青蒿血清指紋圖譜及其建立方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥材指紋圖譜技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及青蒿血清指紋圖譜及其建立方法。
【背景技術(shù)】
[0002]中藥雖然已經(jīng)有幾千年的應(yīng)用發(fā)展歷史，但如何有效的評價中藥材質(zhì)量的好壞，一直是中藥材研宄與應(yīng)用的重點和難點。隨著科技的發(fā)展，指紋圖譜質(zhì)控技術(shù)在中藥領(lǐng)域被提出并得到廣泛認可，其在中藥材質(zhì)控中的應(yīng)用也越來越多；中藥材指紋圖譜是指中藥材經(jīng)過適當處理后，采用一定的分析手段和檢測儀器得到的，能夠標示該中藥材特性的圖譜，它是現(xiàn)階段可以較全面地反映中藥材內(nèi)在質(zhì)量的最有效的手段之一，也得到了國際社會的認可。
[0003]中藥由于種類繁多、來源復(fù)雜，因此在質(zhì)量控制方面需要采用現(xiàn)代先進的分析技術(shù)來分析中藥的活性成分及其整體特性，制定統(tǒng)一標準和規(guī)范的質(zhì)量控制，保證中藥的質(zhì)量和療效。
[0004]從中藥質(zhì)量控制方法的發(fā)展來看，模仿化學(xué)合成藥物的質(zhì)量控制模式是目前普遍采用的一種質(zhì)量控制方法，即采用中藥中已知的某種、或者某幾種主要活性成分或有效成分作為該藥材質(zhì)量控制的指標，通過常用的分析方法對其進行定性定量的描述，借以判斷其是否達到藥用的標準。然而任何單一的活性成分或指標成分均不能反應(yīng)中醫(yī)用藥所體現(xiàn)的整體療效，所以僅僅對單一成分指標進行檢測控制，難以真正控制中藥療效。因此從中醫(yī)理論辨證論治、隨證加減的治療和用藥原則出發(fā)，強調(diào)天然藥物成分產(chǎn)生藥效的“整體性”，具有綜合的、宏觀的、非線性分析觀念的質(zhì)量控制模式才是具有生命力的發(fā)展方向。天然藥物色譜指紋圖譜具有整體性、模糊性和可以量化等特點，能夠全面地反映中藥的整體質(zhì)量，已成為國際上公認的控制天然藥物質(zhì)量的有效手段。
[0005]中藥指紋圖譜是指借助于現(xiàn)代分析及檢測技術(shù)來表達植物藥(主要是次生代謝產(chǎn)物)化學(xué)信息特征的指紋圖譜。歐洲對草藥的質(zhì)量控制采用了指紋圖譜方法。美國最近幾年制定的植物草藥指南中已經(jīng)明確把指紋圖譜作為這類混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法。英國草藥典、印度草藥典以及德國藥學(xué)植物學(xué)會也把指紋圖譜作為質(zhì)控標準的內(nèi)容之一。
[0006]高效毛細管電泳(HighPerformance Capillary Electrophoresis，HPCE)具有以下幾個方面的優(yōu)勢，主要有:①它分離效能高、分析速度快、樣品前處理簡單，有時甚至無需處理；?毛細管柱便宜、分析成本低、對環(huán)境影響?。虎鄯蛛x模式多，常用的有六種分離模式(CZE，MECC或MEKC，CIEF, CGE, CITP)，它適用于多組分復(fù)雜樣品的分離分析?、苓M樣量少、應(yīng)用范圍廣，不僅能分析水溶性和脂溶性的小分子組分，還能分析大分子化合物，在化學(xué)、藥學(xué)、生命科學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、法醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域應(yīng)用廣泛?？梢詫崿F(xiàn)從無機離子到中性物質(zhì)，從各類小分子、有機化合物、手性分子到天然大分子的分離分析，應(yīng)用范圍廣泛，特別適合于含復(fù)雜成分的樣品的快速分析。
[0007]近年來HPCE發(fā)展非常迅速，在藥物分析以及指紋圖譜的建立中已越來越受到相關(guān)專業(yè)人士的高度重視。如HPCE方法建立的黃芩、半夏、枳殼等單味藥材指紋圖譜以及復(fù)方心舒口服液、益母草注射液等中藥復(fù)方及制劑的指紋圖譜，這些指紋圖譜的建立能更全面地反映該藥材、復(fù)方、制劑的整體質(zhì)量，從而實現(xiàn)質(zhì)量控制的目的。鑒于重慶道地藥材所含成分的復(fù)雜性，采用HPCE來研宄其指紋圖譜具有極大的優(yōu)勢。
[0008]我國天然藥物指紋圖譜研宄起步較晚，主要是采用色譜技術(shù)建立的反映天然藥物注射劑質(zhì)量的化學(xué)成分的指紋圖譜，并對其進行方法學(xué)研宄。這些研宄手段雖然和傳統(tǒng)的質(zhì)量控制模式相比取得了很大的進步，但仍處于指紋圖譜研宄開發(fā)的初級階段，多以譜圖中的峰面積與組分的量之間建立關(guān)系。事實上，有效成分不等于主要成分，復(fù)雜的天然藥物僅用組分的量，以及組分之間的相對含量來進行質(zhì)量控制是遠遠不夠的。目前，指紋圖譜技術(shù)已發(fā)展成為國際上公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量最有效的模式。
[0009]而“回歸自然”、崇尚天然藥物正在成為一種世界性潮流，我國中藥現(xiàn)代化事業(yè)因此面臨新的機遇與挑戰(zhàn)。國家為了發(fā)展和改造傳統(tǒng)中藥業(yè)，把中藥產(chǎn)業(yè)作為國民經(jīng)濟發(fā)展的支柱產(chǎn)業(yè)之一，投入巨資推動中藥現(xiàn)代化和產(chǎn)業(yè)化，使中藥走向國際。隨著國際醫(yī)藥市場的持續(xù)增長，植物藥市場的規(guī)模也在快速增長，加之當今疾病譜和醫(yī)療模式的根本性變化、人們自我保健意識的增強，為中藥進入國際市場創(chuàng)造了千載難逢的機遇。提高中藥產(chǎn)品的國際競爭力，并不斷研制、生產(chǎn)具有自主知識產(chǎn)權(quán)產(chǎn)品，中藥產(chǎn)業(yè)必將成為我國國民經(jīng)濟中的新的經(jīng)濟增長點。目前該產(chǎn)業(yè)目前正在向現(xiàn)代化、國際化發(fā)展，呈現(xiàn)出前所未有的良好發(fā)展勢頭，顯示了廣闊的市場前景。但中藥具有產(chǎn)地來源多樣、藥用部位繁多、化學(xué)成分眾多、基體復(fù)雜的特點，在我國已經(jīng)有幾千年的歷史，這種傳統(tǒng)藥物在應(yīng)用上卻受到多方面的限制，其主要原因之一就是缺乏公認的質(zhì)量評價體系。另一方面，當前，中藥指紋圖譜技術(shù)在國內(nèi)外己成為一種發(fā)展趨勢。首先是美國食品藥品管理局(FDA)開始承認指紋圖譜，在申報 IND (Inviestgiatin New Drug)的 CMC (Chemistry Manufaeture and Control)資料時，植物藥、原料藥和植物藥產(chǎn)品的質(zhì)量控制可以采用指紋圖譜。世界衛(wèi)生組織(WHO)在1990年草藥評價指導(dǎo)原則中也規(guī)定:如果草藥的活性成分不明，可以提供指紋圖譜以證明產(chǎn)品質(zhì)量的一致。
[0010]采用指紋圖譜對天然藥物進行質(zhì)量控制起源于國外。日本漢方藥主要生產(chǎn)企業(yè)在20世紀80年代就在企業(yè)內(nèi)部使用高效液相指紋圖譜控制質(zhì)量。歐共體也將指紋圖譜監(jiān)控技術(shù)應(yīng)用于植物藥質(zhì)量控制，德國對制藥公司所生產(chǎn)的銀杏葉制劑(EGb 761)進行高效液相色譜指紋圖譜研宄。美國FDA最近幾年制定的植物草藥指南中已經(jīng)明確把指紋圖譜作為這類混合物質(zhì)群的質(zhì)量控制方法。美國草藥藥典(AHP)已確定和發(fā)布了美國市場上流通的熱點植物藥和中藥如貫葉連翹、五味子、甘草等的TLC、HPLC指紋圖譜，為該類藥材的生產(chǎn)和應(yīng)用提供依據(jù)。國際上采用指紋圖譜對植物藥進行質(zhì)量控制的國家有韓國、日本、德國等，色譜指紋圖譜的質(zhì)量控制方法已經(jīng)得到了英國草藥典、印度草藥典、美國DFA、加拿大和德國藥用植物學(xué)會的認可。
[0011]指紋圖譜從進入我國開始就得到了大力的發(fā)展，2000年《中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗操作規(guī)程指南》的頒布實施表明我國正式推行中藥指紋圖譜，以此來控制中藥注射劑的質(zhì)量。廣大的科技工作者在實踐中不斷地探索、完善，實現(xiàn)了 “新技術(shù)”與“老傳統(tǒng)”的結(jié)合，在對中藥指紋圖譜質(zhì)量穩(wěn)定性的評判中，提出了相似度的概念，并總結(jié)出一整套計算方法，設(shè)計、開發(fā)出“計算機輔助中藥指紋圖譜相似度計算軟件”，使中藥色譜指紋圖譜作為質(zhì)量標準更加科學(xué)化。
[0012]由此可見，指紋圖譜已經(jīng)成為國際公認的控制中藥或天然藥物質(zhì)量的最有效手段。中藥指紋圖譜的研宄是對中藥質(zhì)量進行控制和監(jiān)督的有益探索，為中藥新藥的研宄提供了新的模式。開展中藥指紋圖譜的研宄是最終解決中藥質(zhì)量評價科學(xué)性的關(guān)鍵，為加快我國中藥及其制劑走向國際市場提供科學(xué)的依據(jù)和奠定堅實的基礎(chǔ)。
[0013]國內(nèi)外同類項目研宄存在的問題:目前中藥的指紋圖譜研宄僅僅停留在體外單純的“化學(xué)特征信息”的研宄，而中藥傳統(tǒng)的口服給藥形式?jīng)Q定了那些被吸收入血的物質(zhì)才能產(chǎn)生活性。且由于中