溶液制成每Iml各含I?5mg (例如2?3mg)的溶液，作為對(duì)照品溶液； 2)取貢菊和亳菊藥材粗粉適量，分別置于具塞錐形瓶中，加溶劑25ml，超聲處理10?90分鐘，濾過(guò)，將濾液在水浴上蒸干，殘?jiān)謩e加甲醇或乙醇Iml溶解，制得貢菊和亳菊的供試品溶液； 3)用定量毛細(xì)管分別吸取上述I)制得的3種對(duì)照品溶液和2)制得的2種供試品溶液適量，依次點(diǎn)樣于同一反相薄層板W/UV254的同一水平線不同位置上； 4)以甲醇和水、或乙醇和水以一定比例為展開劑，進(jìn)行展開，展開后取出，晾干； 5)以5%三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，顯色后，加熱適當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間，取出，放涼； 6)在364nm和/或254nm紫外燈光下觀察，并比較色譜圖中的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)和/或暗斑(254nm紫外光燈下)，以鑒別貢菊和亳菊； 7)結(jié)果判斷: 正品的貢菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同Rf值位置上，(相對(duì)于木樨草素對(duì)照品斑點(diǎn)而言，下同)顯示較弱的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)和/或暗斑(254nm紫外光燈下)，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同Rf值位置上，不顯示熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)和/或暗斑(254nm紫外光燈下)； 正品的亳菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同Rf值位置上，(相對(duì)于木樨草素對(duì)照品斑點(diǎn)而言，下同)顯示較強(qiáng)的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)和/或暗斑(254nm紫外光燈下)，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同Rf值位置上，(相對(duì)于山柰酚、金合歡素對(duì)照品斑點(diǎn)而言，下同)顯示相同的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)和/或暗斑(254nm紫外光燈下)； 如果標(biāo)記為貢菊或亳菊的檢測(cè)藥材與上述相應(yīng)正品藥材不吻合，則該檢測(cè)藥材不是正品藥材。2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟I)中所述甲醇或乙醇溶液是指將甲醇或乙醇與水以一定比例混合后制成的溶液，其中甲醇與水的體積比可以是10:90?100:0、乙醇與水的體積比可以是10:90?100:0 ;例如甲醇溶液或乙醇溶液的濃度為10%?100%，例如濃度為50%?90%，例如濃度為60%?90%。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟2)中所述藥材粗粉可以是過(guò)20?100目篩的粉末(例如50-80目篩)；所述粗粉適量，可以是0.1?0.5g，例如0.2?0.3g。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟2)中，所述溶劑是指將甲醇或乙醇與水以一定比例混合后制成的溶液，其中甲醇與水的體積比可以是10:90?100:0、乙醇與水的體積比可以是10:90?100:0 ;例如甲醇溶液或乙醇溶液的濃度為10%?100%，例如濃度為50%?90%，例如濃度為60%?90%。5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟3)中所述取對(duì)照品溶液或供試品溶液適量，可以是I?10 μ 1，例如I?5 μ 1，例如I?3 μ I。6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟4)中所述甲醇和水、或乙醇和水以一定比例為展開劑，甲醇與水的體積比可以是10:90?100:0、乙醇與水的體積比可以是10:90?100:0，例如甲醇溶液或乙醇溶液的濃度為10%?100%，例如濃度為20%?90%，例如濃度為20%?80%。7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述展開是一次展開或二次展開。8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，步驟4)中，所述5%三氯化鋁乙醇溶液是三氯化鋁用95%乙醇溶液配制成的溶液。9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，所述步驟5)中所述加熱，可以是烘箱加熱，也可以是電吹風(fēng)加熱；加熱溫度控制在45?100°C，例如80?100°C ;所述適當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間可以是I?20分鐘，例如2-10分鐘，例如5分鐘。10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其包括以下步驟: 1)對(duì)照品洛液的制備: 分別精密稱取木樨草素、山柰酚、金合歡素對(duì)照品，置于1ml量瓶中，加50%?100%甲醇溶液(例如60%?90%甲醇溶液)或50%?100%乙醇溶液(例如60%?90%乙醇溶液)溶解并稀釋至刻度，搖勾，制成每Iml含I?5mg(例如含2?3mg)的對(duì)照品溶液，備用； 2)藥材供試品溶液制備: 用高速萬(wàn)能粉碎機(jī)對(duì)干燥的貢菊和亳菊藥材分別進(jìn)行粉碎，過(guò)60目篩得藥材粉末； 精密稱取貢菊、亳菊粉末0.1?lg(，例如0.2?0.3g)，分別置于具塞錐形瓶中，加50%?100%甲醇(甲醇占水溶液中體積比)或50%?100%乙醇(乙醇占水溶液中體積比)(例如甲醇溶液或乙醇溶液的濃度為50%?90%，例如濃度為60%?90%) 25ml，超聲處理30-50分鐘，濾過(guò)，將濾液在水浴上蒸干，殘?jiān)謩e加甲醇或乙醇Iml溶解，制得貢菊和亳菊的供試品溶液； 3)用定量毛細(xì)管分別吸取上述制得的3種對(duì)照品溶液和2種供試品溶液各2?10 μ I (例如I?5 μ 1，例如I?3 μ I)，依次點(diǎn)樣于同一反相薄層板W/UV254的同一水平線不同位置上；接著使用以下二次展開方法或者一次展開方法進(jìn)行展開； 4)二次展開方法，按以下a?d方法操作: a)取甲醇和水，按照體積比2:8混合均勻，得到展開劑I ;將展開劑I置干燥潔凈的雙槽薄層色譜展開缸的第一個(gè)槽中； b)將步驟3)的反相薄層板W/UV254，置于步驟a)的雙槽薄層色譜展開缸第二個(gè)槽中，密閉缸蓋，預(yù)飽和10-15分鐘后，將上述雙槽薄層色譜展開缸第一個(gè)槽中的展開劑轉(zhuǎn)移到放有反相薄層板W/UV254的第二個(gè)槽中，進(jìn)行第一次展開，展距10cm，結(jié)束展開，取出薄層板，晾干，完成第一次展開； c)取甲醇和水，按照體積比6:4混合均勻，得到展開劑II ;將展開劑II置干燥潔凈的雙槽薄層色譜展開缸的第一個(gè)槽中； d)將步驟b)完成第一次展開的反相薄層板W/UV254，置于步驟c)的雙槽薄層色譜展開缸第二個(gè)槽中，密閉缸蓋，預(yù)飽和10-15分鐘后，將上述雙槽薄層色譜展開缸第一個(gè)槽中的展開劑轉(zhuǎn)移到放有反相薄層板W/UV254的第二個(gè)槽中，進(jìn)行第二次展開，展距10cm，結(jié)束展開，取出薄層板，晾干，完成第二次展開； 5)—次展開方法，按以下e?f操作: e)取甲醇和水，按照體積比7:2混合均勻，得到展開劑；將展開劑置干燥潔凈的雙槽薄層色譜展開缸的第一個(gè)槽中； f)將步驟3)的反相薄層板W/UV254，置于步驟e)的雙槽薄層色譜展開缸第二個(gè)槽中，密閉缸蓋，預(yù)飽和10-15分鐘后，將上述雙槽薄層色譜展開缸第一個(gè)槽中的展開劑轉(zhuǎn)移到放有反相薄層板W/UV254的第二個(gè)槽中，進(jìn)行展開，展距10cm，結(jié)束展開，取出薄層板，晾干; 6)配制顯色劑:取5g三氯化鋁(AlCl3)置于10ml量瓶中，用95%乙醇溶解并稀釋至刻度，配制成5%A1C13Z醇溶液顯色劑，置于噴霧器中備用； 7)將顯色劑均勻噴至步驟4)或步驟5)的反相薄層板W/UV254上，100°C加熱5分鐘，取出，放涼；按下述方法比較色譜圖中的斑點(diǎn)鑒別貢菊和亳菊: 71)分別于365nm、254nm波長(zhǎng)紫外燈下檢視步驟7)的反相薄層板W/UV254，并比較色譜圖中的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)或暗斑(254nm紫外光燈下)，以鑒別貢菊和亳菊； 72)正品的貢菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同Rf值位置上，顯示較弱的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)或暗斑(254nm紫外光燈下)，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同Rf值位置上，不顯示熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)或暗斑(254nm紫外光燈下)； 73)正品的亳菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同Rf值位置上，顯示較強(qiáng)的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)或暗斑(254nm紫外光燈下)，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同Rf值位置上，顯示相同的熒光斑點(diǎn)(365nm紫外光燈下)或暗斑(254nm紫外光燈下)； 74)如果標(biāo)記為貢菊或亳菊的檢測(cè)藥材與上述相應(yīng)正品藥材不吻合，則該檢測(cè)藥材不是正品藥材。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種用于鑒別貢菊和亳菊的反相薄層色譜方法，具體步驟如下：以木樨草素、山柰酚、金合歡素為對(duì)照品，貢菊和亳菊乙醇溶液為供試品溶液，點(diǎn)于同一反相薄層板上，以甲醇和水為展開劑，展開后，取出，晾干，以三氯化鋁乙醇溶液為顯色劑，顯色后，分別于波長(zhǎng)365nm和254nm紫外光燈下進(jìn)行檢視鑒別。貢菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同位置上，顯示較弱的熒光斑點(diǎn)或暗斑，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同位置上，不顯示熒光斑點(diǎn)或暗斑；亳菊供試品在與木樨草素對(duì)照品相同位置上，顯示較強(qiáng)的熒光斑點(diǎn)或暗斑，在與山柰酚、金合歡素對(duì)照品相同位置上，顯示相同的熒光斑點(diǎn)或暗斑。此發(fā)明是首次采用反相薄層色譜法鑒別貢菊和亳菊，該鑒別方法專屬性強(qiáng)，能夠準(zhǔn)確鑒別貢菊和亳菊。
【IPC分類】G01N30/90
【公開號(hào)】CN105136967
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510437008
【發(fā)明人】王京輝, 陳有根, 傅欣彤, 郭洪祝
【申請(qǐng)人】北京市藥品檢驗(yàn)所
【公開日】2015年12月9日
【申請(qǐng)日】2015年7月23日