專利名稱：用偏振光散射技術(shù)篩選微觀細(xì)胞的方法和裝置的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明一般涉及一種用偏振光散射技術(shù)篩選具有選擇特性微觀細(xì)胞的方法和裝置。具體地說(shuō)，本發(fā)明用一種在上面鍵合有單克隆抗體的微球改變每一特定細(xì)胞的檢測(cè)特性，以便從一個(gè)細(xì)胞種群中鑒別出感興趣的細(xì)胞群的細(xì)胞來(lái)分析在所述細(xì)胞種群中感興趣的被遮蔽一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞群。
本發(fā)明一般涉及一個(gè)自動(dòng)分析器和使用該儀器來(lái)篩選生物細(xì)胞或成形體以進(jìn)行種群計(jì)數(shù)的方法，這種種群計(jì)數(shù)表征了一些我們用作研究、診斷、醫(yī)療或工業(yè)目的各種選擇特性。更具體地說(shuō)，體現(xiàn)本發(fā)明的一些自動(dòng)分析儀器和方法，獨(dú)特的將光學(xué)或光學(xué)和電子技術(shù)和選擇能力生物分子(如抗體)的特殊性結(jié)合起來(lái)，能夠?qū)?xì)胞或成形體篩選和選擇計(jì)數(shù)多部分分類細(xì)胞和成形體、分類細(xì)胞和成形體的功能表現(xiàn)型，在其他細(xì)胞中區(qū)分白血病、淋巴瘤或硬腫瘤細(xì)胞，用于這些細(xì)胞和成形體的篩選和選擇性計(jì)數(shù)。
采用柯?tīng)柼仉娮庸?Inc.ofHialean，F(xiàn)lorida)的COULTERCOUNTERA型可以成功地使自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)算器達(dá)到人體外周血液常規(guī)全血細(xì)胞(CBC)分析的自動(dòng)化。這種儀器的電子微粒檢測(cè)系統(tǒng)的原理在美國(guó)專利2656508(1953年10月20日頒發(fā)給WallaceH、Coulter)中有所公開(kāi)。這種柯?tīng)柼貦z測(cè)原理被發(fā)展和擴(kuò)大到更多采用先進(jìn)技術(shù)的儀器(例如COULTERCOUNTER(注冊(cè)商標(biāo))ModelS一些儀器)中，這些儀器借助于特殊計(jì)算機(jī)程序使CBC參數(shù)、絕對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)和形態(tài)、紅血細(xì)胞(RBC)形態(tài)、能夠解釋正常和異常血液樣品。
柯?tīng)柼仉娮游⒘Ｔ響?yīng)用了一個(gè)使用直流(DC)孔徑電源的孔徑檢測(cè)電路，這種微粒傳感器結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，非常穩(wěn)定可靠，美國(guó)和世界其他各地的臨床實(shí)驗(yàn)室大都普遍采用COULTERCOUNTER(注冊(cè)商標(biāo))自動(dòng)分析器就證明了這一點(diǎn)。這個(gè)基本的孔徑檢測(cè)電路一個(gè)改進(jìn)型在美國(guó)專利3502974(在1970年頒發(fā)給WallaceCoultter和WalterHogg)中已公開(kāi)。除了標(biāo)準(zhǔn)的直流孔徑電源外，還加了一個(gè)高頻孔徑電流，這使檢測(cè)一個(gè)用來(lái)進(jìn)行分類的附加參數(shù)成為可能。高頻孔徑電流產(chǎn)生一個(gè)信號(hào)，這個(gè)信號(hào)是血細(xì)胞內(nèi)部導(dǎo)電性和細(xì)胞體積的函數(shù)。同時(shí)由直流孔徑電路產(chǎn)生一個(gè)常規(guī)直流幅度信號(hào)，這個(gè)信號(hào)基本上指示了細(xì)胞體積。用一個(gè)高速除法電路將射頻振幅除以直流脈沖振幅，得到一個(gè)為細(xì)胞體積和內(nèi)部電阻的函數(shù)的商，通常稱之謂“濁度”。這個(gè)原理在美國(guó)專利3502973(1970年頒發(fā)給WallaceCoulter和WalterHogg)中進(jìn)一步公開(kāi)。這個(gè)濁度參數(shù)可以用于細(xì)胞分類系統(tǒng)。無(wú)論是單一孔徑還是一對(duì)分開(kāi)的孔徑都可用于這種用途。
不同種群的分類是通過(guò)核對(duì)所產(chǎn)生的一對(duì)信號(hào)的數(shù)據(jù)來(lái)完成的，一個(gè)測(cè)量微粒體積，而另一個(gè)測(cè)量細(xì)胞內(nèi)部的電阻率或濁度。表示該數(shù)據(jù)的一種方便形式稱為散點(diǎn)圖的二維圖形。這類圖形在FlowCytometryandsorting(MelamedMelaney，和Medelsohn編輯，JohnWiley父子公司1979版)371頁(yè)中有詳細(xì)說(shuō)明。
起初柯?tīng)柼仉娮游⒘z測(cè)原理用來(lái)對(duì)紅血細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，而后更完善的用來(lái)確定紅血細(xì)胞的其他一些參數(shù)。將紅血細(xì)胞從全外周血液中除去，只要除去紅血胞的過(guò)程并不顯著地?fù)p害所留下的待測(cè)白血細(xì)胞種群的性質(zhì)，就可著手對(duì)白血細(xì)胞(WBC)種群進(jìn)行分析。為此研制了各種紅血細(xì)胞的溶胞劑，這些溶胞劑雖然很有用，并且廣泛地使用著，但對(duì)于接著的白血細(xì)胞測(cè)定來(lái)說(shuō)并不是一切都令人滿意的。
上述的單獨(dú)用直流體積或用在各個(gè)角度上的光散射進(jìn)行白血細(xì)胞流動(dòng)分析的方法就顯示三簇白血細(xì)胞，分別相應(yīng)于淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒性白細(xì)胞，粒性白細(xì)胞包括嗜中性細(xì)胞、嗜堿性細(xì)胞和嗜酸性細(xì)胞種群。根據(jù)一些樣品對(duì)嗜酸性種群濃度進(jìn)行一個(gè)粗略而有用的估計(jì)。對(duì)于這種方法來(lái)說(shuō)，第五主要種群嗜堿性細(xì)胞相對(duì)說(shuō)來(lái)是太小了。采用專門的熒光技術(shù)也已觀察到一簇明顯的嗜酸性細(xì)胞種群。
在一外周血液涂片中發(fā)現(xiàn)異常時(shí)，免疫研究也是很重要的。為了針對(duì)白血病更好的選擇治療方法以及給病人提供一個(gè)盡可能明確的予后癥狀，必須確定白血病的特定的子型。例如，在急性白血病的情況，在外周血液中有胚胞優(yōu)勢(shì)，因?yàn)槿鄙俨顒e，把未成熟的細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞或粒性白細(xì)胞可能是困難的。如果發(fā)現(xiàn)這個(gè)胚胞子種群很快增殖是T11受體的舉止，這個(gè)白血病可能是一急性淋巴母細(xì)胞白血病，T-細(xì)胞型。通常T系A(chǔ)LL比B系A(chǔ)LL予后癥狀差，根據(jù)這些白血病之間的差別的大小進(jìn)一步把它們分組也是通常的。組Ⅰ和Ⅱ呈現(xiàn)出在早期的胸腺母細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)抗原，而組Ⅲ中表示抗原是類似于在成熟的T細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的表面抗原。對(duì)于病人予后癥狀和治療，有關(guān)在白血病的細(xì)胞上表現(xiàn)出的表面抗原這樣信息是有用的。
利用光學(xué)顯微鏡測(cè)定淋巴細(xì)胞子種群已初步改進(jìn)了免疫試驗(yàn)。1970年Coombs和其他人在人的淋巴細(xì)胞和綿羊紅血細(xì)胞之間觀察到玫瑰花結(jié)形態(tài)。后來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，在適當(dāng)條件下胸腺產(chǎn)生淋巴細(xì)胞(T-細(xì)胞)的所有的或至少一主要部分顯示出玫瑰花結(jié)形態(tài)。這些研究利用菲科爾分離淋巴細(xì)胞，并且在一定時(shí)間內(nèi)用光學(xué)顯微鏡對(duì)分離的淋巴細(xì)胞作常規(guī)的子種群分類。
目前，在一個(gè)帶有熒光示蹤單克隆抗體的樣品中，通常是用熒光標(biāo)記細(xì)胞來(lái)測(cè)定淋巴細(xì)胞的子種群的。熒光示蹤單克隆抗體結(jié)合到表達(dá)抗原的細(xì)胞的表面上有關(guān)抗原上。然后細(xì)胞樣品用一熒光顯微鏡或一個(gè)高度復(fù)雜的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器來(lái)分析。當(dāng)利用一個(gè)流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器時(shí)，細(xì)胞樣品的制備，數(shù)據(jù)采集和數(shù)據(jù)分析一定要由一專門培訓(xùn)的技術(shù)人員來(lái)完成。這種流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器包括一激光器和復(fù)雜的光學(xué)系統(tǒng)，一高效率計(jì)算機(jī)和電子及流體系統(tǒng)。這種流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器的各個(gè)分支系統(tǒng)必須適當(dāng)?shù)谋ｐB(yǎng)，定期和經(jīng)常校準(zhǔn)。雖然目前流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器是標(biāo)準(zhǔn)的淋巴細(xì)胞子種群測(cè)定方法，這個(gè)方法有如下缺點(diǎn)儀器的高成本，以及要求專家正確地操作這樣的儀器。
利用由本申請(qǐng)的受讓人(CoulterElectronics，Inc.)研制的自動(dòng)化儀器和方法也能測(cè)定淋巴細(xì)胞的子種群。在1990年9月20日申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)587646(名稱為“AutomatedAnalyserandMethodForscreeningCellsorFormedBodiesForEnumerationofPopulationsExpressingSelectedCharacteristics”它是同樣名稱的美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?25345，申請(qǐng)日1987年3月13日的后續(xù)申請(qǐng))中公開(kāi)了一個(gè)改進(jìn)的簡(jiǎn)單自動(dòng)儀器和使用該儀器方法。這篇申請(qǐng)結(jié)合了電子檢測(cè)原理的申請(qǐng)、對(duì)鑒別和/或計(jì)數(shù)確定的細(xì)胞或形成體的種群的選擇的生物分子的特異性、以及顯微顆粒技術(shù)。這種自動(dòng)分析儀器可以與專門的溶胞試劑和/或鍵合到顯微球體或各種組份的支持體上的抗體一起使用。
第二個(gè)申請(qǐng)(美國(guó)專利申請(qǐng)285856，申請(qǐng)日1988年12月16日，名稱“MethodandApparatusForscreeningCellsorFormedBodieswithPopulationsExpressingSelectedCharacteristics)公開(kāi)了從全血樣品或它的一部分中直接篩選子種群。
第三個(gè)申請(qǐng)(1989年4月14日申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)339156，名稱MethodandApparatusForScreeningCellsorFormedBodieswithPopulationsExpressingSelectedCharacteristicsUtilizingATLeastOnesensingParameter)公開(kāi)了從全血樣品或從通過(guò)種群和/或子種群消除來(lái)除去紅血細(xì)胞和/或白血細(xì)胞種群的一個(gè)樣品中用一個(gè)或多個(gè)光學(xué)或電子參數(shù)來(lái)完成多部分或五部分白血細(xì)胞分類計(jì)數(shù)淋巴細(xì)胞子種群和重疊的測(cè)定。
第四個(gè)申請(qǐng)(1990年5月17日申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)07/525231，名稱“MethodandApparatusForScreeningObscuredorPartiallyObscuredCalls)公開(kāi)了用結(jié)合有專用單克隆抗體的微球體把被遮蔽細(xì)胞的檢測(cè)特性從散布圖上的一細(xì)胞種群區(qū)域移動(dòng)到另一區(qū)域來(lái)分析一被遮蔽細(xì)胞，結(jié)合上述四個(gè)提到申請(qǐng)?jiān)诖俗鲄⒖肌?br> 在美國(guó)專利申請(qǐng)025442(1987年3月13日申請(qǐng)，是1987年12月4日申請(qǐng)129954的后續(xù)申請(qǐng)，兩者名稱“Multi-PartDifferentialAnalyzingApparatusUtilizinglightScatterTechninques”)公開(kāi)了一個(gè)改進(jìn)的分析血液學(xué)的儀器和儀器的使用方法，也結(jié)合作為參考。這種所謂VCS血液學(xué)儀器用光散射和電子檢測(cè)技術(shù)獲得淋巴細(xì)胞(L)WBC種群的多部分區(qū)分。但是，這個(gè)血液學(xué)儀器不能完成L子種群區(qū)分，因?yàn)樵贚種群中這樣的子種群被遮蔽。
另一個(gè)有關(guān)的申請(qǐng)(1990年11月23日申請(qǐng)，申請(qǐng)?zhí)?17075，名稱“MethodandApparatusForScreeningMicroscopicCellsUtilizinglightScatterTechniques)利用光散射技術(shù)獲得L子種群和重疊子種群測(cè)定，也結(jié)合作本文的參考。
通過(guò)使微細(xì)顆粒有選擇地附著在一種細(xì)胞種群的每個(gè)細(xì)胞上，可以使決定至少一個(gè)種群的原始位置的參量發(fā)生改變。把很多微細(xì)顆粒加到選定的靶種群的每一個(gè)細(xì)胞上，這種附加物影響測(cè)量的體積和/或濁度值，從而使在描述一個(gè)種群的散點(diǎn)圖上的點(diǎn)的位置發(fā)生改變。
把已知特異性的抗體用在涂覆微細(xì)顆粒中，這個(gè)涂層能賦予顆粒有選擇地附著到那些能表現(xiàn)出對(duì)該抗體有特異性的抗原細(xì)胞上。這些涂覆過(guò)的細(xì)胞或標(biāo)記細(xì)胞是顆粒和細(xì)胞的組合體，它們表現(xiàn)類似一個(gè)新的實(shí)體?？梢园阉鼈兊臐岫?、體積或者濁度和體積二者一起組合參量認(rèn)為是代表細(xì)胞和顆粒二者對(duì)所測(cè)得信號(hào)影響的總和。如果這些組分的特性是不同的，那么新的實(shí)體就根據(jù)凈的影響在散點(diǎn)圖上移到一個(gè)新的位置。將這個(gè)新的位置與單獨(dú)細(xì)胞的原來(lái)位置對(duì)照就可以對(duì)這樣的一個(gè)新實(shí)體或新實(shí)體組進(jìn)行分類。如果這些附著到細(xì)胞上的顆粒是磁性的，根據(jù)現(xiàn)在的實(shí)際情況，那么就可以采用磁鐵來(lái)捕獲這些新實(shí)體，如果迅速地?cái)嚢?，就?huì)產(chǎn)生出人意料的效果，即能完全捕獲一個(gè)種群，而又沒(méi)有損害在研究中的細(xì)胞性質(zhì)發(fā)生。
利用前面提到的種群的DC體積和濁度參量的固有的和唯一的性質(zhì)，只能容易地從一個(gè)血樣中鑒別和計(jì)數(shù)出三種明顯不同種群的細(xì)胞。為了能對(duì)更多的種群進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)，必須采用一些例如改進(jìn)溶解系統(tǒng)等附加的步驟。當(dāng)然，這些額外的種群是代表三個(gè)基本種群的子種群，它們分別被稱為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞和粒狀白細(xì)胞，在上述引證的專利申請(qǐng)的操作步驟中描述了如何獲得這三個(gè)基本種群的子種群。
利用這種與兩個(gè)或多個(gè)生物顆粒相結(jié)合的簡(jiǎn)單的孔檢測(cè)技術(shù)可獲得一個(gè)獨(dú)特和新穎的代表一個(gè)給定種群的點(diǎn)簇的位置。一些種群在點(diǎn)圖象或散點(diǎn)圖上的選擇性位移是可以重現(xiàn)的，因此可以用于把一個(gè)種群從三個(gè)基本種群中區(qū)分開(kāi)來(lái)。
通過(guò)把微顆粒附到選定的各個(gè)細(xì)胞上，可以使原來(lái)的和固有的DC體積和濁度檢測(cè)技術(shù)的組合得到改進(jìn)。選擇性是由生物分子，尤其是抗體的本性或特異性賦予顆粒的，這些生物分子被用作顆粒表面的涂料，如果一個(gè)單個(gè)細(xì)胞種群，而在細(xì)胞表面上沒(méi)有顆粒，那么這個(gè)種群可能和其它一些種群或子種群無(wú)區(qū)別地占據(jù)一個(gè)點(diǎn)圖位置，因而使這些種群不可能相互區(qū)分開(kāi)。通過(guò)這一途徑可以把具有選擇引力的顆粒附著到要試圖鑒別、計(jì)數(shù)和研究的一個(gè)特定細(xì)胞種群上。通過(guò)把足夠量的選擇顆粒有選擇的加到感興趣的性質(zhì)不同的種群上，可以使這個(gè)種群的散點(diǎn)圖的位置根據(jù)每個(gè)細(xì)胞的新的唯一的質(zhì)量、體積和濁度的組合結(jié)果而移動(dòng)。
本發(fā)明的具體化的方法和裝置可以用于各種免疫反應(yīng)，例如包括有反應(yīng)試劑和形成體或細(xì)胞的免疫反應(yīng)中。本發(fā)明還可用于分析形成體的懸浮液，例如，細(xì)菌和其中的病毒。在此使用的細(xì)胞定義為動(dòng)物或植物細(xì)胞，包括細(xì)胞質(zhì)狀的細(xì)菌、真菌，它們可以單獨(dú)鑒別或在聚集中鑒別。細(xì)胞是能夠作為一個(gè)獨(dú)立單位起作用的生命物質(zhì)的最低等結(jié)構(gòu)聚集體。例如，細(xì)胞可以是人類的紅血細(xì)胞和白紅細(xì)胞種群，在組織上或血液樣品中的癌細(xì)胞或其它異常細(xì)胞。形成體被定義為某些細(xì)菌和病毒。可以予料，這些被用適宜的方法標(biāo)記或示蹤的細(xì)胞和形成體當(dāng)然可以借助于采用和人類血液例子的方式的本發(fā)明的方法和裝置用光學(xué)方法鑒別出。
雖然“試劑”一詞在上述的那些申請(qǐng)中已經(jīng)被限定為溶胞劑和單克隆抗體，但是這些試劑可以包括能檢測(cè)和與一個(gè)或多個(gè)特定分子反應(yīng)的各種試劑，這些特定的分子處在細(xì)胞或形成體的表面上。見(jiàn)下面的例子試劑特定的分子抗體抗原藥品藥品受體激素激素受體生長(zhǎng)因子生長(zhǎng)因子受體這些試劑偶聯(lián)或結(jié)合到細(xì)胞的特定分子上。這些試劑確定構(gòu)成了化學(xué)反應(yīng)的一部分;然而這些試劑未必發(fā)生化學(xué)變化。
一種用于完成篩選被一細(xì)胞種群，例如WBC種群的一種或多種感興趣的子種群，遮蔽的感興趣的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞群的方法和裝置。利用上面結(jié)合有單克隆抗體微球改變特異細(xì)胞的檢測(cè)特性，以便從遮蔽的細(xì)胞種群中區(qū)分出感興趣的細(xì)胞群來(lái)計(jì)數(shù)感興趣的細(xì)胞群。
為了提供一個(gè)感興趣的WBC子種群體的期望分析結(jié)果，可以對(duì)一個(gè)全血樣品或其一部分進(jìn)行篩選。把該樣品一部分同上面結(jié)合有對(duì)感興趣的WBC子種群是特異的單克隆抗體的微球相混合，以便使微球結(jié)合到感興趣的細(xì)胞上，從而使該細(xì)胞的檢測(cè)特性移位。然后再至少用兩個(gè)檢測(cè)參量對(duì)含有感興趣的WBC子種群的樣品部分進(jìn)行檢測(cè)，這兩個(gè)參量有一個(gè)是偏振光檢測(cè)參量，再使感興趣的WBC子種群的特性充分地移位，以便能直接測(cè)量感興趣的子種群。還可以對(duì)重疊的細(xì)胞種群進(jìn)行分析;可以使兩個(gè)感興趣細(xì)胞群同時(shí)移位。
首先測(cè)量樣品的一部分，然后再貧化其中特異性的細(xì)胞，以便能在一個(gè)區(qū)域內(nèi)檢測(cè)該感興趣的細(xì)胞群，否則在上述區(qū)域內(nèi)，該感興趣細(xì)胞群被貧化細(xì)胞遮蔽。再對(duì)這份樣品進(jìn)行測(cè)量，然后同第一次測(cè)量結(jié)果相比較，從而區(qū)分出感興趣的細(xì)胞群，在一個(gè)全血樣品中，感興趣的細(xì)胞群是在另一狀態(tài)下被WBC的一個(gè)細(xì)胞種群遮蔽的感興趣的WBC的子種群。
為此，本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種在具有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的細(xì)胞樣品的至少一部分中分析出至少一個(gè)感興趣的細(xì)胞群的方法，其特征在于為了把上述細(xì)胞群的檢測(cè)特性從遮蔽細(xì)胞種群的檢測(cè)特性中移出，而改變?cè)诘谝粯悠凡糠种辽俚谝贿x擇感興趣細(xì)胞群的檢測(cè)特性;借助于至少一個(gè)偏振光參量對(duì)該第一樣品部分進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)，以便獲得該選擇的感興趣的細(xì)胞群所占的百分率。
本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一個(gè)用于在具有至少一種遮蔽細(xì)胞種群的細(xì)胞樣品的至少一部分中分析出至少一個(gè)感興趣細(xì)胞群的裝置，其特征在于包括為了把該細(xì)胞群的檢測(cè)特性從遮蔽細(xì)胞種群的檢測(cè)特性中移出而使在第一樣品部分中的至少第一感興趣選擇細(xì)胞群的檢測(cè)特性發(fā)生改變的裝置;為獲得該選擇的感興趣的細(xì)胞群所占的百分率而采用至少一個(gè)偏振光參量對(duì)該第一樣品部分進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)的裝置。
本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種在具有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的細(xì)胞樣品的至少一部分中分析出至少一個(gè)感興趣細(xì)胞群的方法，其特征在于包括借助于至少一個(gè)偏振光參量對(duì)第一樣品部分檢測(cè)和計(jì)數(shù)，把該遮蔽細(xì)胞種群從第二樣品部分中分離出，借助于至少一個(gè)偏振光參量對(duì)該第二樣品部分進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)，以及把這二個(gè)計(jì)數(shù)相比較，從而獲得該感興趣的被遮蔽細(xì)胞組所占的百分率。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一個(gè)用在具有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的細(xì)胞樣品的至少一部分中分析出至少一個(gè)感興趣細(xì)胞組的裝置，其特征在于包括借助于至少一個(gè)偏振光參量對(duì)第一樣品部分進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)的裝置;使遮蔽著的細(xì)胞種群從第二樣品部分中分離出的裝置;借助至少一個(gè)偏振光參量對(duì)該第二樣品部分進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)的裝置;以及為獲得該感興趣的被遮蔽的細(xì)胞群所占的百分率而使這兩個(gè)計(jì)數(shù)相比較的裝置。
下面參考說(shuō)明書(shū)的附圖，通過(guò)舉例來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施例，這些附圖是

圖1是本發(fā)明的一個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖2是本發(fā)明的第二個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖3是本發(fā)明的一個(gè)具體的分析裝置實(shí)施例;
圖4是本發(fā)明的一個(gè)偏振檢測(cè)器的結(jié)構(gòu);
圖5A-6D是說(shuō)明本發(fā)明為測(cè)得一個(gè)感興趣的WBC子種群的技術(shù)的散點(diǎn)圖;
圖7A-7C是利用不同的檢測(cè)參量測(cè)得的感興趣WBC子種群的散點(diǎn)圖;
圖8A-9D是根據(jù)本發(fā)明采用兩個(gè)相同尺寸的微球體而測(cè)得的散點(diǎn)圖;
圖10是本發(fā)明為測(cè)定重疊的子種群的另一個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖11是本發(fā)明為測(cè)定被遮蔽細(xì)胞的一個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖12是本發(fā)明為測(cè)定被遮蔽細(xì)胞的另一篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖13是本發(fā)明為同時(shí)分析兩個(gè)感興趣細(xì)胞群的一個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例的示意方塊圖;
圖14是本發(fā)明用于同時(shí)分析兩個(gè)感興趣細(xì)胞群的第二個(gè)篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例示意方塊圖。
在圖1中，用數(shù)字(10)代表本發(fā)明的整個(gè)第一篩選細(xì)胞分析裝置實(shí)施例。該分析裝置(10)包括至少包含有一個(gè)第一組細(xì)胞或細(xì)胞種群(未示出)的樣品(12)，當(dāng)按照如下所述的分析時(shí)，這個(gè)細(xì)胞種群遮蔽著一個(gè)感興趣的細(xì)胞組，例如一個(gè)子種群或第二組細(xì)胞。樣品(12)可以包含一種細(xì)胞加到其中的緩沖劑。
樣品(12)或其一部分經(jīng)管路(14)同經(jīng)過(guò)管路(18)的至少一個(gè)試劑(16)混合。感興趣細(xì)胞群的那些細(xì)胞中至少一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞特性在移位細(xì)胞群部位(20)被改變或移位。將感興趣細(xì)胞群的細(xì)胞檢測(cè)特性充分地改變或移位，直至使細(xì)胞的特性從遮蔽細(xì)胞種群的檢測(cè)細(xì)胞特性中移出。
試劑(16)可以是或可以包括很多上面結(jié)合有對(duì)感興趣細(xì)胞群特異性的抗體的微球。試劑(16)和樣品部分(12)最好是一起攪拌，以便提高微球?qū)Ω信d趣細(xì)胞群的結(jié)合。通常是采用把微球涂覆到感興趣細(xì)胞組的每個(gè)細(xì)胞上的方法來(lái)使很多微球結(jié)合到感興趣細(xì)胞群的每個(gè)細(xì)胞上，這個(gè)情況使感興趣細(xì)胞群每個(gè)細(xì)胞的最后的檢測(cè)特性改變或移位。然后把樣品部分(12)經(jīng)管路(24)輸送到分析器(22)中。分析器(22)至少對(duì)樣品部分(12)中的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)算數(shù)目。分析器(22)包括至少一個(gè)但最好是兩個(gè)檢測(cè)參量，至少其中的一個(gè)是偏振光參量，這將在下面進(jìn)一步描述。
在圖2中，用數(shù)字(30)代表本發(fā)明的第二個(gè)篩選細(xì)胞分析器的具體裝置。分析儀器(30)包括一個(gè)生物樣品(32)，該樣品至少包括一個(gè)第一組生物細(xì)胞(未示出)，例如是在一個(gè)全血樣品中的生物細(xì)胞或來(lái)自一個(gè)全血樣品的生物細(xì)胞。生物樣品(32)的那些細(xì)胞是被卷入到定量和/或定性測(cè)定或分析的一個(gè)生物反應(yīng)中。生物樣品(32)至少包括一個(gè)WBC種群，這個(gè)WBC種群遮蔽一個(gè)感興趣的WBC子種群。樣品(32)還可以包括一種細(xì)胞加到其中的緩沖劑。
按照在此處的應(yīng)用，WBC子種群可以是使特異的單克隆抗體結(jié)合到上面WBC種群的子種群。單克隆抗體這一術(shù)語(yǔ)現(xiàn)已被世界衛(wèi)生組織和國(guó)際免疫學(xué)會(huì)確定。單克隆抗體被定義為由一集合代號(hào)為(CD)的術(shù)語(yǔ)，它確定為對(duì)一個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群所具有的特定特異性以及對(duì)CD群細(xì)胞有特異性的單克隆抗體。僅以舉例為目的，在下述例子中用了三個(gè)CD組，即CD2、CD1和CD8，單克隆抗體的CD術(shù)語(yǔ)，特異性和某些商品來(lái)源列在表2中。
表1分化群抗體(商品來(lái)源)b特異性CD2(gp50)aT11(Coulter) EROssetteOKT11(ortho);Leu5a(BD)受體CD4(gp56)T4(Coulter)輔助物/誘導(dǎo)物TOKT4a(ortho);Leu3a(BD)CD8(gp32-33)T8(coulter)胞毒/壓制基因TOKT8(ortho);Leu2a(BD)ayp-糖蛋白,分子量以干道爾頓計(jì)。
b coulter-Coulter公司Coulter免疫部(Hialeah,Florida)BD-Becton-Dickinson免疫測(cè)量系統(tǒng)ortho-ortho診斷系統(tǒng)(Raritan,New Jersey)將樣品(32)或其一部分經(jīng)管路(34)同經(jīng)管路(38)的至少一個(gè)試劑(36)混合，然后借助指定用作紅血細(xì)胞(RBC)除去部位(40)將紅血細(xì)胞從混合物分離出去?？梢杂酶鞣N方式借助于部位(40)把紅血細(xì)胞從混合物中分離出來(lái)?？梢杂迷噭?36)中一溶胞劑來(lái)溶胞RBC。在1987年12月10日申請(qǐng)的名為“用于從全血樣品中分離、鑒別和/或分析白血病的方法和指示劑系統(tǒng)”的美國(guó)專利申請(qǐng)No130911中描述了這樣的一個(gè)可用的合適的溶胞劑和誶滅劑，這兩者可以同時(shí)采用。這篇申請(qǐng)是1987年3月13日申請(qǐng)的相同名稱的No025303的后續(xù)申請(qǐng)，它們都被作為本申請(qǐng)的參考文件而被引證。試劑(36)可以是或可以包括很多磁性微球(未標(biāo)出)，該微球上面帶有對(duì)紅血細(xì)胞有特異性的抗體。在名稱為“用于回收在人的周邊血液中的白血細(xì)胞的單克隆抗體和回收使用的所述單克隆抗體的方法”美國(guó)專利No4752563中描述了這個(gè)例子中使用的特殊紅血細(xì)胞的特異抗體，這篇專利申請(qǐng)被作為參考文件引證。除了樣品緩沖劑外試劑(36)還可包括一個(gè)緩沖劑，或代替樣品的緩沖劑。而且，試劑(36)最好是紅血細(xì)胞溶胞劑和紅血細(xì)胞的特異微球的結(jié)合。
當(dāng)紅血細(xì)胞基本上以樣品部分的混合物中除去以后，就把這混合物的一部分輸送到子種群的移位部位(42)。例如在分析裝置(10)中那樣，為了使感興趣的白血細(xì)胞子種群的檢測(cè)特性從遮蔽白血細(xì)胞種群的檢測(cè)細(xì)胞特性移出去，這個(gè)感興趣的白血細(xì)胞子種群應(yīng)該在部位(42)中使至少一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生改變或移位。
此外，試劑(36)可以是或可以包括很多微球，該球上結(jié)合有對(duì)感興趣的白血細(xì)胞子種群有特異性的抗體。試劑(36)和樣品部分(32)最好一起攪拌，以便增強(qiáng)微球和白血細(xì)胞子種群的結(jié)合。使很多微球結(jié)合到感興趣的白血球子種群的每一個(gè)細(xì)胞上。把微球涂覆到每個(gè)細(xì)胞上，可以使感興趣的白血細(xì)胞子種群的每一個(gè)細(xì)胞的合成的檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生改變或移位。
然后將該樣品部分輸送到分析器(44)，這個(gè)分析器與分析器(22)相同，能利用至少一個(gè)偏振參量對(duì)樣品部分(32)中的細(xì)胞至少能進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)。
一個(gè)實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的以及能完成第一和第二分析裝置(10)和(30)的分析方法具體的分析儀器實(shí)施例在圖3中用代號(hào)(50)來(lái)代表。
在儀器(50)中，只列舉一個(gè)具體的數(shù)字，根據(jù)本發(fā)明的原理，它的部件幾乎可以做無(wú)窮的改變。而且儀器(50)示出了一般的功能細(xì)節(jié)，而具體的實(shí)施例可以用很多已知的方法來(lái)進(jìn)行結(jié)構(gòu)上的改進(jìn)。
儀器(50)包括一個(gè)吸氣泵裝置(52)，它被用于抽吸感興趣的細(xì)胞樣品，例如把樣品(12)或(32)抽到儀器(50)中，吸氣泵(52)經(jīng)管路(53)與一個(gè)取樣閥(54)相連接，這個(gè)閥可以接到一個(gè)取樣管(55)上。稀釋劑泵(56)可以包含稀釋劑或緩沖劑溶液，并可以經(jīng)管路(58)與閥(54)相連接。根據(jù)需要，閥(54)和泵(52)可以使樣品(12)或(32)與經(jīng)過(guò)泵(56)的稀釋劑一起抽入。
然后將反應(yīng)混合物或細(xì)胞樣品本身經(jīng)一個(gè)排放管路(60)輸入到一個(gè)混合裝置(66)中，混合裝置(66)包括一個(gè)接收輸入樣品或試劑的混合容器(68)。紅血細(xì)胞將被來(lái)自溶胞劑泵(62)的溶胞劑溶解，然后經(jīng)管路(64)輸送到容器(68)。在反應(yīng)完成后，經(jīng)管路(72)從部位(70)提供一個(gè)誶滅(劑)和固著劑。這個(gè)反應(yīng)可以通過(guò)使溶胞劑和/或誶滅劑同樣品在混合容器(68)中的混合來(lái)加速完成，這正如在(74)的功能說(shuō)明中所描述的那樣。
在1987年3月13日申請(qǐng)的美國(guó)專利申請(qǐng)No025337和1990年5月1日申請(qǐng)的No517309(它是前一申請(qǐng)的接續(xù)申請(qǐng))名稱均為“用于促進(jìn)生物反應(yīng)小體積迅速混合的方法和裝置”的申請(qǐng)中，描述了可使用適當(dāng)?shù)幕旌掀?66)的具體細(xì)節(jié)。這兩篇申請(qǐng)作為參考文件被引證。由于采用混合器(66)而使反應(yīng)速度大大加快，并且沒(méi)有明顯損害感興趣細(xì)胞的性質(zhì)，例如由于提高反應(yīng)溫度可能出現(xiàn)的損害。此外，這個(gè)反應(yīng)是在顯著縮短的時(shí)間內(nèi)完成的，通常在2分鐘或更短的時(shí)間內(nèi)完成。這樣就適合于自動(dòng)的高容量分析儀器(50)迅速地進(jìn)行分析。
把經(jīng)過(guò)溶胞劑分離出RBC的誶滅過(guò)的樣品部分經(jīng)管路(76)直接輸送到白血細(xì)胞分析器(78)[(即分析器(22)或(44)]。該樣品部分直接輸送到分析器(78)，在那里從該樣品中首先測(cè)得一個(gè)參考或非移位的數(shù)據(jù)，以便供后面的參考或比較時(shí)用。分析器(78)可以是根據(jù)由wallaceH.Coulter在美國(guó)專利No2656508中描述的和體現(xiàn)在受讓人(CoulterElectronies.Inc)的眾多的市售血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中的計(jì)數(shù)和分粒技術(shù)而設(shè)計(jì)的很多實(shí)際類型。
分析器(78)通常包括一流動(dòng)細(xì)胞型的檢測(cè)池(80)，流動(dòng)池(80)包括至少一個(gè)偏振光檢測(cè)器，最好還包括一個(gè)電子學(xué)檢測(cè)器。流動(dòng)池(80)是由任何光學(xué)透明材料制成，例如熔凝硅石或石英。流動(dòng)池(80)包括一個(gè)變窄的水縮的孔徑(82)，樣品部分用公知方式形成的流體力學(xué)流的作用下，通過(guò)該孔徑。流動(dòng)池(80)包括一個(gè)為使偏振的電磁光能束(84)聚焦的光學(xué)平板表面，最好是使用來(lái)自激光源(86)的激光束經(jīng)過(guò)透鏡系統(tǒng)(88)聚集在孔徑(82)中的斑點(diǎn)上。在單個(gè)的細(xì)胞通過(guò)孔徑(82)時(shí)，由這些細(xì)胞使光散射，因此，光束(84)由偏振光檢測(cè)器裝置(90)檢測(cè)出，這將結(jié)合圖4描述。
流動(dòng)池(80)還包括電子檢測(cè)電路。流動(dòng)池(80)包括一個(gè)具有同在池中流體接觸的第一電極(92)的第一部分(91)。
流動(dòng)池容器部分(91)和電極(92)經(jīng)孔(82)與在該容器中具有一個(gè)第二電極(98)的第二容器部分(96)相連接。電極(92)和(98)經(jīng)過(guò)電抗導(dǎo)線(100)和(102)連接到一個(gè)RF/DC電源和檢測(cè)電路(104)。電路(104)既同DC或低頻電流或信號(hào)相耦合，又同在電極(91)和(98)之間的高頻信號(hào)相耦合。
低頻信號(hào)被用于檢測(cè)在細(xì)胞通過(guò)孔(82)時(shí)引起的信號(hào)脈沖幅度。高頻信號(hào)被用于測(cè)得由同一細(xì)胞通過(guò)孔(82)時(shí)的電子學(xué)濁度。
測(cè)量細(xì)胞的電子學(xué)濁度的方法由WallaceHCoulter和WalterRHogg在美國(guó)專利3502974中和受讓人(CoulterElectroniesInc)的幾份專利和自其以后的出版物中作了描述。在名稱為“用于測(cè)量一個(gè)顆粒的電阻和電抗的顆粒分析裝置”美國(guó)專利4791355中描述了在此應(yīng)用的一個(gè)具體電路。該專利被引證為本發(fā)明的參考文件。
由來(lái)自被檢測(cè)細(xì)胞的電路(104)產(chǎn)生的信號(hào)經(jīng)DC信號(hào)導(dǎo)線(106)和射頻信號(hào)導(dǎo)線(108)耦合到比較器(110)中。比較器(110)能夠保持從樣品的各部分產(chǎn)生的信號(hào)，即為了同來(lái)自待描述的其它樣品各部分的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較。比較器(110)還可以包括經(jīng)來(lái)自光學(xué)檢測(cè)裝置(90)經(jīng)導(dǎo)線(112)的一個(gè)光學(xué)檢測(cè)輸入或多個(gè)光學(xué)檢測(cè)輸入。
分析器(78)包括一個(gè)能按公知方式使細(xì)胞匯聚在流動(dòng)池(80)中的鞘流，該鞘流可以按公知的方法由一個(gè)射流系統(tǒng)(114)提供，通過(guò)一對(duì)管路(116)和(118)聯(lián)接到流動(dòng)池(80)。樣品反應(yīng)混合物可以經(jīng)一個(gè)導(dǎo)管(120)輸送到流動(dòng)池(80)，然后可以經(jīng)一個(gè)出口管(122)從流動(dòng)池(80)中輸送到廢液容器(124)中。
當(dāng)混合物的第一部分在分析器(78)中已經(jīng)進(jìn)行分析時(shí)，可以經(jīng)沖洗管路(126)清洗或沖洗混合器(56)，并經(jīng)過(guò)排廢管(128)排出。接著可以把第二樣品部分輸送到容器(68)，以便使該樣品中的細(xì)胞的檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生改變或移位。另一方面可以使改變的樣品部分先輸送到容器(68)中，而不首先測(cè)定第一非移位或標(biāo)準(zhǔn)樣品部分的數(shù)據(jù)。通過(guò)從部位(130)經(jīng)管路(132)、閥(134)和容器管路(136)把WBC微球加入到容器(68)中和該樣品部分混合，使WBC或其它的感興趣細(xì)胞組移位。
利用攪拌器(74)使WBC微球同第二樣品部分混合。為了移位，將WBC微球與含有結(jié)合WBC微球的反應(yīng)混合物經(jīng)管路(76)輸送到分析器(78)(即分析器(22)或(44))中，對(duì)其中的第二樣品部分按類似第一部分的方法進(jìn)行分析，然后把所得的那些數(shù)據(jù)在比較器(110)中進(jìn)行比較。使第二樣品部分的至少一個(gè)WBC子種群細(xì)胞的檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生變化，例如借助于結(jié)合微球的WBC子種群改變細(xì)胞的濁度，以便獲得在接下來(lái)可以分析的變化的結(jié)果。
如果WBC微球是磁性的，由于下述理由，則可以在混合過(guò)種中和/或在混合之后利用一個(gè)磁場(chǎng)或磁鐵(138)把結(jié)合到微球上的WBC子種群分離出去。這個(gè)磁場(chǎng)可以借助電磁裝置或能相對(duì)容器(68)作機(jī)械運(yùn)動(dòng)的磁鐵(138)來(lái)產(chǎn)生，以便捕獲磁性結(jié)合WBC子種群。再使不含結(jié)合WBC子種群的第二樣品部分經(jīng)管路(76)輸送到分析器(86)中，按照前述的方法測(cè)得分析數(shù)據(jù)。
儀器(66)準(zhǔn)備接受下次分析用的下一個(gè)樣品或樣品部分，可以用取樣管清洗裝置(140)清洗取樣管(58)，以及用通常的手段清洗管路和容器(68)。后續(xù)樣品混合物的分析結(jié)果是在快速和自動(dòng)的方式下測(cè)得的。在后續(xù)混合物樣品分析之間的時(shí)間可以是在幾分鐘或更少一些。
在操作分析儀器(66)過(guò)程中，使摻有溶胞劑/試劑的反應(yīng)混合物同樣品部分在容器(68)中與來(lái)自部位(130)的非磁性WBC微球一道混合，這些非磁性微球結(jié)合到WBC的一個(gè)子種群上。將淬滅劑(70)加到反應(yīng)混合物中，然后把反應(yīng)混合物經(jīng)管路(76)輸送到WBC分析器(78)中進(jìn)行分析。
作為代替使用溶胞劑情況，不使用溶胞劑的情況下，可以使樣品(12)或(32)經(jīng)閥(56)不通入溶胞劑輸送到混合器(66)中。在這種情況下，利用來(lái)自RBC微球部位(142)的上面結(jié)合有RBC特異性抗體的微球用磁力把RBC分離出去，經(jīng)過(guò)管路(142)輸送到閥(134)，然后經(jīng)管路(136)輸送到容器(68)中。在這里不使用溶胞劑，按照基本上與上述的用磁結(jié)合WBC方法相同的方法，在混合之后用磁鐵(140)磁性除去結(jié)合的RBC。
此外，在為了提高反應(yīng)速度的第二種情況下，可以利用摻有RBC溶胞劑和RBC磁性小球兩者的樣品反應(yīng)混合物。將該混合物混合，使溶胞淬滅，并使結(jié)合的RBC種群用磁力分離出去，然后再用前面描述的方法分析WBC。
雖然描述本發(fā)明技術(shù)時(shí)是利用一個(gè)自然狀態(tài)的樣品，例如一個(gè)直接輸送到儀器(66)中的全血樣品，但是根據(jù)需要樣品也可以是離線制備的或者部分離線制備的。樣品也可以先貧化RBC。還可以利用一個(gè)能離線或在制備模式下加入微球的系統(tǒng)，然后可以使檢測(cè)的細(xì)胞特性已經(jīng)移位的樣品部分導(dǎo)入系統(tǒng)中，以便進(jìn)行分析。下面描述幾下具體的例子。
在由Sequoia-TurnerofMountainview(California)銷售的CELL-DYN3000儀器的說(shuō)明書(shū)中描述了利用多維光散射鑒別白細(xì)胞或WBC種群的方法。這個(gè)儀器利用了一個(gè)偏振光源和具有正向10°和90°(正交)偏振和消偏振的散射器的測(cè)頭。為了使RBC對(duì)激光是透明的，這個(gè)儀器可以利用一種指示劑配方。然而，既使采用這些多個(gè)參量，這個(gè)儀器也不能完成對(duì)WBC的任何子種群的鑒別。
參照?qǐng)D4，在圖4中示出了一個(gè)偏振光檢測(cè)器裝置(90)的例子，裝置(90)包括一偏振激光光源(150)，它把偏振激光束(152)射到流動(dòng)池(80)上，光束(152)同細(xì)胞流(未示出)相互作用，產(chǎn)生一個(gè)含有與細(xì)胞有關(guān)的情報(bào)信號(hào)的反射光束(154)，反射光束(154)射到光束分離器(156)上。
光束的第一部分(158)通過(guò)光束分離器(156)，透過(guò)偏振光濾光器(160)被光電倍增管(162)作為一個(gè)90°偏振光散射信號(hào)或輸出信號(hào)檢測(cè)出。由光束分離器(156)反射射出光束的第二部分(164)，并;被第二光電倍增管(166)作為一個(gè)非偏振光散射信號(hào)測(cè)出。也可以采用其它的檢測(cè)光參量，例如在上面引證的VCS和Case35368儀器中所描述的參量。
參看圖5A-6B，在圖5中示出了DC/偏振光散射繪圖儀測(cè)出的散點(diǎn)圖。三個(gè)WBC種群組，單核細(xì)胞(M)(168)和淋巴細(xì)胞(L)(170)。嗜中細(xì)胞(N)與嗜酸細(xì)胞(E)相混合(172)，在這個(gè)散點(diǎn)圖中，沒(méi)有使用微球。
當(dāng)把微球加入以后，被微球散射的光使這些檢測(cè)特性混合，從而使只有兩個(gè)WBC種群組分開(kāi)計(jì)數(shù)，這正如圖5B中所示，L(170)和M，N，E是混合的(174)。通過(guò)利用最小數(shù)目的微球，可以使細(xì)胞組的這個(gè)混合限制一最小程度，此外，在光源發(fā)的光波波長(zhǎng)為488nm時(shí)采用很小的微球，當(dāng)其直徑小于0.6μm時(shí)不會(huì)引起明顯的混合。
利用圖5A作為標(biāo)準(zhǔn)或?qū)φ战M，把上面結(jié)合有對(duì)L子種群例如CD4有特異性的單克隆抗體的非磁性微球混合在同一樣品中或該樣品的第二部分中，結(jié)果是由于產(chǎn)生位移而構(gòu)成一個(gè)如圖5B中所示的直觀的子種群組(176)。
這個(gè)程序可以離線使用，也可以在線使用，程序步驟1-3可以離線完成。這樣將會(huì)省去填加微球和把微球與樣品混合所需要的設(shè)備。利用一個(gè)全自動(dòng)化的儀器(50)，可以自動(dòng)地在線完成全部步驟，這些步驟通常包括1、提供150μl(或更多)全血液。
2加入15μl的非磁性的直徑2μm的上面線合有對(duì)L子種群具有特異性的單克隆抗體(T4、T8或T11，每種微球在分開(kāi)的容器中混合)或加入10μlMSIG中對(duì)照微球，以便得到對(duì)照/背景標(biāo)準(zhǔn)。
3、攪拌2分鐘(此后，可以保持一定時(shí)間，至少1小時(shí)以上)。
4、使系統(tǒng)在自動(dòng)模式下運(yùn)轉(zhuǎn)。
5、在系統(tǒng)中，在線溶胞和淬滅。
參看圖6A，再一次說(shuō)明一個(gè)對(duì)照組或非移位過(guò)的散點(diǎn)圖的結(jié)果，L在組(178)中出現(xiàn)，而M在組(180)，而N和E在組(182)中出現(xiàn)。如上所述，對(duì)照組不是必需的，因?yàn)閺膱D5B和6B中可以發(fā)現(xiàn)感興趣的WBC子種群可以直接地找到，因此不需要把背景同一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果比較。只有在要求散點(diǎn)圖不受干擾的時(shí)候，才使用MSIG對(duì)照微球，MSIG是一老鼠的單克隆免疫球蛋白，它對(duì)WBC任何種群或WBC的任何子種群沒(méi)有特異性。
通過(guò)使T4微球結(jié)合到CD4細(xì)胞上，使感興趣的第一WBC子種群CD4細(xì)胞移位，如圖6B所示，不帶有移位的子種群的剩余物L(fēng)在組(178)中被發(fā)現(xiàn)，而M、N和E在組(184)中被發(fā)現(xiàn)，CD4細(xì)胞移位檢測(cè)細(xì)胞特性構(gòu)成了一個(gè)新的組(186)，把組(186)同圖6A中的結(jié)果相比較，或者直接進(jìn)行分析，就可得到CD4細(xì)胞相對(duì)總的L的百分率。在這個(gè)例子中，測(cè)得的CD4細(xì)胞占有的百分率為53.2%。為了比較，對(duì)相同的樣品在通用的EPICS(注冊(cè)商標(biāo))流動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀器中作了分析，所得的CD4細(xì)胞占有百分率為53.3%。
在圖7A-7C中，通過(guò)利用不同的檢測(cè)參量所形成的不同的散點(diǎn)圖，說(shuō)明CD4的移位情況。這些結(jié)果不是最優(yōu)化的，但是它是為了說(shuō)明利用另外的檢測(cè)參量例如MAS(中間角度散射，在圖3和圖4中沒(méi)有說(shuō)明)原理。圖7A說(shuō)明一個(gè)屬于所有WBC種群的對(duì)照細(xì)胞組(188)。在這個(gè)散點(diǎn)圖中繪出了90°散射光和90°偏振散射光的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
圖7B說(shuō)明了一個(gè)屬于所有WBC種群的單個(gè)細(xì)胞組(190)和一個(gè)屬于位移的來(lái)自同一樣品混合物CD4細(xì)胞的一個(gè)散開(kāi)的CD4組(191)。在這個(gè)散點(diǎn)圖中，繪出了90°的消偏振散射光和90°散射光的對(duì)應(yīng)關(guān)系。
圖7C示出了圖7B中相同的數(shù)據(jù)。散點(diǎn)圖是根據(jù)DC對(duì)MALS的關(guān)系繪出的。L出現(xiàn)在組(192)中，而位移的CD4細(xì)胞出現(xiàn)在組(194)中。
圖8A-D說(shuō)明了同時(shí)利用兩個(gè)相同直徑的微球篩選兩個(gè)不同感興趣的細(xì)胞群的潛在的可行性，這些感興趣細(xì)胞群例如是兩個(gè)感興趣的WBC子種群。利用兩種不同類型的微球，一個(gè)直徑為5.74μm，另一個(gè)直徑為5.11μm，測(cè)出了非偏振的散射光的對(duì)數(shù)數(shù)值和濁度的對(duì)應(yīng)關(guān)系，如圖8B所示，只測(cè)得一個(gè)單個(gè)的微球組(196)。但是利用偏振光的檢測(cè)參量，90°偏振散射光的對(duì)數(shù)值。如圖8B所示測(cè)得兩個(gè)分開(kāi)的組(198)和(200)。利用這些參量，大概可以把二個(gè)分開(kāi)的WBC子種群移位，并且在一個(gè)樣品部分中獲得結(jié)果。在這個(gè)所列舉的檢測(cè)結(jié)果中，不包括任何細(xì)胞只有一個(gè)微球本身。此外，正如圖8C和圖8D所示，只利用唯一的偏振光參量，90°散射偏振光的對(duì)數(shù)值，獲得了一維分開(kāi)的兩個(gè)微球組的結(jié)果(圖8D)。普通的非偏振光散射表明不能在各組間進(jìn)行區(qū)分(圖8C)。
利用偏振光可以在圖上使兩個(gè)不同類型的微球(一個(gè)直徑為10μm，另一個(gè)直徑為10.35μm)可能分開(kāi)，如圖9A-9D所示。圖9A說(shuō)明了用90°散射和濁度的對(duì)應(yīng)關(guān)系只能顯示出唯一的組，而圖9B說(shuō)明了用偏振光散射可以使組(204)和(206)分開(kāi)。此外，這些結(jié)果也可以用一單個(gè)偏振光檢測(cè)參量測(cè)得，如圖9D所示。在圖9C中的非偏振光數(shù)據(jù)中沒(méi)有顯示出兩個(gè)組。
參照?qǐng)D10，用數(shù)字(190)代表本發(fā)明的第三個(gè)篩選細(xì)胞分析儀器的實(shí)施例。為了測(cè)定感興趣細(xì)胞的重疊百分率，可以利用分析儀器(190)，下面將針對(duì)來(lái)自全血樣品或其一部分的WBC種群的子種群來(lái)描述這個(gè)分析儀器。
分析儀器(190)包括一個(gè)生物樣品(192)，它又至少包括一個(gè)第一WBC種群，該WBC種群至少包括兩個(gè)感興趣的WBC種群的子種群。使生物樣品(192)或某一部分經(jīng)管路(194)同經(jīng)管路(198)的至少一種試劑混合。然后借助一個(gè)功能指定的RBC除去部位(200)把RBC從樣品部分中分離出去。RBC可以用先前描述的技術(shù)之一分離出去。
一旦把RBC分離出去以后，立即將混合物的各部分輸送到不同的管路中。第一管路(202)可以用于經(jīng)管路(206)把第一樣品部分直接輸送到分析器(204)。就上述的分析器(22)和(44)來(lái)講，是借助至少兩個(gè)檢測(cè)參量來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的特性，其中的一個(gè)參量是光檢測(cè)參量。
第二管路(208)把第二樣品部分輸送到“X”細(xì)胞移位部位(210)。前面的“X”是感興趣的第一WBC種群的子種群，它具有至少一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞特性在部位(210)中被改變或移位，以便使感興趣的WBC種群的子種群的檢測(cè)特性從遮蔽的WBC種群的檢測(cè)細(xì)胞特性中移出。如前所述，通過(guò)使一些帶有一個(gè)對(duì)感興趣WBC種群的子種群有特異性的抗體的大多數(shù)非磁性微球結(jié)合到細(xì)胞上，使檢測(cè)細(xì)胞特性移位。然后使樣品部分輸送到分析器(204)。可以把分析器(204)測(cè)得的每組數(shù)據(jù)，經(jīng)過(guò)通道(214)儲(chǔ)存在比較器(212)用于以后的比較。
用類似的方式，使第三樣品部分經(jīng)管路(218)輸送到“Y”細(xì)胞移位部位(216)。使“Y”細(xì)胞的檢測(cè)細(xì)胞特性在部位(216)中移位或改變，然后再把該樣品部分輸送到分析器(204)和比較器(212)。這既可以直接得到“X”細(xì)胞和“Y”細(xì)胞的百分率，也可以用來(lái)自通道(202)非移位的數(shù)據(jù)比較而獲得“X”細(xì)胞和“Y”細(xì)胞的百分率。但是這種方法不能測(cè)得“X”和“Y”細(xì)胞可能存在的重疊數(shù)量。
為了測(cè)定這個(gè)重疊百分率，需把第四樣品部分經(jīng)管路(222)輸送到“X”和“Y”移位部位(220)中。采用重疊意味著至少包括兩個(gè)感興趣的受體或抗體的某些細(xì)胞，細(xì)胞種群、細(xì)胞子種群或形成體。在這個(gè)樣品部分中，把帶有對(duì)“X”細(xì)胞或感興趣的第一WBC種群的子種群有特異性的抗體的微球和帶有對(duì)“Y”細(xì)胞或感興趣的第二WBC種群子種群有特異性抗體的微球兩者混合在一起。然后使這個(gè)樣品部分輸送到分析器(204)，并把獲得數(shù)據(jù)供給比較器(212)。
通過(guò)把分別來(lái)自通道(208)和(218)的單獨(dú)的“X”和“Y”的百分率數(shù)值加在一起，可以求出重疊百分率。從這個(gè)總和中減去來(lái)自管路(222)組合的“X”和“Y”的百分率。如果這兩個(gè)總的百分率基本相等，則表明“X”和“Y”細(xì)胞沒(méi)有明顯的重疊。如果有一個(gè)差，則這個(gè)差值就是上面結(jié)合有兩種“X”和“Y”特異性微球的細(xì)胞的重疊百分率。盡管已經(jīng)描述了具有很多管路的分析儀器(190)，分析儀器(190)也可以是一個(gè)利用單一管路的順序工作的分析儀器，如對(duì)分析器(50)所述的那樣。按照分析儀器(50)，也可提供多管路，利用單個(gè)混合器(66)，每個(gè)管路(208)、(218)和(222)平行排列，用這個(gè)程序所獲得的結(jié)果示在圖9A-9F中。
參看圖11，用數(shù)字(250)代表本發(fā)明的另一個(gè)篩選被遮蔽細(xì)胞的分析儀器。分析儀器(250)包括至少含有一第一組細(xì)胞或細(xì)胞種群(未示出)的樣品(252)。這個(gè)細(xì)胞種群在下述分析中遮蔽住一個(gè)感興趣細(xì)胞組，例如細(xì)胞的一個(gè)子種群或細(xì)胞的第二子種群。樣品(252)可以包括一個(gè)細(xì)胞加到里面的緩沖劑。
把樣品(252)或其一部分經(jīng)管路(254)同經(jīng)管路(258)的至少一種試劑(256)混合。使該混合物的第一部分經(jīng)管路(262)直接輸送到分析器(260)中。分析器(260)可以是和分析器(22)相同的分析器，并對(duì)該樣品部分的細(xì)胞數(shù)量至少進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)，其結(jié)果經(jīng)通道(266)送到比較器(264)中。
經(jīng)管路(270)把第二樣品部分輸送到一細(xì)胞除去部位(268)中，對(duì)這些細(xì)胞按照上述方法進(jìn)行移位或貧化處理。為了移位，把非磁性微球結(jié)合遮蔽細(xì)胞種群上，從而改變檢測(cè)細(xì)胞的特性，從感興趣被遮蔽的細(xì)胞的檢測(cè)特性中充分地移出它們。為了貧化，把磁性微球結(jié)合到遮蔽的細(xì)胞種群上，然后再用磁力把這些微球從這個(gè)樣品部分中分離出去。
然后把這第二樣品部分經(jīng)管路(272)輸送到分析器(260)，并將獲得的數(shù)據(jù)送到比較器(264)。然后把來(lái)自這兩個(gè)樣品部分的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，以便確定感興趣被遮蔽的細(xì)胞組所占的百分率。
參看圖12，用數(shù)字(280)來(lái)代表本發(fā)明的另一個(gè)篩選細(xì)胞的分析儀器。分析儀器(280)與分析儀器(250)相類似，但還包括一個(gè)至少包含一第一組活的生物細(xì)胞(未示出)的生物樣品(282)，這個(gè)活的生物細(xì)胞例如可以是在全血樣品里或來(lái)自全血樣品。生物樣品(282)的細(xì)胞要在定性和/或定量測(cè)定或分析中參與生物反應(yīng)。該生物樣品至少包括一個(gè)對(duì)一個(gè)感興趣的WBC種群有遮蔽作用的WBC種群，樣品(282)還可以包括一個(gè)細(xì)胞加到里面的緩沖劑。
使樣品(282)或其一部分經(jīng)管路(284)同來(lái)自管路(288)的試劑(286)混合。在RBC除去部位(290)中，使RBC從這個(gè)樣品部分(282)中除去?？梢圆捎蒙鲜龅姆椒ㄖ怀BC。經(jīng)管路(292)使除去RBC的樣品的一部分輸送到分析器(294)，在該分析器中至少對(duì)該WBC種群體進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)。把來(lái)自分析器(294)的數(shù)據(jù)經(jīng)通道(296)輸送到比較器(298)(象在分析器250)中一樣。)把第二樣品部分經(jīng)管路(302)輸送到按指定功能嗜中性細(xì)胞(N)除去部位(300)。通過(guò)移位或改變一個(gè)參量，例如濁度或通過(guò)磁分離，兩者如上所述，可以把N從這個(gè)混合物中除去。在本例中所用的具體的N特異性抗體在名稱為“對(duì)嗜中性細(xì)胞有特異性的單克隆抗體”的美國(guó)專利4931395作了描述。
把這個(gè)經(jīng)除去N或移位過(guò)的混合物經(jīng)管路(304)輸送到WBC分析器(294)中。并把分析器(294)的分析結(jié)果輸送給比較器(298)。再將第二樣品部分的結(jié)果同第一樣品部分的結(jié)果相比較，而測(cè)定出在N區(qū)域是否留下來(lái)的任何細(xì)胞，這些細(xì)胞是先前被N遮蔽住的。
參考圖13，用數(shù)字(340)代表本發(fā)明的并存的篩選細(xì)胞分析儀器。分析儀器(340)包括一個(gè)樣品(342)，該樣品至少包含有一個(gè)第一組細(xì)胞或細(xì)胞種群(未示出)。這個(gè)細(xì)胞種群在按下述方法分析時(shí)，遮蔽住至少感興趣的兩個(gè)細(xì)胞組，例如一些子種群或其他的細(xì)胞組。樣品(342)可以包括一個(gè)供加入細(xì)胞的緩沖劑。
使樣品(342)或其一部分經(jīng)管路(344)同經(jīng)過(guò)管路(348)的至少一種試劑(346)混合。每個(gè)感興趣細(xì)胞組的至少一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞特性在移位細(xì)胞群部位(350)中改變或移位。為了把這些檢測(cè)細(xì)胞特性從遮蔽的細(xì)胞種群中或從它們相互之間除去，要使每一群檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生充分的改變或位移。
試劑(346)可以是或包括多個(gè)不同的非磁性微球組，每組微球上都分別結(jié)合有一種對(duì)感興趣的幾個(gè)細(xì)胞組中的一組具有特異性的抗體。最好是把試劑(346)和樣品部分(342)一起攪拌，以便促進(jìn)微球同感興趣的細(xì)胞組的結(jié)合。使多個(gè)微球結(jié)合到每個(gè)感興趣細(xì)胞組的每個(gè)細(xì)胞上，通常以微球涂覆每個(gè)細(xì)胞，以便使感興趣細(xì)胞群中的每個(gè)細(xì)胞最后的檢測(cè)特性發(fā)生改變或移位。
然后使這個(gè)樣品或混合物(342)經(jīng)管路(354)輸送到分析器(352)中。分析器(352)對(duì)這個(gè)樣品部分(342)進(jìn)行檢測(cè)和計(jì)數(shù)細(xì)胞。分析器(352)至少包括兩個(gè)檢測(cè)參量，如前所述，其中至少一個(gè)是光學(xué)參量。分析儀器(340)基本上和分析儀器(10)和(50)相同，但附加至少兩組不同的微球。
參看圖14，用參考數(shù)字(360)來(lái)代表本發(fā)明的第二個(gè)并存的篩選細(xì)胞分析儀器。分析儀器(360)包括一個(gè)生物樣品(362)，該生物樣品至少包含第一組活生物細(xì)胞(未示出)，例如在一個(gè)全血樣品中的活生物細(xì)胞或來(lái)自全血的活生物細(xì)胞。生物樣品(362)的細(xì)胞要在定量和/或定性測(cè)定或分析中參加生物反應(yīng)。生物樣品(362)至少包括一種WBC種群，該WBC種群至少遮蔽住兩個(gè)感興趣的WBC子種群，樣品(362)還可以包括一個(gè)供加入細(xì)胞的緩沖劑。
將樣品(362)或其中一部分經(jīng)管路(364)同經(jīng)管路(368)的至少一種試劑(366)混合。然后用一功能指定RBC除去部位(370)從該混合物中除去RBC。由部位(370)利用前面描述的一些方法例如溶胞、磁性微球及其組合的方法從該混合物中可以除去RBC。
一旦在RBC基本上從這部分樣品混合物(362)中除去，立即將一部分混合物輸送到子種群移位部位(372)。如同在分析儀器(10)中一樣，為了使感興趣的WBC子種群的檢測(cè)細(xì)胞特性從遮蔽WBC種群和從相互之間移出，在部位(42)中要使每個(gè)感興趣的WBC子種群中至少有一個(gè)檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生改變或移位。
此外，試劑(366)可以是或可以包括兩組不同的微球，每組包括一些上面結(jié)合有對(duì)感興趣的WBC子種群之一具有特異性抗體的非磁性微球。為了促進(jìn)微球和感興趣WBC子種群的結(jié)合，最好使試劑(366)和樣品部分(362)一起攪拌。如前述一樣，把來(lái)自一組的多個(gè)微球結(jié)合到每個(gè)感興趣WBC子種群的每個(gè)細(xì)胞上，使微球包覆到每個(gè)細(xì)胞上，這樣就使感興趣的WBC子種群的每個(gè)細(xì)胞的最后檢測(cè)細(xì)胞特性發(fā)生改變或移位。
然后，把樣品部分(362)輸送到分析器(374)該分析器和分析器(22)相同，并在樣品部分(362)中至少進(jìn)行細(xì)胞檢測(cè)和計(jì)數(shù)。分析儀器(50)可以完成分析儀器(360)的分析方法。
這些分析儀器最好能計(jì)算WBC種群絕對(duì)數(shù)目，從而也計(jì)算WBC子種群的絕對(duì)數(shù)目。這一點(diǎn)對(duì)治療艾滋病患者是特別有用的，因?yàn)樵跊Q定如何對(duì)艾滋病患者進(jìn)行藥物治療時(shí)，要利用特異的CD4種群數(shù)目。借助通用方法，例如受讓商(Coulter Electronics，Ins)銷售的很多商品化細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置中所采用根據(jù)對(duì)特定體積內(nèi)的WBC的數(shù)目的計(jì)算可以獲得這個(gè)絕對(duì)數(shù)目。
所用的磁性微球可以是任何適用的型號(hào)，例如是0.7μ直徑的聚苯乙烯磁性微球，具有重量對(duì)10%實(shí)心體積比(withaweighttoVolumeof10%Solids)，由BangsLaboratoriesofCarmel，Inaiana銷售。非磁性微球可以是任何適用的型號(hào)，例如是直徑為2.17μm，重量對(duì)8%實(shí)心體積比，經(jīng)表面活性劑游離磺化的苯乙烯乳膠微球，例如InterfacialDynamicsofPortland，Oregon銷售的IDC微球。這些特定的微球只是作為例子而使用的，其它類型和尺寸的由其它一般來(lái)源的微球也可以使用。
通常情況下，為了移位，最好利用直徑大體上比細(xì)胞直徑小的微球，因?yàn)樵诿總€(gè)細(xì)胞上要結(jié)合多個(gè)微球。微球的典型直徑是以0.65到3.0μm，以便保證儀器不能象指出細(xì)胞那樣檢測(cè)和計(jì)數(shù)游離微球本身。此外，太大的微球可能粘住或堵塞檢測(cè)孔，因?yàn)楹芏嗉?xì)胞可能粘到這些球上，而形成一個(gè)大球和細(xì)胞團(tuán)。雖然為了使檢測(cè)細(xì)胞移位也可以利用磁性微球，但是在通常的情況下，因?yàn)榉谴判晕⑶虻膬r(jià)格低廉而被用于檢測(cè)細(xì)胞的移位中。所采用的微球尺寸范圍還與所用光的波長(zhǎng)有關(guān)。
為了用磁力分離出細(xì)胞，只能利用磁性微球。在這個(gè)申請(qǐng)中，微球尺寸不是主要的，因?yàn)樵跈z測(cè)之前把這些細(xì)胞從樣品中除去。為了迅速容易地在磁場(chǎng)被除去，微球是有效的手段。在這種情況下，適用0.65到4.5μm直徑的微球。進(jìn)一步，因?yàn)閮H是除去細(xì)胞，可使用10μm或大于10μm直徑的微球，可以使多個(gè)細(xì)胞結(jié)合到每個(gè)微球上，但是因?yàn)椴恍栌?jì)數(shù)，所以不干擾儀器的操作。
權(quán)利要求
1.一種從具有至少一個(gè)遮蔽其中細(xì)胞種群的一細(xì)胞樣品的至少一部分中分析至少一個(gè)感興趣的細(xì)胞群的方法，其特征在于在第一樣品部分中改變至少第一選擇的感興趣的細(xì)胞群的檢測(cè)特性，從遮蔽細(xì)胞種群檢測(cè)特性中除去該細(xì)胞群檢測(cè)特性；以及用至少一個(gè)光偏振參量，檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第一樣品部分，得到所述感興趣的選擇細(xì)胞群占有的百分率。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于通過(guò)提供具有結(jié)合到那里的一試劑的微球，該試劑對(duì)所述感興趣的選擇的細(xì)胞群上一特定分子是特異的，并所述微球與所述樣品部分一起混合，以移位所述感興趣的選擇的細(xì)胞群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)改變所述的檢測(cè)特性。
3.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，以及形成所述特定分子的在所述感興趣的細(xì)胞種群的子種群上的抗原。
4.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于從有是一WBC種群的所述遮蔽細(xì)胞種群和是一所述WBC種群的子種群的一全血樣品中形成所述的細(xì)胞樣品。
5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于通過(guò)提供具有一試劑結(jié)合到上面的微球，該試劑對(duì)所述WBC種群的子種群上的一特定分子是特異性的，并把所述微球與所述樣品部分混合，結(jié)合到所述WBC種群的子種群上，從而移位所述WBC種群的子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)改變所述檢測(cè)特性。
6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，以及在所述WBC種群的感興趣的子種群上形成所述特定分子的抗原。
7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于通過(guò)提供具有結(jié)合到上面的單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第一白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第一子種群上，移位所述第一子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位一第一白血細(xì)胞種群的子種群。
8.如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于在一第二樣品部分通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第二白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第二子種群上，移位所述第二子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位一第二白血細(xì)胞種群的子種群。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于在一第三樣品部分，通過(guò)提供兩組微球，第一組微球具有所述的結(jié)合到上面的單克隆抗體，該抗體對(duì)所述第一白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，第二組微球具有所述的結(jié)合到上面的單克隆抗體，該抗體對(duì)所述的第二WBC種群的子種群是特異的，以及把所述的微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第一和第二子種群上，移位所述第一和第二子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述第一和第二白血細(xì)胞種群的子種群，并比較所述第一、第二、以及第三樣品部分的結(jié)果，確定第一和第二WBC種群的子種群重疊百分率。
10.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于通過(guò)提供具有一結(jié)合到上面的單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于在第二樣品部分中，通過(guò)提供具有一單克隆抗體結(jié)合到上面的微球，該抗體對(duì)CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的;把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述CD8白血細(xì)胞種群的子種群。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于在第三樣品部分，通過(guò)提供每個(gè)具有單克隆抗體結(jié)合到上面的兩組微球，單克隆抗體對(duì)所述CD4和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的一種群是特異的，并把所述微球與所述的樣品混合，結(jié)合到所述的CD4和CD8子種群上，移位所述CD4和CD8子種群的一種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位CD4和CD8白血細(xì)胞種群的子種群雙方，以及比較所述第一、第二、以及第三樣品部分的結(jié)果，從而確定CD4和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的重疊百分率。
13.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于通過(guò)提供具有一單克隆抗體結(jié)合到上面的微球，該單克隆抗體對(duì)所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，以移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位CD4白血細(xì)胞種群的子種群。
14.如權(quán)利要求13所述的方法，其特征在于在第二樣品部分中，通過(guò)提供具有一單克隆抗體結(jié)合到上面的微球，該抗體對(duì)CD2白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2子種群上，移位所述CD2子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述CD2白血細(xì)胞種群的子種群。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于在第三樣品部分中，通過(guò)提供兩組具有結(jié)合到上面的單克隆抗體的微球，所述抗體對(duì)所述CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子種群之一是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2和CD4子種群上，以移位所述CD2和CD4子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子種群雙方，并把所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果進(jìn)行比較，以確定CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子種群的重疊百分率。
16.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位CD8白血細(xì)胞種群的子種群。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于在第二樣品部分，通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該單克隆抗體對(duì)CD2白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述的微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2子種群上，以移位所述CD2子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，從而移位CD2白血細(xì)胞種群的子種群。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于在第三樣品部分中，通過(guò)提供上面結(jié)合有單克隆抗體的兩組微球，該抗體對(duì)CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群之一是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2和CD8子種群上，從而移位所述CD2和CD8子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群，并比較所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果，以確定CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的重疊百分率。
19.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于所述全血樣品包括一紅血細(xì)胞種群，并且從所述樣品中除去所述紅血細(xì)胞種群，不明顯有害地影響所述白血細(xì)胞種群的相關(guān)的定性和/或定量。
20.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在改變所述檢測(cè)特性前，首先檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第一樣品部分，并比較所數(shù)計(jì)數(shù)，得到所占的百分率。
21.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于在所述第一樣品部分，與所述感興趣的第一細(xì)胞群同時(shí)改變感興趣的至少第二選擇的細(xì)胞群的檢測(cè)特性，從而由遮蔽細(xì)胞種群的檢測(cè)特性和所述感興趣第一細(xì)胞群檢測(cè)特性中除去第二細(xì)胞群的檢測(cè)特性。
22.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)在所述感興趣的第二細(xì)胞群上特定分子是特異的，并把所述微球與所述樣品部分混合，結(jié)合到所述感興趣的第二細(xì)胞群上，以移位所述感興趣的第二細(xì)胞群的至少一檢測(cè)特性，來(lái)改變所述感興趣的第二細(xì)胞群的檢測(cè)特性。
23.如權(quán)利要求22所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述感興趣的細(xì)胞種群的子種群上形成所述特定分子的抗原。
24.如權(quán)利要求21所述的方法，其特征在于從具有所述遮蔽細(xì)胞種群，它是一WBC種群，和所述感興趣的選擇細(xì)胞群，它是所述WBC種群的子種群的一全血樣品中形成所述細(xì)胞樣品。
25.如權(quán)利要求24所述的方法，其特征在于提供多組微球，每一組微球上面結(jié)合有一試劑，該試劑對(duì)所述WBC種群各個(gè)子種群之上的一特定分子是特異的，把所述各組微球與所述樣品部分混合，把每組微球結(jié)合到所述WBC種群的各個(gè)子種群之一上，以移位每一個(gè)所述的WBC種群的子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)改變所述的檢測(cè)特性。
26.如權(quán)利要求25所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，以及在所述感興趣WBC種群的各個(gè)子種群上形成所述特定分子的抗原。
27.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第一白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第一子種群上，從而移位所述第一子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位第一白血細(xì)胞種群的子種群;以及在所述樣品部分中，通過(guò)提供上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第二白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第二子種群上，以移位所述第二子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位第二白血細(xì)胞種群的子種群。
28.如權(quán)利要求26所述的方法，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該單克隆抗體對(duì)所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，以移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位CD4白血細(xì)胞種群的子種群;以及在所述樣品部分，提供上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，并把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，來(lái)移位所述CD8白血細(xì)胞種群的子種群。
29.一種用于從含有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的一細(xì)胞樣品的至少一部分中獲得至少一個(gè)感興趣的細(xì)胞群分析的裝置，其特征在于，包括在第一樣品部分中，改變至少第一選擇的感興趣細(xì)胞群的檢測(cè)特性，從遮蔽細(xì)胞種群檢測(cè)特性中除去該細(xì)胞群的檢測(cè)特性的部件(20，42，66，268，300，350，372);以及用至少一個(gè)光偏振參量檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第一樣品部分，得到感光趣的所述選擇細(xì)胞群所占百分率的部件(22，44，104，162，204，264，294，352，374)。
30.如權(quán)利要求29所述的裝置，其特征在于用于改變所述檢測(cè)特性的所述部件包括用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)感興趣的所述選擇的細(xì)胞群上一特定分子是特異的部件(16，36，130，196，346，366);用于把所述微球與所述樣品部分混合，結(jié)合到感興趣的所述選擇的細(xì)胞群上，以移位感興趣的所述選擇細(xì)胞群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件(74)。
31.如權(quán)利要求30所述的裝置，其特征在于用于提供單克隆抗體，形成所述試劑，以及在感興趣的所述細(xì)胞種群子種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
32.如權(quán)利要求29所述的裝置，其特征在于;用于從含有所述遮蔽細(xì)胞種群，一WBC種群，和感興趣的所述選擇的細(xì)胞群，一所述WBC種群的子種群的全血樣品中形成所述細(xì)胞樣品的部件。
33.如權(quán)利要求32所述的裝置，其特征在于用于改進(jìn)所述檢測(cè)特性的部件包括用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)在所述WBC種群的子種群上的特定分子是特異的部件，以及用于把所述微球與所述樣品部分混合，結(jié)合到所述WBC種群的子種群上，以移位所述WBC種群的子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
34.如權(quán)利要求33所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述感興趣的WBC種群的子種群上的形成所述特定分子的抗原的部件。
35.如權(quán)利要求34所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第一WBC種群的子種群是特異的，移位第一白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第一子種群上，從而移位所述第一子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
36.如權(quán)利要求35所述的裝置，其特征在于用于在第二樣品部分中移位第二白血細(xì)胞種群的子種群，是通過(guò)提供在上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第二白細(xì)胞種群的子種群是特異的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第二子種群上，以移位所述第二子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
37.如權(quán)利要求36所述的裝置，其特征在于用于在第三樣品部分，提供兩組微球，第一組上面結(jié)合有所述單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第一白血細(xì)胞種群的子種群是特異的;以及第二組上面結(jié)合有所述單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第二WBC種群的子種群是特異的，移位所述第一、第二白血細(xì)胞種群子種雙方的部件;和用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到第一和第二子種群上，移位所述第一和第二子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;以及用于比較所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果，以確定第一和第二WBC種群的子種群的重疊百分率的部件。
38.如權(quán)利要求34所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，移位CD4白血細(xì)胞種群的子種群的部件，以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
39.如權(quán)利要求38所述的裝置，其特征在于用于在第二樣品部分中，用提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位CD8白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
40.如權(quán)利要求39所述的裝置，其特征在于用于在第三樣品部分中，通過(guò)提供兩組微球，每一組上結(jié)合有單克隆抗體，該抗體對(duì)所述CD4和CD8白血細(xì)胞種群的子種群之一是特異的，來(lái)移位CD4和CD8白血細(xì)胞種群子種群雙方的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4和CD8子種群上，移位所述CD4和CD8子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;和用于比較所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果，以確定CD4和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的重疊百分率的部件。
41.如權(quán)利要求34所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位CD4白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，以移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
42.如權(quán)利要求41所述的裝置，其特征在于用于在第二樣品部分中，通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD2白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位所述CD2白血細(xì)胞種群的子種群的的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2子種群上，移位所述CD2子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
43.如權(quán)利要求42所述的裝置，其特征在于用于在第三樣品部分中，通過(guò)提供兩組上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子種群的一個(gè)子種群是特異的，來(lái)移位CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子種群的部件;用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2和CD4子種群上，以移位所述CD2和CD4子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;以及用于比較所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果，以確定CD2和CD4白血細(xì)胞種群的子群種的重疊百分率的部件。
44.如權(quán)利要求37所述的裝置，其特征在于用提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，移位所述CD8白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
45.如權(quán)利要求44所述的裝置，其特征在于用于在第二樣品部分中，通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD2白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位所述CD2白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2子種群上，移位所述CD2子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
46.如權(quán)利要求45所述的裝置，其特征在于用于在第三樣品部分中，通過(guò)提供兩組每組上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)于所述CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群之一是特異的，來(lái)移位所述CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的部件;用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD2和CD8子種上，以移位所述CD2和CD8子種群的每一個(gè)的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;以及用于比較所述第一、第二和第三樣品部分的結(jié)果，以確定CD2和CD8白血細(xì)胞種群的子種群的重疊百分率的部件。
47.如權(quán)利要求32所述的裝置，其特征在于所述全血樣品包一紅血細(xì)胞種群，以及用于從所述樣品中除去所述紅血細(xì)胞種群，而不明顯有害地影響所述白血細(xì)胞種群的相關(guān)的定性和/或定量。
48.如權(quán)利要求29所述的裝置，其特征在于用于在改變所述檢測(cè)特性前，首先檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第一樣品部分的部件;以及用于比較所述計(jì)數(shù)，得到所占百分率的部件。
49.如權(quán)利要求29所述的裝置，其特征在于用于在所述第一樣品部分中，與所述第一感興趣細(xì)胞群同時(shí)改變感興趣的至少第二選擇的細(xì)胞群的檢測(cè)特性，以便從遮蔽細(xì)胞種群的檢測(cè)特性和所述第一感興趣細(xì)胞群檢測(cè)特性兩者中除去第二細(xì)胞群檢測(cè)特性的部件。
50.如權(quán)利要求49所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述感興趣的第二細(xì)胞群上一特定分子是特異的，來(lái)改變所述感興趣第二細(xì)胞群的檢測(cè)特性的部件;以及用于把述微球與所述樣品部分混合，結(jié)合到所述感興趣第二細(xì)胞群上，以移位所述感興趣的第二細(xì)胞群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
51.如權(quán)利要求50所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述感興趣的細(xì)胞種群的子種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
52.如權(quán)利要求49所述的裝置，其特征在于用于從具有所述遮蔽細(xì)胞種群，-WBC種群，和所述感興趣的選擇細(xì)胞群，所述WBC種群的子種群的一全血樣品中，形成所述細(xì)胞樣品的部件。
53.如權(quán)利要求52所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供若干組微球，每一組上面結(jié)合有一試劑，該試劑對(duì)所述WBC種群的子種群的一個(gè)上的一特定分子是特異的，來(lái)改變所述檢測(cè)特性的部件;以及用于把所述若干組微球與所述樣品部分混合，把每一組結(jié)合到所述WBC種群子種群之一上，以移位每一個(gè)所述WBC種群的子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
54.如權(quán)利要求53所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述感興趣WBC種群各子種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
55.如權(quán)利要求54所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第一白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位第一白血細(xì)胞種群的子種群的部件;用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第一子種群上，移位所述第一子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;在所述樣品部分，通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)所述第二白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位第二白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述第二子種群上，移位所述第二子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
56.如權(quán)利要求54所述的裝置，其特征在于通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD4白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移所述CD4白血細(xì)胞種群的子種群的部件;用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD4子種群上，以移位所述CD4子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件;用于在所述樣品部分，通過(guò)提供上面結(jié)合有一單克隆抗體的微球，該抗體對(duì)CD8白血細(xì)胞種群的子種群是特異的，來(lái)移位所述CD8白血細(xì)胞種群的子種群的部件;以及用于把所述微球與所述樣品混合，結(jié)合到所述CD8子種群上，以移位所述CD8子種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
57.一種從具有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的一細(xì)胞樣品的至少一部分中分析至少一個(gè)感興趣的細(xì)胞群的方法，其特征在于用至少一個(gè)光偏振參量檢測(cè)和計(jì)數(shù)第一樣品部分;從第二樣品部分除去遮蔽細(xì)胞種群;用至少一個(gè)光偏振參量檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第二樣品部分;以及比較所述兩個(gè)計(jì)數(shù)，得到所述感興趣的被遮蔽的細(xì)胞群所占百分率。
58.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的;把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，以移位所述遮蔽細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性。
59.如權(quán)利要求58所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原。
60.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)在所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的，把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，以及從所述樣品中除去上面結(jié)合有所述遮蔽細(xì)胞的微球。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，以及在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原。
62.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于從帶有所述遮蔽細(xì)胞種群，-WBC種群，和所述被遮蔽感興趣的細(xì)胞群，由所述WBC種群遮蔽的一種群的一全血樣品中形成所述的細(xì)胞樣品。
63.如權(quán)利要求62所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上的一特定分子是特異的;把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，移位所述遮蔽細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性。
64.如權(quán)利要求63所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，以及在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原。
65.如權(quán)利要求64所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一嗜中性細(xì)胞特異單克隆抗體的微球，并把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述嗜中性細(xì)胞種群上，移位所述嗜中性細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，所述感興趣的選擇細(xì)胞群是未成熟的白血細(xì)胞種群。
66.如權(quán)利要求62所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的，并把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，以及從所述樣品除去帶有結(jié)合到上面的所述遮蔽細(xì)胞種群的所述微球。
67.如權(quán)利要求66所述的方法，其特征在于提供形成所述試劑的單克隆抗體，和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其特征在于提供上面結(jié)合有一嗜中性細(xì)胞特異的單克隆抗體的微球，并把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述嗜中性細(xì)胞種群上，以及從所述樣品部分除去上面結(jié)合有所述嗜中性細(xì)胞種群的所述微球。
69.如權(quán)利要求68所述的方法，其特征在于提供磁性微球和一磁場(chǎng)，以及在所述磁場(chǎng)中當(dāng)吸引所述磁性微球時(shí)，通過(guò)除去所述第二樣品部分的剩余部分，從所述第二樣品部分除去所述嗜中性細(xì)胞種群。
70.從含有至少一個(gè)遮蔽細(xì)胞種群的一細(xì)胞樣品的至少一部分中分析至少一個(gè)感興趣的細(xì)胞群的裝置，其特征在于用至少一個(gè)光偏振參量檢測(cè)和計(jì)數(shù)第一樣品部分的部件(204，260，294);用于從第二樣品部分除去遮蔽細(xì)胞種群的部件(210，268，300);用至少一個(gè)光偏振參量檢測(cè)和計(jì)數(shù)所述第二樣品部分的部件;以及用于比較所述兩個(gè)計(jì)數(shù)，從而得到所述感興趣的被遮蔽細(xì)胞種群的所占百分率的部件。
71.如權(quán)利要求70所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上的一特定分子是特異的部件(196，256，286);用于把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，以移位所述遮蔽細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
72.如權(quán)利要求71所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
73.如權(quán)利要求70所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的部件;用于把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上的部件;以及用于從所述樣品中除去結(jié)合有所述遮蔽細(xì)胞種群的所述微球的部件。
74.如權(quán)利要求73所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
75.如權(quán)利要求70所述的裝置，其特征在于用于從含有所述遮蔽細(xì)胞種群，-WBC種群，和所述被遮蔽的感興趣的細(xì)胞群，一個(gè)被所述WBC種群遮蔽的種群的部件。
76.如權(quán)利要求75所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的部件;和用于把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上，以移位所述遮蔽細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性的部件。
77.如權(quán)利要求76所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
78.如權(quán)利要求77所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一嗜中性細(xì)胞特異的單克隆抗體的微球的部件;以及用于把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述嗜中性細(xì)胞種群上，以移位所述嗜中性細(xì)胞種群的至少一個(gè)檢測(cè)特性，所述感興趣的選擇的細(xì)胞群是未成熟的白血細(xì)胞種群的部件。
79.如權(quán)利要求75所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有一試劑的微球，該試劑對(duì)在所述遮蔽細(xì)胞種群上一特定分子是特異的部件;和用于把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述遮蔽細(xì)胞種群上的部件;以及用于從所述樣品中除去結(jié)合有所述遮蔽細(xì)胞種群的所述微球的部件。
80.如權(quán)利要求79所述的裝置，其特征在于用于提供形成所述試劑的單克隆抗體和在所述遮蔽細(xì)胞種群上形成所述特定分子的抗原的部件。
81.如權(quán)利要求80所述的裝置，其特征在于用于提供上面結(jié)合有嗜中性細(xì)胞特異的單克隆抗體的微球的部件，和把所述微球與所述第二樣品部分混合，結(jié)合到所述嗜中性細(xì)胞種群上的部件;以及用于從所述樣品部分中除去上面結(jié)合有所述嗜中性細(xì)胞種群的所述微球的部件。
82.如權(quán)利要求81所述的裝置，其特征在于用于提供磁性微球和一磁場(chǎng)的部件，和當(dāng)所述磁性微球吸引在所述的磁場(chǎng)中時(shí)，通過(guò)除去所述第二樣品部分的剩余部分從所述第二樣品部分除去所述嗜中性細(xì)胞種群的部件。
全文摘要
利用至少一個(gè)偏振光檢測(cè)參量，來(lái)完成一個(gè)或多個(gè)感興趣細(xì)胞群的篩選，所述細(xì)胞群被一個(gè)細(xì)胞種群，例如一個(gè)WBC種群的感興趣的一個(gè)或多個(gè)子種群，所遮蔽的方法和裝置(10，30，50，90，190，250，280，340，360)。通過(guò)利用上面結(jié)合有單克隆抗體的微球，改進(jìn)特定細(xì)胞的檢測(cè)特性，以便從遮蔽細(xì)胞種群中區(qū)分感興趣的細(xì)胞群，來(lái)計(jì)數(shù)感興趣的細(xì)胞群。
文檔編號(hào)G01N33/74GK1067965SQ9210159
公開(kāi)日1993年1月13日 申請(qǐng)日期1992年2月21日 優(yōu)先權(quán)日1991年2月22日
發(fā)明者J·C·赫德森, C·M·羅德蓋茲, T·拉塞爾 申請(qǐng)人:科特公司