一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，包括：對哌馬色林進行高效液相色譜檢測，所述高效液相色譜檢測過程中的流動相包括水相和有機相，所述水相為酸的水溶液，所述有機相為酸的有機溶液，所述水相中的酸和有機相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸；所述有機溶液中的溶劑包括甲醇或乙腈；所述有機雜質(zhì)為式I所示結(jié)構(gòu)的化合物。本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，對哌馬色林進行高效液相色譜檢測的過程中采用特定物質(zhì)的水相和有機相組成流動相，這種流動相能夠?qū)τ袡C雜質(zhì)進行較好的分離，使本發(fā)明提供的方法能夠準確檢測出哌馬色林中的有機雜質(zhì)。此外，本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性好、專屬性強。
【專利說明】
一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及哌馬色林技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前全世界帕金森氏病患者約七百萬到一千萬，中國就有260萬，居世界第一，每 年還要增加10萬新發(fā)病患者。50%以上的帕金森氏病患者曾有過精神癥狀(PDP)。這些精神 癥狀主要表現(xiàn)為幻覺和妄想，這給帕金森氏病患者的治療和護理帶來更大挑戰(zhàn)。阿卡迪亞 (Acadia Pharmaceuticals)是位于美國圣地亞哥的一家專注于為神經(jīng)系統(tǒng)及相關(guān)的中樞 神經(jīng)系統(tǒng)紊亂疾病研究新療法的生物制藥公司，哌馬色林/匹莫范色林（通用名： Pimavanserin，商品名：Nuplazid)是阿卡迪亞制藥公司自主研發(fā)的專利藥，用于治療帕金 森氏病精神癥狀，為非多巴胺神經(jīng)遞質(zhì)類似物，可以選擇性阻斷5羥色胺2A受體而不影響多 巴胺的作用。哌馬色林/匹莫范色林(Pimavanserin，Nuplazid)于2014年9月3日獲美國食品 藥品監(jiān)督管理局(FDA)授予突破性療法認證。突破性療法認證是由H)A創(chuàng)建的，旨在加速開 發(fā)及審查治療嚴重的或威脅生命的疾病的新藥。阿卡迪亞(Acadia)制藥公司將于2014年底 前向FDA遞交哌馬色林/匹莫范色林(Pimavanserin)的新藥申請。
[0003] 藥物中的雜質(zhì)指任何影響藥物純度的物質(zhì)，包括有機雜質(zhì)、無機雜質(zhì)和殘留溶劑。 無機雜質(zhì)和殘留溶劑的研究及檢測方法相對比較成熟，方法的通用性比較強，控制標準也 比較明確，從技術(shù)審評實踐來看，無機雜質(zhì)和殘留溶劑在申報注冊藥物中已得到了較好的 研究與控制。與無機雜質(zhì)及殘留溶劑相比，有機雜質(zhì)的研究與控制要復(fù)雜得多，在雜質(zhì)的分 離鑒定、雜質(zhì)來源分析、雜質(zhì)安全性研究、雜質(zhì)限度確定等方面，都需要結(jié)合藥物的結(jié)構(gòu)特 點、制備工藝、貯藏穩(wěn)定性、臨床應(yīng)用特點等進行大量的深入細致的研究。
[0004] 哌馬餌林藥物牛產(chǎn)忖趕中
會引入縣有式T所示結(jié)構(gòu)的有機雜質(zhì)：
[0006] 這種有機雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)和哌馬色林的結(jié)構(gòu)極為相近，會嚴重影響到藥品的純度，是 決定藥品合格與否的關(guān)鍵因素之一。因此，準確檢測哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量對于控制 藥物產(chǎn)品質(zhì)量具有重要的意義。
[0007] 目前，還未見對哌馬色林中有機雜質(zhì)進行檢測的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，本發(fā)明 提供的方法能夠準確檢測出哌馬色林中的有機雜質(zhì)。
[0009] 本發(fā)明提供了一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，包括：
[0010] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測，得到哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量;所述高效 液相色譜檢測過程中的流動相包括水相和有機相，所述水相為酸的水溶液，所述有機相為 酸的有機溶液，所述水相中的酸和有機相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有機溶液 中的溶劑包括甲醇或乙腈;所述有機雜質(zhì)為式I所示結(jié)構(gòu)的化合物：
[0012]優(yōu)選的，酸的水溶液的質(zhì)量濃度為0.05%~0.15%。
[0013]優(yōu)選的，所述酸的有機溶液的質(zhì)量濃度為0.05%~0.15%。
[0014] 優(yōu)選的，所述水相和有機相的質(zhì)量比為(50~60): (50~40)。
[0015] 優(yōu)選的，所述高效液相檢測過程中流動相的流速為0.5mL/min~1.5mL/min。
[0016]優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測過程中采用梯度洗脫的方式使流動相通過色譜 柱，所述梯度洗脫的過程為：
[0017] 在〇~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由80%~90%降低到45%~55%，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由10%~20%提高到45%~55% ;
[0018] 在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由45%~55%降低到10%~0,有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由45%~55%提高到90%~100% ;
[0019] 在35min~38min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持10 %~0，有機相在流動相中的 質(zhì)量含量保持90 %~100 % ;
[0020] 在38min~40min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由10 %~0提高到80 %~90 %，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由90%~100%降低到10%~20% ;
[0021] 在4〇111111~45111111，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持80%~90%，有機相在流動相 中的質(zhì)量含量保持10%~20%。
[0022] 優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測過程中使用的色譜柱為C8色譜柱或C18色譜柱。 [0023]優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為25°C~45°C。
[0024]優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測器為紫外檢測器。
[0025]優(yōu)選的，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測波長為200nm~240nm〇 [0026]本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，對哌馬色林進行高效液相色譜檢 測的過程中采用特定物質(zhì)的水相和有機相組成流動相，這種流動相能夠?qū)τ袡C雜質(zhì)進行較 好的分離，使本發(fā)明提供的方法能夠準確檢測出哌馬色林中的有機雜質(zhì)。此外，本發(fā)明提供 的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性好、專屬性強。
【附圖說明】
[0027] 為了更清楚地說明本發(fā)明實施例或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對實施例或現(xiàn) 有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本 發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù) 提供的附圖獲得其他的附圖。
[0028] 圖1為本發(fā)明實施例1中哌馬色林的制備工藝流程圖；
[0029] 圖2為本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林的核磁共振譜圖；
[0030] 圖3為本發(fā)明實施例2檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖；
[0031 ]圖4為本發(fā)明實施例3檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖；
[0032] 圖5為本發(fā)明實施例4檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖；
[0033] 圖6為本發(fā)明比較例1檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖。
【具體實施方式】
[0034] 下面將對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施 例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范 圍。
[0035] 本發(fā)明提供了一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，包括：
[0036] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測，得到哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量;所述高效 液相色譜檢測過程中的流動相包括水相和有機相，所述水相為酸的水溶液，所述有機相為 酸的有機溶液，所述水相中的酸和有機相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有機溶液 中的溶劑包括甲醇或乙腈;所述有機雜質(zhì)為式I所示結(jié)構(gòu)的化合物：
[0038] 本發(fā)明對哌馬色林進行高效液相色譜檢測。本發(fā)明對所述哌馬色林的來源沒有特 殊的限制，可由市場購買獲得，也可采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備得到。在本發(fā)明的 實施例中，所述哌馬色林的制備方法為：
[0039] 將式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化合物進行反應(yīng)，得到哌馬色林，所示 哌馬色林具有式II所示的結(jié)構(gòu)：

[0042] 在本發(fā)明的實施例中，式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng)的溫度 為20°C~30°C。在本發(fā)明的實施例中，式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng) 的時間為1小時~2小時。在本發(fā)明的實施例中，式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化 合物的摩爾比為1:1。本發(fā)明對式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化合物的來源沒有 特殊的限制，可由市場購買獲得，也可按照本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的方法制備得到。在本發(fā)明 的實施例中，所述式1所示結(jié)構(gòu)的化合物的制備方法為：
[0043] 將式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化合物進行反應(yīng)，得到式1所示結(jié)構(gòu)的 化合物：
[0045] 在本發(fā)明的實施例中，式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng)的溫度 為10°C~35°C。在本發(fā)明的實施例中，式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化合物反應(yīng) 的時間為1小時~2小時。在本發(fā)明的實施例中，式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化 合物的質(zhì)量比為1:1.3。本發(fā)明對式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化合物的來源沒 有特殊的限制，可由市場購買獲得。
[0046] 在本發(fā)明中，所述高效液相色譜檢測以液體為流動相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有 不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖液等流動相栗入裝有固定相的色譜柱， 在柱內(nèi)各成分被分離后，進入檢測器進行檢測，從而實現(xiàn)對試樣的分析。
[0047] 在本發(fā)明中，所述高效液相色譜檢測過程中的流動相包括水相和有機相。在本發(fā) 明中，所述水相為酸的水溶液，所述水相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸。在本發(fā)明的實 施例中，所述水相中的酸包括甲酸或三氟乙酸;在另外的實施例中，所述水相中的酸包括三 氟乙酸。
[0048]在本發(fā)明的實施例中，所述酸的水溶液的質(zhì)量濃度為0.05 %~0.15 % ;在其他的 實施例中，所述酸的水溶液的質(zhì)量濃度為0.08%~0.12% ;在另外的實施例中，所述酸的水 溶液的質(zhì)量濃度為〇. 1%。在本發(fā)明的實施例中，所述水相為質(zhì)量濃度為〇. 1 %的三氟乙酸 水溶液。
[0049]在本發(fā)明中，所述有機相為酸的有機溶液，所述有機相中的酸包括甲酸、三氟乙酸 或磷酸，所述有機溶液中的溶劑包括甲醇或乙腈。在本發(fā)明中，所述有機相中的酸和水相中 的酸需采用同一種酸。在本發(fā)明的實施例中，所述有機溶液中的溶劑包括乙腈。在本發(fā)明的 實施例中，所述酸的有機溶液的質(zhì)量濃度為0.05%~0.15% ;在其他的實施例中，所述酸的 有機溶液的質(zhì)量濃度為0.08%~0.12% ;在另外的實施例中，所述酸的有機溶液的質(zhì)量濃 度為0.1 %。在本發(fā)明的實施例中，所述有機相為質(zhì)量濃度為0.1 %的三氟乙酸的乙腈溶液。 [0050]在本發(fā)明的實施例中，所述水相和有機相的質(zhì)量比為(50~60): (50~40);在其他 的實施例中，所述水相和有機相的質(zhì)量比為(52~58): (48~42);在其他的實施例中，所述 水相和有機相的質(zhì)量比為(54~56): (46~44);在另外的實施例中，所述水相和有機相的質(zhì) 量比為 55.5:45.5。
[00511在本發(fā)明的實施例中，所述高效液相檢測過程中流動相的流速為0.5 mL /m i n~ 1.5mL/mi n;在其他的實施例中，所述高效液相檢測過程中流動相的流速為0.8mL/mi n~ 1.2mL/min;在另外的實施例中，所述高效液相檢測過程中流動相的流速為lmL/min。
[0052] 在本發(fā)明的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中可采用梯度洗脫的方式使流 動相通過色譜柱，以提高柱效、改善檢測器的靈敏度。在本發(fā)明的實施例中，所述梯度洗脫 的過程為：
[0053] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由80%~90%降低到45%~55%，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由10 %~20 %提高到45 %~55 % ;在25min~35min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由45%~55 %降低到10 %~0,有機相在流動相中的質(zhì)量含量由45%~ 55 %提高到90 %~100% ;在35min~38min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持10 %~0，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量保持90%~100%;在38111；[11~401]1；[11，水相在流動相中的質(zhì)量含量 由10%~0提高到80%~90%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由90%~100%降低到10%~ 20 % ;在40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持80 %~90 %，有機相在流動相中的 質(zhì)量含量保持10%~20%。
[0054]在其他的實施例中，所述梯度洗脫的過程為：
[0055] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由82%~88%降低到47%~53%，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由12%~18%提高到47%~53% ;在25min~35min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由47%~53%降低到8%~2%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由47%~ 53 %提高到92%~98% ;在35min~38min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持8 %~2%，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量保持92 %~98 % ;在38min~40min，水相在流動相中的質(zhì)量含量 由8%~2%提高到82%~88%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由92%~98%降低到12%~ 18 % ;在40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持82 %~88 %，有機相在流動相中的 質(zhì)量含量保持12%~18%。
[0056] 在其他的實施例中，所述梯度洗脫的過程為：
[0057] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由84%~86%降低到49%~51 %，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量由14%~16%提高到49%~51 %;在25min~35min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由49%~51 %降低到4%~6%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由49 %~ 51 %提高到94%~96% ;在35min~38min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持4%~6%，有機 相在流動相中的質(zhì)量含量保持94%~96 % ;在38min~40min，水相在流動相中的質(zhì)量含量 由4%~6%提高到84%~86%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由94%~96%降低到16%~ 14% ;在40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持84%~86 %，有機相在流動相中的 質(zhì)量含量保持14%~16%。
[0058]在另外的實施例中，所述梯度洗脫的過程為：
[0059] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由85 %降低到50 %，有機相在流動相中 的質(zhì)量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由50%降低 到0，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流動相中 的質(zhì)量含量保持0，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由〇提高到85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持 15%〇
[0060] 在本發(fā)明的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中使用的色譜柱為C8色譜柱或 C18色譜柱;在其他的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中使用的色譜柱為C18色譜柱。
[0061] 在本發(fā)明的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為25°C~45 °C;在其他的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為30°C~40°C;在另外 的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為32°C~38°C;在另外的實施例 中，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為34°C~36°C;在另外的實施例中，所述高 效液相色譜檢測過程中的色譜柱柱溫為35°C。
[0062] 在本發(fā)明的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測器為紫外檢測器。在 本發(fā)明的實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測波長為200nm~240nm;在其他的 實施例中，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測波長為210nm~230nm;在另外的實施例中， 所述高效液相色譜檢測過程中的檢測波長為215mm~225nm;在另外的實施例中，所述高效 液相色譜檢測過程中的檢測波長為218nm~220nm〇
[0063] 在本發(fā)明的實施例中，所述哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法為：
[0064] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測，得到哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量;所述高效 液相色譜檢測過程中的流動相中水相為質(zhì)量濃度為0.1 %的三氟乙酸水溶液，有機相為質(zhì) 量濃度為〇. 1 %的三氟乙酸的乙腈溶液，色譜柱為C18色譜柱，色譜柱溫度為35°C，流動相流 速為lmL/min，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為218nm，所述高效液相色譜檢測過程中流動 相采用梯度洗脫的方式通過色譜柱，所述梯度洗脫的過程為：
[0065] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由85 %降低到50 %，有機相在流動相中 的質(zhì)量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由50%降低 到0，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流動相中 的質(zhì)量含量保持〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由〇提高到85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持 15%〇
[0066]按照2015版藥典通則0512中的規(guī)定的方法，檢測本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜 質(zhì)的檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，記錄多次進樣后測得的主峰保留時間、主峰面積、有機雜質(zhì)峰 保留時間、有機雜質(zhì)峰面積以及有機雜質(zhì)的分離度;檢測結(jié)果表明，本發(fā)明提供的哌馬色林 中有機雜質(zhì)的檢測方法峰形好、穩(wěn)定、重復(fù)性高、專屬性強。
[0067]按照2015版藥典通則9101中規(guī)定的方法，對本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的 檢測方法進行加標回收率實驗，檢測結(jié)果表明，本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測 方法檢測結(jié)果準確，能夠準確的測定哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量。
[0068]本發(fā)明以下實施例所用到的原料均為市售商品。
[0069] 實施例1
[0070]按照圖1所示的工藝流程制備哌馬色林，圖1為本發(fā)明實施例1中哌馬色林的制備 工藝流程圖；
[0071 ]將摩爾比為1:1.3的式3所示結(jié)構(gòu)的化合物和式4所示結(jié)構(gòu)的化合物在25°C下進行 1.5小時的反應(yīng)，得到式1所示結(jié)構(gòu)的化合物；
[0072] 將摩爾比為1:1的式1所示結(jié)構(gòu)的化合物和式2所示結(jié)構(gòu)的化合物在25°C下進行1 小時的反應(yīng)，得到哌馬色林。
[0073] 對本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林進行核磁共振檢測，檢測結(jié)果如圖2所示， 圖2為本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林的核磁共振譜圖，由圖2可知，本發(fā)明實施例1制 備得到的哌馬色林具有式II所示的結(jié)構(gòu)。
[0074] 實施例2
[0075] 對本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林進行高效液相色譜檢測，所述高效液相色 譜檢測過程中的流動相中水相為質(zhì)量濃度為0.1 %的三氟乙酸水溶液，有機相為質(zhì)量濃度 為0.1 %的三氟乙酸的乙腈溶液，色譜柱為C18色譜柱，色譜柱溫度為35°C，流動相流速為 lmL/min，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為218nm，所述高效液相色譜檢測過程中流動相采 用梯度洗脫的方式通過色譜柱，所述梯度洗脫的過程為：
[0076] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由85 %降低到50 %，有機相在流動相中 的質(zhì)量含量由15%提高到50% ;在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由50%降低 到0，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由50 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流動相中 的質(zhì)量含量保持〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由〇提高到85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由100 %降低到15 % ;在 40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持85 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持 15%〇
[0077] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測后得到圖3所示的液相色譜圖，圖3為本發(fā)明實 施例2檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖（圖3表中的內(nèi)容為色譜圖對應(yīng)的數(shù)據(jù)），由圖 3可知，本發(fā)明實施例2提供的方法能夠檢測出哌馬色林中具有式I結(jié)構(gòu)的有機雜質(zhì)，雜質(zhì)峰 與哌馬色林峰能夠達到基線分離，峰形較好。
[0078] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測本發(fā)明實施例2提供的哌馬色林中有機雜質(zhì) 的檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，檢測結(jié)果如表1所示，表1為本發(fā)明實施例2提供的雜質(zhì)檢測方法 的系統(tǒng)適應(yīng)性。
[0079] 表1本發(fā)明實施例2提供的雜質(zhì)檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性
[0080]
[0081] 由表1可知，本發(fā)明實施例2提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性 高、專屬性強。
[0082] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，對本發(fā)明實施例2提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的 檢測方法進行加標回收率實驗，實驗結(jié)果如表2所示，表2為本發(fā)明實施例2提供的雜質(zhì)檢測 方法的加標回收率。
[0083] 表2本發(fā)明實施例2提供的雜質(zhì)檢測方法的加標回收率
[0085] 注:表4中L、M、H表示加入有機雜質(zhì)的量從低到高，1、2、3表示加入不同量的雜質(zhì)平 行做3次。
[0086] 由表2可知，本發(fā)明實施例2提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法檢測結(jié)果準 確。
[0087] 實施例3
[0088] 對本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林進行高效液相色譜檢測，所述高效液相色 譜檢測過程中的流動相中水相為質(zhì)量濃度為0.1 %的甲酸水溶液，有機相為質(zhì)量濃度為 0.1 %的甲酸的乙腈溶液，色譜柱為C18色譜柱，色譜柱溫度為30°C，流動相流速為0.8mL/ min，檢測器為紫外檢測器，檢測波長為210nm，所述高效液相色譜檢測過程中流動相采用梯 度洗脫的方式通過色譜柱，所述梯度洗脫的過程為：
[0089] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由90 %降低到55%，有機相在流動相中 的質(zhì)量含量由10 %提高到45% ;在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由55 %降低 到〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由45 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流動相中 的質(zhì)量含量保持〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由〇提高到90 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由100 %降低到10 % ;在 40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持90 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持 10%〇
[0090]對哌馬色林進行高效液相色譜檢測后得到圖4所示的液相色譜圖，圖4為本發(fā)明實 施例3檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖，由圖4可知，本發(fā)明實施例3提供的方法能夠 檢測出哌馬色林中具有式I結(jié)構(gòu)的有機雜質(zhì)，雜質(zhì)峰與哌馬色林峰能夠達到基線分離，峰形 較好。
[0091]按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測本發(fā)明實施例3提供的哌馬色林中有機雜質(zhì) 的檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，檢測結(jié)果如表3所示，表3為本發(fā)明實施例3提供的雜質(zhì)檢測方法 的系統(tǒng)適應(yīng)性。
[0092]表3本發(fā)明實施例3提供的雜質(zhì)檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性
[0094] 由表3可知，本發(fā)明實施例3提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性 高、專屬性強。
[0095] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，對本發(fā)明實施例3提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的 檢測方法進行加標回收率實驗，實驗結(jié)果如表4所示，表4為本發(fā)明實施例3提供的雜質(zhì)檢測 方法的加標回收率。
[0096] 表4本發(fā)明實施例3提供的雜質(zhì)檢測方法的加標回收率
[0097]
[0099] 注:表2中L、M、H表示加入有機雜質(zhì)的量從低到高，1、2、3表示加入不同量的雜質(zhì)平 行做3次。
[0100]由表4可知，本發(fā)明實施例3提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法檢測結(jié)果準 確。
[0101] 實施例4
[0102] 對本發(fā)明實施例1制備得到的哌馬色林進行高效液相色譜檢測，所述高效液相色 譜檢測過程中流動相中水相為質(zhì)量濃度為0.1 %的磷酸水溶液，有機相為質(zhì)量濃度為0.1 % 的磷酸的甲醇溶液，色譜柱為C8色譜柱，色譜柱溫度為40°C，流動相流速為1.2mL/min，檢測 器為紫外檢測器，檢測波長為230nm，所述高效液相色譜檢測過程中流動相采用梯度洗脫的 方式通過色譜柱，所述梯度洗脫的過程為：
[0103] 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由80 %降低到45%，有機相在流動相中 的質(zhì)量含量由20 %提高到55% ;在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由45 %降低 到〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由55 %提高到100 % ;在35min~38min，水相在流動相中 的質(zhì)量含量保持〇，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持100% ;在38min~40min，水相在流動 相中的質(zhì)量含量由〇提高到80%，有機相在流動相中的質(zhì)量含量由100%降低到20% ;在 40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持80 %，有機相在流動相中的質(zhì)量含量保持 20% 〇
[0104] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測后得到圖5所示的液相色譜圖，圖5為本發(fā)明實 施例4檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖，由圖5可知，本發(fā)明實施例4提供的方法能夠 檢測出哌馬色林中具有式I結(jié)構(gòu)的有機雜質(zhì)，雜質(zhì)峰與哌馬色林峰能夠達到基線分離，峰形 較好。
[0105] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，檢測本發(fā)明實施例4提供的哌馬色林中有機雜質(zhì) 的檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性，檢測結(jié)果如表5所示，表5為本發(fā)明實施例4提供的雜質(zhì)檢測方法 的系統(tǒng)適應(yīng)性。
[0106] 表5本發(fā)明實施例4提供的雜質(zhì)檢測方法的系統(tǒng)適應(yīng)性
[0107]
[0108] 由表1可知，本發(fā)明實施例4提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性 高、專屬性強。
[0109] 按照上述技術(shù)方案所述的方法，對本發(fā)明實施例4提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的 檢測方法進行加標回收率實驗，實驗結(jié)果如表6所示，表6為本發(fā)明實施例4提供的雜質(zhì)檢測 方法的加標回收率。
[0110] 表6本發(fā)明實施例4提供的雜質(zhì)檢測方法的加標回收率
[0112] 注:表6中L、M、H表示加入有機雜質(zhì)的量從低到高，1、2、3表示加入不同量的雜質(zhì)平 行做3次。
[0113] 由表6可知，本發(fā)明實施例4提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法檢測結(jié)果準 確。
[0114] 比較例1
[0115] 按照實施例2所述的方法對實施例1制備得到的哌馬色林進行高效液相色譜檢測， 與實施例2不同的是，采用摩爾濃度為20mmol/L的KH 2P〇4水溶液為水相，采用乙腈為有機相。
[0116] 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測后得到圖6所示的液相色譜圖，圖6為本發(fā)明比 較例1檢測哌馬色林后得到的高效液相色譜圖，由圖6可知，本發(fā)明比較例1提供的方法雜質(zhì) 峰和哌馬色林峰沒有分開，無法檢測出哌馬色林的有機雜質(zhì)。
[0117]由以上實施例可知，本發(fā)明提供了一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，包括:對 哌馬色林進行高效液相色譜檢測，得到哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量;所述高效液相色譜檢 測過程中的流動相包括水相和有機相，所述水相為酸的水溶液，所述有機相為酸的有機溶 液，所述酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有機溶液中的溶劑包括甲醇或乙腈;所述有機 雜質(zhì)為式I所示結(jié)構(gòu)的化合物。本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，對哌馬色林 進行高效液相色譜檢測的過程中，采用特定物質(zhì)的水相和有機相組成流動相，這種流動相 能夠?qū)τ袡C雜質(zhì)進行較好的分離，使本發(fā)明提供的方法能夠準確檢測出哌馬色林中的有機 雜質(zhì)。此外，本發(fā)明提供的哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法穩(wěn)定、重復(fù)性好、專屬性強。
【主權(quán)項】
1. 一種哌馬色林中有機雜質(zhì)的檢測方法，包括： 對哌馬色林進行高效液相色譜檢測，得到哌馬色林中有機雜質(zhì)的含量;所述高效液相 色譜檢測過程中的流動相包括水相和有機相，所述水相為酸的水溶液，所述有機相為酸的 有機溶液，所述水相中的酸和有機相中的酸包括甲酸、三氟乙酸或磷酸;所述有機溶液中的 溶劑包括甲醇或乙腈;所述有機雜質(zhì)為式I所示結(jié)構(gòu)的化合物：2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述酸的水溶液的質(zhì)量濃度為0.05% ~0.15%〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述酸的有機溶液的質(zhì)量濃度為 0.05% ~0.15%〇4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述水相和有機相的質(zhì)量比為（50~ 60):(50~40)。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相檢測過程中流動相的流 速為 0 · 5mL/min~1 · 5mL/min〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測過程中采用梯 度洗脫的方式使流動相通過色譜柱，所述梯度洗脫的過程為： 在0~25min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由80%~90%降低到45%~55%，有機相在 流動相中的質(zhì)量含量由10%~20%提高到45%~55% ; 在25min~35min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由45 %~55 %降低到10 %~0，有機相在 流動相中的質(zhì)量含量由45%~55%提高到90%~100% ; 在35min~38min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持10 %~0，有機相在流動相中的質(zhì)量 含量保持90 %~100 %; 在38min~40min，水相在流動相中的質(zhì)量含量由10 %~0提高到80 %~90%，有機相在 流動相中的質(zhì)量含量由90%~100%降低到10%~20% ; 在40min~45min，水相在流動相中的質(zhì)量含量保持80 %~90 %，有機相在流動相中的 質(zhì)量含量保持10%~20%。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測過程中使用的 色譜柱為C8色譜柱或C18色譜柱。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測過程中的色譜 柱柱溫為25°C~45°C。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測過程中的檢測 器為紫外檢測器。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述高效液相色譜檢測過程中的檢 測波長為200nm~240nm〇
【文檔編號】G01N30/02GK105929030SQ201510958090
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2015年12月18日
【發(fā)明人】施雯, 嚴紫薇, 石功名, 賀耘
【申請人】重慶兩江藥物研發(fā)中心有限公司