專利名稱：一種新型的ana、抗dna聯(lián)合檢測(cè)法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到一種實(shí)驗(yàn)室的免疫檢測(cè)技術(shù)，具體地說(shuō)，也就是涉及到一種醫(yī)學(xué)疾病診斷方法的檢測(cè)。
系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是侵犯皮膚、關(guān)節(jié)、腎臟、肝臟、心臟等多器官的自身免疫性疾病，患者血清中存在有多種自身抗體，其中主要有抗核抗體(ANA)和抗雙鏈的脫氧核糖核酸抗體(ds-DNA)。血清中ANA陽(yáng)性率高達(dá)0.80-0.96%，但其他風(fēng)濕性性疾病如皮肌炎、硬皮病、結(jié)締組織周圍炎等ANA亦可陽(yáng)性。因此為了鑒別這些疾病，尋找一種特異性高又靈敏、快速的檢測(cè)方法，本發(fā)明用錐蟲(chóng)和肝細(xì)胞配合后組成雙抗原底物，可同時(shí)檢出ANA和抗DNA抗體。
經(jīng)聯(lián)機(jī)檢索美國(guó)專利近40年及世界專利近10年無(wú)此檢測(cè)方法，近期首都醫(yī)院徐世正等“測(cè)定雙鏈DNA抗體新方法”一文，其主要方法為用感染錐蟲(chóng)的小鼠剪其尾部滴血直接制片，制成的血片蟲(chóng)體堆積，血細(xì)胞極少或沒(méi)有有核細(xì)胞，此片只能做抗DNA單一染色，無(wú)法做ANA染色。
本發(fā)明的任務(wù)在于為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，并能同時(shí)在一張玻片上、一個(gè)視野里發(fā)現(xiàn)兩種抗體的存在為目的而實(shí)現(xiàn)的。
本發(fā)明通過(guò)以下幾個(gè)途徑完成(一)錐蟲(chóng)的形態(tài)及結(jié)構(gòu)錐蟲(chóng)是一種單細(xì)胞原生動(dòng)物，能寄生于許多動(dòng)物體內(nèi)，如牛、羊、馬、狗、兔、鼠均可被感染而患錐蟲(chóng)病。錐蟲(chóng)的蟲(chóng)體呈紡錘狀、梭形、柳葉形等，伊氏錐蟲(chóng)體長(zhǎng)15.6-31.3μ左右、寬1.5-2.5μ，瑞士染色鏡下可見(jiàn)紫紅色的體核和動(dòng)基體，淺紅色的波動(dòng)膜和鞭毛。
(二)雙抗原底物的制備取錐蟲(chóng)數(shù)條用無(wú)菌生理鹽水混和腹腔接種小白鼠，防蚊、防蠅喂養(yǎng)3-7天，待小鼠發(fā)病至睡眠狀態(tài)后，尾部取血作錐蟲(chóng)計(jì)數(shù)，錐蟲(chóng)達(dá)5-107/mm2時(shí)用肝素抗凝，小白鼠臨死前1-1.5小時(shí)作眼球后取血，再將死鼠解剖取出肝臟，用肝臟的切面沾上含有錐蟲(chóng)的血液在潔凈玻片上輕輕壓印一下，制成一層薄的具有肝細(xì)胞和錐蟲(chóng)的雙抗原底物。室溫涼干后，用玻璃紙包好置于5--40℃最佳4--30℃內(nèi)保存?zhèn)溆谩?br> (三)檢測(cè)方法取患者血清。用間接免疫熒光法(同ANA法)、FITC最大吸收光譜520-530nm，每例標(biāo)本做原配血清1∶10、1∶20、1∶40、1∶80五個(gè)滴度，將上述血清分別加于五個(gè)含有錐蟲(chóng)和肝細(xì)胞的印片上，經(jīng)染色后鏡檢有翠綠色熒光者為陽(yáng)性，錐蟲(chóng)的體核和動(dòng)基體發(fā)出一大一小亮綠色熒光為雙鏈DNA抗體陽(yáng)性，肝細(xì)胞亮綠色為抗核抗體陽(yáng)性，無(wú)綠色熒光者為陰性。
本發(fā)明的特殊功能在于一種檢測(cè)手段可得出兩種檢策效果，患紅斑狼瘡的病人能夠很快明確診斷，得到及時(shí)治療;使用本方法省時(shí)、省力、節(jié)約試劑，減輕病人經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
權(quán)利要求
1.一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測(cè)法，其特征在于利用感染錐蟲(chóng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟切面沾上含有錐蟲(chóng)的血液在潔凈玻片上輕輕壓印一下，制成具有肝細(xì)胞和錐蟲(chóng)的雙抗原底物，置5-40℃最佳溫度為4-30℃保存?zhèn)溆谩?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測(cè)法，其特征在于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以小白鼠為最好，并在小白鼠感染錐蟲(chóng)后臨死前1-1.5小時(shí)取其肝臟切片。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測(cè)法，其特征在于取臨終前小白鼠的眼球血粘在肝切面上，再印在玻片上。
全文摘要
本發(fā)明所涉及的是醫(yī)學(xué)免疫的一種新型的ANA、抗DNA聯(lián)合檢測(cè)法。主要用于紅斑狼瘡特異性檢查。本方法主要是將感染錐蟲(chóng)的小白鼠眼球血與其肝臟切面混合后印在玻片上制成雙抗原底物，取病人血清滴在底物上經(jīng)熒光染色在電鏡下檢測(cè)ANA及抗DNA。本方法提高了對(duì)紅斑狼瘡病的診斷率，同時(shí)省時(shí)、省力、節(jié)約試劑，減輕了病人的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。
文檔編號(hào)G01N33/53GK1059033SQ9110574
公開(kāi)日1992年2月26日 申請(qǐng)日期1991年8月15日 優(yōu)先權(quán)日1991年8月15日
發(fā)明者肖麗文, 馮柏莊, 高靜雯 申請(qǐng)人:中山醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院