一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，具體是利用超高效合相色譜法（UPC2）檢測(cè)煙草中敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮等除草劑的方法。首先，利用QuRChERS方法對(duì)煙葉中含有的除草劑進(jìn)行萃取及初步除雜；其次，為進(jìn)一步減少基質(zhì)對(duì)檢測(cè)目標(biāo)物的干擾，采用弗羅里硅土小柱對(duì)提取液進(jìn)行固相萃取凈化處理；第三，采用超高效合相色譜儀對(duì)除草劑進(jìn)行檢測(cè)，并通過外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。高效合相色譜儀可以在5分鐘之內(nèi)即可完成所有目標(biāo)物質(zhì)的分析，在此過程中有機(jī)溶劑用量極少，是一種集高效、靈敏、環(huán)保等多種優(yōu)點(diǎn)于一體的分析方法。
【專利說明】一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種利用合相色譜進(jìn)行煙草中除草劑殘留量的分析方法。

【背景技術(shù)】
[0002]為保證煙草作物的生長，降低勞動(dòng)力的投入，煙草種植戶在煙草的生長過程中普遍采取噴施除草劑，由于這些物質(zhì)在煙草的加工過程中不能完全除去，因此會(huì)在煙草點(diǎn)燃過程中進(jìn)入到吸食者身體，或者散發(fā)到周圍空氣中進(jìn)而危害周圍人的健康。因此，對(duì)這類物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)是保證煙草品質(zhì)的重要內(nèi)容之一。
[0003]目前，研究及應(yīng)用的煙草中除草劑分析方法主要包括氣相色譜以及高效液相色譜，其中氣相色譜是比較常用的方法。由于色相色譜分析時(shí)間較長，高效液相色譜法需要用到大量的有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。因此，研究運(yùn)用更為快速、綠色、高選擇性的分析方法有重要意義。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本方法的目的正是基于上述現(xiàn)有技術(shù)狀況而提供的一種一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，主要是先利用QuRChERS前處理技術(shù)以及固相萃取技術(shù)進(jìn)行預(yù)處理，然后采用超高效合相色譜儀對(duì)除草劑進(jìn)行檢測(cè)，并通過外標(biāo)法進(jìn)行定量分析。本方法儀器分析快速，且有機(jī)溶劑用量極少，是一種集高效、靈敏、環(huán)保等多種優(yōu)點(diǎn)于一體的分析方法。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的:
一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，是對(duì)煙草中敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮六種除草劑殘留的測(cè)定，首先利用乙腈對(duì)樣品基質(zhì)中殘留的除草劑進(jìn)行提取，加入一定量的硫酸鎂、氯化鈉、脫水檸檬酸三納進(jìn)行振蕩，離心后吸取一定量的上清液進(jìn)行氮吹濃縮，然后進(jìn)行固相萃取對(duì)其進(jìn)行凈化處理，氮?dú)獯蹈珊罄靡译嫒軇┻M(jìn)行復(fù)溶，過0.22 μ m有機(jī)相濾膜后，利用超高效合相色譜儀對(duì)其中的物質(zhì)進(jìn)行濃度分析，具體步驟如下:
1)樣品的提取:
稱取2.0 g已粉碎的煙草樣品于50 mL具塞離心管中，加入10 mL超純水，浸潤樣品，靜置10 min，使其充分吸水溶脹；取10 mL乙腈到離心管中，于旋渦混合器上以2000 rpm速度振蕩I min，把離心管放入-20° C冰箱冷凍10 min，防止下一步鹽析作用時(shí)產(chǎn)熱而造成的目標(biāo)物分解；然后向離心管中加入鹽析試劑包(含4 g無水硫酸鎂，I g氯化鈉，I g檸檬酸鈉和0.5 g朽1檬酸氫鈉),立即于旋潤混合器上以2000 rpm振蕩2 min,以5000 rpm離心3 min,取5mL上清液氮吹濃縮至I mL ；
2)樣品的固相萃取凈化:
為獲得理想的除雜效果，將濃縮好的樣品進(jìn)行固相萃取凈化處理，具體操作步驟分為:首先，利用6mL正己烷對(duì)弗羅里硅土小柱進(jìn)行活化處理；其次，將上一步所獲得的I mL濃縮液注入至弗羅里硅土小柱上；第三步，利用5 ml體積比為9:1的正己烷和丙酮的混合液對(duì)小柱進(jìn)行洗滌，收集全部洗滌液；第四步，注入3 mL空氣以排凈小柱上殘留的液體；
3)濃縮、復(fù)溶及過濾:
為使超高效合相色譜儀檢測(cè)順利進(jìn)行，同時(shí)實(shí)現(xiàn)精確定量，樣品溶劑需更換為I mL乙腈，具體的做法為:以氮吹儀對(duì)收集的洗脫液濃縮近干，然后加入ImL乙腈復(fù)溶，并利用
0.22 μ m有機(jī)相濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過濾，作為樣品待測(cè)液；
4)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制:
配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為:敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異噁草酮濃度分別為 0.05 μ g/mL、0.1 μ g/mL、0.25 μ g/mL、0.5 μ g/mL、1.0 μ g/mL、2.5 μ g/mL, 5 μ g/mL,異丙甲草胺濃度為 0.15 μ g/mL、0.3 μ g/mL、0.75 μ g/mL、1.5 μ g/mL、3.0 μ g/mL、7.5 μ g/mL、15 μ g/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。具體配制方法如下:
先配置六種除草劑單標(biāo)儲(chǔ)備液:分別準(zhǔn)確稱取10.0 mg (精確到0.1 mg)各標(biāo)準(zhǔn)品，置于六個(gè)10 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容，配制成質(zhì)量濃度為1000.0 μ g/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液，貯存在-20 °C冰箱中備用。
[0006]混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別取敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮單標(biāo)儲(chǔ)備液0.5、0.5、0.5、0.5、1.5、0.5 ml于100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，配制成各農(nóng)藥組分質(zhì)量濃度為5.0,5.0,5.0,5.0、15.0,5.0 μ g/mL的混合工作儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存在4 °C冰箱中備用。
[0007]系列標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:準(zhǔn)確移取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、l mL、2 mL、5 mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，即得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為:敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異噁草酮濃度分別為0.05 μ g/mL、
0.1 μ g/mL、0.25 μ g/mL、0.5 μ g/mL、l.0 μ g/mL、2.5 μ g/mL, 5 μ g/mL,異丙甲草胺濃度為
0.15 μ g/mL、0.3 μ g/mL、0.75 μ g/mL、1.5 μ g/mL、3.0 μ g/mL、7.5 μ g/mL、15 μ g/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
[0008]5)合相色譜分析
采用超高效合相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品待測(cè)液進(jìn)行濃度分析，紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量；
色譜條件:采用色譜柱為Acquity UPC2 CSH Fluoro-Phenyl色譜柱；ABPR壓力為1800Psi ;色譜柱溫度為60 V ;進(jìn)樣量為5-10 μ L ;流動(dòng)相分別為CO2 (流動(dòng)相Α)和甲醇(流動(dòng)相B)，流速為1.5 mL/min，流動(dòng)相梯度洗脫程序如下表；紫外檢測(cè)波長為210 nm ；6種目標(biāo)物混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的合相色譜圖見附圖2。
[0009]表I梯度洗脫程序—二氧化礙甲醇
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61757525
ο1.?>y y,.yU? I
在上述合相色譜條件下，對(duì)本方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，各除草劑成分的線性方程、線性范圍、相關(guān)系數(shù)、平均回收率、定量限等見表2。
[0010]
表2含《色濟(jì)法柃剩?種除.的鍵能if價(jià)
__________除關(guān)_____________________________紐浦辦-平―第?^
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本方法首次利用UPC2建立了一種煙草中敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮等除草劑的同時(shí)快速測(cè)定方法。本技術(shù)以CO2為主要流動(dòng)相，配合少量乙腈，能夠在5分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)6種化合物的分離與定量分析；而且，由于本方法有機(jī)溶劑用量極少，能夠有效降低分析成本，減輕環(huán)境污染。該方法可以為該指標(biāo)的相關(guān)檢驗(yàn)提供依據(jù)。
[0011] 【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1:樣品前處理及合相色譜檢測(cè)流程圖。
[0012]圖2:標(biāo)準(zhǔn)品合相色譜圖，1:甲草胺；2:雙苯酰草胺；3:異惡草酮；4:精喹禾靈5:敵草胺；6:異丙甲草胺。
[0013]【具體實(shí)施方式】:
本發(fā)明結(jié)合實(shí)例做進(jìn)一步描述，但并不是限制本發(fā)明。
[0014]實(shí)例1:
1.儀器與試劑:
6種除草劑:甲草胺、雙苯酰草胺、異惡草酮、精喹禾靈、敵草胺、異丙甲草胺，均為標(biāo)準(zhǔn)品；乙腈、丙酮、正己烷，均為色譜級(jí)試劑。
[0015]美國Waters 合相色譜儀(UPC2),瑞士 Mettler AE 163 電子天平(感量:0.0OOlg);美國Labnet VtexMixer VX200振蕩器；德國Sigma高速冷凍離心機(jī)。
[0016]2.樣品處理:
對(duì)某種白肋煙樣品進(jìn)行分析，首先進(jìn)行樣品的提取:分別稱取2.0 g已粉碎的煙草樣品于50 mL具塞離心管中，加入10 mL水浸潤樣品，靜置10 min。取10 mL乙腈到離心管中，于旋渦混合器上以2000 rpm速度振蕩I min，把離心管放入-20° C冰箱冷凍10 min。然后向離心管中加入鹽析試劑包(含4 g無水硫酸鎂,I g氯化鈉，I g檸檬酸鈉和0.5 g朽1檬酸氫二鈉)，立即于旋潤混合器上以2000 rpm振蕩2 min,以5000 rpm離心3 min。取5mL上清液氮吹濃縮至I mL。
[0017]其次，進(jìn)行樣品的固相萃取凈化。將濃縮好的樣品進(jìn)行固相萃取凈化處理，具體操作步驟分為以下4步:首先，利用6 mL正己烷對(duì)佛羅里硅土小柱進(jìn)行活化處理；其次，將上一步所獲得的I mL濃縮液注入至弗羅里硅土小柱上；第三步，利用5 ml體積比為9:1的正己烷和丙酮的混合液對(duì)小柱進(jìn)行洗滌，收集全部洗滌液；第四步，注入3 mL空氣以排凈小柱上殘留的液體。對(duì)處理液進(jìn)行濃縮、復(fù)溶及0.22 μ m有機(jī)相濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過濾。
[0018]3.準(zhǔn)備標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:
配制系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異噁草酮濃度分別為 0.05 μ g/mL、0.1 μ g/mL、0.25 μ g/mL、0.5 μ g/mL、1.0 μ g/mL、2.5 μ g/mL, 5 μ g/mL,異丙甲草胺濃度為 0.15 μ g/mL、0.3 μ g/mL、0.75 μ g/mL、l.5 μ g/mL、3.0 μ g/mL、7.5 μ g/mL、15 μ g/mL。
[0019]4.測(cè)定方法:
采用超高效合相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品待測(cè)液進(jìn)行濃度分析，紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。
[0020]色譜條件:采用色譜柱為Acquity UPC2 CSH Fluoro-Phenyl色譜柱；ABPR壓力為1800 psi ;色譜柱溫度為60 V ;進(jìn)樣量為5-10 μ L ;流動(dòng)相分別為CO2 (流動(dòng)相Α)和甲醇(流動(dòng)相B)，流速為1.5 mL/min，流動(dòng)相梯度洗脫程序如表1 ;紫外檢測(cè)波長為210 nm。分析結(jié)果見表3。
[0021]分析結(jié)果:
表3實(shí)際樣品檢測(cè)結(jié)果(單位:mg/kg)

【權(quán)利要求】
1.一種煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，是對(duì)煙草中敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮六種除草劑殘留的測(cè)定，其特征在于:首先利用乙腈對(duì)樣品基質(zhì)中殘留的除草劑進(jìn)行提取，加入一定量硫酸鎂、氯化鈉、脫水檸檬酸鈉及檸檬酸氫鈉進(jìn)行振蕩，離心后吸取一定量的上清液進(jìn)行氮吹濃縮，然后進(jìn)行固相萃取對(duì)其進(jìn)行凈化處理，氮?dú)獯蹈珊罄靡译嫒軇┻M(jìn)行復(fù)溶，過0.22 μ m有機(jī)相濾膜后，利用超高效合相色譜儀對(duì)其中的物質(zhì)進(jìn)行濃度分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，其特征在于:所述分析方法的具體步驟如下: .1)樣品的提取 稱取2.0 g已粉碎的煙草樣品于50 mL具塞離心管中，加入10 mL超純水浸潤樣品，靜置10 min ;取10 mL乙腈到離心管中，于旋潤混合器上以2000 rpm速度振蕩I min,把離心管放入-20° C冰箱冷凍10 min ;然后向離心管中加入鹽析試劑包(含4 g無水硫酸鎂,I g氯化鈉，I g檸檬酸鈉和0.5 g檸檬酸氫鈉)，立即于旋渦混合器上以2000 rpm振蕩2 min,以5000 rpm離心3 min,取5mL上清液氮吹濃縮至I mL ； .2)樣品的固相萃取凈化 將濃縮好的樣品進(jìn)行固相萃取凈化處理，具體操作步驟分為:首先，利用6mL正己烷對(duì)弗羅里硅土小柱進(jìn)行活化處理；其次，將上一步所獲得的I mL濃縮液注入至弗羅里硅土小柱上；第三步，利用5 ml體積比為9:1的正己烷和丙酮的混合液對(duì)小柱進(jìn)行洗滌，收集全部洗滌液；第四步，注入3 mL空氣以排凈小柱上殘留的液體； . 3)濃縮、復(fù)溶及過濾 以氮吹儀對(duì)收集的洗脫液濃縮近干，然后加入I mL乙腈復(fù)溶，并利用0.22 ym有機(jī)相濾膜對(duì)樣品進(jìn)行過濾，作為樣品待測(cè)液； .4)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制 配制系列混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，使敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異噁草酮濃度分別為 0.05 μ g/mL、0.1 μ g/mL、0.25 μ g/mL、0.5 μ g/mL、1.0 μ g/mL、2.5 μ g/mL, 5 μ g/mL,異丙甲草胺濃度為 0.15 μ g/mL、0.3 μ g/mL、0.75 μ g/mL、l.5 μ g/mL、3.0 μ g/mL、.7.5 μ g/mL、15 μ g/mL ； . 5)合相色譜分析 采用超高效合相色譜儀對(duì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品待測(cè)液進(jìn)行濃度分析，紫外檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量； 色譜條件:采用色譜柱為Acquity UPC2 CSH Fluoro-Phenyl色譜柱；ABPR壓力為1800Psi ;色譜柱溫度為60 V ;進(jìn)樣量為5-10 μ L ;流動(dòng)相分別為CO2 (流動(dòng)相Α)和甲醇(流動(dòng)相B)，流速為1.5 mL/min，流動(dòng)相梯度洗脫程序如下表；紫外檢測(cè)波長為210 nm ； 表I梯度洗脫程序 時(shí)間 + 流:?二氣fe碳 甲_ (min)K JTiL/iTiiri > C A / %) (B./ %) ΓιI F?€:i ci ci) Cl ^ I'::w %bbpmsr me mm'?P asrnm. 51.59010. 6I.57 525 .71.57525 S 1.5 99.9 0.1









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3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的煙草中除草劑殘留的合相色譜分析方法，其特征在于:標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制的具體方法如下: 先配制六種除草劑單標(biāo)儲(chǔ)備液:分別準(zhǔn)確稱取10.0 mg各標(biāo)準(zhǔn)品，置于六個(gè)10 mL容量瓶中，用乙腈溶解定容，配制成質(zhì)量濃度為1000.0 μ g/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液，貯存在-20 °〇冰箱中備用； 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液:分別取敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異丙甲草胺、異噁草酮單標(biāo)儲(chǔ)備液0.5、0.5、0.5、0.5、1.5、0.5 ml于100 mL容量瓶中，用乙腈稀釋定容，配制成各農(nóng)藥組分質(zhì)量濃度為5.0,5.0,5.0,5.0、15.0,5.0 μ g/mL的混合工作儲(chǔ)備液，儲(chǔ)存在.4 °C冰箱中備用；
系列標(biāo)準(zhǔn)溶液配制:準(zhǔn)確移取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、l mL、2 mL、5 mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，置于10 mL容量瓶中，用乙腈定容，即得系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，具體濃度為:敵草胺、甲草胺、精喹禾靈、雙苯酰草胺、異11 惡草酮濃度分別為0.05 μ g/mL、0.1 μ g/mL、0.25 μ g/mL、0.5 μ g/mL、1.0 μ g/mL、2.5 μ g/mL, 5 μ g/mL,異丙甲草胺濃度為 0.15 μ g/mL、.0.3 μ g/mL、0.75 μ g/mL、1.5 μ g/mL、3.0 μ g/mL、7.5 μ g/mL、15 μ g/mL 的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。
【文檔編號(hào)】G01N30/14GK104181246SQ201410417690
【公開日】2014年12月3日 申請(qǐng)日期:2014年8月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月25日
【發(fā)明者】唐綱嶺, 郭衛(wèi)蕓, 邊照陽, 劉學(xué)功, 李中皓, 楊飛, 劉珊珊, 范子彥, 張洪非, 王穎, 胡清源 申請(qǐng)人:國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心, 許昌學(xué)院