本發(fā)明涉及免疫學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及了一種時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑。
背景技術(shù)：
：β興奮劑(β腎上腺受體激動(dòng)劑)的藥物，主要包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺以及沙丁胺醇、溴布特羅、馬布特羅等，β興奮劑容易在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)大量蓄積，維持較高的殘留量，所以畜產(chǎn)品一旦攜有，一般烹飪方法和過程都很難將其清除或使其失活、溶解、損耗，因而嚴(yán)重影響到人類的健康。歐美等國早已立法禁止在畜禽生產(chǎn)上使用β興奮劑，而我國農(nóng)業(yè)部也作出相同的規(guī)定，盡管如此，受經(jīng)濟(jì)利益的驅(qū)使，違法濫用β興奮劑現(xiàn)象仍然比較普遍。目前針對(duì)β興奮劑的檢測技術(shù)主要有色譜技術(shù)和免疫分析技術(shù)等，色譜技術(shù)最常用，主要有高壓液相色譜(hplc)，高壓液相色譜/熒光(hplc/fld)，液相色譜-質(zhì)譜連用(lc-ms)，氣象色譜-質(zhì)譜(gc-ms)連用，毛細(xì)管電泳等方法。這些方法靈敏準(zhǔn)確，但是樣品處理繁瑣費(fèi)時(shí)，成本高，而且需要有經(jīng)過專門訓(xùn)練的專業(yè)人士來操作復(fù)雜的儀器設(shè)備。而酶聯(lián)免疫分析技術(shù)靈敏、特異、快速，一次能檢測大量樣品，但該方法也需酶標(biāo)儀等儀器設(shè)備，分析時(shí)間一般為1～4小時(shí)，對(duì)β興奮劑檢測仍具有一定的局限，因此，急需發(fā)展一種簡便、快速、適于現(xiàn)場的β興奮劑檢測方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中操作復(fù)雜、成本高、時(shí)間長的缺點(diǎn)，提供了一種簡便、快速、適于現(xiàn)場的時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑。為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明通過下述技術(shù)方案得以解決：一種時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑，包括以下步驟，步驟一，eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗鼠igg，經(jīng)蛋白質(zhì)脫鹽柱(pd-10)柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗鼠igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗鼠igg與0.5mg的eu3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在6％交聯(lián)瓊脂糖(sepharosecl-6b)柱中分餾，分餾物即為eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg；步驟二，sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗兔igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗兔igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗兔igg與0.5mg的sm3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg；步驟三，參考標(biāo)準(zhǔn)品的制備：用0.05mol/l、ph7.8含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液將萊克多巴胺單克隆抗體:沙丁胺醇單克隆抗體配制成0.1:0.5，0.2:1，0.5:2.5，2.5:12.5，5:25ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；步驟四，固相包被板的制備：將萊克多巴胺-卵清蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇-卵清蛋白偶聯(lián)物與0.1mol/l、ph7.8含有0.05％nan3和0.9％nacl的碳酸鹽緩沖液4℃下充分混合12h，混合后所得液體稀釋至1mg/l作為包被液，96孔微孔板各孔加入80ul包被液，室溫下放置14h，棄去包被液，用0.05mol/l含有0.05％tween20的tris-hcl緩沖液洗滌5次，之后加入100ul、0.05mol/l、ph7.2含有0.5％ova，0.9％nacl，0.05％nan3的tris-hcl緩沖液封閉，37℃下放置1h，棄去封閉液，真空抽干，包被板密封后-20℃冷凍保存。步驟五，取步驟四所得的包被板，加入步驟三所得標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品到各自微孔中，再加入步驟一所得標(biāo)記物和步驟二所得標(biāo)記物，震蕩孵育后用洗脫液洗滌次，再加入增強(qiáng)液，震蕩孵育，用半自動(dòng)熒光檢測儀進(jìn)行檢測。作為優(yōu)選，取步驟四所得包被板，加入50ul步驟三所得標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品，加入100ul步驟一所得標(biāo)記物和步驟二所得標(biāo)記物，室溫下震蕩孵育30min，用0.05mol/l、ph7.4含有0.9％nacl和0.4％～0.6％甲醇的tris-hcl洗滌液洗滌5次，再加200ul增強(qiáng)液，震蕩孵育10min，用半自動(dòng)熒光檢測儀進(jìn)行檢測。作為優(yōu)選，增強(qiáng)液為0.1mol/l、ph3.2含有15umolβ-萘甲酰三氟丙酮和0.1％tritonx-100的鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液。作為優(yōu)選，樣品為尿液或血液，樣品處理：尿液以3000r/min離心5min，之后用生理鹽水稀釋10倍；將0.5ml血液用0.5ml、ph7.4、10mmol/l的pbs緩沖液稀釋10倍。eu3+-dtta、sm3+-dtta均購自tianjinradio-medicalinstitute。時(shí)間分辨熒光免疫層析法其原理是利用具有雙功能基團(tuán)結(jié)構(gòu)的螯合劑，其一端和鑭系元素結(jié)合，另一端和抗體分子上的自由氨基聯(lián)接，制成eu3+標(biāo)記抗體，它與待測樣品中的抗原結(jié)合成免疫復(fù)合物，測定復(fù)合物中鑭系元素的熒光強(qiáng)度就能確定樣品中抗原的量。本發(fā)明由于采用了以上技術(shù)方案，具有顯著的技術(shù)效果：甲醇可以提高標(biāo)記物的溶解度和評(píng)估其在時(shí)間分辨熒光免疫層析法中的效果；在時(shí)間分辨熒光免疫層析法采用eu3+標(biāo)記羊抗鼠igg和sm3+標(biāo)記羊抗兔igg，測量時(shí)，通過檢測eu3+和sm3+可以同時(shí)檢測樣品中是否含有萊克多巴胺(rac)和沙丁胺醇(stl)。本發(fā)明具有穩(wěn)定性佳、靈敏度高及重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式下面實(shí)施例是對(duì)本發(fā)明進(jìn)一步詳細(xì)描述，但不是限制本發(fā)明的范圍。對(duì)比例1elisa試劑盒測定β興奮劑：將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫(20～25℃)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻；取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板放回鋁箔袋，封口，保存于2～8℃；洗滌工作液在使用前也需回溫；將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置；酶結(jié)合物工作液配制：根據(jù)需要量用濃縮酶結(jié)合物稀釋液將濃縮酶結(jié)合物按1:10的比例稀釋成酶結(jié)合物工作液(即1份濃縮酶結(jié)合物加入到10份濃縮酶結(jié)合物稀釋液中)；加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本及酶結(jié)合物工作液：加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl到對(duì)應(yīng)的微孔中，然后加入配制好的酶結(jié)合物工作液100μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)40min；洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250μl/孔，充分洗滌4～5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。顯色：加入底物液a液50μl/孔，再加底物液b液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15min。測定：加入終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù))，測定每孔o(hù)d值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液。實(shí)施例1一種時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑，包括以下步驟，步驟一，eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗鼠igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗鼠igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗鼠igg與0.5mg的eu3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg；步驟二，sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗兔igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗兔igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗兔igg與0.5mg的sm3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg；步驟三，參考標(biāo)準(zhǔn)品的制備：用0.05mol/l、ph7.8含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液將萊克多巴胺單克隆抗體:沙丁胺醇單克隆抗體配制成0.1:0.5，0.2:1，0.5:2.5，2.5:12.5，5:25ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；步驟四，固相包被板的制備：將萊克多巴胺-卵清蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇-卵清蛋白偶聯(lián)物與0.1mol/l、ph7.8含有0.05％nan3和0.9％nacl的碳酸鹽緩沖液4℃下充分混合12h，混合后所得液體稀釋至1mg/l作為包被液，96孔微孔板各孔加入80ul包被液，室溫下放置14h，棄去包被液，用0.05mol/l含有0.05％tween20的tris-hcl緩沖液洗滌5次，之后加入100ul、0.05mol/l、ph7.2含0.5％ova、0.9％nacl和0.05％nan3的tris-hcl緩沖液封閉，37℃下放置1h，棄去封閉液，真空抽干，包被板密封后-20℃冷凍保存。步驟五，取步驟四所得包被板，加入50ul步驟三所得標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品，再加入100ul步驟一所得標(biāo)記物和步驟二所得標(biāo)記物，室溫下震蕩孵育30min，用0.05mol/l、ph7.4含有0.9％nacl和0.4％～0.6％甲醇的tris-hcl洗滌液洗滌5次，再加200ul增強(qiáng)液，震蕩孵育10min，用半自動(dòng)熒光檢測儀進(jìn)行檢測。增強(qiáng)液為0.1mol/l、ph3.2含有15umolβ-萘甲酰三氟丙酮和0.1％tritonx-100的鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液。樣品為尿液，樣品處理為尿液以3000r/min離心5min，之后用生理鹽水稀釋10倍。實(shí)施例2一種時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑，包括以下步驟，步驟一，取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗鼠igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗鼠igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗鼠igg與0.5mg的eu3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg；步驟二，sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗兔igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗兔igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗兔igg與0.5mg的sm3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg；步驟三，參考標(biāo)準(zhǔn)品的制備：用0.05mol/l、ph7.8含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液將萊克多巴胺單克隆抗體:沙丁胺醇單克隆抗體配制成0.1:0.5，0.2:1，0.5:2.5，2.5:12.5，5:25ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；步驟四，將萊克多巴胺-卵清蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇-卵清蛋白偶聯(lián)物與0.1mol/l、ph7.8含有0.05％nan3和0.9％nacl的碳酸鹽緩沖液4℃下充分混合12h，混合后所得液體稀釋至1mg/l作為包被液，96孔微孔板各孔加入80ul包被液，室溫下放置14h，棄去包被液，用0.05mol/l含有0.05％tween20的tris-hcl緩沖液洗滌5次，之后加入100ul、0.05mol/l、ph7.2含有0.5％ova、0.9％nacl和0.05％nan3的tris-hcl緩沖液封閉，37℃下放置1h，棄去封閉液，真空抽干，包被板密封后-20℃冷凍保存。取步驟四所得包被板，加入50ul步驟三所得標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品，再加入100ul步驟一所得標(biāo)記物和步驟二所得標(biāo)記物，室溫下震蕩孵育30min，用0.05mol/l、ph7.4含有0.9％nacl和0.4％甲醇的tris-hcl洗滌液洗滌5次，再加200ul增強(qiáng)液，震蕩孵育10min，用半自動(dòng)熒光檢測儀進(jìn)行檢測。增強(qiáng)液為0.1mol/l、ph3.2含有15umolβ-萘甲酰三氟丙酮和0.1％tritonx-100的鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液。樣品為動(dòng)物組織，樣品處理為按照gb/t5009.192-2003標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)施例3一種時(shí)間分辨熒光免疫層析法定量檢測動(dòng)物中的β興奮劑，包括包括以下步驟，步驟一，eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗鼠igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗鼠igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗鼠igg與0.5mg的eu3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為eu3+標(biāo)記的羊抗鼠igg；步驟二，sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg：取溶解于50mol/l、ph7.0的pbs緩沖液的5g/l羊抗兔igg，經(jīng)pd-10柱轉(zhuǎn)換緩沖條件，洗脫液為0.05mol/l、ph9.6的碳酸鹽緩沖溶液，用洗脫液稀釋羊抗兔igg至1mg/ml，取1.0ml稀釋后的羊抗兔igg與0.5mg的sm3+-dtta混合后在4℃下不斷攪拌反應(yīng)24h，反應(yīng)后所得的混合物采用0.05mol/l、ph8.0含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液作為洗脫液在sepharosecl-6b柱中分餾，分餾物即為sm3+標(biāo)記的羊抗兔igg；步驟三，參考標(biāo)準(zhǔn)品的制備：用0.05mol/l、ph7.8含有0.9％nacl的tris-hcl緩沖液將萊克多巴胺單克隆抗體:沙丁胺醇單克隆抗體配制成0.1:0.5，0.2:1，0.5:2.5，2.5:12.5，5:25ng/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液；步驟四，固相包被板的制備：將萊克多巴胺-卵清蛋白偶聯(lián)物、沙丁胺醇-卵清蛋白偶聯(lián)物與0.1mol/l、ph7.8含有0.05％nan3和0.9％nacl的碳酸鹽緩沖液4℃下充分混合12h，混合后所得液體稀釋至1mg/l作為包被液，96孔微孔板各孔加入80ul包被液，室溫下放置14h，棄去包被液，用0.05mol/l含有0.05％tween20的tris-hcl緩沖液洗滌5次，之后加入100ul、0.05mol/l、ph7.2含有0.5％ova、0.9％nacl和0.05％nan3的tris-hcl緩沖液封閉，37℃下放置1h，棄去封閉液，真空抽干，包被板密封后-20℃冷凍保存。取步驟四所得包被板，加入50ul步驟三所得標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品，再加入100ul步驟一所得標(biāo)記物和步驟二所得標(biāo)記物，室溫下震蕩孵育30min，用0.05mol/l、ph7.4含有0.9％nacl和0.6％甲醇的tris-hcl洗滌液洗滌5次，再加200ul增強(qiáng)液，震蕩孵育10min，用半自動(dòng)熒光檢測儀進(jìn)行檢測。增強(qiáng)液為0.1mol/l、ph3.2含有15umolβ-萘甲酰三氟丙酮和0.1％tritonx-100的鄰苯二甲酸氫鉀緩沖液。樣品為血液，樣品處理為將0.5ml血液用0.5ml、ph7.4、10mmol/l的pbs緩沖液稀釋10倍。以上羊抗鼠igg、羊抗兔igg購自于sigma公司；eu3+-dtta、sm3+-dtta購自于tianjinradio-medicalinstitute，蛋白質(zhì)脫鹽柱(pd-10)購自于rullwellco.ltd，6％交聯(lián)瓊脂糖(sepharosecl-6b)購自于北京奇松生物科技有限公司。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.靈敏度國家對(duì)萊克多巴胺、沙丁胺醇規(guī)定的最高殘留量均為0.05ng/ml，從表1張可以看出，本發(fā)明滿足對(duì)萊克多巴胺、沙丁胺醇的測試要求，現(xiàn)有技術(shù)中采用ic/ms測試方法，對(duì)此兩種物質(zhì)的檢測線為10ng/ml，因此相比與ic/ms法、elisa法，本發(fā)明具有較高的靈敏度。2.回收率在1ml尿樣(0ng/mlrac，0ng/mlstl)和1ml尿樣(1ng/mlrac，1ng/mlstl)，分別加入0.1ml混合液a，混合物b，混合物c。其中混合液a中含有0ng/mlrac和0ng/mlstl；混合液b中含有1ng/mlrac和1ng/mlstl；混合液c中含有10ng/mlrac和10ng/mlstl。重復(fù)計(jì)算5次，計(jì)算回收率。樣品(rac,stl)含量(rac,stl)添加含量(rac,stl)測定值(rac,stl)回收率0ng/ml，0ng/ml0.1ng/ml，0.1ng/ml0.11ng/ml，0.11ng/ml110％，110％0ng/ml，0ng/ml1.0ng/ml，1.0ng/ml0.9ng/ml，0.9ng/ml90％，90％0ng/ml，0ng/ml10.0ng/ml，10.0ng/ml9.3ng/m，9.3ng/ml93％，93％0.1ng/ml，0.1ng/ml0.1ng/ml，0.1ng/ml0.2ng/ml，0.2ng/ml100％，100％0.1ng/ml，0.1ng/ml1.0ng/ml，1.0ng/ml1.09ng/ml，1.09ng/ml99.1％，99.1％0.1ng/ml，0.1ng/ml10.0ng/ml，10.0ng/ml9.9ng/ml，9.9ng/ml98％，98％從表2可以看出，rac,stl空白平均加標(biāo)回收率均為97.7％，rac,stl樣品平均加標(biāo)回收率均為99％，表明本試劑具有良好的準(zhǔn)確性。3.分析精密度以樣品加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)中3個(gè)分析樣本為質(zhì)控，采用直接競爭法進(jìn)行測定，各設(shè)10個(gè)重復(fù)孔，分析內(nèi)精密度與分析間精密度測試結(jié)果分別如表3和表4所示。表3分析內(nèi)精密度測試結(jié)果(rac,stl)濃度(rac,stl)平均測定濃度(rac,stl)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rac,stl)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.2，0.20.21，0.210.005，0.0052.38，2.381.1，1.11.06，1.050.039，0.0413.68，3.9010.1，10.19.83，9.700.354，0.3633.60，3.74表4分析間精密度測試結(jié)果(rac,stl)濃度(rac,stl)平均測定濃度(rac,stl)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rac,stl)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.2，0.20.19，0.200.006，0.0073.16，3.681.1，1.11.08，1.090.046，0.0474.25，4.3110.1，10.19.87，9.800.525，0.5315.32，5.42從表3和表4可以看出，rac的分析內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.38％～3.60％，平均3.22％，stl的分析內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差2.38％～3.74％，平均3.34％；rac的分析間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.16％～5.25％，平均4.24％，stl的分析間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.68％～5.42％，平均4.47％。從分析內(nèi)與分析間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差可以看出本試劑重復(fù)性好、精密度高?？傊?，以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所作的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬本發(fā)明專利的涵蓋范圍。當(dāng)前第1頁12