本發(fā)明屬于溶劑適應(yīng)性檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種LC-MS級(jí)甲醇溶劑的適應(yīng)性檢測(cè)方法。

背景技術(shù)：

目前，色譜級(jí)國(guó)產(chǎn)試劑質(zhì)量不夠穩(wěn)定，在新型試劑標(biāo)準(zhǔn)制定方面國(guó)內(nèi)也比較滯后，尤其是液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（簡(jiǎn)稱LC-MS）試劑，絕大部分科研實(shí)驗(yàn)室只能采用進(jìn)口試劑，實(shí)現(xiàn)色譜級(jí)溶劑的自主研發(fā)與產(chǎn)業(yè)化對(duì)多個(gè)學(xué)科、多個(gè)領(lǐng)域的整體提高具有非常重要的關(guān)聯(lián)推動(dòng)作用，而建立相應(yīng)的試劑分析檢測(cè)方法是其中的一個(gè)重要部分。

在LC-MS檢測(cè)中，流動(dòng)相溶劑中即便是ppb級(jí)的痕量雜質(zhì)，也可能增加LC-MS的背景噪音，降低目標(biāo)分析物的離子化效率或形成干擾圖譜解析的非目標(biāo)分析物的加合物，從而降低LC-MS對(duì)痕量分析物的檢測(cè)和鑒定能力。因此，LC-MS級(jí)色譜試劑除了通過(guò)紫外吸收、高效液相（HPLC）梯度洗脫等HPLC溶劑指標(biāo)外，還需通過(guò)多項(xiàng)LC-MS適應(yīng)性測(cè)試，來(lái)滿足高靈敏度的LC-MS應(yīng)用。

進(jìn)口LC-MS級(jí)色譜試劑均通過(guò)適應(yīng)性檢測(cè)，但相關(guān)檢測(cè)方法報(bào)道不多。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)在甲醇溶劑中加入定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，采用質(zhì)譜儀直接進(jìn)樣，檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度來(lái)判斷溶劑是否達(dá)到LC-MS色譜試劑的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。在LC-MS系統(tǒng)中，最常見的離子化模式是電噴霧（ESI）模式，分為ESI⁺和ESI^-離子化模式，對(duì)于不同離子化模式的檢測(cè)應(yīng)選用不同的標(biāo)準(zhǔn)物。目前，多數(shù)LC-MS儀器供應(yīng)商采用利血平來(lái)測(cè)試儀器的靈敏度，以及儀器安裝時(shí)的性能等，因此將利血平作為ESI⁺指標(biāo)測(cè)試中的標(biāo)準(zhǔn)物。但利血平離子化效率高，使得低分子量雜質(zhì)難以在利血平測(cè)試中被檢測(cè)，因此在ESI⁺指標(biāo)中增加了咖啡因指標(biāo)，用于難電離化合物的LC-MS分析。而在環(huán)境分析中，LC-MS應(yīng)用多傾向于采用ESI^-離子化模式，故采用典型的環(huán)境污染物4-硝基苯酚為標(biāo)準(zhǔn)物制定LC-MS級(jí)溶劑的ESI^-指標(biāo)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是根據(jù)上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，提供一種LC-MS級(jí)甲醇溶劑的適應(yīng)性檢測(cè)方法，該適應(yīng)性檢測(cè)方法將利血平、咖啡因作為ESI⁺指標(biāo)測(cè)試中的標(biāo)準(zhǔn)物，并將環(huán)境污染物4-硝基苯酚作為ESI^-指標(biāo)測(cè)試中的標(biāo)準(zhǔn)物。

本發(fā)明目的實(shí)現(xiàn)由以下技術(shù)方案完成：

一種LC-MS級(jí)甲醇溶劑的適應(yīng)性檢測(cè)方法，其特征在于所述適應(yīng)性檢測(cè)方法包括如下步驟：

在甲醇溶劑中加入定量標(biāo)準(zhǔn)物配制成與適應(yīng)性指標(biāo)相應(yīng)濃度的甲醇溶液，其中所述標(biāo)準(zhǔn)物是利血平、咖啡因、4-硝基苯酚；將配制好的含標(biāo)準(zhǔn)物的甲醇溶液采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓、進(jìn)樣速度、N2流速以及脫溶劑氣溫度，檢測(cè)含標(biāo)準(zhǔn)物的甲醇溶液質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度；采用相同方法將待測(cè)的甲醇溶液采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣，檢測(cè)待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度。

在甲醇溶劑中加入定量利血平配制成含50ppb利血平的甲醇溶液，在正離子模式下，將配置好含利血平的甲醇溶液采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓至50V、進(jìn)樣速度至50μL/min、N2流速至270 L/h以及脫溶劑氣溫度至170℃，檢測(cè)含利血平的甲醇溶液質(zhì)譜出峰情況，并與待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析。

在甲醇溶劑中加入定量咖啡因配制成含100ppb咖啡因的甲醇溶液，在正離子模式下，將配置好含咖啡因的甲醇溶液采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓至35V、進(jìn)樣速度至40μL/min、N2流速至270 L/h以及脫溶劑氣溫度至190℃，檢測(cè)含咖啡因的甲醇溶液質(zhì)譜出峰情況，并與待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析。

在甲醇溶劑中加入定量4-硝基苯酚配制成含50ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液，在負(fù)離子模式下，將配置好含4-硝基苯酚的甲醇溶液采用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓至-35V、進(jìn)樣速度至50μL/min、N2流速至270 L/h以及脫溶劑氣溫度至230℃，檢測(cè)含4-硝基苯酚的甲醇溶液質(zhì)譜出峰情況，并與待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析。

所述液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀的分辨率m/z為0.10，毛細(xì)管電壓3000V，離子源溫度為80℃。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，采用LC-MS級(jí)甲醇建立了適應(yīng)性檢測(cè)方法，LC-MS級(jí)甲醇雜質(zhì)形成的噪聲小，標(biāo)準(zhǔn)物的離子化效率高，能夠達(dá)到LC-MS適應(yīng)性檢測(cè)要求，此方法適用于LC-MS級(jí)甲醇試劑的適應(yīng)性檢測(cè)；三種不同的標(biāo)準(zhǔn)物所得結(jié)果略有差異，但能夠達(dá)到實(shí)際檢測(cè)要求；適應(yīng)性是用于證明色譜系統(tǒng)的分離度和重現(xiàn)性能滿足樣品的分析要求，為此LC-MS級(jí)的甲醇建立適應(yīng)性檢測(cè)方法具有必要性。

附圖說(shuō)明

圖1為本發(fā)明中最佳條件下含50 ppb利血平的LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖和待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖；

圖2為本發(fā)明中最佳條件下含100 ppb咖啡因的LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖及待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖；

圖3為本發(fā)明中最佳條件下含50 ppb 4-硝基苯酚的進(jìn)口LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖和待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的特征及其它相關(guān)特征作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明，以便于同行業(yè)技術(shù)人員的理解：

實(shí)施例：本實(shí)施例具體涉及一種LC-MS級(jí)甲醇溶劑的適應(yīng)性檢測(cè)方法，該適應(yīng)性檢測(cè)方法涉及的儀器與試劑如下：

液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀、LC-MS級(jí)甲醇、利血平(標(biāo)準(zhǔn)品)、咖啡因(標(biāo)準(zhǔn)品)、4-硝基苯酚(標(biāo)準(zhǔn)品)。

本實(shí)施中LC-MS級(jí)甲醇溶劑的適應(yīng)性檢測(cè)方法包括如下步驟：

（一）選用利血平為標(biāo)準(zhǔn)物

（1）溶液配制：

稱取利血平標(biāo)準(zhǔn)物0.0010 g于肖特藍(lán)蓋試劑瓶，用10 mL LC-MS級(jí)甲醇試劑溶解，配制成濃度為0.1 g/L標(biāo)準(zhǔn)物溶液；取相應(yīng)量的該標(biāo)準(zhǔn)物溶液于50 mL容量瓶中，加入甲醇試劑定容，配制成含50 ppb利血平的甲醇溶液，轉(zhuǎn)移至肖特藍(lán)蓋試劑瓶中保存?zhèn)溆茫?/p>

并用相同方法配制待測(cè)LC-MS級(jí)甲醇溶液；

（2）實(shí)驗(yàn)條件的選取：

固定條件為：分辨率(m/z)為0.10，毛細(xì)管電壓3000 V，離子源溫度80 ℃；

（2.1）最佳樣品電壓的選取：

將配制好含50 ppb利血平的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持進(jìn)樣速度、脫溶劑氣(N₂)流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓，觀察質(zhì)譜出峰情況；樣品電壓影響樣品的離子化效率，電壓過(guò)小或過(guò)大都不利于樣品電離；隨著電壓逐漸增大，質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度呈先增大后減小的趨勢(shì)；而每個(gè)電壓下的質(zhì)譜圖中的雜質(zhì)峰也隨著電壓的增大先增多后減?。唤Y(jié)合這兩個(gè)因素，可以得出利血平指標(biāo)的最佳電壓為50 V；

（2.2）最佳進(jìn)樣速度的選?。?/p>

在最佳樣品電壓下，將配制好含50 ppb利血平的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持N₂流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變進(jìn)樣速度，觀察質(zhì)譜出峰情況；進(jìn)樣速度主要影響單位時(shí)間通過(guò)質(zhì)譜儀的樣品量，在信號(hào)強(qiáng)度變化不大時(shí)，進(jìn)樣量越少越好；隨著進(jìn)樣速度逐漸增大，質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度也呈先增大后略微減小的趨勢(shì)；每個(gè)進(jìn)樣速度下的質(zhì)譜圖中的雜質(zhì)峰基本不隨進(jìn)樣速度的變化而變化；結(jié)合這兩個(gè)因素，可以得出利血平指標(biāo)的最佳進(jìn)樣速度為50 μL/min；

（2.3）最佳N₂流速的選取

在最佳樣品電壓及進(jìn)樣速度下，將配制好含50 ppb利血平的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變N₂流速，觀察質(zhì)譜出峰情況；N₂流速主要影響樣品的霧化程度，只要達(dá)到能使樣品完全霧化的流速即可；隨著N₂流速逐漸增大，質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度呈先增大后略微減小的趨勢(shì)；每個(gè)N₂流速下的質(zhì)譜圖中的雜質(zhì)峰基本不隨進(jìn)樣速度的變化而變化；結(jié)合這兩個(gè)因素，可以得出利血平指標(biāo)的最佳N₂流速為270 L/h；

（2.4）最佳脫溶劑氣溫度的選取

在最佳樣品電壓、進(jìn)樣速度及N₂流速下，將配制好含50 ppb利血平的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中改變脫溶劑氣溫度，觀察質(zhì)譜出峰情況；脫溶劑氣溫度主要影響溶劑的氣化，溶劑氣化越完全，樣品電離程度越高；隨著脫溶劑氣溫度逐漸增大，質(zhì)譜信號(hào)強(qiáng)度基本呈逐漸增大的趨勢(shì)；再結(jié)合每個(gè)脫溶劑氣溫度下質(zhì)譜圖中的雜質(zhì)峰的變化情況，可以得出利血平指標(biāo)的最佳脫溶劑氣溫度170 ℃；

（3）適應(yīng)性檢測(cè)：

在得到的上述最佳條件下，將配制好的含50 ppb利血平的甲醇溶液用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣30 min，觀察質(zhì)譜出峰情況；并與LC-MS級(jí)待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析；

如圖1所示為在正離子模式下利血平(m/z＝609.28) 指標(biāo)的檢測(cè)示意圖，最佳條件下含50 ppb利血平的進(jìn)口LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖和待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖中可以看出，利血平分子離子峰(m/z＝609.28)信號(hào)最強(qiáng)，且?guī)缀醪淮嬖谄渌s質(zhì)峰，這說(shuō)明甲醇試劑中可檢測(cè)到的雜質(zhì)信號(hào)強(qiáng)度低于50 ppb利血平正離子信號(hào)；

（二）選用咖啡因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)物

（1）溶液配制：

稱取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)物0.0010 g于肖特藍(lán)蓋試劑瓶，用10 mL LC-MS級(jí)甲醇試劑溶解，配制成濃度為0.1 g/L標(biāo)準(zhǔn)物溶液；取相應(yīng)量的該標(biāo)準(zhǔn)物溶液于50 mL容量瓶中，加入甲醇試劑定容，配制成含100 ppb咖啡因的甲醇溶液，轉(zhuǎn)移至肖特藍(lán)蓋試劑瓶中保存?zhèn)溆茫?/p>

并用相同方法配制待測(cè)LC-MS級(jí)甲醇溶液；

（2）實(shí)驗(yàn)條件的選?。?/p>

固定條件為：分辨率(m/z)為0.10，毛細(xì)管電壓3000 V，離子源溫度80 ℃；

（2.1）最佳樣品電壓的選?。?/p>

將配制好含100 ppb咖啡因的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持進(jìn)樣速度、脫溶劑氣(N₂)流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出咖啡因指標(biāo)的最佳電壓為35V；

（2.2）最佳進(jìn)樣速度的選取：

在最佳樣品電壓下，將配制好含100 ppb咖啡因的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持N₂流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變進(jìn)樣速度，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出咖啡因指標(biāo)的最佳進(jìn)樣速度為40 μL/min；

（2.3）最佳N₂流速的選取

在最佳樣品電壓及進(jìn)樣速度下，將配制好含100 ppb咖啡因的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變N₂流速，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出利血平指標(biāo)的最佳N₂流速為270 L/h；

（2.4）最佳脫溶劑氣溫度的選取

在最佳樣品電壓、進(jìn)樣速度及N₂流速下，將配制好含100 ppb咖啡因的甲醇溶液在正離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中改變脫溶劑氣溫度，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出咖啡因指標(biāo)的最佳脫溶劑氣溫度190 ℃；

（3）適應(yīng)性檢測(cè)：

在得到的上述最佳條件下，將配制好的含100 ppb咖啡因的甲醇溶液用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣30 min，觀察質(zhì)譜出峰情況；并與LC-MS級(jí)待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析；

如圖2所示為正離子模式下咖啡因(m/z＝301.13) 指標(biāo)的檢測(cè)示意圖，從最佳條件下含100 ppb咖啡因的進(jìn)口LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖及待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖中可以看出，咖啡因分子離子峰(m/z＝301.13)信號(hào)最強(qiáng)，m/z＝195.09的峰為咖啡因分子與甲醇溶劑的加和峰，且?guī)缀醪淮嬖谄渌s質(zhì)峰，這說(shuō)明甲醇試劑中可檢測(cè)到的雜質(zhì)信號(hào)強(qiáng)度低于100 ppb咖啡因正離子信號(hào)。

（三）選用4-硝基苯酚為標(biāo)準(zhǔn)物

（1）溶液配制：

稱取4-硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)物0.0010 g于肖特藍(lán)蓋試劑瓶，用10 mL LC-MS級(jí)甲醇試劑溶解，配制成濃度為0.1 g/L標(biāo)準(zhǔn)物溶液；取相應(yīng)量的該標(biāo)準(zhǔn)物溶液于50 mL容量瓶中，加入甲醇試劑定容，配制成含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液，轉(zhuǎn)移至肖特藍(lán)蓋試劑瓶中保存?zhèn)溆茫?/p>

并用相同方法配制待測(cè)LC-MS級(jí)甲醇溶液；

（2）實(shí)驗(yàn)條件的選?。?/p>

固定條件為：分辨率(m/z)為0.10，毛細(xì)管電壓3000 V，離子源溫度80 ℃；

（2.1）最佳樣品電壓的選取：

將配制好含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液在負(fù)離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持進(jìn)樣速度、脫溶劑氣(N₂)流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中調(diào)節(jié)樣品電壓，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出4-硝基苯酚指標(biāo)的最佳電壓為-35V；

（2.2）最佳進(jìn)樣速度的選?。?/p>

在最佳樣品電壓下，將配制好含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液在負(fù)離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持N₂流速、脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變進(jìn)樣速度，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出4-硝基苯酚指標(biāo)的最佳進(jìn)樣速度為50μL/min；

（2.3）最佳N₂流速的選取

在最佳樣品電壓及進(jìn)樣速度下，將配制好含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液在負(fù)離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，保持脫溶劑氣溫度不變，進(jìn)樣過(guò)程中改變N₂流速，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出4-硝基苯酚指標(biāo)的最佳N₂流速為270 L/h；

（2.4）最佳脫溶劑氣溫度的選取

在最佳樣品電壓、進(jìn)樣速度及N₂流速下，將配制好含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液在負(fù)離子電離模式下以流動(dòng)相形式直接進(jìn)樣，進(jìn)樣過(guò)程中改變脫溶劑氣溫度，觀察質(zhì)譜出峰情況；可以得出4-硝基苯酚指標(biāo)的最佳脫溶劑氣溫度190 ℃；

（3）適應(yīng)性檢測(cè)：

在得到的上述最佳條件下，將配制好的含50 ppb 4-硝基苯酚的甲醇溶液用液相-質(zhì)譜聯(lián)用儀進(jìn)樣30 min，觀察質(zhì)譜出峰情況；并與LC-MS級(jí)待測(cè)甲醇溶液進(jìn)行對(duì)比分析；

如圖3所示為負(fù)離子模式下4-硝基苯酚(m/z＝138.02) 指標(biāo)的檢測(cè)示意圖，最佳條件下含50 ppb 4-硝基苯酚的進(jìn)口LC-MS甲醇溶液質(zhì)譜圖和待測(cè)甲醇溶液質(zhì)譜圖中可以看出，4-硝基苯酚分子離子峰(m/z＝138.02)信號(hào)最強(qiáng)，雜質(zhì)峰很小，這說(shuō)明甲醇試劑中可檢測(cè)到的雜質(zhì)信號(hào)強(qiáng)度明顯低于50 ppb 4-硝基苯酚負(fù)離子信號(hào)。

上述最佳實(shí)驗(yàn)條件總結(jié)如下表所示：

綜上所述，對(duì)于LC-MS級(jí)甲醇來(lái)說(shuō)，需要保證溶劑中雜質(zhì)形成的噪聲小，分析物離子化效率高，以滿足LC-MS靈敏度的要求；采用進(jìn)口LC-MS級(jí)甲醇建立了適應(yīng)性檢測(cè)方法進(jìn)口LC-MS級(jí)甲醇雜質(zhì)形成的噪聲小，標(biāo)準(zhǔn)物的離子化效率高，能夠達(dá)到LC-MS適應(yīng)性檢測(cè)要求，此方法適用于LC-MS級(jí)甲醇試劑的適應(yīng)性檢測(cè)；三種不同的標(biāo)準(zhǔn)物所得結(jié)果略有差異，但能夠達(dá)到實(shí)際檢測(cè)要求。