本實(shí)用新型涉及傳感器，特別是涉及一種用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒 PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器。

背景技術(shù)：

人巨細(xì)胞病毒(HCMV)為DNA病毒，屬皰疹病毒屬，具有潛伏一活化的生物學(xué)特征，在宿主免疫力下降時(shí)，潛伏的HCMV可被激活產(chǎn)生嚴(yán)重病變。感染HCMV后，抵抗力強(qiáng)的人可徹底清除病毒，抵抗力差的人群不能完全清除病毒而處于活動(dòng)期，或病毒處于免疫逃逸狀態(tài)，在體內(nèi)潛伏起來(lái)，一旦機(jī)體免疫力下降，又會(huì)重新激活，處于活動(dòng)狀態(tài)。

目前檢測(cè)HCMV的方法有：①檢測(cè)HCMV抗體(I鰣)的方法，如ELISA法、蛋白芯片法。②檢測(cè)HCMV抗原法(如PP65抗原)：間接熒光免疫法。③檢測(cè)HCMVDNA的方法：熒光定量PCR法。

檢測(cè)抗體的方法存在如下問(wèn)題：①HCMV感染后經(jīng)過(guò)數(shù)周才產(chǎn)生IgM，且在病毒清除后較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)多會(huì)存在于體內(nèi)，因此存在窗口期，且不能判斷是否為活動(dòng)性感染；免疫系統(tǒng)發(fā)育尚未完善的新生兒、使用免疫抑制劑的患者(如器官移植者)及免疫功能受損的患者(如艾滋病患者)產(chǎn)生IgM能力都很弱，因此易導(dǎo)致假陰性。故IgM檢測(cè)對(duì)HCMV感染的旱期診斷意義不大。②體內(nèi)含有內(nèi)風(fēng)濕因子，及其他病毒感染多可能與固相抗人IgM發(fā)生非特異性吸附，導(dǎo)致假陽(yáng)性，如此時(shí)提高標(biāo)本的稀釋度雖可避免此類情況的發(fā)生，但同時(shí)又降低了實(shí)驗(yàn)靈敏度。③不能進(jìn)行定量檢測(cè)，不能了解疾病的發(fā)展情況。間接熒光免疫法的缺點(diǎn)是：只能定性檢測(cè)，不能定量檢測(cè)，且操作繁瑣。熒光定量PCR法，雖有靈敏、特異性高、可以定量的優(yōu)點(diǎn)，但實(shí)驗(yàn)條件要求高、成本高、費(fèi)時(shí)，不宜在基層單位推廣。國(guó)內(nèi)外至今沒(méi)有一種即時(shí)定量檢測(cè)HCMV感染的方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本實(shí)用新型要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種能夠及時(shí)定量的檢測(cè)巨細(xì)胞病毒的傳感器。

為解決上述問(wèn)題，本實(shí)用新型提供一種用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒 PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器，包括電極、電極修飾膜、巨細(xì)胞病毒抗體層以及辣根過(guò)氧化物酶層，所述電極修飾膜粘附在電極表面，所述巨細(xì)胞病毒抗體層粘附在電極修飾膜上，所述辣根過(guò)氧化物酶粘附在狙細(xì)胞病毒抗體層上。

進(jìn)一步的，所述電極修飾膜包括若干納米復(fù)合材料層以及若干納米金-硫堇層，所述納米復(fù)合材料層和納米金-硫堇層間隔設(shè)置。

進(jìn)一步的，所述納米復(fù)合材料層和若干納米金-硫堇層均為三層。

進(jìn)一步的，巨細(xì)胞病毒抗體為巨細(xì)胞病毒PP65抗原單克隆抗體。

進(jìn)一步的，所述電極為絲網(wǎng)印刷電極。

本實(shí)用新型用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器，不受樣品濃度的影響，無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行純化等預(yù)處理，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)，能夠用于對(duì)巨細(xì)胞病毒抗原進(jìn)行快速定量檢測(cè)，且靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確性等技術(shù)參數(shù)均良好。

附圖說(shuō)明

圖1是本實(shí)用新型電極的制備流程圖。

圖2是本實(shí)用新型用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器的制備流程圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合附圖對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步說(shuō)明。

本實(shí)用新型用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器包括電極1、電極修飾膜和巨細(xì)胞病毒抗體層，所述電極修飾膜粘附在電極1表面，所述巨細(xì)胞病毒抗體層設(shè)在電極修飾膜上。

如圖1所示，所述電極1為絲網(wǎng)印刷電極，其包括PVC基板11、碳工作電極12、參比電極13、碳對(duì)電極14、絕緣層15和三根導(dǎo)電軌道16。先將所述三根導(dǎo)電軌道16均固定在PVC基板11上，然后依次將碳對(duì)電極14、碳工作電極12和參比電極13固定在PVC基板 11上，且所述碳對(duì)電極14、碳工作電極12和參比電極13對(duì)應(yīng)三個(gè)導(dǎo)電軌道16與其電性連接；所述碳工作電極12位于碳對(duì)電極14和參比電極13之間。其次，在三根導(dǎo)電軌道16上鋪設(shè)所述絕緣層15，且部分導(dǎo)電軌道16的長(zhǎng)度大于絕緣層15的長(zhǎng)度；所述導(dǎo)電軌道16 比絕緣層15長(zhǎng)0.6cm。所述碳工作電極12呈圓盤狀；所述碳工作電極12的直徑為3mm。

如圖2所示，用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器的制備：

制備氧化態(tài)石墨烯(GS)，用制備好的GS和生物保護(hù)劑殼聚糖 (CHI)、1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸鹽([BMIM][PF 6]-NH 2)發(fā)生環(huán)氧化物開(kāi)環(huán)反應(yīng)制得離子液體—石墨烯(GS-CHI-[BMIM][PF 6])，將GS-CHI-[BMIM][PF 6]與多壁碳納米管(MWCNT)混合，得到MWCNT-CHI-GS-[BMIM][PF 6]納米復(fù)合材料，將此納米復(fù)合材料滴加在電極1表面，自然干燥后，先后使用金納米離子及硫堇進(jìn)行修飾電極，自然干燥，反復(fù)3次，使其在電極上形成電極修飾膜。最后在電極1表面滴加5ul濃度為3ug/ml的抗巨細(xì)胞病毒PP65抗原單克隆抗體包被液，自然風(fēng)干過(guò)夜，然后用蒸餾水進(jìn)行沖洗，去除未固定的抗原，滴加5ul濃度為0.25％辣根過(guò)氧化物酶(HRP)進(jìn)行封閉，形成用于檢測(cè)巨細(xì)胞病毒PP65抗原的電化學(xué)免疫傳感器。

將巨細(xì)胞病毒抗體固定在上電極修飾膜，因膠體金具有很好的生物相容性，膠體金可與巨細(xì)胞病毒抗體之間可以形成Au-N的特性，使其巨細(xì)胞病毒抗體能穩(wěn)定的固定在電極修飾膜上。

制備標(biāo)準(zhǔn)曲線：

將巨細(xì)胞病毒抗原，進(jìn)行不同濃度的稀釋，并用制備好的傳感器進(jìn)行測(cè)定，繪制以電流毫安為橫坐標(biāo)，巨細(xì)胞病毒抗原濃度為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本傳感器不受樣品濃度的影響，無(wú)需對(duì)樣品進(jìn)行純化等預(yù)處理，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)靈敏度高、特異性強(qiáng)，能夠用于對(duì)巨細(xì)胞病毒抗原進(jìn)行快速定量檢測(cè)，且靈敏度、特異性以及準(zhǔn)確性等技術(shù)參數(shù)均良好。

以上僅為本實(shí)用新型的實(shí)施方式，并非因此限制本實(shí)用新型的專利范圍，凡是利用本實(shí)用新型說(shuō)明書(shū)及附圖內(nèi)容所作的等效結(jié)構(gòu)，直接或間接運(yùn)用在其他相關(guān)的技術(shù)領(lǐng)域，均同理在本實(shí)用新型的專利保護(hù)范圍之內(nèi)。