一種同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法
【專利摘要】一種同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于：是采用ASE加速溶劑萃取儀進行樣品前處理以實現(xiàn)萃取和凈化一步完成，是在底部放有濾膜的加速溶劑萃取池中，加入混合好的弗羅里硅土和石墨化炭黑（GCB），再加入混合好的樣品，該樣品為煙末和硅藻土的混合物，然后加入內(nèi)標，再將萃取池上方空余地方用硅藻土填滿；萃取完成之后，將萃取液混合均勻，過0.22μm有機相濾膜后進行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）檢測。本發(fā)明將樣品的萃取和凈化一步完成，大大簡化了前處理的過程，是一種自動化程度高、操作簡單、靈敏度高、準確性和重復性好的檢測方法，能夠同時檢測煙草中多達92種農(nóng)藥的殘留，符合多農(nóng)殘分析方法的要求。
【專利說明】—種同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于煙草多農(nóng)藥殘留檢測【技術(shù)領(lǐng)域】，主要涉及煙草中92種農(nóng)藥殘留的檢測技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]在煙草的種植和儲存過程中，不可避免的會產(chǎn)生農(nóng)藥殘留。隨著人們對食品安全問題的日益關(guān)注，煙草作為一種吸食品，其農(nóng)藥殘留問題作為吸煙安全的重要組成部分也受到了越來越多的重視。因此，檢測煙草中的農(nóng)藥殘留就具有十分重要的意義。多農(nóng)藥殘留檢測方法是農(nóng)殘檢測的發(fā)展趨勢。
[0003]加速溶劑萃取(ASE)是一種在較高的溫度和壓力下用于固體和半固體樣品中目標物提取的方法，具有溶劑用量少、提取時間短、自動化程度高等優(yōu)點。美國環(huán)保署(EPA)采用加壓液相萃取的方法作為萃取土壤及其他固體、半固體樣品中目標物的標準方法，標準號為US EPA Method 3545A。加速溶劑萃取也已經(jīng)用于食品、蔬菜、水果等復雜基質(zhì)的農(nóng)藥殘留提取中。Pang G F等人通過加速溶劑萃取的方法提取了谷物中的農(nóng)藥殘留，用石墨化炭黑、硅膠鍵合氨基固相萃取柱等凈化了萃取液，然后用GC-MS和LC-MS/MS對目標物進行了檢測。但這些方法都是將萃取、凈化分兩步進行，不僅耗費時間，還容易造成目標物的損失。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種萃取、凈化一步完成的加壓液相萃取方法，用來萃取煙草樣品中的多種農(nóng)藥殘留，并用LC-MS/MS進行檢測、分析。本方法可將萃取步驟和凈化步驟合二為一，大大的簡化了前處理過程。
[0005]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:
一種同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法，是采用ASE加速溶劑萃取儀進行樣品前處理以實現(xiàn)萃取和凈化一步完成，是在底部放有濾膜的加速溶劑萃取池中，加入混合好的弗羅里硅土和石墨化炭黑GCB，再加入混合好的樣品，該樣品為煙末和硅藻土的混合物，然后加入內(nèi)標，再將萃取池上方空余地方用硅藻土填滿；萃取完成之后，將萃取液混合均勻，過
0.22 μπι有機相濾膜后進行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS檢測。
[0006]ASE加速溶劑萃取儀參數(shù)設(shè)定如下:萃取劑:乙腈；溫度:120°C ;壓力，1500 psi ；靜態(tài)萃取時間，6 min ;靜態(tài)循環(huán)次數(shù):2次；沖洗體積，50%。
[0007]本發(fā)明的具體步驟如下:
1)標準溶液配制:分別取適量各農(nóng)藥標準品，用乙腈配制成0.5-100ng/mL濃度范圍內(nèi)9個濃度點的標準工作溶液，配制濃度為10 μ g/mL的內(nèi)標(磷酸三苯酯，TPP)乙腈溶液；
2)樣品前處理條件:將2g煙末和I g硅藻土在100 mL燒杯中混合均勻，在33mL不銹鋼萃取池的底部放兩片玻璃纖維濾膜，加入混合好的4 g弗羅里硅土和40 mg GCB，再加入混合好的樣品,然后加入100 μ L內(nèi)標工作液(10 μ g/mL)，將萃取池上方空余地方用硅藻土填滿(約需4 g),萃取完成之后,將萃取液混合均勻,取I mL過0.22 μ m有機相濾膜；
3)基質(zhì)匹配標準工作溶液的配制:將空白樣品按2)中所述進行前處理，取ImL萃取液，氮吹近干，再分別用不同濃度的I mL標準工作溶液進行復溶；
4)樣品分析條件:
液相色譜條件:色譜柱:Atlantis dC18 柱(150 mm X 2.1 mm X 3 μπι,美國 Waters公司);柱溫:25。。;流速:0.2 mL/min ;進樣量:10 μ L ;流動相A:0.1%甲酸水溶液；流動相B:乙腈；流動相洗脫梯度=B初始體積分數(shù)為10% ；0 -1 min, B線性增加至50% ；1 - 5 min,B 保持 50% ；5 - 16 min, B 線性增加至 60% ；16 - 25 min, B 線性增加至 80% ；25 - 30 min, B線性增加至95% ；30 - 40 min, B保持95% ；40 - 40.1 min, B回到初始狀態(tài)，并保持10 min。
[0008]質(zhì)譜條件:離子源:ESI ;碰撞氣:6 psi ;氣簾氣:20 psi ;霧化氣:50 psi ;輔助加熱氣:50 psi ;電噴霧電壓:5500 V ;離子源溫度:500 V ;入口電壓:10 V ;出口電壓:9 V ；掃描模式:正離子掃描；監(jiān)測模式:多反應監(jiān)測模式；駐留時間:20 ms。92種農(nóng)藥及內(nèi)標的質(zhì)譜參數(shù)見表I。
[0009]
【權(quán)利要求】
1.一種同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于:是采用ASE加速溶劑萃取儀進行樣品前處理以實現(xiàn)萃取和凈化一步完成，是在底部放有濾膜的加速溶劑萃取池中，加入混合好的弗羅里硅土和石墨化炭黑GCB，再加入混合好的樣品，該樣品為煙末和硅藻土的混合物，然后加入內(nèi)標，再將萃取池上方空余地方用硅藻土填滿；萃取完成之后，將萃取液混合均勻，過0.22 μ m有機相濾膜后進行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜LC-MS/MS檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于:ASE加速溶劑萃取儀參數(shù)設(shè)定如下:萃取劑:乙腈?’溫度:120°C ;壓力，1500 psi ;靜態(tài)萃取時間，6min ;靜態(tài)循環(huán)次數(shù):2次；沖洗體積，50%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時檢測煙草中多種農(nóng)藥殘留的方法，其特征在于:具體步驟如下: 1)標準溶液配制:分別取適量各農(nóng)藥標準品，用乙腈配制成0.5-100ng/mL濃度范圍內(nèi)標準工作溶液，配制濃度為10 μ g/mL的內(nèi)標磷酸三苯酯乙腈溶液； 2)樣品前處理條件:將2g煙末和I g硅藻土在100 mL燒杯中混合均勻，在33mL不銹鋼萃取池的底部放兩片玻璃纖維濾膜，加入混合好的4 g弗羅里硅土和40 mg GCB，再加入混合好的樣品，然后加入100 μ L內(nèi)標工作液，將萃取池上方空余地方用硅藻土填滿，萃取完成之后，將萃取液混合均勻，取I mLS0.22 μ m有機相濾膜； 3)基質(zhì)匹配標準工作溶液配制:將空白樣品按2)中所述進行前處理，取ImL萃取液，氮吹近干，再分別用不同濃度 的I mL標準工作溶液進行復溶； 4)樣品分析條件: 液相色譜條件:色譜柱=Atlantis dC18柱；柱溫:25 °CV流速:0.2 mL/min ;進樣量:10μ L ;流動相A:0.1%甲酸水溶液；流動相B:乙腈；流動相洗脫梯度:B初始體積分數(shù)為10% ；O -1 min, B 線性增加至 50% ；1- 5 min, B 保持 50% ；5 - 16 min, B 線性增加至 60% ; 16 - 25min, B 線性增加至 80% ；25 - 30 min, B 線性增加至 95% ；30 - 40 min, B 保持 95% ；40 - 40.1min, B回到初始狀態(tài)，并保持10 min ； 質(zhì)譜條件:離子源=ESI ;碰撞氣:6 psi ;氣簾氣:20 psi ;霧化氣:50 psi ;輔助加熱氣:50 psi ;電噴霧電壓:5500 V ;離子源溫度:500 °C ;入口電壓:10 V ;出口電壓:9 V ;掃描模式:正離子掃描；監(jiān)測模式:多反應監(jiān)測模式；駐留時間:20 ms ； 5)基質(zhì)匹配標準工作曲線的制定及定量分析: 將各基質(zhì)匹配標準工作溶液在上述液相色譜和質(zhì)譜條件下進行檢測，將得到的各農(nóng)藥的峰面積與內(nèi)標物峰面積的比值與相應的農(nóng)藥的濃度進行回歸分析，計算得出各農(nóng)藥的標準工作曲線及其回歸方程； 其次將樣品溶液在上述相同條件下進行檢測，將得到的各農(nóng)藥的峰面積與內(nèi)標物峰面積的比值帶入相應的回歸方程中，得到樣品溶液中各農(nóng)藥的濃度，計算得出樣品中各農(nóng)藥的殘留量。
【文檔編號】G01N30/88GK103698462SQ201410004317
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2014年1月6日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月6日
【發(fā)明者】胡斌, 艾丹, 劉惠民, 潘立寧, 陳黎, 王冰, 謝復煒 申請人:中國煙草總公司鄭州煙草研究院