一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，原料為銀杏葉提取物，經(jīng)乙酸乙酯磁力攪拌提取后得到溶液，旋蒸濃縮至干，采用甲醇溶解并超聲處理，作為檢測樣品，高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器分析檢測。本發(fā)明檢測結(jié)果與中國藥典方法檢測結(jié)果一致，在銀杏葉萜類內(nèi)酯提取分離中，本發(fā)明更方便實用。檢測每個樣品時間低于12min(中國藥典方法45min)，大大提高了檢測效率，縮短試驗周期，節(jié)約成本，經(jīng)濟(jì)環(huán)保。該方法可以用于銀杏葉內(nèi)酯的定性與定量分析，本發(fā)明經(jīng)方法學(xué)驗證表明，分離效果良好，方法線性、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率等均符合要求。本發(fā)明還適用于檢測以單種或多種銀杏葉萜類內(nèi)酯作為原料的制劑，適于工業(yè)化生產(chǎn)使用，有較大的應(yīng)用價值。
【專利說明】一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及藥物檢測方法，具體涉及中藥提取物的檢測方法，尤其涉及一種檢測銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002]銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物的葉子，主要化學(xué)成分為黃酮類和萜類內(nèi)酯化合物，具有重要的藥用價值和市場價值，因此，市場上已開發(fā)了許多銀杏葉系列產(chǎn)品。隨著社會的進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，銀杏葉萜類內(nèi)酯的重要性越來越受人們的關(guān)注。銀杏葉萜類內(nèi)酯是僅在銀杏葉中發(fā)現(xiàn)的一類具有特殊結(jié)構(gòu)及顯著藥理活性的重要成分，迄今尚未發(fā)現(xiàn)存在于其他任何植物中，更重要的是它們具有獨特的藥理作用和治療價值，常見的銀杏葉萜類內(nèi)酯為銀杏內(nèi)酯A、B、C,白果內(nèi)酯B,均為強血小板活化因子(platelet-activatingfactor, PAF)受體拮抗劑，具有很好的藥用價值，它們獨特的藥理作用和治療價值已引起世界范圍制藥工業(yè)的極大興趣。隨著對銀杏葉內(nèi)酯的深度開發(fā)研究，準(zhǔn)確、方便、快捷的內(nèi)酯檢測方法有著關(guān)鍵性的作用。
[0003]蒸發(fā)光散射檢測器(ELSD)的檢測方法消除了常見于傳統(tǒng)HPLC檢測方法中的難點，它不同于紫外(UV)和熒光(FLD)檢測器，ELSD的響應(yīng)不依賴與樣品的光學(xué)特性，任何揮發(fā)性低于流動相的樣品均能被檢測，不受其官能團(tuán)的影響。ELSD的響應(yīng)值與樣品的質(zhì)量成正比，因而能用于測定樣品的純度或者檢測未知物。蒸發(fā)光散射檢測器靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩(wěn)定，適合與梯度洗脫液相色譜聯(lián)用。《中國藥典》2010年版中對銀杏葉萜類內(nèi)酯含量的測定，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以正丙醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動相；用蒸發(fā)光散射檢測器檢測。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于2500。但是每個樣品的檢測時間長達(dá)45min，因此，不能滿足銀杏葉內(nèi)酯快速的測定，需要進(jìn)一步改進(jìn)檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于克服上述不足之處，研究設(shè)計快速、準(zhǔn)確檢測銀杏葉萜類內(nèi)酯的方法，縮短試驗周期，提高檢測效率。本發(fā)明提供了一種銀杏葉萜類內(nèi)酯的檢測方法，本發(fā)明的技術(shù)方案是:以銀杏葉提取物為原料，經(jīng)乙酸乙酯磁力攪拌提取后得到銀杏葉萜類內(nèi)酯組合物溶液，旋蒸濃縮至干，采用甲醇溶解并超聲處理，作為檢測樣品，進(jìn)行高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器檢測，以外標(biāo)兩點法定量，色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈與水作為流動相，流動相流速為0.1?2.0mL/min，梯度洗脫，柱溫箱溫度20°C?50°C，蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度為60°C?110°C，載氣壓力為
1.0 ?5.0bar,氣體流速 0.5L/min ?3.5L/min)。
[0005]具體的，本發(fā)明方法包括以下步驟:
[0006](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇或乙腈為有機相，純化水為水相，梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測器檢測(漂移管溫度為60。。~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min~3.5L/min)。理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于3500 ；
[0007](2)對照品溶液的制備:分別精密稱取白果內(nèi)酯對照品、銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品和銀杏內(nèi)酯C對照品適量,加甲醇制成每ImL各含2mg、lmg、lmg、lmg的混合溶液，作為對照品溶液；
[0008](3)供試品溶液的制備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恒溫提取3次(分別用30mL、20mL、1mL)，同時磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合并3次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯至干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液即得；
[0009](4)測定法:分別精密吸取對照品溶液5 μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定，外標(biāo)兩點法對數(shù)方程分別計算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，各內(nèi)酯總量即為銀杏內(nèi)酯含量。
[0010]本發(fā)明方法所述色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠。
[0011]所述蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar,氣體流速 0.5L/min ~3.5L/min。
[0012]所述流動相條件:流動相為有機相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機相為色譜級甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
[0013]柱溫箱溫度20V~50°C。
[0014]流動相流速0.1 ~2.0mL/min。
[0015]梯度洗脫程序:
[0016]
【權(quán)利要求】
1.一種銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，使用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器分析檢測，其特征在于，該方法包括以下步驟: (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗:色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以有機相/水相為流動相，梯度洗脫；蒸發(fā)光散射檢測器檢測，理論板數(shù)按白果內(nèi)酯峰計算應(yīng)不低于 3500 ； (2)對照品溶液的制備:分別精密稱取白果內(nèi)酯對照品、銀杏內(nèi)酯A對照品、銀杏內(nèi)酯B對照品和銀杏內(nèi)酯C對照品適量,加甲醇制成每ImL各含2mg、Img> Img> Img的混合溶液，作為對照品溶液； (3)供試品溶液的制備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恒溫分別用30mL、20mL、10mL提取3次，同時磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合并3次提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收乙酸乙酯至干，殘渣用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續(xù)濾液即得； (4)測定法:分別精密吸取對照品溶液5μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定，外標(biāo)兩點法對數(shù)方程分別計算白果內(nèi)酯、銀杏內(nèi)酯Α、銀杏內(nèi)酯B和銀杏內(nèi)酯C的含量，各內(nèi)酯總量即為銀杏內(nèi)酯含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，其特征在于，所述步驟(I)色譜柱的柱溫箱溫度20°C~50°C。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，其特征在于，所述步驟(I)蒸發(fā)光散射檢測器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min ~3.5L/min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，其特征在于，所述步驟(I)流動相為有機相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機相為色譜級甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內(nèi)酯的檢測方法，其特征在于，所述步驟(I)流動相流速0.1~2.0mL/min ； 梯度洗脫程序:
【文檔編號】G01N30/02GK104034826SQ201410321649
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月8日
【發(fā)明者】孫蓉, 尹小華, 呂署一, 李丁, 肖志勇 申請人:上海信誼百路達(dá)藥業(yè)有限公司