本發(fā)明涉及日化技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法。

背景技術(shù)：

隨著社會(huì)的發(fā)展，現(xiàn)代生活節(jié)奏不斷加快，生存競(jìng)爭(zhēng)日趨激烈，工作學(xué)習(xí)壓力越來越大，尤其是商務(wù)人士、白領(lǐng)及學(xué)生，經(jīng)常會(huì)感到疲憊、頭腦昏沉。有些人在春天、炎熱夏季、秋季容易犯困，特別是駕駛?cè)藛T，更需要在疲乏困倦時(shí)提神醒腦，避免危險(xiǎn)。因此，消費(fèi)者對(duì)具有提神醒腦功效的產(chǎn)品需求量增加。

精油是從植物的花、葉、莖、根或果實(shí)中，通過水蒸氣蒸餾法、擠壓法、冷浸法或溶劑提取法提煉萃取的揮發(fā)性芳香物質(zhì)。芳香精油對(duì)人體中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以產(chǎn)生影響，這種影響源于嗅覺感應(yīng)神經(jīng)元細(xì)胞及其受體對(duì)大腦功能的影響，這類功能包括了提神和警覺等行為。精油是由一些很小的分子所組成，這些高揮發(fā)物質(zhì)，可由鼻腔粘膜組織吸收進(jìn)入身體，將訊息直接送到腦部，通過大腦的邊緣系統(tǒng)，調(diào)節(jié)情緒和身體的生理功能。精油具有刺激交感神經(jīng)及副交感神經(jīng)、鎮(zhèn)靜及催眠、興奮提神、調(diào)整精神狀況、抗憂郁、緩解心理壓力、修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)的作用。動(dòng)物研究顯示，某些芳香精油可以在一定程度上增加體液中多巴胺濃度。

目前，芳香精油功效的評(píng)估多基于原料種屬，原料產(chǎn)地，原料成分，原料含量，原料提取和制備工藝，包括凝固點(diǎn)、熔點(diǎn)、沸點(diǎn)、密度、折光度、顏色在內(nèi)的原料物理屬性，原料氣味，原料應(yīng)用的傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)，以及少量人體使用感受和某些特定體液測(cè)量等。上述對(duì)芳香精油提神功效進(jìn)行評(píng)估的技術(shù)手段，多基于芳香精油原料的物理屬性、制備工藝、傳統(tǒng)經(jīng)驗(yàn)以及感官判斷和體驗(yàn)。但針對(duì)芳香精油生物學(xué)功效評(píng)估的技術(shù)手段，缺乏在生物學(xué)水平的客觀標(biāo)準(zhǔn)支持，無法固化和量化芳香精油提神功效的相關(guān)生物學(xué)功效，導(dǎo)致在工業(yè)應(yīng)用中在挑選具有提神功效的芳香精油原料、配方應(yīng)用和功效宣傳等方面，受到很大局限性和不確定性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

有鑒于此，本發(fā)明提供了一種具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法。該篩選方法具有快速準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)可重復(fù)、方法可固化、標(biāo)準(zhǔn)客觀以及應(yīng)用安全的特點(diǎn)。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法，包括如下步驟：

采用精油或其產(chǎn)品處理大腦神經(jīng)元細(xì)胞，檢測(cè)5-羥色胺、γ-氨基丁酸、褪黑激素、甘氨酸、多巴胺、谷氨酸、去甲腎上腺素和乙酰膽堿的濃度，獲得處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度；

根據(jù)如下公式檢測(cè)處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度與空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)濃度相比較的變化率：

其中，c1為處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度，c0為空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)濃度，vc為處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度與空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)濃度相比較的變化率；

根據(jù)vc分別獲得5-羥色胺、γ-氨基丁酸、褪黑激素、甘氨酸、多巴胺、谷氨酸、去甲腎上腺素和乙酰膽堿的提神分值xi；提神分值如下：

根據(jù)如下公式檢測(cè)精油或其產(chǎn)品的提神總分值x：

x＝x1+x2+x3+x4+x5+x6+x7+x8

其中，x為提神總分值，x1為5-羥色胺的提神分值，x2為γ-氨基丁酸的提神分值，x3為褪黑激素的提神分值，x4為甘氨酸的提神分值，x5為多巴胺的提神分值，x6為谷氨酸的提神分值，x7為去甲腎上腺素的提神分值，x8為乙酰膽堿的提神分值；

當(dāng)x≥44時(shí)，則精油或其產(chǎn)品為具有提神功效的精油或其產(chǎn)品；

當(dāng)x＜44時(shí)，則精油或其產(chǎn)品為不具有提神功效的精油或其產(chǎn)品。

作為優(yōu)選，精油或其產(chǎn)品的質(zhì)量百分比濃度為0.00005％～0.05％。

優(yōu)選地，精油的質(zhì)量百分比濃度為0.0005％。

作為優(yōu)選，精油或其產(chǎn)品處理大腦神經(jīng)元細(xì)胞的時(shí)間為5～60min。

優(yōu)選地，處理的時(shí)間為30min。

作為優(yōu)選，精油或其產(chǎn)品大腦神經(jīng)元細(xì)胞為培養(yǎng)5～15天的大腦神經(jīng)元細(xì)胞。

優(yōu)選地，大腦神經(jīng)元細(xì)胞為培養(yǎng)10天的大腦神經(jīng)元細(xì)胞。

作為優(yōu)選，培養(yǎng)的培養(yǎng)基為馬血清培養(yǎng)液，細(xì)胞接種量為1×10⁴個(gè)/ml，培養(yǎng)溫度為37℃，培養(yǎng)條件為5％co2。

作為優(yōu)選，大腦神經(jīng)元細(xì)胞為人體大腦神經(jīng)元細(xì)胞或動(dòng)物大腦神經(jīng)元細(xì)胞。

在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，動(dòng)物大腦神經(jīng)元細(xì)胞為鼠大腦神經(jīng)元細(xì)胞。

在本發(fā)明提供的實(shí)施例中，動(dòng)物大腦神經(jīng)元細(xì)胞為小鼠大腦神經(jīng)元細(xì)胞。

本發(fā)明提供了一種具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法。該篩選方法包括：采用精油或其產(chǎn)品處理大腦神經(jīng)元細(xì)胞，檢測(cè)5-羥色胺等濃度，獲得處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度；檢測(cè)處理組神經(jīng)遞質(zhì)濃度與空白對(duì)照組神經(jīng)遞質(zhì)濃度相比較的變化率vc；根據(jù)vc分別獲得各個(gè)神經(jīng)遞質(zhì)的提神分值xi；根據(jù)求和公式檢測(cè)精油或其產(chǎn)品的提神總分值x；當(dāng)x≥44時(shí)，則精油或其產(chǎn)品為具有提神功效的精油或其產(chǎn)品。本發(fā)明至少具有如下優(yōu)勢(shì)之一：

本發(fā)明從生物體外細(xì)胞及其生理和生化層面，對(duì)芳香精油原料和產(chǎn)品進(jìn)行與提神提神功效相關(guān)的可量化評(píng)估；

本發(fā)明可以解決芳香精油及其產(chǎn)品提神功效的生物學(xué)客觀數(shù)據(jù)，對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品的提神功效評(píng)估進(jìn)行量化；

本發(fā)明可以對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品提神功效進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證；

本發(fā)明對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品提神功效的量化評(píng)估和驗(yàn)證均在體外進(jìn)行，便于操作，同時(shí)，這一體外評(píng)估方法具有可重復(fù)的固化特點(diǎn)；

本發(fā)明對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品提神功效的評(píng)估方法，可以有效支持具有提神功效芳香精油的原料挑選、配方設(shè)計(jì)和調(diào)配及其功效檢測(cè)；

可見，本發(fā)明篩選方法針對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品，進(jìn)行提神功效的生物學(xué)體外評(píng)估，具有快速準(zhǔn)確、數(shù)據(jù)可重復(fù)、方法可固化、標(biāo)準(zhǔn)客觀、以及應(yīng)用安全的特點(diǎn)。

本發(fā)明篩選方法可以加速對(duì)芳香精油及其產(chǎn)品的篩選評(píng)估進(jìn)度，對(duì)建立具有提神功效的芳香精油及其產(chǎn)品配方調(diào)配進(jìn)行快速評(píng)估，為具有提神功效的芳香精油及其產(chǎn)品的使用者提供產(chǎn)品功效說明、產(chǎn)品安全說明、產(chǎn)品使用劑量說明以及產(chǎn)品使用方法說明。

附圖說明

圖1示腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)第10天生長(zhǎng)狀況；

圖2～4分別示薄荷精油放置大腦神經(jīng)元細(xì)胞后0～60分鐘培養(yǎng)液中神經(jīng)元細(xì)胞所釋放的多巴胺、γ氨基丁酸和褪黑激素水平；

圖5示檸檬草油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺水平的影響；

圖6～13分別示不同芳香精油對(duì)神經(jīng)細(xì)胞釋放5-羥色胺、γ-氨基丁酸、乙酰膽堿、去甲腎上腺素、甘氨酸、谷氨酸、褪黑激素、多巴胺水平的影響；

圖14示本發(fā)明的工藝流程。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明公開了一種具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應(yīng)用已經(jīng)通過較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。

以下實(shí)施案例中的％，如無特別說明，均為質(zhì)量百分比。

在以下實(shí)施例中，在檢測(cè)各神經(jīng)遞質(zhì)水平時(shí)采用市售試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒中包括顯色劑a和顯色劑b。

本發(fā)明提供的具有提神功效精油或其產(chǎn)品的篩選方法中所用精油或腦神經(jīng)元細(xì)胞均可由市場(chǎng)購(gòu)得。

下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：

實(shí)施例1腦神經(jīng)元細(xì)胞的培養(yǎng)

1、培養(yǎng)原代小鼠腦神經(jīng)元細(xì)胞

選擇新生1天小鼠，分離提取小鼠大腦中神經(jīng)元細(xì)胞，分散于含有馬血清的neurobasalmedium(thermofisher,cat.#21103-049)培養(yǎng)液中，然后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為空氣:二氧化碳為95:5。每隔一天更換腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)液。腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)第10天生長(zhǎng)狀況如圖1所示。

2、培養(yǎng)原代人腦神經(jīng)元細(xì)胞

通過商業(yè)途徑購(gòu)買人腦神經(jīng)元細(xì)胞，并將細(xì)胞置于含有馬血清的neurobasalmedium(thermofisher,cat.#21103-049)培養(yǎng)液中，然后置于37℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為空氣:二氧化碳為95:5。每隔一天更換腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)液。腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)第10天生長(zhǎng)狀況與圖1相近。

實(shí)施例2薄荷精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞3種神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平影響

薄荷精油(mintpeppermintyakimaoil)對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平影響時(shí)間。將薄荷精油加入培養(yǎng)第10天的大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中，并使薄荷精油在大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中的最終濃度為0.0005％、0.0050％和0.0500％，測(cè)量薄荷精油放置大腦神經(jīng)元細(xì)胞后0～60分鐘培養(yǎng)液中神經(jīng)元細(xì)胞所釋放的多巴胺(dopamine)、γ氨基丁酸(gaba)和褪黑激素(melatonin)水平。本實(shí)施例中的神經(jīng)遞質(zhì)樣本收集時(shí)間為第5分鐘、第10分鐘、第15分鐘、第20分鐘、第30分鐘、第40分鐘、第50分鐘和第60分鐘。結(jié)果如圖2-4所示。

試驗(yàn)結(jié)果表明：薄荷精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞胞釋放多巴胺(dopamine)、γ氨基丁酸(gaba)和褪黑激素(melatonin)等神經(jīng)遞質(zhì)的時(shí)間可以在加入樣品后第5分鐘開始變得明顯，這一過程可以持續(xù)60分鐘。數(shù)據(jù)提示，芳香精油樣品對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放的樣本收集時(shí)間在第5分鐘到第30分鐘之間更具有一定的線性關(guān)系。

實(shí)施例3薄荷精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞多種神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平影響

在不同濃度下，薄荷精油(mintpeppermintyakimaoil)對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞在第30分鐘時(shí)，對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中不同神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的影響，見下表1。本實(shí)施例所涉及的神經(jīng)遞質(zhì)包括多巴胺(dopamine)、五羥色胺(5hydroxy-tryptamine)、γ-氨基丁酸(gammaaminobutyricacid)、乙酰膽堿(acetylcholine)、去甲腎上腺素(noradrenaline)、甘氨酸(glycine)、谷氨酸鹽(glutamine)和褪黑激素(melatonin)。

表1薄荷精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞的不同神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的影響

上述試驗(yàn)結(jié)果顯示，在一定濃度下，薄荷精油可促進(jìn)退黑色素、多巴胺、去甲腎上腺素的釋放，同時(shí)抑制5-羥色胺、γ-氨基丁酸、甘氨酸、乙酰膽堿、谷氨酸的釋放。此外，這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，不同劑量薄荷精油對(duì)促進(jìn)或者抑制不同神經(jīng)遞質(zhì)的釋放具有一定的量效關(guān)系。

實(shí)施例4檸檬草油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺水平的影響

本實(shí)施例涉及了檸檬草油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺水平的影響以及提神功效的分析。

試驗(yàn)方法：將檸檬草油加入培養(yǎng)第10天的大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中，并使檸檬草油在大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中的最終濃度為0％、0.00005％、0.0005％，測(cè)量精油放置大腦神經(jīng)元細(xì)胞后30分鐘培養(yǎng)液中神經(jīng)元細(xì)胞所釋放的神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺水平。

檢測(cè)結(jié)果如圖5所示。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，不同濃度的檸檬草油，可以提升大腦神經(jīng)元細(xì)胞多巴胺水平。多巴胺對(duì)人的感覺、興奮、記憶等信息傳遞密切相關(guān)，因此，本申請(qǐng)通過這項(xiàng)測(cè)量可以從數(shù)據(jù)上得知，檸檬草油在500ppm濃度時(shí)，對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞的興奮性刺激作用提升了32.22％，在這一濃度下調(diào)配相關(guān)產(chǎn)品，可能獲得對(duì)人體較好的提神作用。

實(shí)施例5提神功效精油的篩選方法

本實(shí)施例研究了不同芳香精油對(duì)多種大腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)水平的影響。本實(shí)施例所涉及的芳香精油濃度均為0.0005％。

試驗(yàn)方法：將精油加入培養(yǎng)第10天的大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中，并使精油在大腦神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)體系中的最終濃度為0.0005％，測(cè)量精油放置大腦神經(jīng)元細(xì)胞后30分鐘培養(yǎng)液中神經(jīng)元細(xì)胞所釋放的神經(jīng)遞質(zhì)水平。

本實(shí)施案例所涉及的神經(jīng)遞質(zhì)包括多巴胺(dopamine)、五羥色胺(5hydroxy-tryptamine)、γ-氨基丁酸(gammaaminobutyricacid)、乙酰膽堿(acetylcholine)、去甲腎上腺素(noradrenaline)、甘氨酸(glycine)、谷氨酸鹽(glutamine)和褪黑激素(melatonin)。

本實(shí)施例所涉及的芳香精油包括芳樟油(hohe)，迷迭香油(rosemaryoil)，羅勒油(basiloil)，檸檬草油(lemongrassoil)，依蘭油(ylangiiimadagascareo)，薄荷油(mintpeppermintyakimaoil)，檸檬油(lemonoilitaly)，桉葉油(eucalyptusglobulusoil)。

不同芳香精油對(duì)神經(jīng)細(xì)胞處理后的多種神經(jīng)遞質(zhì)水平檢測(cè)結(jié)果如圖6-13所示。

根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果，采用如下的評(píng)估體系計(jì)算各種芳香精油在提神方面的分值。工藝流程圖見圖14。提神作用評(píng)估體系的標(biāo)準(zhǔn)如表2所示，計(jì)算結(jié)果如表3所示。

表2芳香精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞在提神作用評(píng)估體系的標(biāo)準(zhǔn)

注：評(píng)分?jǐn)?shù)值越高，說明興奮型神經(jīng)遞質(zhì)濃度越高或抑制型神經(jīng)遞質(zhì)濃度越低。

表3芳香精油對(duì)大腦神經(jīng)元細(xì)胞的提神分值

*注：

es10：薄荷精油12％+檸檬草油7％+檸檬桉精油4％+葡萄柚精油5％+佛手柑精油8％+羅勒精油6％+沒藥精油8％+甜杏仁油50％；

es32：苦橙精油6％+超級(jí)薰衣草精油8％+依蘭精油4％+天竺葵精油4％+絲柏精油3％+玫瑰草精油4％+羅馬洋甘菊精油6％+橙花精油7％+安息香精油8％+甜杏仁油50％。

本發(fā)明以44分為分界線，總分越高，樣品的提神效果越好。表3數(shù)據(jù)顯示，某些濃度的薄荷油和檸檬草油對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的總分值超過44分，提示在相應(yīng)濃度下，該樣品可能具有較好的提神作用；而其他精油樣品在相應(yīng)濃度下對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的總分值未超過44分，則提示在相應(yīng)濃度下，該樣品可能不具有較好的提神作用。實(shí)驗(yàn)3中樣品es32和es10分別為陰性和陽(yáng)性對(duì)照，es32對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的總分值為28分，es10對(duì)腦神經(jīng)元細(xì)胞神經(jīng)遞質(zhì)釋放水平的總分值為51分，提示采用這一評(píng)估方法，可以獲得與對(duì)照樣品相一致的提神作用的判斷。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。