一種新生兒血型鑒定卡的制作方法
【專利說(shuō)明】一種新生兒血型鑒定卡
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及輸血醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種新生兒血型鑒定卡。
[0003]
【背景技術(shù)】
[0004]新生兒溶血病(HDN)是指由于母子血型不合，母親體內(nèi)產(chǎn)生與胎兒血型抗原不配的血型抗體，這種抗體通過(guò)胎盤進(jìn)入到胎兒體內(nèi)引起同族免疫性溶血，常見于ABO血型系統(tǒng)和Rh血型系統(tǒng)的血型不合，因此新生兒的血型鑒定對(duì)于新生兒溶血病的診斷有著重要意義。
[0005]新生兒由于自然發(fā)生的抗體量較少，大部分要到出生后幾個(gè)月才會(huì)形成血型抗體，且通常亦會(huì)存在來(lái)源于母體的抗體，因此新生兒的ABO血型檢測(cè)以及定型為主，無(wú)需進(jìn)行反定型。
[0006]微柱凝膠免疫檢測(cè)技術(shù)是20世紀(jì)90年代產(chǎn)生的一種免疫檢測(cè)技術(shù)，其基本原理是利用分子篩技術(shù)、離心技術(shù)和特異性免疫反應(yīng)技術(shù)原理，把血型血清學(xué)技術(shù)與凝膠分子篩技術(shù)有機(jī)結(jié)合起來(lái)，可靈敏地檢測(cè)出可能存在的微弱血型抗原抗體反應(yīng)，被認(rèn)為是血型血清學(xué)檢驗(yàn)的里程碑。
[0007]目前國(guó)內(nèi)外已有一些廠家生產(chǎn)新生兒血型鑒定卡，但是存在以下一些不足:一是采用單一型號(hào)的葡聚糖凝膠或聚丙烯葡聚糖凝膠，使得靈敏度與特異性無(wú)法兼顧;二是采用生理鹽水或抗體緩沖液溶脹凝膠，使得凝膠無(wú)法充分完全溶脹，以及破壞反應(yīng)體系的離子強(qiáng)度;三是對(duì)添加不同抗體的凝膠，凝膠洗滌緩沖液完全一致，無(wú)法有效保護(hù)抗體穩(wěn)定性；四是仍需要做反定型試驗(yàn)，增加了操作人員的工作負(fù)擔(dān)。
[0008]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009]本發(fā)明就是要克服以上不足，提供一種靈敏度高、特異型好，穩(wěn)定性強(qiáng)、保質(zhì)期長(zhǎng)的新生兒血型鑒定卡。
[0010]為達(dá)到上述目的，本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案進(jìn)行解決:
一種新生兒血型鑒定卡，包括含有六個(gè)微柱的檢測(cè)卡，所述六個(gè)微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠，其通過(guò)以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:選用至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，然后加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，再用純化水洗滌去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的葡聚糖凝膠顆粒；
(2)制備各抗體稀釋液:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10-15g/L、牛血清白蛋白20-25g/L、蔗糖15-20g/L;抗A稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白15-20g/L、蔗糖25-30g/L，抗B稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽15-20g/L、牛血清白蛋白 10-158/1、蔗糖18-268/1，稀釋液的?!1值為6.6-6.8；
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽10-15g/L、牛血清白蛋白35-40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉I.75g-2.07g/L、磷酸氫二鈉0.185-0.2198/1、磷酸二氫鈉0.203-0.248/1、甘氨酸18-218/1;并調(diào)節(jié) pH值為6.6-6.8；
(3)制備各抗體工作液:
取抗A單克隆抗體濃縮液與抗A稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗A單克隆抗體工作液的效價(jià) M28;
取抗B單克隆抗體濃縮液與抗B稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗B單克隆抗體工作液的效價(jià) M28;
取抗AB單克隆抗體濃縮液與抗AB稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗AB單克隆抗體工作液的效價(jià)2 128;
取抗D單克隆抗體濃縮液與抗D稀釋液進(jìn)行混合，使得到的抗D單克隆抗體工作液的效價(jià) 2 64;
選取對(duì)抗D免疫球蛋白(IgG)致敏的紅細(xì)胞效價(jià)2 32的廣譜抗人球蛋白試劑；
(4)制備凝膠:
取六份等量的葡聚糖凝膠顆粒分別用等量的抗A稀釋液、抗B稀釋液、抗AB稀釋液、抗D稀釋液、空白凝膠洗滌緩沖液和空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行洗滌至少三次，再加入相對(duì)應(yīng)的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作液、廣譜抗人球蛋白試劑和空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠；
(5)分裝:
按照每管24-32微升的量，將抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠分別灌注到六個(gè)微柱中，形成新生兒血型鑒定卡。
[0011]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中交聯(lián)葡聚糖凝膠為交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-50、交聯(lián)葡聚糖凝膠6-75或交聯(lián)葡聚糖凝膠6-100。
[0012]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中在交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物中加入純化水中進(jìn)行充分懸浮溶脹，其中交聯(lián)葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:2-1: 3。
[0013]進(jìn)一步方案，所述步驟(I)中懸浮溶脹的時(shí)間為48-72小時(shí)。
[00? 4]進(jìn)一步方案，所述步驟(4 )中抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作液、廣譜抗人球蛋白試劑、空白凝膠洗滌緩沖液分別與洗滌后葡聚糖凝膠顆粒按體積比為I: 2-1:3進(jìn)行混合。
[0015]本發(fā)明選擇六等份由至少兩種交聯(lián)葡聚糖凝膠用純化水中進(jìn)行溶脹所得的葡聚糖凝膠顆粒，再分別用抗A稀釋液、抗B稀釋液、抗AB稀釋液、抗D稀釋液、空白凝膠洗滌緩沖液和空白凝膠洗滌緩沖液分別對(duì)其進(jìn)行洗滌至少三次，再加入相對(duì)應(yīng)的抗A單克隆抗體工作液、抗B單克隆抗體工作液、抗AB單克隆抗體工作液、抗D單克隆抗體工作、廣譜抗人球蛋白試劑和空白凝膠洗滌緩沖液進(jìn)行混合，得到抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠。再將它們依次裝入檢測(cè)卡中的六個(gè)微柱中，形成新生兒血型鑒定卡。該檢測(cè)卡用來(lái)檢測(cè)新生兒的血型鑒定，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)于新生兒溶血病進(jìn)行診斷、預(yù)防和治療具有重要的臨床意義。
[0016]所以本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是:
1、本發(fā)明采用不同大小、不同篩分范圍的交聯(lián)葡聚糖凝膠進(jìn)行混合，有效避免了單一交聯(lián)葡聚糖凝膠的特異性與靈敏度不能兼顧的特點(diǎn)，可實(shí)現(xiàn)在保證特異性的同時(shí)，仍擁有很高的靈敏度；
2、本發(fā)明采用純化水作為交聯(lián)葡聚糖凝膠的溶脹溶液，可以使凝膠顆粒完全充分溶脹；
3、本發(fā)明用各抗體稀釋液洗滌葡聚糖凝膠顆粒，從而不會(huì)破壞抗體的保護(hù)液成分，能更有效的保證抗體的穩(wěn)定性;并保證了緩沖液體系的純粹性，不受其他離子的影響，有效保證了體系的離子強(qiáng)度。
[0017]4、本發(fā)明無(wú)需進(jìn)行新生兒ABO反定型試驗(yàn)，可減輕醫(yī)護(hù)人員操作負(fù)擔(dān)，并排除來(lái)源于母體的抗體對(duì)于試驗(yàn)的干擾。
[0018]
具體實(shí)施辦法實(shí)施例一:
一種新生兒血型鑒定卡包括含有六個(gè)微柱的檢測(cè)卡，所述六個(gè)微柱中分別裝有等量的抗A凝膠、抗B凝膠、抗AB凝膠、抗D凝膠、抗人球凝膠和空白凝膠，其通過(guò)以下方法制備而成:
(1)葡聚糖凝膠的溶脹:
選用交聯(lián)葡聚糖凝膠G-25、交聯(lián)葡聚糖凝膠G-50和交聯(lián)葡聚糖凝膠G-75按照質(zhì)量比1:2:1進(jìn)行混合得葡聚糖凝膠混合物，然后按照葡聚糖凝膠混合物和純化水的質(zhì)量體積比為1:3加入純化水，進(jìn)行懸浮溶脹48小時(shí)后;再用純化水對(duì)其洗滌三次，去除破碎顆粒，得到大小均勻、呈完整球形的凝葡聚糖膠顆粒；
(2)抗體稀釋液的配制:
抗A稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)10g/L、牛血清白蛋白20g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗B稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白15g/L、蔗糖30g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗AB稀釋液:以生理鹽水為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)16g/L、牛血清白蛋白12g/L、蔗糖20g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
抗D稀釋液:以磷酸鹽緩沖液(PBS)為基液，其中含有乙二胺四乙酸二鉀鹽(EDTA二鉀鹽)15g/L、牛血清白蛋白40g/L，稀釋液的pH值為6.6-6.8;
空白凝膠洗滌緩沖液:以純化水為溶劑，緩沖液中含有氯化鈉1.75gg/L、磷酸氫二鈉
0.185g/L、磷酸二氫鈉0.203g/L、甘氨酸18g/L;并調(diào)節(jié)pH值為6.6-6.8；
(3)制備各抗體工作液: 取抗A單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗A稀釋液進(jìn)行混合得抗A單克隆抗體工作液，其抗A單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗B單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗B稀釋液混合得抗B單克隆抗體工作液，其抗B單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗AB單克隆抗體濃縮液與步驟(2 )制備的抗AB稀釋液混合得抗AB單克隆抗體工作液，其抗AB單克隆抗體工作液效價(jià)2 128;
取抗D單克隆抗體濃縮液與步驟(2)制備的抗D稀釋液混合得抗D單克隆抗體工作液，其抗D單克隆抗體工作液效價(jià)I 64;
選取對(duì)抗D免疫球蛋白(IgG)致敏的紅細(xì)胞效價(jià)2 32的廣譜抗人球蛋白試劑；
(4)制備凝膠:
將步驟(I)中溶脹的葡聚糖凝膠顆粒均分為六等份，其中一份用等量的抗A稀釋液洗滌三次，再用抗A單克隆抗體工作液與洗滌后的葡聚糖凝膠顆粒按照體積比1:2進(jìn)行混合均勻，得到抗A凝膠；