本發(fā)明涉及了一種紅景天甙的提取方法，屬于中草藥提取分析領(lǐng)域，具體地說涉及了一種長白山道地植物高山紅景天的紅景天甙提取方法。

背景技術(shù)：

高山紅景天（Rhodiola shalinensis A．Bor．）別名庫頁紅景天，系景天科紅景天屬 (Rhodiola L．)，是一種生長在高海拔低溫山區(qū)的多年生雙子葉草本植物。在我國多分布于東北，是長白山地區(qū)的稀有珍貴藥用植物之一。高山紅景天的根、莖、葉、花、種子均可入藥，有效成分為紅景天甙、黃酮類化合物及多種微量元素，紅景天具有抗氧化、抗疲勞、抗缺氧、抗寒冷、抗衰老、抗微波輻射等類似“適應(yīng)原”功效。目前紅景天的種類有200種之多，但僅有14種曾進(jìn)行過生化研究，經(jīng)鑒定發(fā)現(xiàn)紅景天種類與其化學(xué)成分和藥理活性具有相關(guān)性。

紅景天甙（Salidroside）是從景天科植物高山紅景天的干燥根及根莖或干燥全草中提取的一種化合物，是無色透明針狀結(jié)晶體，易溶于水、乙醇、正丁醇、微溶于丙醇和乙醚。近年來，人們逐步側(cè)重對(duì)紅景天甙的藥用和化學(xué)成分以及生物學(xué)特性進(jìn)行研究，已經(jīng)取得了豐碩的成果。紅景天甙是甙元酪醇和尿苷二磷酸葡萄等代謝過程的上游產(chǎn)物，并對(duì)其代謝過程開展了深入的研究，所以，作為對(duì)紅景天甙探索的第一步，紅景天甙提取工藝就顯得尤為重要。

紅景天甙的提取方法根據(jù)提取方式的不同，主要分為：超臨界CO2萃取法、溶劑回流提取法、醇提取法、超聲提取法、水提取法、微波破碎提取法、和酶解法等。這些提取方法中，既有優(yōu)點(diǎn)也有缺點(diǎn)。溶劑回流提取法是比較傳統(tǒng)的提取紅景天甙的方法，該方法的操作簡(jiǎn)單，成本低，設(shè)備要求不高，耗時(shí)較長；超聲提取法是利用超聲波的一種物理破碎過程，通過機(jī)械作用產(chǎn)生空化效應(yīng)和熱效應(yīng)，使介質(zhì)分子的運(yùn)動(dòng)速度增大，以破壞植物的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，促使物質(zhì)擴(kuò)散，使溶劑有效滲透到藥材細(xì)胞中，從而使藥材中的有效成分得到分離，縮短提取時(shí)間，最終達(dá)到提高產(chǎn)量和質(zhì)量的目的。微波破碎提取是利用微波技術(shù)對(duì)植物的大分子物質(zhì)進(jìn)行萃取，以提高萃取效率的一種新技術(shù)，通過電磁場(chǎng)的作用使被提取物與其基體或者體系有效的分離，最終進(jìn)入到極性比較接近的提取溶劑中，從而達(dá)到提取目的，此方法不僅縮短了提取時(shí)間，而且比傳統(tǒng)的溶劑回流提取的方法的效率高、雜質(zhì)少、節(jié)能和環(huán)保。酶提取法是利用植物體內(nèi)酶的專一性的作用，對(duì)植物細(xì)胞成分進(jìn)行處理，如纖維素酶能分解出一種糖苷鍵來破壞細(xì)胞壁，讓植物細(xì)胞內(nèi)的有效成分離并釋放出來。但是該方法需要一定的溫度，時(shí)間和pH值，才能夠有效的提取出目的產(chǎn)物。如果溫度過低纖維素酶不能夠充分的表現(xiàn)，如果溫度過高又會(huì)導(dǎo)致酶的結(jié)構(gòu)變性，兩者都會(huì)使酶活性降低，所以此方法一般較為少用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
針對(duì)上述不足，本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)紅景天甙提取方法中，紅景天甙提取困難、純度低的不足，提供一種新的紅景天甙提取的方法，使得紅景天甙提取更加高效。

本發(fā)明是按以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：本發(fā)明的提取方法中，將常用的超聲提取法進(jìn)行改進(jìn)，首先將樣品置于微波爐中，功率500w，微波2min，微波后進(jìn)行超聲提取，離心，收集提取物，成功提取出了純度高、雜質(zhì)峰干擾少的紅景天甙樣品。

該方法的具體步驟如下：

1）、在長白山海拔高度為1700-2500 m 處采集高山紅景天的野生苗。

2）、取步驟1）中高山紅景天根5g，清洗干凈，放入培養(yǎng)皿中；利用鼓風(fēng)干燥箱80℃烘干；將樣品研磨粉碎；過60目篩；稱取1.0g干粉置于50ml離心管中；加入40ml重蒸水，漩渦震蕩3min，將樣品置于微波爐中，功率500w，微波2min；將超聲波清洗儀設(shè)置60℃，超聲提取5min；利用重蒸水將樣品定容至50ml；用0.45um濾膜抽濾3次，制得紅景天甙提取液；取100ul紅景天甙提取液，利用HPLC檢測(cè)，其色譜圖在13.5-14分鐘出峰， 證明提取液中含有紅景天甙， 根據(jù)其峰值確定提取液中紅景天甙含量。

本發(fā)明具有以下有益的效果：

1、本發(fā)明的紅景天甙提取方法中，將常用的超聲提取法進(jìn)行改進(jìn)，首先將利用微波處理樣品，微波后進(jìn)行超聲提取，離心，收集提取物。成功提取出了純度高、雜質(zhì)峰干擾少的紅景天甙樣品。

2、本發(fā)明的方法對(duì)現(xiàn)有的超聲提取法和微波破碎提取法進(jìn)行了有創(chuàng)造性的結(jié)合與改進(jìn)，具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步，具體體現(xiàn)在 ： 本發(fā)明的提取方法中，將常用的超聲提取法進(jìn)行改進(jìn)，首先將利用微波處理樣品，將樣品置于微波爐中，功率500w，微波2min，微波后進(jìn)行超聲提取，離心，收集提取物。成功提取出了純度高、雜質(zhì)峰干擾少的紅景天甙樣品。

3、本發(fā)明的方法較其它紅景天甙提取方法相比，操作快速、高效，實(shí)用性強(qiáng)，經(jīng)高效液相色譜法檢測(cè)分析，本發(fā)明獲得的紅景天甙，峰型完整、雜質(zhì)干擾峰少、紅景天甙含量較高，為后續(xù)中草藥藥用成份分離提純的研究奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

附圖說明

圖1為紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色譜圖。

圖2為現(xiàn)有技術(shù)中采用超聲提取法提取的紅景天甙樣品HPLC色譜圖。

圖3為本發(fā)明采用超聲+微波破碎提取法提取的紅景天甙HPLC色譜圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施案例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明：

1、紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品HPLC檢測(cè)

紅景天甙標(biāo)準(zhǔn)品購自中國藥品生物制品檢定所，將紅景天的標(biāo)準(zhǔn)品用乙腈/水(1/9)溶液溶解，在紫外可見光分光光度計(jì)上進(jìn)行紫外的全波長掃描，分別記錄掃描數(shù)據(jù)，繪制掃描后峰圖，確定標(biāo)準(zhǔn)品檢測(cè)波長。利用HPLC檢測(cè)，其色譜圖基線平整，峰型整齊，并且確定紅景天甙在第13.5-14分鐘出峰（如圖1所示）。

2、采用現(xiàn)有技術(shù)超聲提取法提取紅景天甙：

1）、在長白山海拔高度為1700-2500 m 處采集高山紅景天的野生苗。

2）、首先取上述1）中的高山紅景天根5g，清洗干凈，放入培養(yǎng)皿中，利用鼓風(fēng)干燥箱80℃烘干，將烘干后的樣品研磨粉碎，過60目篩；稱取1.0g干粉置于50ml離心管中，加入40ml重蒸水，漩渦震蕩3min； 將超聲波清洗儀設(shè)置60℃，超聲提取5min，利用重蒸水將樣品定容至50ml；用0.45um濾膜抽濾3次，制得紅景天甙提取液A；取100ul紅景天甙提取液A，利用HPLC檢測(cè)，其色譜圖顯示，在第13.5-15分鐘并未出現(xiàn)明顯峰型，雜質(zhì)峰較多，說明樣品分離并不明顯，紅景天甙含量低（如圖2所示）。

3、采用超聲+微波破碎提取法提取的紅景天甙：

1）、在長白山海拔高度為1700-2500 m 處采集高山紅景天的野生苗。

2）首先取上述1）中的高山紅景天根5g，清洗干凈，放入培養(yǎng)皿中，利用鼓風(fēng)干燥箱80℃烘干，將烘干后的樣品研磨粉碎，過60目篩；稱取1.0g干粉置于50ml離心管中，在加入40ml重蒸水，漩渦震蕩3min之后，將樣品置于微波爐中，功率500w，微波2min，微波之后在將超聲波清洗儀設(shè)置60℃，超聲提取5min；利用重蒸水將樣品定容至50ml，最后用0.45um濾膜抽濾3次；制得紅景天甙提取液B；取100ul紅景天甙提取液B，利用HPLC檢測(cè)，其色譜圖顯示，樣品在13.5-14分鐘出現(xiàn)明顯峰，峰型穩(wěn)定，雜質(zhì)峰較少，說明樣品得到了有效分離，且紅景天甙含量較高（如圖3所示）。

所述上述1、2、3中的HPLC色譜條件：

色譜柱： Hypersil-C18 ( 5 μm，150 mm × 4． 6mm) ，流速：1 ml /min，進(jìn)樣量：10 μl，柱溫 25℃ 。 檢測(cè)波長280 nm，流動(dòng)相：A 為甲醇，B 為水，變梯度洗脫為等度洗脫，具體條件見表1。

表1 梯度洗脫程序

本研究采用現(xiàn)有技術(shù)超聲提取法和超聲+微波破碎提取法分別進(jìn)行了高山紅景天甙的提取，并采用高效液相色譜系統(tǒng)（HPLC）對(duì)兩種方法所得的紅景天甙樣本進(jìn)行色譜分析，結(jié)果表明，采用現(xiàn)有技術(shù)超聲提取法提取的紅景天甙雜質(zhì)峰較多，樣品分離并不明顯，紅景天甙含量低；超聲+微波破碎提取法獲得的紅景天甙，峰型完整、雜質(zhì)干擾峰少、紅景天甙含量較高。說明超聲+微波破碎提取法更適用于高山紅景天甙的提取。