一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜測定方法
【專利摘要】一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜測定方法，其特征在于：包括樣品經(jīng)簡單前處理后直接引入超高效液相色譜儀進(jìn)行測定，可快速、準(zhǔn)確檢測出尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的含量水平。本發(fā)明為全新的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的測定方法，采用外標(biāo)法定量分析物；超高效液相色譜法更好的提高了方法的選擇性與準(zhǔn)確性。通過色譜柱以及洗脫條件的選擇與優(yōu)化，很好的提高了色譜分離過程，極大程度上縮短了色譜分離分析的時(shí)間。
【專利說明】一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜測定方法
[0001]
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0002]本發(fā)明屬于尿液樣本的理化檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體來說是一種采用超高效液相色譜儀測定尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的分析測定方法。
【背景技術(shù)】
[0003]苯乙烯是塑料橡膠工業(yè)的重要原料，它是無色油狀液體，有芳香氣味，用以制造各種塑料樹脂，合成橡膠。日常生活和工業(yè)生產(chǎn)中廣泛使用的含有苯乙烯的塑料橡膠制品，如各種包裝材料、隔熱材料、一次性飯盒、紙杯、管道、容器等。苯乙烯還存在于卷煙煙氣中，苯乙烯主要以氣體形式通過呼吸道，或通過皮膚接觸進(jìn)入人體，對眼和上呼吸道粘膜有刺激和麻醉作用，短時(shí)間接觸高濃度苯乙烯可引起咳嗽、咽痛等呼吸道刺激癥狀；長時(shí)間接觸苯乙烯可引起肺組織結(jié)構(gòu)損害，從而使人易患肺炎、肺氣腫等疾病。國際癌癥研究組織將其列為Group 2A，即對人類為很可能致癌物，對動(dòng)物則為確定之致癌物。吸入體內(nèi)的苯乙烯在CYP2B6和CYP2E酶的作用下代謝為苯乙烯7，8-氧化物，苯乙烯7，8-氧化物在環(huán)氧化物酶的作用下進(jìn)一步代謝為苯乙醛酸和苯乙醇酸，苯乙醛酸和苯乙醇酸(兩者結(jié)構(gòu)式如下)，目前已經(jīng)被用作苯乙烯暴露的生物標(biāo)志物。
【權(quán)利要求】
1.一種尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸的超高效液相色譜(UPLC)測定方法，其特征在于:包括以下工藝步驟: a、收集志愿者尿液； b、樣品前處理:室溫下解凍尿液樣品，混合均勻后，經(jīng)過0.22 μ m的水相濾膜過濾，取1.0 mL的尿液，加入1.0 mL 6 mol/L的鹽酸和4.0 mL由二氯甲烷:異丙醇按9:1配成的混合萃取溶液，以2000 r/min振蕩提取3分鐘，10000 r/min離心I分鐘，取下層有機(jī)相1.0mL,于40°C氮吹至干，加入0.2 mL0.01%混合酸水溶液復(fù)溶，取5 μ L引入超高效液相色譜儀分離分析； C、標(biāo)準(zhǔn)工作液配制:用純水配制不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液； d、超高效液相色譜(UPLC)測定，吸取配制好的不同濃度的苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，注入超高效液相色譜系統(tǒng)，苯乙醛酸和苯乙醇酸的線性回歸方程分別為=1.12X10X+1.36X 104和= 1.94X IOx- 2.48X 103，其中代表目標(biāo)分析物的峰面積，z表示尿液中目標(biāo)分析物的濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)均大于0.9990，對樣品待測液進(jìn)行測定，得到分析物的色譜峰 面積，代入一元線性回歸方程，求得樣品待測液中分析物的含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜(UPLC)測定方法，其特征在于:苯乙醛酸和苯乙醇酸混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度分別為0.085，0.17，0.425，0.85，4.25 和 8.5 μ g/mL 和 0.25，0.5，1，2，10 和 20 μ g/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜(UPLC)測定方法，其特征在于:選取Waters ACQUITY UPLC? BH!色譜柱，規(guī)格50 mmX2.1 mm, 1.7Mffl ;流動(dòng)相體系為甲醇:0.01%混合酸水溶液，兩者比例為15:85，等度洗脫；流動(dòng)相流速為150 μ L/min ;分析時(shí)間為8 min ;進(jìn)樣量為5 μ L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜(UPLC)測定方法，其特征在于:超高效液相色譜檢測器條件:光電二極管陣列檢測器，檢測波長:225 nm、254 nm ;柱溫箱溫度:30°C。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的尿液中苯乙醛酸和苯乙醇酸含量的超高效液相色譜(UPLC)測定方法，其特征在于:所述0.01%混合酸水溶液的配制方法為:吸取醋酸、85%磷酸各1.0mL稀釋至100 mL容量瓶中，置冰箱存放，用時(shí)取IOmL用水稀釋至1L，即為0.01%混合酸水溶液。
【文檔編號】G01N30/02GK103822989SQ201410093955
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月14日
【發(fā)明者】楊進(jìn), 石龍凱, 胡清源, 王安, 劉勇, 侯宏衛(wèi), 劉彤, 韓書磊, 吳帥賓, 陳歡 申請人:國家煙草質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心