一種蛋白質(zhì)固定試劑及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種蛋白質(zhì)固定試劑及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 硝酸纖維素膜（NC膜）是一種疏水的膜材料，由于這種材料固定蛋白質(zhì)能力很強(qiáng)， 目前這種膜材已經(jīng)應(yīng)用于免疫診斷試紙條的開發(fā)，但由于這種膜材是疏水的，診斷試劑廠 家很難根據(jù)不同廠家的材質(zhì)進(jìn)行處理，并且處理操作非常麻煩、診斷試劑性能不一致，因此 希望購(gòu)買的NC膜經(jīng)過親水處理。所以現(xiàn)在市場(chǎng)上NC膜的生產(chǎn)廠家都推出經(jīng)親水處理的膜 材提供給免疫診斷試劑廠家用于生產(chǎn)。
[0003] 這種親水的NC膜是通過在NC膜內(nèi)添加大量的表面活性劑及親水大分子物質(zhì)來解 決NC膜的親水性問題。但是這種解決方法卻嚴(yán)重影響了 NC膜固定蛋白質(zhì)的能力。因?yàn)榈?白質(zhì)與NC膜的相互作用是一種非特異性吸附作用力，當(dāng)這些表面活性劑、大分子物質(zhì)封閉 了硝酸纖維素固定蛋白質(zhì)的非特異性吸附位點(diǎn)后，蛋白質(zhì)就難以吸附，導(dǎo)致蛋白質(zhì)固定不 牢固。當(dāng)NC膜固定的是超大分子的抗體時(shí)，抗體固定效果還比較穩(wěn)定，當(dāng)固定是一種比較 小的蛋白質(zhì)分子（如BSA、HAS等）時(shí)，這種蛋白質(zhì)就非常不牢固，很容易隨著層析液的流動(dòng) 而被沖走，從而導(dǎo)致診斷試條的測(cè)試結(jié)果非常不穩(wěn)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種蛋白質(zhì)固定試劑及其應(yīng)用，使其能夠提高 NC膜上蛋白質(zhì)固定效果，可以應(yīng)用于NC膜免疫診斷試紙條的制備中。
[0005] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[0006] 一種蛋白質(zhì)固定試劑，包括陽離子表面活性劑和陽離子型高分子聚合物中的一 種、緩沖液。
[0007] 針對(duì)現(xiàn)有的NC膜固定蛋白質(zhì)抗原效果不佳，致使免疫診斷結(jié)果不穩(wěn)定的缺點(diǎn)，本 發(fā)明提供了一種以陽離子表面活性劑或陽離子型高分子聚合物為主要成分的蛋白質(zhì)固定 試劑，其可以在制備NC膜免疫診斷試紙條中與相應(yīng)蛋白質(zhì)抗原一同作為試紙條上T(test) 線劃膜溶液，增強(qiáng)相應(yīng)蛋白質(zhì)抗原固定在NC膜上的效果，從而解決了檢測(cè)不穩(wěn)定的問題。 其中，所述相應(yīng)蛋白質(zhì)抗原視檢測(cè)和制備需求而確定，如為了制備尿微量白蛋白試紙條，相 應(yīng)蛋白抗原為人血清白蛋白，這種對(duì)應(yīng)關(guān)系對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是十分清楚的，相應(yīng)蛋白 質(zhì)抗原的工作濃度一般為0. 5mg/ml-5mg/ml，優(yōu)選為lmg/ml-2mg/ml。
[0008] 作為本發(fā)明的優(yōu)選，所述陽離子表面活性劑質(zhì)量百分含量為0. 005% -0. 1%，更 優(yōu)選為〇. 01% -〇. 05%，還可以從此范圍中選擇0. 02%、0. 03%或0. 04%。
[0009] 作為優(yōu)選，所述陽離子型高分子聚合物質(zhì)量百分含量為0.005% -0. 1%，更優(yōu)選 為0. 02% -0. 05%，還可以從此范圍中選擇0. 03%或0. 04%。
[0010] 作為優(yōu)選，所述緩沖液的濃度為〇· 005-0. lmol/L。
[0011] 作為優(yōu)選，所述緩沖液為磷酸緩沖液，更優(yōu)選為PH值7. 4的磷酸緩沖液。
[0012] 作為優(yōu)選，所述陽離子型高分子聚合物選自瓜爾膠、聚丙烯酰胺。
[0013] 作為優(yōu)選，所述陽離子表面活性劑選自季銨鹽類表面活性劑；更優(yōu)選地，所述季銨 鹽類表面活性劑為十六烷基三甲基溴化銨或十二烷基三甲基溴化銨。
[0014] 此外，為了更好地利于檢測(cè)，本發(fā)明所述固定試劑還包括蛋白質(zhì)保護(hù)劑，所述蛋白 質(zhì)保護(hù)劑選自蔗糖、海藻糖、麥芽糖等糖類物質(zhì)，質(zhì)量百分含量為〇. 5% -10%。
[0015] 與直接用相應(yīng)蛋白質(zhì)抗原劃膜溶液制備的NC膜免疫診斷試紙條相比，加入了本 發(fā)明所述固定試劑制備而成試紙條，其T(test)/C(control)面積比更大，說明T線固定的 蛋白質(zhì)抗原越牢固，跟流經(jīng)T線的樣本作用才越強(qiáng)烈，從而才使T/C面積比更大。同時(shí)，利 用本發(fā)明固定試劑制備的試紙條進(jìn)行多次檢測(cè)，其CV相比對(duì)照更好，結(jié)果更穩(wěn)定。
[0016] 基于此，本發(fā)明提供了本發(fā)明任意所述固定試劑在制備NC膜免疫診斷試紙條中 的應(yīng)用。
[0017] 同時(shí)，本發(fā)明還提供了一種NC膜免疫診斷試紙條的制備方法，用緩沖液稀釋蛋白 質(zhì)抗原，然后加入陽離子表面活性劑或陽離子型高分子聚合物，以此混合溶液作為T線劃 膜溶液劃膜，同時(shí)進(jìn)行C線化膜，劃膜完后的NC膜在烘箱中過夜烤干，獲得所述NC膜免疫 診斷試紙條。
[0018] 其中，所述緩沖液為磷酸緩沖液，更優(yōu)選為pH值7. 0-7. 4的磷酸緩沖液。
[0019] 作為優(yōu)選，所述緩沖液的濃度為0· 005-0. lmol/L。
[0020] 所述稀釋蛋白質(zhì)抗原為稀釋蛋白質(zhì)抗原終濃度至0. 5mg/ml-5mg/ml，更優(yōu)選為 lmg/ml_2mg/ml〇
[0021] 作為優(yōu)選，所述陽離子表面活性劑質(zhì)量百分含量為0.005% -0. 1%，更優(yōu)選為 0. 01% -0. 05%，還可以從此范圍中選擇0. 02%、0. 03%或0. 04%。
[0022] 作為優(yōu)選，所述陽離子型高分子聚合物質(zhì)量百分含量為0.005% -0. 1%，更優(yōu)選 為0. 02% -0. 05%，還可以從此范圍中選擇0. 03%或0. 04%。
[0023] 作為優(yōu)選，所述陽離子表面活性劑選自季銨鹽類表面活性劑；更優(yōu)選地，所述季銨 鹽類表面活性劑為十六烷基三甲基溴化銨或十二烷基三甲基溴化銨。
[0024] 本發(fā)明所述制備方法還包括加入蛋白質(zhì)保護(hù)劑，所述蛋白質(zhì)保護(hù)劑選自蔗糖、海 藻糖、麥芽糖等糖類物質(zhì)，質(zhì)量百分含量為0.5% -10%。
[0025] 由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明以陽離子表面活性劑或陽離子型高分子聚合物為主 要成分，配合緩沖液等組分組成了一種蛋白質(zhì)固定試劑，其能夠在NC膜免疫診斷試劑的制 備過程中，顯著改善NC膜固定蛋白質(zhì)抗原的能力，使得免疫診斷結(jié)果更加穩(wěn)定和準(zhǔn)確。
【具體實(shí)施方式】
[0026] 本發(fā)明公開了一種蛋白質(zhì)固定試劑及其應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi) 容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員 來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述產(chǎn)品已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn) 行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的的組合物和 應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0027] 本發(fā)明【具體實(shí)施方式】中所采用的NC膜如非特別說明，均為經(jīng)過親水化處理的市 售NC膜。
[0028] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0029] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所述蛋白質(zhì)固定試劑
[0030] (1)聚丙烯酰胺 0· 005%，ρΗ7· 4、0· 005mol/L 磷酸緩沖液；
[0031] (2)聚丙烯酰胺 0. 02%，pH7. 4、0.0 lmol/L 磷酸緩沖液；
[0032] (3)聚丙烯酰胺 0· 05%，ρΗ7· 4、0· 06mol/L 磷酸緩沖液；
[0033] (4)聚丙烯酰胺0· 1 %，ρΗ7· 4、0· lmol/L磷酸緩沖液。
[0034] 實(shí)施例2 :本發(fā)明所述蛋白質(zhì)固定試劑
[0035] (1)瓜爾膠 0· 005%，ρΗ7· 4、0· 008mol/L 磷酸緩沖液；
[0036] (2)瓜爾膠 0· 02%，ρΗ7· 4、0· 02mol/L 磷酸緩沖液；
[0037] (3)瓜爾膠 0· 05%，ρΗ7· 4、0· 08mol/L 磷酸緩沖液；
[0038] (4)瓜爾膠 0· 1 %，ρΗ7· 4、0· 09mol/L 磷酸緩沖液。
[0039] 實(shí)施例3 :本發(fā)明所述蛋白質(zhì)固定試劑
[0040] (1)十六烷基三甲基溴化銨0· 005%，ρΗ7· 0、0· 006mol/L磷酸緩沖液；
[0041] (2)十六烷基三甲基溴化銨0. 01%，pH7. 4、0. 03mol/L磷酸緩沖液；
[0042] (3)十六烷基三甲基溴化銨0. 05%，pH7. 4、0. 05mol/L磷酸緩沖液；
[0043] (4)十六烷基三甲基溴化銨0· 1%，ρΗ7· 4、0· lmol/L磷酸緩沖液。
[0044] 實(shí)施例4:蛋白質(zhì)固定效果對(duì)比
[0045] 對(duì)照組：Iml終濃度為2mg/ml的HAS (人血清白蛋白）溶液，未加其他任何試劑；
[0046] 實(shí)驗(yàn)組I :1ml包含聚丙烯酰胺0· 005%，ρΗ7· 4、0· 005mol/L磷酸緩沖液，終濃度為 2mg/ml的HAS的溶液，未加其他試劑；
[0047] 實(shí)驗(yàn)組2 :1ml包含聚丙烯酰胺0. 02%，pH7. 4、0.0 lmol/L磷酸緩沖液，終濃度為 2mg/ml的HAS的溶液，未加其他試劑；
[0048] 實(shí)驗(yàn)組3 :1ml包含聚丙烯酰胺(λ 05%，ρΗ7· 4、(λ 06mol/L磷酸緩沖液，終濃度為 2mg/ml的HAS的溶液，未加其他試劑；
[0049] 將上述實(shí)驗(yàn)組溶液作為MAU(尿微量白蛋白試條）的T(Test)線劃膜溶液， C(Control)線采用羊抗鼠溶液，所有實(shí)驗(yàn)組中C線劃膜溶液的配方都一致，然后進(jìn)行劃膜， 劃膜后在37°C烘箱中烘烤過夜，第二天把板取出，組裝成試劑卡進(jìn)行測(cè)試。每個(gè)實(shí)驗(yàn)組測(cè)試 2個(gè)樣本濃度，分別為0、200mg/L，測(cè)試原始值按照T/C面積比值進(jìn)行計(jì)算，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組每個(gè) 濃度重復(fù)測(cè)試10次，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1 :
[0050] 表 1
[0051]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種蛋白質(zhì)固定試劑，其特征在于，包括陽離子表面活性劑和陽離子型高分子聚合 物中的一種、緩沖液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，所述陽離子表面活性劑質(zhì)量百分含量 為 0? 005% -0? 1%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，所述陽離子型高分子聚合物質(zhì)量百分 含量為 〇? 001% -〇? 05%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，所述緩沖液為磷酸緩沖液、檸檬酸緩沖 液、醋酸緩沖液等。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，所述陽離子型高分子聚合物選自瓜爾 膠、聚丙烯酰胺。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，所述陽離子表面活性劑選自季銨鹽類 表面活性劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述固定試劑，其特征在于，所述季銨鹽類表面活性劑為十六烷基 三甲基溴化銨或十二烷基三甲基溴化銨。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述固定試劑，其特征在于，還包括蛋白質(zhì)保護(hù)劑，所述蛋白質(zhì)保護(hù) 劑選自蔗糖、海藻糖、麥芽糖、果糖等糖類物質(zhì)，質(zhì)量百分含量在〇. 5% -10%。
9. 權(quán)利要求1-8任意一項(xiàng)所述固定試劑在制備NC膜免疫診斷試紙條中的應(yīng)用。
10. -種NC膜免疫診斷試紙條的制備方法，其特征在于，用緩沖液稀釋蛋白質(zhì)抗原， 然后加入陽離子表面活性劑或陽離子型高分子聚合物，以此混合溶液作為T線劃膜溶液劃 膜，同時(shí)進(jìn)行C線劃膜，劃膜完后的NC膜在烘箱中過夜烤干，獲得所述NC膜免疫診斷試紙 條。
【專利摘要】本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體公開了一種蛋白質(zhì)固定試劑及其應(yīng)用。本發(fā)明所述固定試劑括陽離子表面活性劑和陽離子型高分子聚合物中的一種、緩沖液。本發(fā)明以陽離子表面活性劑或陽離子型高分子聚合物為主要成分，配合緩沖液等組分組成了一種蛋白質(zhì)固定試劑，其能夠在NC膜免疫診斷試劑的制備過程中，顯著改善NC膜固定蛋白質(zhì)抗原的能力，使得免疫診斷結(jié)果更加穩(wěn)定和準(zhǔn)確。
【IPC分類】G01N33-547
【公開號(hào)】CN104730236
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510181561
【發(fā)明人】劉偉, 聶海龍
【申請(qǐng)人】三諾生物傳感股份有限公司
【公開日】2015年6月24日
【申請(qǐng)日】2015年4月16日