一種植物葉片花青素的提取方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于花青素提取技術領域，具體涉及一種植物葉片花青素的提取方法。
【背景技術】
[0002] 花青素是一種水溶性黃酮類化合物，廣泛存在于植物的花、葉片、果實等植物器官 中，它是植物葉片色素中第三類主要色素，尤其在植物幼小和衰老葉片中含量豐富?；ㄇ嗨?的有效積累是由許多環(huán)境脅迫引起的，包括強光和中波紫外線照射、低溫、干旱、損傷、細菌 及真菌感染、氮和磷的缺乏、除草劑及污染物，因此在許多植物種類中，花青素可以作為植 物葉片衰老及脅迫的指示器，它們的探測和定量評估，能夠提供植物對環(huán)境脅迫的響應和 調整的重要信息。
[0003] 花青素具有抗氧化、預防心腦血管疾病、抗突變、保護肝臟等多種生理功能。植物 葉呈紫紅色，富含花青素，是研究植物葉花青素的理想對象。現有技術中，鄭永春等采用"將 不同時期的上、下兩部分葉片粉末分別準確稱量I.OOOg于試管中，加入20mL甲醇溶液（含 1%鹽酸，體積比）提取液，輕輕混勻。將試管置于4°C避光浸提12小時，過濾，加入提取液 定容至50mL后，冷藏備用。所有樣品平行處理3次。以高效液相色譜法測定提取液中的花 青素含量"（紫葉李葉中花青素含量動態(tài)變化的研究，鄭永春等，湖北農業(yè)科學，第51卷第 8期，第1675-1677頁，2012年）的方法對植物葉片中的花青素進行提取，該方法處理時間 較長，提取成本較高。

【發(fā)明內容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種植物葉片花青素的提取方法，該方法提取過程簡單易 操作，處理時間較短，成本較低，提取率較高。
[0005] 為實現以上目的，本發(fā)明采用的技術方案為：
[0006] -種植物葉片花青素的提取方法，包括將植物葉片碎片加入酸化甲醇中，在30~ 50°C條件下浸提至少2次，每次浸提時間為1. 5~2. 5h，每次浸提后對浸提液進行離心 分離，合并上清液，過濾，即得花青素提取液；所述酸化甲醇為鹽酸與甲醇溶液的體積比為 0.837:100的混合液。
[0007] 所述鹽酸的質量濃度為36~38%。
[0008] 所述植物葉片碎片為2X5mm的長條狀碎片。
[0009] 所述植物葉片碎片通過將植物葉片洗凈去雜、吸干后剪碎得到。
[0010] 所述酸化甲醇的用量為：每IL酸化甲醇加入10~20g植物葉片碎片。
[0011] 所述離心分離的轉速為3000~7000r/min。
[0012] 所述甲醇溶液中甲醇的體積含量不小于95 %。
[0013] 植物葉片花青素的提取方法還包括得到花青素提取液后對植物葉片花青素提取 量的測定，測定方法包括以下步驟：
[0014] 1)將花青素提取液定容；
[0015] 2)利用分光光度計測定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波長下的光 密度值；
[0016] 3)根據式（1)計算定容后花青素提取液中花青素的ODa;
[0017] 4)根據式（2)計算植物葉片花青素提取量，基于質量進行表達，單位為ymol/g;
[0018] ODx= (OD53O-OD620)-O.IX(OD650-OD620) (1)
[0020] 式中ODx -花青素提取液在530nm波長下修正后的光密度值；
[0021] ￡,-花青素摩爾消光系數，取4.62\104，17!11〇1;
[0022] V-花青素提取液總體積，mL;
[0023] m-植物葉片碎片質量，g;
[0024] Canth-植物葉片花青素提取量，ymol/g〇
[0025] 步驟1)中所述定容為取花青素提取液20mL用酸化甲醇定容至50mL。
[0026] 植物葉片花青素提取量的測定方法來自文獻"熊慶娥等，植物生理學實驗教程 [M]，第94-95頁，成都，四川科學技術出版社，2003年"。
[0027] 本發(fā)明的植物葉片花青素的提取方法，優(yōu)化采用酸化甲醇提取植物葉片花青素方 法參數得到花青素的最大提取率。提取植物葉片花青素時反應的溫度與時間對花青素提取 率有很大影響；提取花青素時鹽酸的作用主要是讓花青素顯紅色，將溶液中葉綠素和花青 素區(qū)別開，酸化甲醇中鹽酸含量需適中，鹽酸含量太低無法將葉綠素和花青素區(qū)別開，鹽酸 含量太高會引起化學反應，提取出的花青素減少；本發(fā)明優(yōu)化了酸化甲醇提取花青素的溫 度、時間及酸化甲醇中鹽酸的含量，實現高效快速地提取植物葉片中花青素。酸化甲醇中的 甲醇可被回收，降低提取成本，該方法簡單易操作，處理時間較短，提取率較高，成本較低。
[0028] 本發(fā)明的植物葉片花青素的提取方法，利用分光光度計測定植物葉片花青素提取 量，進一步降低成本。
【具體實施方式】
[0029] 下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限 制。
[0030] 實施例1
[0031] 本實施例的植物葉片花青素的提取方法，包括以下步驟：
[0032] 1)植物葉片樣品采集與處理：2015年5月在西北農林科技大學校園內，采集了 紫葉李的不同樹齡葉片，葉片基于可視化特征進行隨機選擇，葉片的顏色從綠、微紅到完全 紅，并且健康、無損傷，采集了 342個紫葉李葉片，每3個葉片為1個樣本，共114個樣本；取 紫葉李葉片用水洗凈去雜、吸干，剪成2X5mm長條狀碎片；
[0033] 2)取IOg步驟1)所述長條狀碎片，加入到IL酸化甲醇（鹽酸與甲醇溶液的體積 比為0. 837:100,鹽酸的質量濃度為36%，甲醇溶液中甲醇的體積含量為95% )中進行2次 浸提，每次浸提溫度為45°C，時間為2h，每次浸提后在5000r/min下離心分離，合并2次離 心上清液，過濾，即得花青素提取液。
[0034]利用分光光度計測定植物葉片花青素提取量，包括以下步驟：
[0035] 1)取花青素提取液20mL用酸化甲醇定容至50mL ;
[0036] 2)利用分光光度計測定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波長下的光 密度值；
[0037] 3)根據式（1)計算定容后花青素提取液中花青素的ODa;
[0038] 4)根據式（2)計算植物葉片花青素提取量，基于質量進行表達，單位為ymol/g;
[0039] ODx= (OD53O-OD620)-O. IX (OD650-OD620) (1)
[0041] 式中ODx -花青素提取液在530nm波長下修正后的光密度值；
[0042] eX-花青素摩爾消光系數，取4. 62X 10 4, L/mol ;
[0043] V -花青素提取液總體積，mL ;
[0044] m -植物葉片碎片質量，g;
[0045] Canth-植物葉片花青素提取量，ymol/g 〇
[0046] 測得的植物葉片花青素提取量為4. 610ymol/g。
[0047] 實施例2
[0048] 本實施例的植物葉片花青素的提取方法，包括以下步驟：
[0049] 1)2015年4月初在西北農林科技大學牡丹園內，在牡丹開花前期采集了 14個不同 品種的葉片，葉片基于可視化特征進行隨機選擇，葉片的顏色從綠、微紅到完全紅，并且健 康、無損傷，采集了 396個牡丹葉片，每3個葉片為1個樣本，共132個樣本。取牡丹葉片用 水洗凈去雜、吸干，剪成2X5_長條狀碎片；
[0050] 2)取20g步驟1)所述長條狀碎片，加入到IL酸化甲醇（鹽酸與甲醇溶液的體積 比為0. 837:100,鹽酸的質量濃度為36%，甲醇溶液中甲醇的體積含量為95% )中進行2次 浸提，每次浸提溫度為45°C，時間為2h，每次浸提后在5000r/min下離心分離，合并2次離 心上清液，過濾，即得花青素提取液。
[0051] 利用分光光度計測定所提取的植物葉片花青素提取量，具體操作方法同實施例1， 植物葉片花青素提取量為0. 656ymol/g。
[0052] 實施例3
[0053] 本實施例的植物葉片花青素的提取方法，包括以下步驟：
[0054] 1)植物葉片處理：取紫葉李葉片用水洗凈去雜、吸干，剪成2X5_長條狀碎片；
[0055] 2)取15g步驟1)所述長條狀碎片，加入到IL酸化甲醇（鹽酸與甲醇溶液的體積 比為0. 837:100,鹽酸的質量濃度為38%，甲醇溶液中甲醇的體積含量為98% )中進行3次 浸提，每次浸提溫度為30°C，時間為2. 5h，每次浸提后在3000r/min下離心分離，合并3次 離心上清液，過濾，即得花青素提取液。
[0056] 利用分光光度計測定所提取的植物葉片花青素提取量，具體操作方法同實施例1， 植物葉片花青素提取量為4. 391ymol/g。
[0057] 實施例4
[0058] 本實施例的植物葉片花青素的提取方法，包括以下步驟：
[0059] 1)植物葉片處理：取牡丹葉片用水洗凈去雜、吸干，剪成2X5mm長條狀碎片；
[0060] 2)取15g步驟1)所述長條狀碎片，加入到IL酸化甲醇（鹽酸與甲醇溶液的體積 比為0. 837:100,鹽酸的質量濃度為37%，甲醇溶液中甲醇的體積含量為97% )中進行3次 浸提，每次浸提溫度為50°C，時間為I. 5h，每次浸提后在7000r/min下離心分離，合并3次 離心上清液，過濾，即得花青素提取液。
[0061] 利用分光光度計測定所提取的植物葉片花青素提取量，具體操作方法同實施例1， 植物葉片花青素提取量為0. 641ymol/g。
【主權項】
1. 一種植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，包括：將植物葉片碎片加入酸化甲 醇中，在30~50°C條件下浸提至少2次，每次浸提時間為1. 5~2. 5h，每次浸提后對浸提 液進行離心分離，合并上清液，過濾，即得花青素提取液；所述酸化甲醇為鹽酸與甲醇溶液 的體積比為0. 837:100的混合液。2. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述鹽酸的質量濃 度為36~38%。3. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述植物葉片碎片 為2X5mm的長條狀碎片。4. 根據權利要求1或3所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述植物葉片碎 片通過將植物葉片洗凈去雜、吸干后剪碎得到。5. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述酸化甲醇的用 量為：每IL酸化甲醇加入10~20g植物葉片碎片。6. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述離心分離的轉 速為 3000 ~7000r/min。7. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，所述甲醇溶液中甲 醇的體積含量不小于95%。8. 根據權利要求1所述植物葉片花青素的提取方法，其特征在于，還包括在得到花青 素提取液后，對植物葉片花青素提取量進行測定，測定方法包括以下步驟： 1) 將花青素提取液定容； 2) 利用分光光度計測定定容后花青素提取液在530nm、620nm、650nm波長下的光密度 值； 3) 根據式（1)計算定容后花青素提取液中花青素的ODa; 4) 根據式（2)計算植物葉片花青素提取量，基于質量進行表達，單位為ymol/g; ODa=(OD530-OD620)-O.IX(OD650-OD620) (1)式中ODx-花青素提取液在530nm波長下修正后的光密度值； ea-花青素摩爾消光系數，取4. 62X10 4,L/mol; V-花青素提取液總體積，mL; m-植物葉片碎片質量，g; Qwra-植物葉片花青素提取量，ym〇l/g。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物葉片花青素的提取方法，屬于花青素提取技術領域。該提取方法包括將植物葉片碎片加入酸化甲醇中，在30～50℃條件下浸提至少2次，每次浸提時間為1.5～2.5h，每次浸提后對浸提液進行離心分離，合并上清液，過濾，即得花青素提取液，酸化甲醇為鹽酸與甲醇溶液的體積比為0.837:100的混合液。該方法所得植物葉片中花青素提取率較高，酸化甲醇中的甲醇可被回收利用，降低了提取成本，具有操作簡單、處理時間短、成本較低等優(yōu)點。
【IPC分類】G01N1/30, G01N1/28, G01N21/31
【公開號】CN105223049
【申請?zhí)枴緾N201510543620
【發(fā)明人】劉秀英, 熊建利, 常慶瑞, 申健, 王力, 宋榮杰, 高雨茜
【申請人】河南科技大學
【公開日】2016年1月6日
【申請日】2015年8月28日