切換閥的A位、F位分別為進樣口和廢液出口 ； 所述二級切換閥(6)為六通閥，固相萃取柱Π (7)連接在二級切換閥的B、E位之間，質(zhì)譜儀(10)通過分離柱(9)連接在二級切換閥(6)的C位，二級切換閥(6)的D位連接有輸液栗(8)，F(xiàn)位為廢液出口； 所述酶反應器(5)的進、出口分別連接在一級切換閥(3)的H位和二級切換閥(6)的B位。2.根據(jù)權利要求1所述的集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于:所述酶反應器(5)是以微米或納米顆?；|(zhì)為載體，包括聚合物顆粒、碳顆粒、硅氧化物顆?；驈秃喜牧项w粒基質(zhì)；或者是以整體材料基質(zhì)為載體，包括聚合物整體材料、硅基質(zhì)整體材料、有機無機雜化基質(zhì)整體材料;或者是納米顆粒摻雜的整體材料，包括金納米顆粒摻雜或其他無機納米顆粒摻雜;酶是蛋白酶、脂肪酶、葡萄糖醛酸酶、萄糖氧化酶中的一種或多種;酶以物理吸附、包埋或共價鍵合方式中的任意一種或兩種修飾在基質(zhì)材料表面。3.根據(jù)權利要求1所述的集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于:所述定量環(huán)(2)規(guī)格為2 yL-5 mL范圍中的任意一種。4.根據(jù)權利要求1所述的集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于:所述固相萃取柱I(4)、固相萃取柱Π (7)均可為陽離子交換柱、陰離子交換柱、混合型離子交換柱、正相萃取柱、反相萃取柱、分子印跡柱中任意一種。5.根據(jù)權利要求1所述的集成化在線樣品預處理裝置，其特征在于:所述分離柱(9)為反相色譜柱、正相色譜柱、疏水色譜柱、親和色譜柱、固定化金屬親和色譜柱或體積排阻色譜柱。6.—種集成化在線樣品預處理裝置在煙氣代謝物分析檢測中的應用，其特征在于，分析檢測過程依次包括以下步驟:(I)通過固相萃取柱1(4)對樣品進行初步富集與凈化；(2)通過酶反應器(5)實現(xiàn)目標代謝物的高效水解;(3)通過串聯(lián)固相萃取柱Π (7)，對水解后目標物進行富集凈化;(4)采用分離柱9對目標分析物進行分離；(5)質(zhì)譜儀10分析檢測目標代謝物碎片離子。7.根據(jù)權利要求6所述的集成化在線樣品預處理裝置在煙氣代謝物分析檢測中的應用，其特征在于:分析檢測過程包括五個管路連接模式:①進樣模式:一級切換閥(3)的AB位相通，將定量環(huán)(2)連接在一級切換閥(3)的B、E位，完成進樣過程;②在線固相萃取:一級切換閥(3)的B、C位相通，由輸液栗(I)輸送的流動相將定量環(huán)(2)中的樣品以一定流速通過固相萃取柱1(4)完成樣品固相萃取過程;③再進樣過程:一級切換閥(3)的BC位相通，定量環(huán)(2)連接一級切換閥(3)的J、G位，將②中收集的樣品進到定量環(huán)(2)中完成再次進樣;④在線樣品水解與固相萃取:切換一級切換閥位置，使I位與J位相通，切換二級切換閥位置，使A、B位相通，酶反應器(5)與固相萃取柱Π (7)串聯(lián)連接，經(jīng)輸液栗(11)流出的緩沖液將定量環(huán)中的樣品推送到酶反應器(5)中，樣品發(fā)生酶水解，并通過固相萃取柱Π (7)進行捕集；⑤色譜分離與質(zhì)譜鑒定:切換二級切換閥(6)，使D、E位相通，固相萃取柱Π (7)與分離柱(9)串聯(lián)連接，輸液栗8流出的流動相依次經(jīng)固相萃取柱Π (7)與分離柱(9)對樣品進行分離，再經(jīng)質(zhì)譜儀(10)完成檢測。8.根據(jù)權利要求7所述的集成化在線樣品預處理裝置在煙氣代謝物分析檢測中的應用，其特征在于:所述進樣方式可以為手動進樣，也可以是自動進樣器進樣。
【文檔編號】G01N30/08GK106053629SQ201610324458
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年5月17日
【發(fā)明人】鄧楠, 李斌, 朱文魁, 魯端峰, 張明建, 王樂, 張柯, 王兵
【申請人】中國煙草總公司鄭州煙草研究院