一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法，該中藥制劑是由黃芪、山楂、白術(shù)、絞股藍(lán)、麥芽、北沙參、枸杞子和牡蠣藥材制備而成；該中藥制劑的檢測方法包括：黃芪、山楂、白術(shù)和枸杞子進(jìn)行薄層定性鑒別；采用氣相色譜法對輔料甘油的含量測定檢查；采用高效液相色譜法，使用蒸發(fā)光散射檢測器測定黃芪甲苷的含量。該檢測方法具有簡便、易行、重復(fù)性好的特點(diǎn)，有利于對該中藥制劑的質(zhì)量控制，有助于提高該藥物臨床使用安全性和穩(wěn)定性。
【專利說明】-種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法

【技術(shù)領(lǐng)域】 本發(fā)明設(shè)及一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法，更具體地說是小兒巧桂口服 液的檢測方法，包括定性鑒別和含量測定，屬于中藥現(xiàn)代化領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】 小兒巧桂口服液為黃巧、山桂、白術(shù)、絞股藍(lán)等八味藥材制備而成，具有健脾益氣、消積 增食的功效，用于小兒厭食脾胃氣虛證，其在治療小兒厭食癥方面有顯著的臨床療效。 發(fā)明專利申請CN 1709335A和CN 101164595A已公開了一種治療小兒厭食癥的中藥制 劑小兒巧桂口服液的處方及制備方法。為有效確保該中藥制劑的質(zhì)量和療效，本發(fā)明擬建 立一種專屬性強(qiáng)、科學(xué)簡便的定性和定量檢測方法。


【發(fā)明內(nèi)容】
本發(fā)明目的在于提供一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法，包括定性鑒別和含 量測定。對其中的黃巧、山桂、白術(shù)和構(gòu)杞子進(jìn)行薄層定性鑒別；采用氣相色譜法對中藥制 劑中輔料甘油的含量測定檢查；采用高效液相色譜法，使用蒸發(fā)光散射檢測器對中藥制劑 中的黃巧甲巧的含量測定。本發(fā)明技術(shù)方案方法具有簡便、可行、準(zhǔn)確、重復(fù)性良好特點(diǎn)，并 可W作為本發(fā)明中藥制劑質(zhì)量控制方法，進(jìn)一步保證藥品質(zhì)量的穩(wěn)定性和療效。 本
【發(fā)明內(nèi)容】
中所述的中藥制劑，均指小兒巧桂口服液，其具體的處方配比組成為：黃巧 200g、山桂300g、白術(shù)200g、絞股藍(lán)50g、麥芽150g、北沙參200g、構(gòu)杞子200g、牡頗200g。 該制劑具體的制備方法為，W上八味，牡頗打碎，加水煎煮1小時(shí)后，再加入黃巧等 ^；：味藥材，加水煎煮二次，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，減壓濃縮至相對密度為1. 68? 1. 18 (80°C熱測）的浸膏，加己醇使含醇量達(dá)70%，靜置24小時(shí)，取上清液，濾過，濾液回收 己醇至無醇味，加水適量，靜置24小時(shí)，取上清液，濾過，濾液加入庶糖lOOg，甜菊素0. 6g， 甘油50ml，山梨酸鐘2g，煮沸15分鐘，靜置過夜，濾過，自濾器加蒸饋水調(diào)整總量至1000ml。 灌封，滅菌，即得。 小兒巧桂口服液由八味藥材組成，經(jīng)試驗(yàn)研究，采用薄層鑒別方法對其中黃巧、山桂、 白術(shù)和構(gòu)杞子進(jìn)行了定性鑒別，方中其它四味中藥材因在薄層色譜板上無特征性斑點(diǎn)因此 未進(jìn)行定性薄層鑒別。 為了避免本制劑在長期貶藏期間產(chǎn)生沉淀，達(dá)不到中國藥典附錄口服液項(xiàng)下的要求， 在制劑工藝中添加了 5%的甘油作為助溶劑。為控制成品質(zhì)量，對其中的甘油含量列入檢驗(yàn) 標(biāo)準(zhǔn)中的檢查項(xiàng)下。采用氣相色譜法對甘油進(jìn)行含量測定，經(jīng)過實(shí)施例中一系列方法學(xué)考 察試驗(yàn)證明，本含量測定方法切實(shí)可行。 黃巧為方中君藥，黃巧甲巧為有效成分，采用高效液相色譜法對制劑中黃巧甲巧進(jìn)行 含量測定，經(jīng)過實(shí)施例中一系列方法學(xué)考察試驗(yàn)證明，本含量測定方法切實(shí)可行。 一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法，所述的中藥制劑是由黃巧200g、山桂 300g、白術(shù)200g、絞股藍(lán)50g、麥芽150g、北沙參200g、構(gòu)杞子200g、牡頗200g的原料藥制備 而成，其特征在于，所述的檢測方法是采用薄層色譜法對該中藥制劑中黃巧、山桂、白術(shù)和 構(gòu)杞子進(jìn)行定性鑒別；采用氣相色譜法對該中藥制劑中輔料甘油的含量測定檢查；采用高 效液相色譜法對該中藥制劑中黃巧甲巧的含量測定。 所述的檢驗(yàn)方法，具體包括： (1) 黃巧的鑒定方法為；取本品少量，有機(jī)溶劑萃取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰?品溶液； (2) 山桂的鑒定方法為；取本品少量，色譜柱分離后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰嚻?溶液； (3) 白術(shù)的鑒定方法為；取本品少量，有機(jī)溶劑提取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰?品溶液； (4) 構(gòu)杞子的鑒定方法為：取本品少量，有機(jī)溶劑萃取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣?試品溶液； (5) 甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI巧測定。 b. 校正因子測定精密取蒙適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液，另取精密稱定 甘油適量，置量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注入氣相色譜 儀，測定，計(jì)算校正因子。 C.測定法精密吸取樣品適量精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注 入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。 (6) 黃巧甲巧的含量測定方法： a. 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定。 b. 對照品溶液的制備精密稱取黃巧甲巧對照品適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，即得。 C.供試品溶液的制備精密量取本品適量，用有機(jī)溶劑萃取，合并溶液，用氨試液充分洗 漆，棄去氨試液后蒸干，殘?jiān)糜袡C(jī)溶劑溶解并轉(zhuǎn)移至量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔 濾膜濾過，即得。 d.測定法精密吸取對照品溶液，供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，W外標(biāo)兩點(diǎn)法對 數(shù)方程計(jì)算，即得。 進(jìn)一步地，所述的檢驗(yàn)方法具體包括： (1) 黃巧的鑒定方法為；取本品少量，用水飽和的正了醇液萃取，用氨試液，用正了醇 飽和的水洗至中性，取正了醇液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液。另取黃巧甲巧 對照品，加甲醇溶解，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液微量，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，氯甲燒-甲醇-水的 下層溶液為展開劑，展開，取出，驚干，噴W 10%硫酸己醇溶液，在l〇5°C加熱至斑點(diǎn)顯色清 晰。 (2) 山桂的鑒別方法；取本品少量，加在聚酷胺柱上，用水洗脫，棄去洗脫液，再分別 用兩種不同濃度己醇溶液洗脫，收集后一種濃度己醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，?為供試品溶液。另取金絲桃巧對照品少量，加甲醇溶解，作為對照品溶液。照薄層色譜法 (中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液微量，分別點(diǎn)于同一聚酷胺 薄膜上，W己醇-甲酸為展開劑，展開，取出，驚干，噴W =氯化侶試液，放置后置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 (3) 白術(shù)的鑒別方法；取本品少量，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值，用S氯甲燒-正了醇振搖提 取，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液。另取白術(shù)對照藥材少量，加甲醇超聲處理， 濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010 年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液微量，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W正己 燒-己酸己醋-甲酸為展開劑，展開，取出，驚干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 (4) 構(gòu)杞子的鑒別方法；取本品少量，加己酸己醋萃取，濃縮為供試品溶液。另取構(gòu)杞 子對照藥材少量，加熱煮沸，濾液加己酸己醋萃取，合并提取液，濃縮作為對照藥材溶液。照 薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液 分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W己酸己醋-立氯甲燒-甲酸為展開劑，展開，取出，驚干， 置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色 的巧光斑點(diǎn)。 (5) 甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI巧測定。 b. 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)酸性聚己二醇（陽G)毛細(xì)管柱；初始溫度165°C，升溫至 240°C ;分流比5:1。理論板數(shù)按蒙峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。 C.校正因子測定精密取蒙適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液，另取精密稱定 甘油適量，置量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注入氣相色譜 儀，測定，計(jì)算校正因子。 d.測定法精密吸取樣品適量精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注 入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。 (6) 黃巧甲巧的含量測定方法： a. 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定。 b. 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)W十八燒基娃燒鍵合娃膠為填充劑；W己膳-水為流動(dòng) 相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)W黃巧甲巧峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。 C.對照品溶液的制備精密稱取黃巧甲巧對照品適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，即得。 d. 供試品溶液的制備精密量取本品適量，用有機(jī)溶劑萃取，合并溶液，用氨試液充分洗 漆，棄去氨試液后蒸干，殘?jiān)糜袡C(jī)溶劑溶解并轉(zhuǎn)移至量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔 濾膜濾過，即得。 e. 測定法精密吸取對照品溶液，供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，W外標(biāo)兩點(diǎn)法對 數(shù)方程計(jì)算，即得。 本發(fā)明中藥制劑的檢測方法包括W下步驟： (1)黃巧的鑒別方法；取本品10ml，用水飽和的正了醇振搖提取3次，每次20ml，合并 正了醇液，用氨試液洗漆2次，每次30ml，棄去氨試液，用正了醇飽和的水洗至中性，取正了 醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃巧甲巧對照品，加甲醇制成每 1ml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B) 試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，氯甲燒-甲醇-水 (13 ;7:2)10°CW下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，驚干，噴W 10%硫酸己醇溶 液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯 相同顏色的斑點(diǎn)；紫外燈（365nm)下顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 似山桂的鑒別方法；取本品30ml，加在聚酷胺柱（60-100目，3g，內(nèi)徑2畑1，濕法裝柱） 上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再20%己醇100ml洗脫，最后用40%己醇100ml洗脫，收 集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?. 5ml超聲使溶解，離屯、，取上清液作為供試品溶液。另取金絲 桃巧對照品，加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥 典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液1. 5 y 1、對照品溶液0. 5 y 1，分別 點(diǎn)于同一聚酷胺薄膜上，W己醇-甲酸巧0:1)為展開劑，展開，取出，驚干，噴氯化侶試 液，放置后置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 做白術(shù)的鑒別方法；取本品10ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值2?3，用^氯甲燒-正了醇 (2:1)振搖提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶 液。另取白術(shù)對照藥材0. 5g，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?1ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試 驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W正己燒-己酸己醋-甲 酸巧:3:0. 2)為展開劑，展開，取出，驚干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 (4) 構(gòu)杞子的鑒別方法；取本品10ml，加己酸己醋振搖提取2次，每次20ml，合并提取 液，濃縮至約1ml，作為供試品溶液。另取構(gòu)杞子對照藥材0. 5g，加水40ml，加熱煮沸15分 鐘，放冷，濾過，濾液加己酸己醋振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，濃縮至約1ml，作為 對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品 溶液5 y 1、對照藥材溶液10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W己酸己醋氯甲燒-甲 酸（3:2:1)為展開劑，展開，取出，驚干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 (5) 甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI巧測定。 b. 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)酸性聚己二醇（陽G)毛細(xì)管柱（柱長30m，內(nèi)徑0. 32mm， 膜厚度0. 5 y m);柱溫為程序升溫，初始溫度165°C，保持8分鐘，再W每分鐘35°C的速率升 溫至240°C，保持5分鐘；分流比5:1。理論板數(shù)按蒙峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。 C.校正因子測定精密取蒙適量，精密稱定，加無水己醇制成每1ml含12mg的溶液，作為 內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘油300mg，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5ml，加無水己 醇定容至刻度，搖勻，吸取1 y 1，注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算校正因子。 d.測定法精密吸取樣品5ml，置100ml量瓶中，加無水己醇85ml，搖勻，精密加入內(nèi)標(biāo)溶 液5ml，超聲處理（功率250W，頻率40kz) 5分鐘，放冷，加無水己醇定容至刻度，搖勻，濾過， 吸取續(xù)濾液1 y 1，注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。 本發(fā)明采用氣相色譜法測定本中藥制劑中甘油含量時(shí)，供試品中甘油色譜峰完全達(dá)到 基線分離，配制缺甘油的陰性樣品，照上述色譜條件，吸取溶劑、內(nèi)標(biāo)溶液、供試品溶液、對 照品溶液和陰性樣品溶液各1 y 1，注入氣相色譜儀中測定。結(jié)果表明，陰性樣品無干擾。方 法學(xué)研究表明，采用氣相色譜法測定本制劑中甘油含量，具有較好精密度、準(zhǔn)確度。 (6)黃巧甲巧的含量測定方法： 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定。 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)W十八燒基娃燒鍵合娃膠為填充劑；W己膳-水（37:63) 為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)W黃巧甲巧峰計(jì)算應(yīng)不低于3000。 對照品溶液的制備精密稱取黃巧甲巧對照品適量，加甲醇制成每1ml含0. 4mg的溶液， 即得。 供試品溶液的制備精密量取本品20ml，用水飽和的正了醇振搖提取4次，每次40ml，合 并正了醇液，用氨試液充分洗漆2次，每次40ml，棄去氨試液，正了醇液蒸干，殘?jiān)眉状既?解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜化45 ym)濾過，即得。 測定法精密吸取對照品溶液5 y 1、10 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相色譜儀，測定， W外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。 本發(fā)明采用高效液相色譜法使用蒸發(fā)光散射檢測器檢測時(shí)，供試品中黃巧甲巧色譜峰 完全達(dá)到基線分離，陰性液無干擾，且黃巧甲巧色譜峰有較高的相應(yīng)信號。方法學(xué)研究表 明，采用高效液相色譜法使用蒸發(fā)光散射檢測器檢測的方法測定本品中黃巧甲巧含量，具 有較好重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和精密度。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有W下有益效果： 本發(fā)明檢測方法簡便、快捷、準(zhǔn)確，靈敏度好、穩(wěn)定性高，提高了對藥品質(zhì)量的有效控 審IJ，保證了質(zhì)量。

【專利附圖】

【附圖說明】 圖1為實(shí)施例的甘油專屬性試驗(yàn)氣相色譜圖； 圖2為實(shí)施例的黃巧甲巧對照品高效液相色譜圖； 圖3為實(shí)施例的黃巧甲巧的供試品高效液相色譜圖； 圖4為實(shí)施例的缺黃巧陰性液樣品高效液相色譜圖。

【具體實(shí)施方式】 儀器和試藥： Shima化U 10A高效液相色譜儀（二元累、柱溫箱、SPD-10VP檢測器、HW色譜工作站）； Sedex75 型蒸發(fā)光散射檢測器；Kromasil Ci8(10nm 5]im，4.6X250mm)色譜柱；Hypersil ODS Ci8(l〇y，ID4. 6X250mm)色譜柱；Diamonsil Ci8巧 y，250X4. 6mm)色譜柱，理論板數(shù) 按黃巧甲巧峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ; Agilent 6890型氣相相色譜儀；DB-1石英毛細(xì)管柱（30mX0. 32mmX0. 25 ym); 邸-Wax石英毛細(xì)管柱（30mX0. 32mmX0. 50ym);邸-Awax石英毛細(xì)管柱 (30mXO. 32mmXO. 50 ym)，理論板數(shù)按蒙峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。 10批本小兒巧桂口服液均為吉林敷東延邊藥業(yè)股份有限公司提供，其樣品編號分為 Yi、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6、Y7、YsY9、Yi〇。
[0044] 甘油（分析純，含量>99.0%);蒙（分析純，含量>99.0%);黃巧甲巧對照品 (批號；0781-200311);白術(shù)對照藥材（批號；120925-200407);構(gòu)杞子對照藥材（批號； 121072-200505);己膳為色譜純；水為二次重蒸水；其余試劑均為分析純。上述對照品及對 照藥材均購于中國藥品生物制品檢定所。 實(shí)施例1;本發(fā)明中藥制劑的薄層鑒別 (1)黃巧的鑒別方法；取本品10ml，用水飽和的正了醇振搖提取3次，每次20ml，合并 正了醇液，用氨試液洗漆2次，每次30ml，棄去氨試液，用正了醇飽和的水洗至中性，取正了 醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃巧甲巧對照品，加甲醇制成每 1ml含Img的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B) 試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，氯甲燒-甲醇-水 (13 ;7:2)10°CW下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，驚干，噴W 10%硫酸己醇溶 液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯 相同顏色的斑點(diǎn)；紫外燈（365nm)下顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 似山桂的鑒別方法；取本品30ml，加在聚酷胺柱（60-100目，3g，內(nèi)徑2畑1，濕法裝柱） 上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再20%己醇100ml洗脫，最后用40%己醇100ml洗脫，收 集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?. 5ml超聲使溶解，離屯、，取上清液作為供試品溶液。另取金絲 桃巧對照品，加甲醇制成每1ml含0. 5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥 典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液1. 5 y 1、對照品溶液0. 5 y 1，分別 點(diǎn)于同一聚酷胺薄膜上，W己醇-甲酸巧0:1)為展開劑，展開，取出，驚干，噴氯化侶試 液，放置后置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯 相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 做白術(shù)的鑒別方法；取本品10ml，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH值2?3，用^氯甲燒-正了醇 (2:1)振搖提取3次，每次20ml，合并提取液，蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶 液。另取白術(shù)對照藥材0. 5g，加甲醇20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?1ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試 驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W正己燒-己酸己醋-甲 酸巧:3:0. 2)為展開劑，展開，取出，驚干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在 與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 (4)構(gòu)杞子的鑒別方法；取本品10ml，加己酸己醋振搖提取2次，每次20ml，合并提取 液，濃縮至約1ml，作為供試品溶液。另取構(gòu)杞子對照藥材0. 5g，加水40ml，加熱煮沸15分 鐘，放冷，濾過，濾液加己酸己醋振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，濃縮至約1ml，作為 對照藥材溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品 溶液5 y 1、對照藥材溶液10 y 1，分別點(diǎn)于同一娃膠G薄層板上，W己酸己醋氯甲燒-甲 酸（3:2:1)為展開劑，展開，取出，驚干，置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與 對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的巧光斑點(diǎn)。 實(shí)施例2本發(fā)明中藥制劑中甘油的含量測定方法 色譜條件：檢測器抑I ;載氣馬1. Oml/min ;氨氣40ml/min ;空氣400ml/min ;分流比 5:1 ;進(jìn)樣口溫度260°C ;檢測器溫度300°C ;柱溫為程序升溫，初始溫度165°C，保持8分鐘， 再W每分鐘35°C的速率升溫至240°C ;進(jìn)樣量1 y 1。 內(nèi)標(biāo)溶液的制備：取蒙適量，精密稱定，加無水己醇制成每1ml含12mg的溶液，即得。 對照品溶液的制備；取甘油300mg，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5ml， 加無水己醇定容至刻度，搖勻，即得。 供試品溶液的制備；精密量取本中藥制劑（樣品Y4) 5ml，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi) 標(biāo)溶液5ml，超聲處理5分鐘，放冷，加無水己醇定容至刻度，搖勻，濾過，取取續(xù)濾液，即得。 專屬性試驗(yàn)；配制缺甘油的陰性樣品，按供試品溶液制備方法配制陰性樣品，照上述色 譜條件，吸取溶劑、內(nèi)標(biāo)溶液、供試品溶液、對照品溶液和陰性樣品溶液1 y 1，注入氣相色譜 儀中測定。結(jié)果表明，陰性樣品無干擾。 線性關(guān)系的考察；精密稱取蒙151. 4mg，置250ml量瓶中，加無水己醇使溶解并定容至 刻度，搖勻，得內(nèi)標(biāo)溶液。再精密稱取甘油520. 8mg，置50ml量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液使溶解并定 容至定容，搖勻，分別精確吸取1、2、3、4、5、1〇1111，置1〇1111量瓶中，加內(nèi)標(biāo)溶液稀釋至刻度， 搖勻，各吸取1 y 1，按上述色譜條件測定。W對照品濃度（mg/ml)為橫坐標(biāo)狂)，甘油峰與蒙 峰面積的比值（Ac/As)為縱坐標(biāo)（Y)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為；Y = 0. 4001X-0. 1359， r = 0. 99995,結(jié)果見表1。結(jié)果表明，甘油進(jìn)樣濃度在1. 0416?10. 416mg/ml的范圍內(nèi)線 性關(guān)系良好。 表1、線性關(guān)系考察結(jié)果

【權(quán)利要求】
1. 一種治療小兒厭食癥的中藥制劑的檢測方法，所述的中藥制劑是由黃芪200g、山楂 300g、白術(shù)200g、絞股藍(lán)50g、麥芽150g、北沙參200g、枸杞子200g、牡蠣200g的原料藥制備 而成，其特征在于，所述的檢測方法是采用薄層色譜法對該中藥制劑中黃芪、山楂、白術(shù)和 枸杞子進(jìn)行定性鑒別；采用氣相色譜法對該中藥制劑中輔料甘油的測定含量檢查；采用高 效液相色譜法對該中藥制劑中黃芪甲苷的含量測定。
2. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于黃芪的鑒定方法為：取本品少量，有機(jī)溶 劑萃取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸?br> 3. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于山楂的鑒定方法為：取本品少量，色譜柱 分離后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸?br> 4. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于白術(shù)的鑒定方法為：取本品少量，有機(jī)溶 劑提取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸?br> 5. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于枸杞子的鑒定方法為：取本品少量，有機(jī) 溶劑萃取后分離蒸干，將殘?jiān)芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸?br> 6. 如權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于黃芪的鑒定方法為：取本品少量，用水飽 和的正丁醇液萃取，用氨試液，用正丁醇飽和的水洗至中性，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?使溶解，作為供試品溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照 品溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液微量， 分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。
7. 如權(quán)利要求6所述的測定方法，其特征在于黃芪的鑒別方法為：取本品10ml，用水飽 和的正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次30ml，棄去氨 試液，用正丁醇飽和的水洗至中性，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品 溶液；另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色 譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10yl，分別點(diǎn)于同 一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13 :7:2) 10°C以下放置過夜的下層溶液為展開 劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在l〇5°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰；供試品色譜 中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同顏色的斑點(diǎn)；紫外燈（365nm)下顯相同顏 色的焚光斑點(diǎn)。
8. 如權(quán)利要求3所述的測定方法，其特征在于山楂的鑒定方法為：取本品少量，加在 聚酰胺柱上，用水洗脫，棄去洗脫液，再分別用兩種不同濃度乙醇溶液洗脫，收集后一種濃 度乙醇洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液。另取金絲桃苷對照品少量，加 甲醇溶解，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸 取上述兩種溶液微量，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-甲酸為展開劑，展開，取出，晾 干，噴以三氯化鋁試液，放置后置紫外光燈（365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色 譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
9. 如權(quán)利要求8所述的測定方法，其特征在于山楂的鑒定方法為：取本品30ml，加在 聚酰胺柱（60-100目，3g，內(nèi)徑2cm，濕法裝柱）上，用水100ml洗脫，棄去洗脫液，再20%乙 醇100ml洗脫，最后用40%乙醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)蛹状?. 5ml超聲使溶 解，離心，取上清液作為供試品溶液。另取金絲桃苷對照品，加甲醇制成每lml含0. 5mg的溶 液，作為對照品溶液。照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述 供試品溶液1. 5 y 1、對照品溶液0. 5 y 1，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇-甲酸（50:1) 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，放置后置紫外光燈（365nm)下檢視。供試 品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
10. 如權(quán)利要求4所述的測定方法，其特征在于白術(shù)的鑒別方法：取本品少量，加稀鹽 酸調(diào)節(jié)PH值，用三氯甲烷-正丁醇振搖提取，蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙?，作為供試品溶液；?取白術(shù)對照藥材少量，加甲醇超聲處理，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状际谷芙猓鳛閷φ账幉?溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液微量，分 別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫 外光燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒 光斑點(diǎn)。
11. 如權(quán)利要求10所述的測定方法，其特征在于白術(shù)的鑒別方法：取本品l〇ml，加稀 鹽酸調(diào)節(jié)PH值2?3,用三氯甲烷-正丁醇（2:1)振搖提取3次，每次20ml，合并提取液， 蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為供試品溶液；另取白術(shù)對照藥材0.5g，加甲醇20ml，超聲 處理20分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糽ml使溶解，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法 (中國藥典2010年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 y 1，分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸（5:3:0.2)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光 燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑 點(diǎn)。
12. 如權(quán)利要求5所述的測定方法，其特征在于枸杞子的鑒別方法：取本品少量，加 乙酸乙酯萃取，濃縮為供試品溶液；另取枸杞子對照藥材少量，加熱煮沸，濾液加乙酸乙酯 萃取，合并提取液，濃縮作為對照藥材溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄 VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液、對照藥材溶液分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙 酯-三氯甲烷_甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm)下檢視；供試品色譜 中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
13. 如權(quán)利要求12所述的測定方法，其特征在于枸杞子的鑒別方法：取本品10ml，加乙 酸乙酯振搖提取2次，每次20ml，合并提取液，濃縮至約lml，作為供試品溶液；另取枸杞子 對照藥材0. 5g，加水40ml，加熱煮沸15分鐘，放冷，濾過，濾液加乙酸乙酯振搖提取2次，每 次20ml，合并提取液，濃縮至約lml，作為對照藥材溶液；照薄層色譜法（中國藥典2010年 版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述供試品溶液5 yl、對照藥材溶液10 yl，分別點(diǎn)于同一硅 膠G薄層板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3:2:1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外 光燈（365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光 斑點(diǎn)。
14. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI E)測定。 b. 校正因子測定精密取萘適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液，另取精密稱定 甘油適量，置量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注入氣相色譜 儀，測定，計(jì)算校正因子。 c. 測定法精密吸取樣品適量精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻， 注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
15. 如權(quán)利要求14所述的測定方法，其特征在于甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI E)測定。 b. 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)酸性聚乙二醇（PEG)毛細(xì)管柱；初始溫度165°C，升溫 至240°C ;分流比5:1。理論板數(shù)按萘峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。 c. 校正因子測定精密取萘適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，作為內(nèi)標(biāo)溶液，另取精密稱定 甘油適量，置量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻，注入氣相色譜 儀，測定，計(jì)算校正因子。 d. 測定法精密吸取樣品適量精密加入內(nèi)標(biāo)溶液適量，加有機(jī)溶液定容至刻度，搖勻， 注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
16. 如權(quán)利要求15所述的測定方法，其特征在于甘油的含量測定方法： a. 照氣相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI E)測定。 b. 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)酸性聚乙二醇（PEG)毛細(xì)管柱（柱長30m，內(nèi)徑 0. 32mm，膜厚度0. 5 y m);柱溫為程序升溫，初始溫度165°C，保持8分鐘，再以每分鐘35°C 的速率升溫至240°C，保持5分鐘；分流比5:1。理論板數(shù)按萘峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。 c. 校正因子測定精密取萘適量，精密稱定，加無水乙醇制成每lml含12mg的溶液，作 為內(nèi)標(biāo)溶液。另取甘油300mg，精密稱定，置100ml量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液5ml，加無水 乙醇定容至刻度，搖勻，吸取1 U 1，注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算校正因子。 d. 測定法精密吸取樣品5ml，置100ml量瓶中，加無水乙醇85ml，搖勻，精密加入內(nèi)標(biāo) 溶液5ml，超聲處理（功率250W，頻率40kz) 5分鐘，放冷，加無水乙醇定容至刻度，搖勾，濾 過，吸取續(xù)濾液1 U 1，注入氣相色譜儀，測定，計(jì)算，即得。
17. 如權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于黃芪甲苷的含量測定方法： a. 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定； b. 對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加有機(jī)溶劑制成溶液，即得； c. 供試品溶液的制備精密量取本品適量，用有機(jī)溶劑萃取，合并溶液，用氨試液充分 洗滌，棄去氨試液后蒸干，殘?jiān)糜袡C(jī)溶劑溶解并轉(zhuǎn)移至量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微 孔濾膜濾過，即得； d. 測定法精密吸取對照品溶液，供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對 數(shù)方程計(jì)算，即得。
18. 如權(quán)利要求17所述的測定方法，其特征在于黃芪甲苷的含量測定方法： a. 照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定； b. 對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成溶液，即得； c. 供試品溶液的制備精密量取本品適量，用水飽和的正丁醇萃取，合并正丁醇液，用 氨試液充分洗滌，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至量瓶中，加甲醇至 刻度，搖勻，用微孔濾膜濾過，即得； d. 測定法精密吸取對照品溶液，供試品溶液，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對 數(shù)方程計(jì)算，即得。
19. 如權(quán)利要求18所述的測定方法，其特征在于黃芪甲苷的含量測定方法： a.照高效液相色譜法（中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定； 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水（37:63) 為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測器；理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ; b. 對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每lml含0. 4mg的溶 液，即得； c. 供試品溶液的制備精密量取本品20ml，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次 40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)?用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0. 45 y m)濾過，即得； d. 測定法精密吸取對照品溶液5 y 1、10 y 1，供試品溶液10 y 1，注入液相色譜儀，測 定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對數(shù)方程計(jì)算，即得。
【文檔編號】G01N30/90GK104502518SQ201410734572
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年12月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月4日
【發(fā)明者】郭淑芹, 解鈞秀, 于江波, 王永寬, 張秀云, 祖雙, 王永彬 申請人:吉林敖東延邊藥業(yè)股份有限公司