例如，在氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀中，采用含碳數(shù)為ClO至C30的直鏈飽和烷烴進行保留時間校準；優(yōu)選的，進行保留時間校準時，根據(jù)正構烷烴保留時間的漂移反算出待測有機酸的漂移情況，如圖5所示。這樣，可得到樣品及其校準后的保留時間，從而能作為中間結果，提供給后續(xù)的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行尿液中的有機酸檢測。
[0047]優(yōu)選的，一個可行的應用是，進行保留時間校準之后，將樣品上機檢測。例如，將樣品在氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀上機檢測。這樣，整體上作為一種以原尿液輔以保留時間校準進行氣相色譜質(zhì)譜尿液的處理方法。
[0048]這樣，本發(fā)明屬于有機酸檢測之前的處理方法，具體涉及保留時間校準、采用原尿作為樣品，后續(xù)可通過氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行尿液有機酸檢測，以便使用原尿通過氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀進行尿液有機酸檢測，輔以保留時間校準等手段，以保證檢測結果的準確。
[0049]如圖2所示，本發(fā)明又一個實施例是，一種尿液的處理方法，其包括以下步驟:取含0.2毫克肌酐的原尿備用；加入尿素酶去除尿素后，加入內(nèi)標、定容；調(diào)整pH至12±0.2，加入鹽酸羥胺，反應后加入鹽酸中和；萃取，氮吹至干后，進行衍生化反應；進行保留時間校準。例如，在10至20攝氏度下氮吹至干；又如，在55至65攝氏度下氮吹至干。優(yōu)選的，還可采用惰性氣體進行吹干，例如，采用氬氣或者氪氣進行吹干，但是這樣成本偏高。又如，在室溫下采用氬氣進行吹干。優(yōu)選的，斜下多向氮吹至干，例如，吹氮氣時的角度為傾斜向下，兩個吹氮氣的出口角度為40至60度，優(yōu)選為45至50度，吹氮氣的速度根據(jù)經(jīng)驗或?qū)嶋H情況調(diào)整即可，這樣可獲得較好的干燥效果。又如，取含0.1毫克肌酐的原尿備用，以此類推。
[0050]下面再結合實際應用情況對本發(fā)明進行舉例說明，例如，一個具體的實施例包括以下步驟。
[0051]留取含0.2mg肌酐的尿液備用；然后，在37°C條件下，加入尿素酶去除尿素，30分鐘后加入內(nèi)標并定容至2.0ml ；
[0052]調(diào)PH = 12，加入鹽酸羥胺充分反應后，加入600ul鹽酸進行中和；
[0053]使用乙酸乙酯進行萃取后，在60 °C條件下氮吹至干，70 °C條件下加入BSTFA: TMCS (99:1)進行衍生化反應；
[0054]進行保留時間校準；優(yōu)選的，分別采用直鏈烷烴進行保留時間校準，例如，分別采用10至31個碳原子的直鏈烷烴進行保留時間校準。
[0055]最后得到待檢測的樣品及其校準后的保留時間，作用中間結果，例如輸出給實驗檢測人員；又如，傳輸樣品。優(yōu)選的，保留時間校準與之前的處理步驟同步執(zhí)行或者異地執(zhí)行，以便提尚處理效率。
[0056]優(yōu)選的，校準之后，樣品上機檢測。例如，進行有機酸檢測或者蛋白酶檢測等。
[0057]例如，又一個具體例子，其包括以下步驟。
[0058]I)利用紫外分光光度法測定尿液中的肌酐含量，留取含0.2mg肌酐的尿液備用；采用紫外分光光度計以紫外分光光度法測定尿液中的肌酐含量，可以快速得到較為準確的尿液中的肌酐含量。
[0059]2)加入30ul尿素酶(IKU)充分振蕩后，在37°C條件下，靜置30分鐘去除尿素，然后加入40ul內(nèi)標并定容至2.0ml ;例如，內(nèi)標中包括0.5mg/ml 3-羥基-2-苯基丙酸、
1.0mg/ml十七燒酸和0.5mg/ml 二十四燒。
[0060]3)調(diào)PH = 12，加入鹽酸羥胺充分反應后，加入濃度為37%的600ul鹽酸，充分振蕩，進行10分鐘酸堿中和；
[0061]4)使用6ml乙酸乙酯進行萃取后，在60°C條件下使用氮吹儀氮吹至至完全干燥，70°C條件下加入10ul的BSTFA: TMCS (99:1)進行30分鐘衍生化反應；
[0062]5)進行保留時間校準；可選的，執(zhí)行下一步驟；
[0063]6)樣品放在進行氣相色譜質(zhì)譜儀進行檢測。
[0064]下面對實際應用時的氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的儀器條件給出實例說明，以便對得到的樣品實施檢測操作。
[0065]1.GC部分條件
[0066]進樣方式:分流模式；
[0067]分流比:10:1;
[0068]進樣口溫度:280 °C;
[0069]升溫程序:100°C保持4分鐘，以4°C /分鐘的升溫速率升至280°C，保持11分鐘；
[0070]流量控制方式:恒線速度(柱內(nèi)平均線速度維持不變，色譜柱阻力變化時柱壓自動調(diào)整)；如圖3所示。
[0071]2.MS部分條件
[0072]離子源溫度:200°C ；
[0073]接口溫度:280 °C;
[0074]采樣方式:Scan ；
[0075]間隔:0.50s;
[0076]掃描速度:1000;
[0077]開始掃描離子質(zhì)荷比(m/z):50 ；
[0078]結束掃描離子質(zhì)荷比(m/z):500。
[0079]下面再給出一些具體應用的案例，例如，運用本發(fā)明的處理方法，得到的實際尿樣，在GC-MS儀器中進行檢測，結果如下:
[0080]1.甲基丙二酸的結果如圖6所示。
[0081]2.尿黑酸的結果如圖7所示。
[0082]3.戊二酸的結果如圖8所示。
[0083]4.鳥氨酸氨甲酰轉(zhuǎn)移酶的結果如圖9所示，其中顯示為乳清酸。
[0084]5.苯丙酮酸以及苯乳酸的結果如圖10所示。
[0085]6.異戊酰甘氨酸的結果如圖11所示。
[0086]7.支鏈氨基酸降解酶的結果如圖12所示，其中顯示為3-羥基丁酸與乙酰乙酸。
[0087]8.丙酸的結果如圖13所示，其中顯示為甲基枸櫞酸。
[0088]9.多種酰基輔酶A羧化酶的結果如圖14所示，其中包括乳酸、3-羥基丁酸、3-羥基異戊酸、甲基巴豆酰甘氨酸、3-甲基巴豆酰甘氨酸等。
[0089]由此可見，本發(fā)明的處理方法，得到的尿樣及其保留時間，作為中間結果，廣泛適用于氣相色譜質(zhì)譜方法以進行有機酸的檢測，并且由于保留時間得到校準，因此大大提升了檢測的準確程度，具有很強的實用價值。
[0090]進一步地，本發(fā)明的實施例還包括，上述各實施例的各技術特征，相互組合形成的尿液的處理方法。但需要說明的是，本發(fā)明所述處理方法，以離體樣品為對象，其直接目的不是獲得診斷結果或健康狀況，而只是對已經(jīng)脫離人體的尿液進行處理以獲取作為中間結果的樣品及其保留時間校準信息的方法，根據(jù)現(xiàn)有技術中的醫(yī)學知識和該專利申請公開的內(nèi)容從所獲得的信息本身不能夠直接得出疾病的診斷結果，還需要采用檢測儀器進行具體檢測。僅僅采用樣品及其保留時間校準信息，根據(jù)現(xiàn)有技術中的醫(yī)學知識，不能夠直接獲得疾病的診斷結果或健康狀況，還需要進一步檢測和試驗才能得到各種有機酸，作為后續(xù)判斷的參考。
[0091]可以理解的是，本發(fā)明的說明書及其附圖中給出了本發(fā)明的較佳的實施例，但是，本發(fā)明可以通過許多不同的形式來實現(xiàn)，并不限于本說明書所描述的實施例，這些實施例不作為對本
【發(fā)明內(nèi)容】
的額外限制，提供這些實施例的目的是使對本發(fā)明的公開內(nèi)容的理解更加透徹全面。并且，上述各技術特征繼續(xù)相互組合，形成未在上面列舉的各種實施例，均視為本發(fā)明說明書記載的范圍；進一步地，對本領域普通技術人員來說，可以根據(jù)上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬于本發(fā)明所附權利要求的保護范圍。
【主權項】
1.一種尿液的處理方法，其特征在于，包括以下步驟: 取若干原尿備用； 加入尿素酶去除尿素； 加入內(nèi)標、定容； 調(diào)整pH，加入鹽酸羥胺，反應后中和； 萃取，干燥后進行衍生化反應； 進行保留時間校準。
2.根據(jù)權利要求1所述處理方法，其特征在于，取含0.2毫克肌酐的原尿備用。
3.根據(jù)權利要求1所述處理方法，其特征在于，加入尿素酶去除尿素時，靜置預設時間后加入內(nèi)標。
4.根據(jù)權利要求3所述處理方法，其特征在于，靜置20至60分鐘后加入內(nèi)標。
5.根據(jù)權利要求4所述處理方法，其特征在于，靜置30分鐘。
6.根據(jù)權利要求1所述處理方法，其特征在于，調(diào)整pH至12±0.2。
7.根據(jù)權利要求1所述處理方法，其特征在于，反應后加入鹽酸中和。
8.根據(jù)權利要求1所述處理方法，其特征在于，采用乙酸乙酯進行萃取。
9.根據(jù)權利要求1至8任一所述處理方法，其特征在于，采用雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺以及三甲基氯硅烷作為衍生化試劑。
10.根據(jù)權利要求9所述處理方法，其特征在于，雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺與三甲基氯娃燒的比例為99:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種尿液的處理方法，其包括以下步驟：取若干原尿備用；加入尿素酶去除尿素；加入內(nèi)標、定容；調(diào)整pH，加入鹽酸羥胺，反應后中和；萃取，干燥后進行衍生化反應；進行保留時間校準。采用上述方案，發(fā)明采用原尿作為檢測對象，避免了干尿濾紙片法所導致的采樣不規(guī)范、尿液晾干時間過長、容易受到污染、容易發(fā)霉、洗脫率難以保證、定性準確性下降等問題，并且通過保留時間校準，適用于氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用方法，具有很強的實用價值。
【IPC分類】G01N30-06
【公開號】CN104569222
【申請?zhí)枴緾N201510047504
【發(fā)明人】孫智勇
【申請人】深圳愛灣醫(yī)學技術服務有限公司
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月29日